FISH技术在乳腺癌Her2基因检测中的应用

目的:探讨乳腺癌中免疫组化法(IHC)检测cerbB2蛋白表达和荧光原位杂交法(FISH)检测Her2基因扩增,并评估其临床意义.方法:IHC及FISH法分别检测50例乳腺癌组织中cerbB2蛋白表达及Her2基因扩增状态,并进行分析比较.结果:50例乳腺癌中Her2蛋白表达(++)者21例中,17例出现Her2基因扩增(80.95%),4例无扩增;Her2蛋白表达(+++)者29例中,28例出现Her2基因扩增(96.55%),1例无扩增;50例乳腺癌中共有45例Her2基因扩增(90%),5例无扩增.两种方法的检测结果阳性率差异无统计学意义(P>0.05).结论:免疫组化检测Her2蛋白表达的情况可以傲为临床治疗的初筛,免疫组化检测Her2蛋白表达(++)及(+++)的病例需要进一步行Her2基因的扩增,来确定临床治疗方案.     

Her2和Ki-67在乳腺癌中的表达和意义

目的:研究Her2和Ki-67在乳腺癌中的表达与淋巴结转移、病理类型、组织学分级及肿瘤分期等的关系和临床意义。方法:应用免疫组织化学方法检测乳腺癌59例中Her2和Ki-67的表达,分析其与临床病理特征的关系。结果:乳腺癌59例中Her2和Ki-67的阳性表达率分别为76.3%和64.4%。两者表达在患者年龄、肿瘤大小、组织病理学类型及组织学分级之间差异无统计学意义(P>0.05);而Her2和Ki-67表达在有无淋巴结转移和肿瘤分期间差异有统计学意义(P<0.05);Her2与Ki-67表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Her2和Ki-67是判断乳腺癌预后的重要指标,联合检测更有助于乳腺癌患者的临床治疗和预后判断。     

运用实时荧光定量RT-PCR法检测乳腺癌组织中ERα、PR和Her2 mRNA表达

目的评价实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)在测定乳腺癌组织中雌激素受体α(ERα)、孕激素受体(PR)和人表皮生长因子受体2(Her2)基因表达的临床价值。方法选择2010年3月至10月在我院接受手术治疗的乳腺癌患者48例和乳腺良性病变患者28例,用免疫组化染色(IHC)法检测乳腺癌组织中ERα、PR、Her2蛋白的表达,用实时qRT-PCR法检测乳腺癌组织及良性乳腺肿瘤组织中ERα、PR、Her2mRNA的表达,并评价这两种检测方法在乳腺癌诊断中的价值。结果用实时qRT-PCR测得的ERα、Her2mRNA在乳腺癌组织中的表达均高于对照组织(P<0.05,P<0.01),而PRmRNA的表达在乳腺癌组织与对照组织之间差异无统计学意义。乳腺癌组织中ERα、PR、Her2的蛋白表达与临床TNM分期有关,ERα和PR的阳性表达率随临床TNM分期的升高而下降(P<0.05),Her2的阳性表达率随临床TNM分期的升高而升高(P<0.05)。乳腺癌淋巴结转移组乳腺组织中ERα、Her2mRNA表达均高于无淋巴结转移组(P<0.05),而PR mRNA表达与无淋巴结转移组比较差异无统计学意义。实时qRT-PCR检测ERα、PR、Her2mRNA在评价乳腺癌对内分泌治疗的敏感性、特异性以及病理学诊断的符合率均与IHC相符。结论 ERα、PR和Her2是预测乳腺癌内分泌治疗或靶向治疗的重要基因,本研究建立的实时qRT-PCR检测方法可用于ERα、PR和Her2mRNA表达的临床检测和研究。     

凝溶胶蛋白抑制乳腺癌细胞MCF7／Her2增殖及迁移侵袭的作用

目的研究凝溶胶蛋白（gelsolin,GSN）对雌激素受体α（ERα）阳性、人表皮生长因子受体2（Her2）过表达乳腺癌细胞MCF7／Her2生长的作用。方法构建GSN的真核表达载体,并稳定转染MCF7／Her2细胞,以RT-PCR及WesternBlot鉴定得到稳定过表达GSN的乳腺癌细胞系McF7／Her2／GsN。以空载体转染的稳定表达细胞MCF7／Her2／V作对照,比较其细胞形态、增殖和迁移能力的改变;WesternBlot及RT-PCR检测Her2、组织金属蛋白酶抑制剂-3（TIMP3）表达和细胞外调节蛋白激酶（ERK）的活化,探索深层次的作用机制。结果MCF7／Her2稳定过表达GSN后,细胞形态改变且增殖及迁移、侵袭能力明显低于对照细胞;发现Her2表达下降,TIMP3的表达上调,而雌激素导致的MCF7／Her2细胞ERK活化增强被逆转。结论凝溶胶蛋白能降低Her2的表达,并通过下调ERK的活化及上调TIMP3的表达,抑制乳腺癌细胞MCF7／Her2增殖及迁移侵袭作用。     

乳腺癌组织中Her2 TopoⅡ表达水平与新辅助化疗近远期疗效的关系研究

目的：探讨乳腺癌组织人类表皮生长因子受体2（Her2）、拓扑异构酶Ⅱ（TopoⅡ）表达水平与新辅助化疗近远期疗效的关系。方法：选取96例TEC方案新辅助化疗乳腺癌患者,化疗前穿刺活检术与化疗后手术采集病灶组织,采用免疫组化法检测组织Her2、TopoⅡ表达水平。结果：新辅助化疗后,Her2、TopoⅡ阳性表达率（60.42%、80.21%）较化疗前（88.54%、92.71%）显著降低（P〈0.05）;且有效组的Her2、TopoⅡ阳性表达率显著低于无效组,阴性表达率显著高于无效组,两组比较差异具有统计学意义（P〈0.05）,Her2、TopoⅡ阴性组的化疗有效率与1、3、5年生存率均显著高于阳性组,两组比较差异性显著（P〈0.05）。结论：新辅助化疗通过降低乳腺癌组织Her2、TopoⅡ阳性表达以增强患者的化疗效果,且Her2、TopoⅡ表达水平在近远期疗效的预测中具有重要的临床价值。     

Her2在介导乳腺癌细胞上皮间质转换中的作用研究

目的：探讨人类表皮生长因子受体2（Her2）在介导乳腺癌细胞上皮间质转换中的作用。方法采用免疫组化方法检测156例乳腺癌组织标本中Her2、上皮样细胞标志E-钙黏素（E-cadherin）、间质样细胞标志N-钙黏素（N-cadherin）表达,根据Her2表达情况将患者分为Her2阳性组与Her2阴性组,比较两组患者E-cadherin N-cadherin表达情况。结果与Her2阴性组比较,Her2阳性组E-cadherin阳性表达率明显降低（75%VS39.47%）,N-cadherin明显升高（30%VS61.84%）,两组比较差异均具有统计学意义（P＜0.05）;E-cadherin、N-cadherin两者表达与TNM分期、淋巴结转移有关（P＜0.05）,表现为TNM分期和淋巴结转移程度越严重,E-cadherin阳性表达越低,N-cadherin阳性表达越高;Her2、N-cadherin阳性表达患者的病死率更高,而E-cadherin阴性表达患者的病死率更高,阴性组与阳性组比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论 Her2阳性表达促进乳腺癌细胞上皮间质转换过程,同时增强乳腺癌的浸润转移能力,严重影响患者的预后情况。     

新辅助化疗对乳腺癌患者ER、PR、Her2表达的影响

目的对比新辅助化疗前后雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、人表皮生长因子受体2（Her2）的改变,评估化疗对受体的影响。方法检测54例乳腺癌患者化疗前后ER、PR、Her2的状态。结果 54例患者化疗前ER阳性率为48.1%,化疗后阳性率为44.4%（P=0.7）;化疗前PR阳性率为40.1%,化疗后阳性率为22.2%（P=0.038）;化疗前Her2阳性表达为63%,化疗后阳性表达为61%（P=0.843）。结论新辅助化疗对ER、Her2表达影响较小,但经新辅助化疗后PR表达率较治疗前明显下降,需进一步研究PR状态转阴的临床意义。     

乳腺癌人表皮生长因子受体－2基因扩增和蛋白表达差异及其临床意义

目的：研究乳腺癌人表皮生长因子受体－2（ Her－2）基因扩增和蛋白表达的差异及其临床意义。方法乳腺癌手术患者87例分别采用荧光原位杂交（ FISH）技术和免疫组化（ IHC）法检测乳腺癌组织中Her－2基因及其蛋白表达,比较两者差异,分析其临床意义。结果87例乳腺癌组织中,IHC法检测Her－2蛋白阳性（＋＋＋）表达33例（37．9％）。FISH法检测基因扩增36例（41．38％）,无扩增51例（58．62％）。免疫组化法Her－2蛋白评分（0～＋）25例中基因扩增2例（20％）,（＋＋）30例中基因扩增8例（26．67％）,（＋＋＋）32例中26例基因扩增（81．25％）。结论 IHC法检测可作为Her－2表达状态的初筛,其检测Her－2蛋白评分（0～＋）、（＋＋＋）与Her－2基因扩增具有较高的一致性,可直接指导临床用药,而Her－2蛋白评分（＋＋）的病例则需行FISH检测确定有无基因扩增。     

乳腺癌病灶Her2、EGF表达与乳腺癌化疗疗效和预后的关系

目的探讨乳腺癌病灶人类表皮生长因子受体2(Her2)、上皮生长因子(EGF)表达与乳腺癌治疗和预后的关系。方法采用免疫组织化学法检测病灶组织Her2与EGF表达量。结果 Her2低表达组治疗有效率为66.67%(36/54),高于Her2高表达组(χ2=5.263,P=0.022);EGF低表达组中治疗有效率为76.19%(48/63),高于EGF高表达组(χ2=4.878,P=0.027)。Her2低表达组2年生存率为72.22%(39/54),5年生存率为66.67%(36/54),均高于Her2高表达组(χ2=5.841,P=0.016;χ2=7.846,P=0.005);EGF低表达组2年生存率为66.67%(42/63),5年生存率为61.90%(39/63),均高于EGF高表达组(χ2=4.293,P=0.038;χ2=5.339,P=0.021)。结论病灶组织Her2和EGF的表达可以用于预测乳腺癌CMF方案化疗的疗效和预后。     

Pin1和Her2蛋白在乳腺浸润性导管癌中的表达及相关性

目的探讨Pin1和Her2在乳腺浸润性导管癌组织中的表达情况、二者之间的相关性及其临床意义,为乳腺肿瘤的防治提供参考。方法收集2012年3月到2015年5月在惠州市第一人民医院行外科手术切除的226例确诊的乳腺癌标本和50例正常乳腺组织,用免疫组织化学方法检测这些石蜡切片中Pin1和Her2蛋白表达,分析两者的相关性以及两者的表达与乳腺癌患者临床病理特征的关系。结果 Pin1蛋白和Her2蛋白在乳腺癌中表达的阳性率均远远高于正常乳腺(P0.05)。Pin1的过表达与病理组织学分级、淋巴结有无转移相关,而与年龄、肿瘤大小、临床PTNM分期无明显相关性。Her2蛋白过表达与临床PTNM分期、淋巴结转移有相关性(P0.05),与病理类型、年龄、肿瘤大小无明显相关性。在乳腺浸润性导管癌组织中Pin1和Her2蛋白阳性表达呈显著正相关(P0.05)。结论 Pin1与Her2的过表达水平密切相关;Pin1和Her2在浸润性乳腺癌中发挥的重要作用,使Pin1可能成为Her2阳性的乳腺癌的一个新的治疗靶点。     

KIR2DS2基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

目的构建携带KIR2DS2基因短发夹状干扰RNA(short hairin RNA,shRNA)的RNAi慢病毒载体.方法针对已经筛选确定的KIR2DS2基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ酶切后的pSicoR-GFP载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接产生LV-shKIR2DS2慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.用LV-shKIR2DS2及Packaging system质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度.结果PCR和测序证实,成功构建KIR2DS2shRNA的慢病毒载体LV-shKIR2DS2.293T细胞测定病毒滴度为6×108TU/ml.结论成功构建携带KIR2DS2基因短发夹状干扰RNA的RNAi慢病毒载体.     

评价房颤CHADS2评分及其衍生评分对冠心病及其严重程度的预测价值

目的：探讨房颤评分系统CHADS2(欧洲)评分及其衍生评分对冠心病及其严重程度的预测价值。方法纳入2013年1月1日-2013年12月1日就诊于本院心血管内科怀疑冠心病并行冠状动脉造影检查的连续病例429例,根据其造影结果分为对照组(n=51)及冠心病组(n=378)。根据患者的临床资料计算其CHADS2、CHA2DS2-VASc和CHA2DS2-VASc-HSF评分,根据其冠状动脉造影结果计算Gensini积分评价其病变严重程度,并对3种评分的冠心病预测能力进行评价。结果 CHADS2、CHA2DS2-VASc和CHA2DS2-VASc-HSF评分与病变支数(r=0.317,P＜0.01;r=0.332,P＜0.01;r=0.330,P＜0.01)及Gensini积分均有一定相关性(r=0.240,P＜0.01;r=0.274,P＜0.01;r=0.295,P＜0.01)。截断点分析显示, CHA2DS2-VASc-HSF评分≥3对冠心病的预测价值最高,其灵敏度、特异度、曲线下面积分别为0.860、0.804、0.832(95%CI：0.766~0.898)。结论 CHADS2及其衍生评分对冠心病有一定的预测价值,尤其是CHA2DS2-VASc-HSF评分≥3对冠心病有较高的预测价值。     

FHL2调控Id2功能活性的研究

目的：探讨FHL2对Id2蛋白功能的调控效应。方法：将E47、5xE-Box-Luc、pRL-SV40、Id2以及FHL2表达载体分别共转染MCF-7、293T以及SH-SY5Y细胞,双荧光素酶报告基因方法检测不同转染组细胞中的相对荧光素酶活性。结果：三个细胞系中E47均显著上调了报告基因的表达,Id2抑制了E47的转录激活活性,而FHL2通过与Id2相互作用显著消弱了Id2对FA7功能的抑制效应。结论：通过相互作用FHL2抑制了Id2蛋白的功能活性,FHL2是一个新的Id2蛋白功能抑制子;     

pD_2和pA_2的测定

本文采用大鼠肛尾肌分别介绍测定苯肾上腺素ｐＤ＿２和其拮抗剂哌唑嗪ｐＡ＿２的方法。同时讨论了ｐＤ＿２和ｐＡ＿２的意义和推导过程。     

CDX2和MUC2在胃癌组织中的表达

目的探讨CDX2与MUC2在胃癌组织中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学方法检测胃癌组织及正常胃粘膜中CDX2与MUC2的表达。结果在正常胃粘膜组织中CDX2和MUC2均无阳性表达。CDX2与MUC2在胃癌组织中阳性表达率分别为51.92%和55.77%。CDX2在肠型胃癌中阳性表达率为65.62%（21/32）,在弥漫型胃癌中阳性表达率为30.0%（6/20）,两型胃癌中CDX2阳性表达率有显著性差异（P〈0.05）。MUC2在肠型胃癌中阳性表达率为68.75%（22/32）,在弥漫型胃癌中阳性表达率为35.0%（7/20）,两型胃癌中MUC2阳性表达率有显著性差异（P〈0.05）。CDX2和MUC2的表达与胃癌分化程度有关（P〈0.05）,与有无淋巴结转移无关（P〉0.05）。CDX2的表达和肿瘤浸润的深度有关（P〈0.01）,MUC2表达与肿瘤浸润的深度也有关（P〈0.05）。结论CDX2与MUC2在胃癌尤其是肠型胃癌中高表达,提示CDX2和MUC2与肠型胃癌的发生更密切。     

小儿FetCO2与PaCO2相关关系的分析

目的探讨小儿呼气末二氧化碳浓度(FetCO2)与动脉血二氧化碳分压(PaCO2)的关系以及不同年龄组间是否存在差异.方法用德国Siemens 930型二氧化碳分析仪和丹麦BME-33型血气分析仪,同步测量119例全麻患儿的FetCO2和PaCO2.按照年龄将病人分成甲组(0～1岁)、乙组(1～4岁)和丙组(4～9岁),分别比较其相关关系.结果全年龄组119例FetCO2与PaCO2呈正相关,r=0.6142(P<0.05).甲组(30例)二者虽呈正相关,但不够显著,r=0.4629(P>0.05);乙组(48例)和丙组(41例)二者呈显著正相关,r分别为0.7436和0.7968(P均<0.01).结论 FetCO2与PaCO2有较好的相关关系;患儿年龄可影响FetCO2的准确性,在使用中需结合临床,综合判断通气是否适当.     

2型糖尿病患者血浆TXA2和PGI2失衡及PLA2活性变化

目的：探讨2型糖尿病（DM）患者血栓素A2（TXA2）和前列环素（PGI2）失衡及PLA2活性变化。方法：以放免法测定血栓素B2和6－酮－前列腺素含量,以改良Zieve法测定血浆PLA2活性,同时观察空腹血糖（FBG）、空腹胰岛素（FINS）、甘油三酯（TG）等的变化。结果：①2型DM患者存在TXA2和PGI2合成异常,且Ⅱ组（有微血管病变组）较I组（无微血管病变组）更为严重;②2型DM患者组血浆PLA2显著低于正常对照组,但I组与Ⅱ组之间无显著差异;③2型DM患者组TXB2与FBG、TG显著正相关,6－K－PGF1a与FINS显著负相关,TXB2与6－K－PGF1a均与血浆PLA2无显著相关性。结论：①TXA2和PGI2失衡在2型糖尿病及微血管病变的发生发展中起重要作用;②血浆分泌型PLA2活性变化与2型糖尿病密切相关,但在糖尿病患者TXA2和PGI2失衡及微血管病变中可能不起直接作用;③糖脂代谢紊乱以及高胰岛素血症在TXA2和PGI2失衡及DM微血管病变中起重要作用。     

Apg-2对H_2O_2诱导的BaF3-P210细胞损伤的影响

目的 探讨Apg-2对H2O2诱导的Bcr/Abl阳性BaF3-P210细胞损伤的影响.方法 以H2O2诱导的pMIGR1 空载体感染细胞BaF3-MIGR1和稳定表达Bcr/Abl的BaF3-P210细胞为损伤模型,Western blot和RT-PCR检测H2O2损伤后2组细胞Apg-2表达;建立过表达Apg-2的BaF3-MIGR1细胞(BaF3-MIGR1-Apg2)和BaF3-P210细胞(BaF3-P210-Apg2)H2O2诱导的损伤模型,Western blot检测磷酸化组蛋白(γ-H2AX)的表达,免疫荧光法检测γ-H2AX焦点数.结果 H2O2作用后的BaF3-MIGR1和BaF3-P210细胞的Apg-2蛋白和mRNA水平表达均升高(P<0.05).H2O2作用BaF3-MIGR1和BaF3-MIGR1-Apg2细胞后其γ-H2AX蛋白表达升高,γ-H2AX焦点数亦增加;BaF3-P210和BaF3-P210-Apg2细胞H2O2损伤后γ-H2AX蛋白表达和焦点数均无明显变化.结论 Apg-2可减少H2O2诱导的BaF3-P210细胞γ-H2AX表达,从而可能降低其细胞损伤.     

运用酵母双杂交技术筛选LRRK2相互作用蛋白

目的:使用酵母双杂交来筛选LRRK2基因的相互作用蛋白,以研究其功能.方法:使用的诱饵片段包含MAPKKK和ROC功能域的一部分与COR功能域的全长.诱饵片段由聚合酶链式反应(PCR)扩增后连入酵母表达质粒pGBKT7,pGBKT7-bait质粒经测序验证后转化酵母茵株AH109,用免疫印迹来检验该质粒在酵母中的表达,人类胎脑cDNA文库被转化到能稳定表达诱饵蛋白的酵母菌株中,并铺到含有x-a-gal的四缺(SD/-Trp/-ku/-His/-Ade)的培养皿上.分别使用含有pGBKT7或pGBKT7-bait的AH109酵母菌株进行回交检测,进一步确证从初步筛选中获得的阳性克隆,并用生物信息学来分析其中的文库质粒.结果:获得9个真阳性的克隆,经生物信息学分析其中有3个克隆中的序列不在已知基因的开放阅读框内.其余6个克隆中的序列在以下几个已知基因的开放阅读框中:STRBP,BAGS,PTPN23,L3 MBTL3,RALYL,KIAA1783.结论:经酵母双杂交后成功地获得了真阳性克隆.这些相互作用蛋白将为研究LRRK2的功能、帕金森病发病机制和其他神经性疾病提供一些新的线索.     

IGF-2及IGFBP-2与脑神经胶质瘤侵袭能力的相关性分析

目的 探讨IGF-2及IGFBP-2与反映脑神经胶质瘤侵袭能力的MMP-2、TIMP-2相关性.方法 选择到咸阳市中心医院神经外科就诊的86例胶质细胞瘤患者,Ⅰ级30例,Ⅱ级患者25例,Ⅲ级患者20例,Ⅳ级患者11例,对各级患者血清IGF-2、IGFBP-2、MMP-2、TIMP-2进行检测.结果 Ⅱ级患者IGF-2、IGFBP-2较Ⅰ级出现升高,差异有统计学意义(P＜0.05),Ⅲ级患者IGF-2、IGFBP-2较Ⅰ级、Ⅱ级均出现升高,差异有统计学意义(P＜0.05),Ⅳ级患者IGF-2、IGFBP-2较Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级均出现升高,差异有统计学意义(P＜0.05).Ⅱ级患者MMP-2/TIMP-2较Ⅰ级呈升高,差异有统计学意义(P＜0.05),Ⅲ级患者MMP-2及TIMP-2较Ⅰ级均差异有统计学意义(P＜0.05),MMP-2/TIMP-2较Ⅰ级、Ⅱ级患者均出现升高,差异有统计学意义(P＜0.05),Ⅳ级患者MMP-2及TIMP-2及MMP-2/TIMP-2较Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级均,差异有统计学意义(P＜0.05).IGF-2与TIMP-2、MMP-2/TIMP-2相关 (P＜0.05),IGFBP-2与TIMP-2、MMP-2/TIMP-2相关(P＜0.05).结论 随着神经胶质瘤分级的进展,IGF-2及IGFBP-2水平与脑神经胶质瘤侵袭能力密切相关,是反映神经胶质瘤侵袭能力的重要因子.