小鼠脊髓腰膨大截面积QTL研究

目的 :小鼠脊髓腰膨大截面积性状进行数量性状基因座 (Quantitativetraitlocus ,QTL)的分析定位。方法 :应用近交系小鼠A/J和C5 7BL/6J以及其F1、F2代为材料 ,测定脊髓腰膨大截面积 ,利用分布于小鼠全基因组的 87对引物 ,PCR法进行F2代小鼠基因组扫描分析。结果 :9个QTL与脊髓腰膨大截面积相关 ,分别位于 4,8,13 ,14 ,15 ,16,17和X染色体上。其中 7个QTL的性状变异解释率 (10 % )。对照我们以前的结果 ,3个腰膨大QTL与脊髓重和颈膨大QTL均重叠 ;3个与脊髓重QTL重叠 ;3个单独与腰膨大相关。D15Mit15 8位点显示出最大的性状变异解释率 (15 % ) ,与脊髓重最大的性状变异解释率 (2 4% )的位点相吻合。结论 :研究结果说明控制小鼠脊髓发育最主要位点位于 15号染色体D15Mit15 8附近。本研究为小鼠脊髓发育QTL的精细定位、进行位置克隆以最终确认控制基因打下了基础     

小鼠15号染色体上脊髓重数量性状基因座的精细定位

目的以前的研究结果表明,控制小鼠脊髓重的一个数量性状基因座(QTL)位于15号染色体D15Mit158附近,跨度约30cM。为分离和确认脊髓重相关基因,本文对该QTL区域进行了精细定位。方法以高级互交系小鼠A/J×C57BL/6J(F4)为研究对象,选择脊髓重偏向两极的个体,在D15Mit158位点附近作高密度局部基因组扫描,用Map Manager QTX19软件对脊髓重与基因型进行连锁不平衡分析。结果在15号染色体D15Mit107附近出现了一个很强的连锁峰,LRS值为17.3(P=1.8×10-4),变异解释率为27%,LOD值达到3.75,可以认定为一主效QTL。该QTL跨度范围为3.2cM。另一个提示可能具有连锁关系的QTL位点在D15Mit28附近,LRS值为7.6(P=0.02),变异解释率为13%,跨度范围为5.0cM。结论控制小鼠脊髓重的D15Mit158区域实际上含有两个QTL,其中一个主效QTL位于15号染色体上宽约3.2cM的D15Mit107位点附近;另一个可能的QTL位于宽约5.0cM的D15Mit28附近。     

小鼠15号染色体上脊髓颈膨大截面积数量性状基因座的精细定位

目的 :对 15号染色体上控制小鼠脊髓颈膨大截面积的数量性状基因座 (QTL)进行精细定位。方法 :以高级互交系小鼠 (A/J)X(C5 7BL/6J) (F4)为研究对象 ,在D15Mit15 8位点附近作高密度图谱的基因组扫描 ,用MapManagerQTX13对脊髓颈膨大截面积与基因型进行连锁分析。结果 :在 15号染色体D15Mit10 7和D15Mit2 0 8附近出现了两个连锁峰 ,LRS值分别为 7.2 (P <0 .0 5 )和 6.4(P <0 .0 5 )。结论 :原 15号染色体上控制脊髓颈膨大截面积的一个QTL实际包含有两个QTL ,分别位于D15Mit10 7、D15Mit2 0 8附近 ,宽约 3 .2cM和 10 .2cM的区间内     

近交系豫医无毛小鼠STR位点的遗传检测

目的：探讨近交系豫医无毛小鼠（YYHL）短串联重复序列（STR）位点的遗传多态性。方法：随机选择位于小鼠3、4、7、16号染色体上的5个STR位点，用PCR技术对近交系YYHL、DBA近交系小鼠及昆明小鼠进行多态性分析。结果：5对引物在近交系YYHL各基因座上均出现一条带，其中D7Nds1、D3Mit22、D16Mit4三基因座表现为多态性，D3Mit21、D4Mit2二基因座表现为单态性。结论：D7Nds1、D3Mit22、D16Mit4三基因座可用于检测近交系小鼠遗传特异性，结合近交系豫医无毛小鼠皮肤移植实验，近交系豫医无毛小鼠符合近交要求。     

近交系豫医无毛小鼠微卫星DNA多态性分析

目的:研究微卫星DNA多态性在豫医无毛小鼠等近交系小鼠遗传监测中的应用.方法:选取小鼠不同染色体上的18个微卫星位点(D3Mit17、D3Mit18、D3Mit15、D3Mit21、D3Mit22、D6Mit192、D6Mit81、D6Mit36、D6Mit149、D16Mit4、D7Nds1、D2Nds3、D3Mit16、D3Mit85、D3Mit41、D4Mit2、D5Mit66、D7Mit164),应用PCR技术对7个近交系小鼠(豫医无毛小鼠、BALB/C、C57、CBA、DBA/2、C3H/HeJ、FVB/NJ)进行了微卫星多态性分析.结果:18个微卫星DNA具有稳定扩增效果.不同品系个体之间11个位点(D3Mit17、D3Mit18、D3Mit15、D3Mit21、D3Mit22、D6Mit192、D6Mit81、D6Mit36、D6Mit149、D16Mit4、D7Nds1)具有多态性,其中5个位点(D6Mit36、 D6Mit81、 D16Mit4、D6Mit149、D7Nds1)具有显著多态性;同一品系不同个体之间表现为单态性.结论:所检测的小鼠符合近交要求,运用筛选出的11个位点(D3Mit17、D3Mit18、D3Mit15、D3Mit21、D3Mit22、D6Mit192、D6Mit81、D6Mit36、D6Mit149、D16Mit4、D7Nds1)进行微卫星多态性分析,能够快速、经济地对近交系小鼠进行品系鉴别和遗传背景监测.同时也反映了近交系豫医无毛小鼠与其他品系小鼠之间亲缘关系的远近.     

近交系小鼠6个短串联重复序列位点遗传多态性分析

目的:分析5品系近交系小鼠6个短串联重复序列(STR)位点的遗传多态性.方法:选择位于3号、6号、7号染色体上的6个STR位点,采用PCR扩增、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳结合银染方法对5品系近交系小鼠(BALB/C、豫医无毛小鼠、C57、DBA/2、FVB/NJ)各5只进行遗传多态性分析.结果:不同品系近交系小鼠在6个位点(D3Mit15、D3Mit85、D3Mit21、D6Mit81、D7Mit164、D7Nds1)上均出现一清晰条带,不同品系小鼠之间有4个位点(D3Mit15、D3Mit21、D6Mit81、D7Nds1)表现为多态性,2个位点(D3Mit85、D7Mit164)表现为单态性.结论:筛选出4个近交系小鼠STR多态性位点.     

全基因组扫描2型糖尿病KKTa小鼠白蛋白尿易感基因定位

 目的 利用全基因组扫描方法进行2型糖尿病KKTa小鼠白蛋白尿易感基因定位。方法 以近交纯品系雌性BALBc小鼠与雄性KKTa小鼠交配建立第一代杂交小鼠(F1),以雄性(KKTa×BALBc)F1小鼠与雌性KKTa小鼠回交。提取208只雄性回交小鼠基因组DNA。根据扩增的101个微卫星DNA分离片段大小决定回交小鼠基因型,同时测定体质量、血糖、尿白蛋白及尿肌酐等表现型。采用基因定位专用软件(MAPMAKERQTL, Map manager)进行数量性状位点(QTL)分析。结果 KKTa小鼠的体重、空腹血糖水平、经腹腔葡萄糖耐量试验空腹与注射葡萄糖后2 h血糖之和显著高于BALBc和F1小鼠(P0.01)。20,28周龄的KKTa小鼠平均尿白蛋白水平显著高于BALBc和F1小鼠(P0.01)。20周龄与28周龄的白蛋白尿水平与第2条染色体83.0 cM D2Mit311微卫星DNA标记附近区域显著连锁,最大对数优势积分值(LOD)为3.5,我们将这一易感基因座位命名为UA-1(尿白蛋白1)。KKKK组回交小鼠20周龄和28周龄的尿白蛋白水平显著高于KKBALB组回交小鼠。结论 与2型糖尿病KKTa小鼠尿白蛋白水平紧密连锁的易感基因座位位于第2条染色体83.0 cM处D2Mit311微卫星DNA标记附近区域（UA-1）。UA-1区域附近的生长激素释放激素(GHrH)基因Ghrh、生长抑素受体4基因Smstr4、血栓调节蛋白(TM)基因Thbd等为糖尿病肾病的可能易感基因。     

小鼠脊髓重量和脊髓颈膨大截面积的基因组扫描分析

目的 :小鼠脊髓重量和脊髓颈膨大截面积大小两个性状进行数量性状基因座 (Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｔｒａｉｔｌｏｃｕｓ ,ＱＴＬ)的分析定位。方法 :利用了两个近交系品种的亲本Ａ/Ｊ(简称Ａ)和Ｃ5 7ＢＬ/ 6Ｊ(简称Ｂ)以及其Ｆ2代小鼠 ,根据已知小鼠微卫星ＤＮＡ数据资料合成了 87对覆盖小鼠全基因组微卫星ＤＮＡ引物 ,在基因组中的平均遗传距离为 15 .5ｃＭ。取 10 0只脊髓发育偏向两个极端的Ｆ2代小鼠 ,其中一半来自Ａ×Ｂ杂交 ,一半来自Ｂ×Ａ杂交 ,应用ＰＣＲ方法进行基因组扫描。结果 :有 9个ＱＴＬ与脊髓重量相关 ,这些ＱＴＬ分别位于 4、8、14、15、17、18、19和Ｘ染色体上。Ａ×Ｂ (Ｆ2 )小鼠基因组扫描的结果显示 ,Ｄ14Ｍｉｔ3 7、Ｄ15Ｍｉｔ15 8、Ｄ17Ｍｉｔ16和Ｄ19Ｍｉｔ16四个位点与脊髓重量连锁 ;Ｂ×Ａ(Ｆ2 )则是在Ｄ4Ｍｉｔ2 14、Ｄ8Ｍｉｔ2 42、Ｄ18Ｍｉｔ12 2、ＤＸＭｉｔ14 0和ＤＸＭｉｔ64五个位点上与脊髓重量连锁。其中 3个ＱＴＬｐ <0 .0 1;分别位于Ｄ15Ｍｉｔ15 8、ＤＸＭｉｔ14 0和ＤＸＭｉｔ64附近 ;其表型变异的解释率分别为 2 4%、19%和 15 % ;加性效应分别为 -3 .78、3 .41和 2 .0 6。其他ＱＴＬ的Ｐ值在 0 .0 1～ 0 .0 5之间。 7个ＱＴＬ与颈膨大截面积相关 ,分别位于     

近交系小鼠微卫星位点的多态性观察

目的:观察不同品系小鼠微卫星位点的多态性.方法:取6～10周龄近交系BALB/C、豫医无毛小鼠、C57、CBA及DBA/2小鼠各5只,颈椎脱臼处死后取新鲜的脑组织0.3～0.5 cm3,提取DNA.随机选择位于小鼠2、3、4和16号染色体上的5对微卫星引物(D2Nds3、D3mit17、D3mit18、D4mit2、D16mit4),应用PCR技术对5种近交系小鼠的DNA多态性进行研究.结果:5对引物在近交系小鼠各基因座上均出现一清晰条带,D16mit4、D3mit17、D3mit18具有多态性,D4mit2、D2Nds3不具有多态性.结论:筛选出的引物D16mit4、D3mit17、D3mit18可用于检测近交系小鼠的品系来源和遗传背景,且所检测的小鼠符合近交要求.     

PLCε基因敲除小鼠微卫星DNA遗传监测分析

目的利用多态性微卫星DNA位点分析PLCε基因敲除小鼠的遗传特性。方法用所筛选的15个微卫星DNA位点对28只PLCε基因敲除小鼠的DNA进行了PCR扩增,通过基因片段大小来分析群体的遗传多样性。结果 13个微卫星DNA位点中(D1Mit365、D3Mit51、D4Mit235、D6Mit102、D7Mit281、D8Mit113、D9Mit23、D10Mit180、D13Mit88、D16Mit145、D17Mit36、D18Mit94、D19Mit97)每个位点的28只小鼠DNA片段泳动距离一致,呈现单态性,表明该群体符合近交系的遗传特性;而利用Dq(敲基因型)和Dy(野生型)两个位点对28只小鼠的PCR扩增结果进行了鉴别分析,其中敲除基因型小鼠为6只;野生型为7只;杂合型为15只。结论利用微卫星标记技术可以对群体进行遗传质量监测,并能有效地鉴别不同的基因型,为小鼠的遗传质量监测提供了一种可行的方法。     

散发性非息肉性大肠癌微卫星DNA不稳定性分析

为分析Ｄ２Ｓ４４１、Ｄ２Ｓ１１９和Ｄ２Ｓ１２３３个微卫星ＤＮＡ标记位点不稳定性,研究ＳＮＰＣＣ发生机理的分子基础。应用ＰＣＲ－ＳＳＬＰ扩增微卫星ＤＮＡ,聚丙烯酰胺凝胶电泳方法对３１例临床诊断为散发性非息肉性大肠癌的肿瘤组织及其相应的正常组织的Ｄ２Ｓ４４１、Ｄ２Ｓ１１９和Ｄ２Ｓ１２３３个微卫星ＤＮＡ标记位点进行分析。结果显示,３１例中,２例在所检测的３个位点均存在微卫星ＤＮＡ不稳定性。提示微卫星ＤＮＡ不稳定性与散发性非息肉性大肠癌发生有关,可通过检测微卫星ＤＮＡ不稳定性筛选大肠癌高危人群,以便早期预防。     

Screening of tumor suppressor genes on 1q31.1-32.1 in Chinese patients with sporadic colorectal cancer

Background As a model for both multistep and multipathway carcinogenesis, colorectal neoplastic progression provides paradigms for researching both oncogenes and tumor suppressor genes （TSGs）. However, the mechanism of colorectal cancer （CRC） is not completely understood, and many genes may be involved in the colorectal carcinogenesis. The purpose of this study was to screen for the potential TSGs on chromosome 1q31.1-32.1 in Chinese patients with sporadic colorectal cancer, to explore whether colorectal cancer in the Chinese population has unique genetic alterations and determine whether other putative TSGs exist and contribute to colon carcinogenesis. Methods Six polymorphic microsatellite markers, at a density of approximately one marker in every 1.6 cM, were chosen for refined loss of heterozygosity （LOH） mapping of 1q31.1-32.1. Eighty-three colorectal cancer patients＇ tumor and normal DNA were analyzed via polymerase chain reaction （PCR） for these microsatellite markers. PCR products were eletrophoresed on an ABI 377 DNA sequencer. Genescan 3.1 and Genotype 2.1 software were used for LOH scanning and analysis. On the basis of refined LOH mapping results, we undertook a microarray-based expression screening to identify tumor association genes in 19 of the CRC cases. Results The average LOH frequency of 1q31.1-32.1 was 24.41%, with the highest frequency of 36.73% （18/49） at D1S2622, and the lowest of 16.42% （11/67） at D1S412. A minimal region of frequent deletion was located within a 2 cM genomic segment at D1S413-D1S2622. There was no significant association between LOH of any marker in the studied regions and the clinicopathological data （patient sex, age, tumor size, growth pattern, or Dukes stage）. On the basis of refined mapping results, we chose 25 genes located in the D1S413-D1S2622 （1q31.3-32.1） region and presented a microarray-based high throughput screening approach in 19 sporadic CRC cases to identify candidate CRC related tumor suppressor genes. This study found 4     

Screening of tumor suppressor genes on lq31.1-32.1 in Chinese patients with sporadic colorectal cancer

Background As a model for both multistep and multipathway carcinogenesis, colorectal neoplastic progression provides paradigms for researching both oncogenes and tumor suppressor genes (TSGs). However, the mechanism of colorectal cancer (CRC) is not completely understood, and many genes may be involved in the colorectal carcinogenesis. The purpose of this study was to screen for the potential TSGs on chromosome lq31.1-32.1 in Chinese patients with sporadic colorectal cancer, to explore whether colorectal cancer in the Chinese population has unique genetic alterations and determine whether other putative TSGs exist and contribute to colon carcinogenesis. Methods Six polymorphic microsatellite markers, at a density of approximately one marker in every 1.6 cM, were chosen for refined loss of heterozygosity (LOH) mapping of lq31.1-32.1. Eighty-three colorectal cancer patients' tumor and normal DNA were analyzed via polymerase chain reaction (PCR) for these microsatellite markers. PCR products were eletrophoresed on an ABI 377 DNA sequencer. Genescan 3.1 and Genotype 2.1 software were used for LOH scanning and analysis. On the basis of refined LOH mapping results, we undertook a microarray-based expression screening to identify tumor association genes in 19 of the CRC cases. Results The average LOH frequency of lq31.1-32.1 was 24.41%, with the highest frequency of 36.73% (18/49) at D1S2622, and the lowest of 16.42% (11/67) at D1S412. A minimal region of frequent deletion was located within a 2 cM genomic segment at D1S413-D1S2622. There was no significant association between LOH of any marker in the studied regions and the clinicopathological data (patient sex, age, tumor size, growth pattern, or Dukes stage). On the basis of refined mapping results, we chose 25 genes located in the D1S413-D1S2622 (lq31.3-32.1) region and presented a microarray-based high throughput screening approach in 19 sporadic CRC cases to identify candidate CRC related tumor suppressor genes. This study found 4 significantly down-expressed genes, including CSRP1, LMOD1, PPP1R12B and CFHL3. There was no significant association between expression levels of CFHL3, CSRP1, LMOD1, PPPIR12B and the clinicopathological data. By database searching, CSRP1 was hypothesized to be a colorectal cancer related tumor suppressor gene. Conclusions Through detailed deletion mapping, we found that the lq31.3-32.1 region might harbor one or more colorectal cancer related tumor suppressor gene(s). And by microarray-based high-throughput screening of candidate genes located in this region and by subsequent database searching, we present the first evidence that CSRP1 might be involved in the progression of CRC.     

黑斑—息肉综合征染色体不稳定性及肿瘤易感基因位点的分析

目的 通过对黑斑－息肉综合征（ＰＪＳ）染色体淡稳定性、基因缺失、点突变和重排的分析,确定与疾病易感的相关基因及变异方式。方法 本研究经家系调查和利用患者外周血淋巴细胞比较分析了染色体脆性位点表达;采用聚合酶反应（ＰＣＲ）、ＰＣＲ／ＳＳＣＰ分析、微卫星检测和ＤＮＡ测序分析技术对染色体脆性位点（Ｆｒａ）出现频率高的３ｐ１４的遗传标记进行检测。结果 ⑴４个家系共２２例患者,其息肉性质均为腺瘤样息肉,死于     

胃癌染色体1q21等位基因杂合性缺失的精细定位

目的 精细定位胃癌染色体1q21等位基因杂合性缺失及其常见缺失区域,并初步探讨1q21等位基因杂合性缺失在胃癌发生发展中的作用.方法 采用1q21区域7个高密度微卫星多态性标志结合PCR技术.精细分析了30例配对新鲜胃癌手术标本中胃癌染色体等位基因杂合性缺失的情况,利用X2检验和四格表确切概率法初步探讨了1q21等位基因杂合性缺失与胃癌临床特征的关系.结果 30例胃癌标本中,有18例存在等位基因杂合性缺失,占60%(18/30),7个微卫星位点D1S514、D1S2696、D1S498、D1S305、D1S2624、D1S2635和D1S2707的杂合性缺失频率分别为13.3%、10%、20%、23.3%、33.3%、40%和23.3%.常见高频率杂合性缺失区域位于D1S2624-D1S2707之间,即共同缺失区在D1S2635附近;胃癌染色体1q21等位基因杂合性缺失与病人的年龄、性别、胃癌原发灶的部位、癌细胞分化程度及临床分期比较差异没有湿著性意义(P>0.05);但是,胃癌染色体1q21等位基因杂合性缺失与胃癌有无淋巴结转移比较差异有显著性意义(P<0.05).结论 胃癌细胞染色体1q21存在较高频率的等位基因杂合性缺失,D1S2635附近可能存在与胃癌发生密切相关的肿瘤抑制基因.     

中国人散发性大肠癌中微卫星DNA不稳定的研究

目的：探讨中国人散发性大肠癌中微卫星 Ｄ Ｎ Ａ 不稳定及复制差错与大肠癌生物学行为的关系。方法：选择１０ 个微卫星位点, 应用 Ｐ Ｃ Ｒ－ 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对３９ 例散发性大肠癌组织进行检测。结果：在多个位点上发现了较高的微卫星 Ｄ Ｎ Ａ 不稳定（ Ｍ Ｉ） ,其中 Ｄ３ Ｓ１３１７ 位点上 Ｍ Ｉ为４４ ％ , Ｄ３ Ｓ９６６ 上 Ｍ Ｉ为２６ ．６ ％ , Ｄ２ Ｓ１２３ 和 Ｄ２ Ｓ１１９ 上 Ｍ Ｉ分别为３６ ％ 和２５ ．７ ％ 。结论： Ｍ Ｉ阳性率和肿瘤组织学分类无明显相关性,而与肿瘤组织的分化程度、浸润程度等有显著的相关关系,因而微卫星 Ｄ Ｎ Ａ 可以为肿瘤的早期诊断及患者预后判断提供帮助。同时,在散发性结肠癌中也存在较高的微卫星 Ｄ Ｎ Ａ 不稳定,这可能与某种 Ｄ Ｎ Ａ 错配修复基因发生突变有关。