维拉帕米阻断TGF-β1诱导的α1(Ⅰ)胶原基因启动子的激活

目的：探讨维拉帕米对α1(Ⅰ）胶原基因启动子活性的影响。方法：将人α1(Ⅰ）胶原基因启动子重组体pCOLH1.5、pCOLH2.5转染至大鼠肾小球纱膜细胞，分别经不同浓度的转化生长因子β1(TGF-β1）和纺拉帕米处理后，ELISA法测定细胞CAT表达水平。结果：TGF－β1作用后，pCOLH1.5和pCOLH2.5的CAT活性明显增加，分别为对照组的1.498和1.551倍；维拉帕米对两上重组体的CAT表达均有抑制作用，与单纯TGF－β1组比较，维拉帕米加TGF－β1组pCOLH2.5的CAT活性明显降低（维拉帕米低浓度组P＜0.05，高浓度组P＜0.01）。结论：维拉帕米不仅直接抑制启动子的活性，而且还部分阻断TGF－β1诱导的α1(Ⅰ）胶原基因启动子激活。     

丹参酮ⅡA对心衰心室重构Ⅰ型胶原基因启动子活性的影响

目的探讨心衰心室重构中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人α1(Ⅰ)胶原基因启动子活性的调控作用和中药单体丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡA,TSN)药物干预的影响环节.方法将人α1(Ⅰ)胶原基因上游-2.5 Kb长度的启动子片段与氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因组成重组体pCOLH2.5,采用脂质体法转染至培养的大鼠心肌成纤维细胞和ELISA法测定CAT活性的方法,观察不同浓度TSN对pCOLH2.5活性及由AngⅡ诱导的pCOLH2.5活性的影响.结果 AngⅡ可剂量依赖性地促进pCOLH2.5的活性,表现为其剂量增大时重组体CAT活性相对增加,与对照组比较有显著性差异(P＜0.05).TSN能抑制pCOLH2.5的活性,并随着药物浓度的增加,其抑制作用亦增强.与对照组、低浓度组比较,差异有显著性(P＜0.05).而且在与AngⅡ共同作用时,pCOLH2.5 CAT的升高幅度明显减少(P＜0.01).结论在心肌成纤维细胞中,AngⅡ具有促进人α1(Ⅰ)胶原基因启动子的转录活性作用.TSN能下调人α1(Ⅰ)胶原基因启动子的激活,并可部分拮抗AngⅡ的促进作用.     

丹参酮Ⅱ_A对心衰心室重构I型胶原基因启动子活性的影响

目的探讨心衰心室重构中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人α1(Ⅰ)胶原基因启动子活性的调控作用和中药单体丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡA,TSN)药物干预的影响环节。方法将人α1(I)胶原基因上游-2.5 Kb长度的启动子片段与氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因组成重组体pCOLH2.5,采用脂质体法转染至培养的大鼠心肌成纤维细胞和ELISA法测定CAT活性的方法,观察不同浓度TSN对pCOLH2.5活性及由AngⅡ诱导的pCOLH2.5活性的影响。结果AngⅡ可剂量依赖性地促进pCOLH2.5的活性,表现为其剂量增大时重组体CAT活性相对增加,与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。TSN能抑制pCOLH2.5的活性,并随着药物浓度的增加,其抑制作用亦增强。与对照组、低浓度组比较,差异有显著性(P<0.05)。而且在与AngⅡ共同作用时,pCOLH2.5 CAT的升高幅度明显减少(P<0.01)。结论在心肌成纤维细胞中,AngⅡ具有促进人α1(Ⅰ)胶原基因启动子的转录活性作用。TSN能下调人α1(Ⅰ)胶原基因启动子的激活,并可部分拮抗AngⅡ的促进作用。     

洛伐他汀对多囊肾囊肿衬里上皮细胞α1(Ⅰ)胶原启动子活性的影响

目的观察洛伐他汀对人常染色体显性遗传性多囊肾病(ADPKD)囊肿衬里上皮细胞COLⅠα1基因启动子活性的影响。方法用FuGENE转染法将pCOLH0.27或pCOLH2.5重组体瞬时转染至ADPKD囊肿衬里上皮细胞,用不同浓度的洛伐他汀和香叶基香叶基焦磷酸(GGPP)处理转染细胞,24h后,用ELISA法测定细胞报告基因CAT表达量。以未加入药物孔的CAT值为1,计算出实验孔CAT的相对表达量。结果瞬时转染pCOLH0.27或pCOLH2.5的ADPKD囊肿衬里上皮细胞,经10或50μmol/L洛伐他汀处理24h后,pCOLH0.27与pCOLH2.5的活性均受明显抑制。10μmol/L洛伐他汀使pCOLH0.27与pCOLH2.5活性分别下降22%和26%(P<0.05),50μmol/L洛伐他汀使pCOLH0.27与pCOLH2.5活性分别下降37%和39%(P<0.01)。洛伐他汀对pCOLH0.27与pCOLH2.5活性的抑制水平相近。GGPP可逆转这一作用(P<0.01)。结论洛伐他汀对ADPKD囊肿衬里上皮细胞COLⅠα1基因启动子活性有明显抑制作用。洛伐他汀的这一作用可能与其抑制GGPP产生,从而阻断促纤维化细胞因子信号转导有关。     

诱导型环氧合酶抑制剂对重组人CD40配体抑制人Ⅰ型胶原α2（Ⅰ）链启动子活性的影响

目的:观察诱导型环氧合酶(COX-2)抑制剂NS-398对重组人CD40配体(rhCD40L)抑制人Ⅰ型胶原α2(Ⅰ)链启动子活性的影响,探讨NS-398治疗AS的可能机制.方法:体外培养人血管平滑肌细胞(VSMCs),人Ⅰ型胶原α2(Ⅰ)链基因启动子重组质粒pCOLH22.4和pCOLH21.6扩增和酶切鉴定后转染VSMCs,用不同浓度rhCD40L (0.1、0.2、0.4 μg/ml)、100 μmol/L NS-398以及rhCD40L(0.4 μg/ml) NS-398(100 μmol/L)作用于转染后细胞, ELISA检测各组细胞CAT目的基因的表达,以未加任何细胞因子或药物处理的成功转染后细胞为对照组.结果:与对照组相比,NS-398增加pCOLH22.4、pCOLH21.6 CAT基因的表达(P《0.05);rhCD40L抑制Ⅰ型胶原基因启动子活性,且呈剂量依赖性,0.4 μg/ml的rhCD40L对启动子活性抑制作用最强(P《0.05);而NS-398可以逆转0.4 μg/ml rhCD40L的抑制作用(P《0.05).结论:NS-398增加Ⅰ型胶原基因启动子活性,在转录水平上促进Ⅰ型胶原的表达;rhCD40L抑制人Ⅰ型胶原α2(Ⅰ)链启动子活性可能与COX-2通路有关.     

促肝细胞生长素对大鼠肝星状细胞增殖及α1(Ⅰ)胶原基因启动子活性的影响

目的:探讨促肝细胞生长素(pHGF)对大鼠肝星状细胞HSC-T_6增殖及α1(Ⅰ)胶原基因启动子活性的影响。方法:(1)采用MTT法分析pHGF对HSC-T_6细胞增殖的影响。(2)构建含人α1(Ⅰ)胶原基因5′侧翼序列(启动子)与氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因的重组体 pCOLH1.5,以脂质体法转染HSC-T_6细胞,ELISA法测定不同浓度pHGF作用24 h后,转染了重组体质粒的HSC-T_6细胞的CAT表达量。结果:(1)不同浓度pHGF对HSC-T_6细胞增殖均有明显的抑制作用,与对照组比较有明显差异(P<0.01)。(2)pHGF在200 μg/ml时对转染重组体质粒pCOLH1.5的HSC-T_6细胞的CAT活性具有明显的抑制作用,与对照组相比差异显著(P<0.05);增加pHGF浓度至400μg/ml时,对CAT活性抑制更为明显,与对照组相比差异非常显著(P<0.01)。结论:pHGF对HSC-T_6细胞增殖具有明显的抑制作用;对α1(Ⅰ)胶原基因启动子活性具有负性调控作用。     

与启动子序列相同的单链寡聚脱氧核苷酸拮抗胰岛素对人α1(Ⅰ)型胶原启动子的激活

目的探讨正义单链寡脱氧核糖核苷酸(ssPTODN)抑制胰岛素对人α1(Ⅰ)型胶原(COL1A1)基因启动子的激活.方法(1)将含有氯霉素乙酰基转移酶(CAT)基因与人COL1A1基因-2483～+42 bp片段的重组质粒(pCOLH12.5)稳定转染至NIH3T3细胞,加入不同剂量的胰岛素,测CAT值;(2)合成全硫代的ssPTODN,其序列为COL1A1基因-129～-105的25个碱基.稳定转染的细胞克隆内加入不同剂量的ssPTODN共孵育24 h,加入2.5 μmol/mL的胰岛素,测定CAT值.结果(1)胰岛素浓度(μmol/mL)在0,0.25,2.5,10时的CAT值(pg/mL)分别是920±94,1 021±99,1 595±81,1 711±121.2.5μmol/mL及10 μmol/mL的胰岛素显著增加了COL1A1基因启动子活性(P＜0.05);二者的作用差异无显著性(P＞0.05).(2)胰岛素剂量为2.5μmol/mL,ssPTODN浓度(μg/mL)分别为0,20,40,80时,各组的CAT值(pg/mL)相应为1 660±104,1 625±64,1 396±76,1 040±135;ssPTODN浓度为80 μg/mL时,受胰岛素刺激所增加的CAT值得到显著抑制(P＜0.05),回复到基础水平附近.结论ssPTODN能够抑制胰岛素对人COL1A1基因启动子的激活.     

TNF—α拮抗胰岛素样生长因子—1对人α1（Ⅰ）胶原启动子？…

目的：探讨ＴＮＦ－α对胰岛素样生长因子－１（ＩＧＦ－１）激活人α１（Ⅰ）胶原启动子的作用。方法：构建含不同长短α１（Ⅰ）胶原启动子序列与氯霉素乙酰基转移酶（ＣＡＴ）报告基因的重组体ｐＣＯＬＨ１ ０．２７,ｐＣＯＬＨ１ ２．５用脂质体法瞬时转染至ＮＩＨ３Ｔ３细胞的人皮肤成纤维细胞中,加入ＩＧＦ－１或（和）ＴＮＦ－α,测定ＣＡＴ活性。结果;１００ｎｇ／ｍｌ ＩＧＦ－１可使转染至ＮＩＨ３Ｔ３细胞的ｐＣＯ     

血管内皮生长因子对胃癌BGC-823细胞多药耐药相关蛋白1启动子活性的影响

目的:检测血管内皮生长因子(VEGF)对多药耐药相关蛋白1(MRP1)基因启动子转录活性的影响并初步探讨其作用机制.方法:合成MRP1启动子片段,克隆到荧光素酶报告基因载体PGL3-Basic中;用脂质体2000将重组的报告基因载体与内参质粒β-半乳糖苷酶(β-gal)瞬时共同转染人胃癌BGC-823细胞,检测VEGF作用后MRP1启动子活性的改变;继之,采用PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002预处理转染的细胞,再检测VEGF对MRP1启动子转录活性的影响.结果:酶切鉴定和DNA序列分析表明成功地构建了重组PGL3-Basic-MRP1载体;荧光素酶活性分析表明重组PGL3-Basic-MRP1在BGC-823细胞中具有启动子活性(144±3.0),与空载体PGL3-Basic(60±4.910)相比,转录活性增高2.4倍,差异有统计学意义(P<0.01);VEGF能以剂量依赖的方式上调MRP1启动子区的转录活性,与无VEGF作用组(171±6.083)相比,最大活性(924±19.975)增高5.4倍(P<0.05);LY294002能够显著抑制VEGF对MRP1启动子区的转录激活,当LY294002浓度为50 μmol/ml时,MRP1启动子活性(392±25.541)与无LY294002作用组(1 001±11.533)相比下降2.5倍(P<0.05).结论:VEGF对MRP1启动子活性具有上调作用,PI3K/AKT信号通路在这一过程中发挥了重要作用.     

人α1(Ⅰ)胶原基因启动子活性研究

目的：探索器官纤维化形成中调控Ⅰ型胶原基因高水平转录的启动片段。方法：从人α１（Ⅰ）胶原基因转录起始点上游－２．５ｋｂ￣＋４２ｂｐ的片段中,取长度不等的片段作为启动子与含氯霉素乙酰基转移酶（ＣＡＴ）报告基因的质粒组成６个重组体,脂质体法转染上述重组体至正常人原代培养皮肤成纤维细胞。ＣＡＴ－ＥＬＩＳＡ测定细胞ＣＡＴ表达水平以比较各重组体的启动子活性。结果：－２４８３￣＋４２ｂｐ,－２６８￣＋４２ｂｐ     

血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞增殖及人I型胶原α2(I)基因启动子活性的影响

目的:通过研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及对人Ⅰ型胶原α2(Ⅰ)链启动子活性的调控,了解AngⅡ在动脉粥样硬化形成和发展过程中的作用.方法:①SD大鼠胸主动脉VSMC体外培养,分别在24、48和72h采用MTT法检测不同浓度的AngⅡ(10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L)对VSMCs增殖的影响.②构建含人α2(Ⅰ)前胶原基因5'侧翼序列-2.4kb和-1.6kb与报告基因氯霉素乙酰基转移酶(CAT)的重组体,用FuGENE转染试剂瞬时转染平滑肌细胞,CAT-ELISA测定AngⅡ10-7mol/L对重组体的作用.结果: ①AngⅡ剂量依赖性促进VSMC增殖.②AngⅡ组的相对CAT表达量明显增高,有统计学意义.结论:AngⅡ可促进VSMC增殖,并可以在转录水平上调人α2(Ⅰ)前胶原基因表达,从而促进动脉粥样硬化的形成和发展.     

血管紧张素Ⅱ对血管平滑肌细胞增殖及人Ⅰ型胶原α2（Ⅰ）基因启动子活性的影响

目的：通过研究血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及对人Ⅰ型胶原α2(Ⅰ)链启动子活性的调控，了解AngⅡ在动脉粥样硬化形成和发展过程中的作用。方法：①SD大鼠胸主动脉VSMC体外培养，分别在24、48和72h采用MTF法检测不同浓度的AngⅡ(10^-8mol／L、10^-7mol／L、10^-6mol／L)对VSMCs增殖的影响。②构建含人α2(Ⅰ)前胶原基因5侧翼序列-2．4kb和-1．6kb与报告基因氯霉素乙酰基转移酶(CAT)的重组体，用FuGENE转染试剂瞬时转染平滑肌细胞，CAT—ELISA测定AngⅡ10^-7mol／L对重组体的作用。结果：①AngⅡ剂量依赖性促进VSMC增殖。②AngⅡ组的相对CAT表达量明显增高，有统计学意义。结论：AngⅡ可促进VSMC增殖，并可以在转录水平上调人α2(Ⅰ)前胶原基因表达，从而促进动脉粥样硬化的形成和发展。     

小鼠肿瘤坏死因子α启动子荧光素酶表达载体的构建及鉴定

目的 构建小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)启动子荧光素酶表达载体.方法 利用PCR技术扩增小鼠TNF-α启动子序列,将其插入荧光素酶表达载体pGL3-basic中.将经过鉴定的重组载体pGL3-TNFα-promoter转染巨噬细胞264.7,应用萤光素酶检测系统检测其活性.结果 测序结果 表明,扩增的启动子序列正确.荧光素酶活性检测表明,pGL3-TNFα-promoter具启动荧光素酶基因表达的活性.结论 成功构建小鼠TNF-α启动子荧光素酶表达载体pGL3-TNFα-promoter,为进一步研究TNF-α奠定了物质基础.     

TNF-α regulates netrin-1 expression through enhancing promoter activity

目的 探讨TNF-α对netrin-1基因表达的影响,并对其调控机制作初步研究.方法 采用RT-PCR和蛋白质免疫印迹法检测TNF-α对netrin-1表达的影响.用PCR反应扩增netrin-1启动子序列,克隆至pGL3荧光素酶报告基因载体,转染HEK 293A细胞,通过检测荧光素酶活性观察TNF-α对netrin-1转录水平的表达调控.结果 TNF-α(20 ng/ml)能上调netrin-1的表达.成功构建pGL3 netrin-1-promoter荧光素酶表达载体,并证实构建的报告基因载体启动子具有活性;发现TNF-α可使netrin-1启动子活性增加(P＜0.05),并以剂量和时间依赖方式调节netrin-1启动子的活性.结论 细胞因子TNF-α可能通过调控启动子的活性而调节netrin 1的表达.     

小鼠α2(Ⅰ)型原胶原基因启动子活性研究

明确纤维化形成中调控Ｉ型胶原基因高水平转录的启动子片段，逐段研究小鼠α２（Ⅰ）原胶原基因２ｋｂ的启动子序列。方法从小鼠α２（Ⅰ）原胶原基因转录起始点上游－２ｋｂ－＋５４ｂｐ的片段中，取长度不等的片段作为启动子，与含氯霉素乙酰基转移酶报告基因的质粒组织６个重组体，脂质体转录法转当上连重组体至胶原产生细胞和非胶霉素乙酰基转移酶报告基因的质粒组织６个重组体，脂质体转染法转染上述重组体至胶原产生细胞和非胶     

IFN-γ和TNF-α对乙型肝炎病毒转录后调节机制的影响研究

目的探讨IFN-γ和TNF-α对乙型肝炎病毒转录后调节机制的影响.方法在体外构建含有HPRE片段的pDM138质粒(含有CAT报告基因),应用脂质体介导方法转染HepG2细胞,观察细胞因子对重组质粒载体CAT报告基因活性表达的影响,CAT基因的活性的检测采用ELISA检测试剂盒.结果成功构建了含有HPRE片段的重组质粒载体.转染重组质粒的HepG2细胞CAT活性表达明显增强,而转染空载体的HepG2细胞仅有本底表达,分别为896.5±213.6 和36.7±11.3 pg/ml.IFN-γ和TNF-α对转染重组质粒的HepG2细胞CAT活性表达的影响均具有浓度依赖性,而对空载体CAT活性的表达无影响.转染重组质粒的HepG2细胞在未加入细胞因子时,其CAT表达活性为896.5±213.6 pg/ml;与IFN-γ、TNF-α及IFN-γ+TNF-α孵育后,其CAT表达活性分别为324.4±56.8, 395.8±82.3, 175.3±35.6 pg/ml,与未加入时比较, t=5.19,4.39,6.68,P<0.01,差异有显著性.结论 IFN-γ和TNF-α可能通过抑制HPRE的功能,调控乙型肝炎病毒基因的表达.     

Peroxiredoxin-1基因沉默对转化生长因子β1促进肺成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响

目的 探讨Peroxiredoxin-1 (Prx-1)基因沉默对转化生长因子β1(TGF-β1)促进肺成纤维细胞合成Ⅰ和Ⅲ型胶原的影响及其作用机制.方法 体外培养肺成纤维细胞分为4组:对照组(0.4％血清),TGF-β1组(5 μg/L),TGF-β1+阴性转染组(5μg/L TGF-β1+阴性对照siRNA),TGF-β1+ Prx-1 siRNA转染组(5 μg/L TGF-β1 +Prx-1 siRNA).利用脂质体Lipo2000将阴性对照siRNA和Prx-1 siRNA分别转染到TGF-β1+阴性转染组和TGF-β1+Prx-1 siRNA转染组的肺成纤维细胞中,转染48 h后用于后续实验.实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测转染后各组的Prx-1 mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷酸化Akt(p-Akt)及Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白水平,2,7-二氯荧光素二乙酸检测活性氧(ROS)水平.结果 (1) Prx-1 siRNA转染肺成纤维细胞后,TGF-β1+ Prx-1 siRNA转染组的Prx-1 mRNA表达明显降低.(2)与对照组比较,TGF-β1组Ⅰ和Ⅲ型胶原、ROS及pAkt蛋白水平均明显增加(0.34±0.06 vs.0.58±0.06、0.42±0.05 vs.0.56±0.06、2 988±379 vs.4 315±580和0.29±0.05 vs.0.66±0.07,差异有统计学意义(P＜0.05).与TGF-β1组比较,TGF-β1+阴性转染组Ⅰ和Ⅲ型胶原、ROS及p-Akt水平无明显变化(P＞0.05),但TGF-β1+ Prx-1 siRNA转染组Ⅰ和Ⅲ型胶原、ROS及p-Akt蛋白水平均进一步增高(0.58±0.06 vs.0.79±0.09、0.56±0.06 vs.0.77±0.08、4 315±580 vs.5 841±782和0.66±0.07 vs.0.93±0.15,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TGF-β1能够诱导肺成纤维细胞生成ROS,并由此促进Akt的激活和肺成纤维细胞合成Ⅰ和Ⅲ型胶原;而沉默Prx-1基因可激活ROS/Akt通路,从而有助于TGF-β1促进肺成纤维细胞合成胶原.     

胰岛素样生长因子-1和肿瘤坏死因子-α对C2C12骨骼成肌细胞增殖和分化的影响

目的 观察胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)和肿瘤坏死因子-α(TNf-α)对体外培养的C2C12小鼠骨骼成肌细胞增殖、分化的影响.方法 体外培养C2C12小鼠骨骼成肌细胞,分别采用IGF-Ⅰ、TNF-α和IGF-I TNF-α干预细胞,以MTT法、肌酸激酶(CK)活性测定法检测处理后的细胞在增殖、分化方面的变化.结果 IGF-Ⅰ组24,48和72 h增殖程度均高于对照组(P＜0.05),且增殖作用具有时间效应(P＜0.05).IGF-Ⅰ组和TNF-α组CK活性均低于对照组(P＜0.05),但随着时间延长IGF-Ⅰ组CK活性呈升高趋势. 结论 IGF-Ⅰ促进C2C12骨骼成肌细胞的增殖,延迟其分化;TNF-α抑制C2C12骨骼成肌细胞的分化.     

肿瘤坏死因子α调控启动子活性促进netrin-1的表达

目的 探讨TNF-α对netrin-1基因表达的影响,并对其调控机制作初步研究。方法 使用RT-PCR和Western blot方法检测TNF-α对netrin-1表达影响。PCR反应克隆出netrin-1启动子序列,构建pGL3-netrin-1-promoter荧光素酶报告基因表达载体。转染HEK-293A细胞检测荧光素酶活性。观察细胞因子TNF-α对netrin-1转录水平的表达调控。结果 首先证实了TNF-α能够上调Netrin-1的表达。其次成功构建pGL3-netrin-1-promoter荧光素酶表达载体,测序正确,然后利用双荧光素酶报告基因系统证实构建的报告基因载体启动子具有活性。发现肿瘤坏死因子TNF-α可以使netrin-1启动子活性显著增加 (P<0.05),TNF-α以剂量和时间依赖方式调节netrin-1启动子的活性。结论 细胞因子TNF-α可能通过调控启动子的活性而调节netrin-1的表达。     

人类可溶性TNFR Ⅰ-GFP融合蛋白重组体的构建、表达和特性分析

目的构建并表达hsTNFR Ⅰ(human solubletumor necrosisfactor receptor Ⅰ)-GFP(green fluorescence protein)-pET28a融合蛋白,用以检测跨膜型TNF-α(mTNF-α).方法用PCR从GFP-pKEN重组质粒中扩增GFP的cD-NA,将其插入hsTNFR Ⅰ-pET28a重组质粒中hsTNFR Ⅰ基因片段的下游,获得hsTNFR Ⅰ-GFP-pET28a重组体.转化大肠杆菌BL-21,用IPTG诱导重组蛋白表达,经镍金属螯合层析柱纯化.用MTT法检测重组融合蛋白对sTNF-α细胞毒效应的抑制活性,并用重组融合蛋白直接对转染TNF基因细胞表面的mTNF-α进行定性检测.结果hsTNFR Ⅰ-GFP重组融合蛋白可明显抑制sTNF-α细胞毒效应,且呈剂量依赖性;该融合蛋白不但可与NIH3T3细胞膜上鼠源性mTNF-α结合,而且也可与转基因NIH3T3细胞表面人mTNF-α结合.结论hsTNFR Ⅰ-GFP重组融合蛋白具有TN-FR的生物学活性,同时保留GFP的发光特性,可用来检测细胞表达mTNF-α的水平.