姜黄素对Caco-2细胞上P-糖蛋白活力及MDR1 mRNA表达的影响

目的研究姜黄素对Caco-2细胞上P-糖蛋白(P-gp)功能和表达的影响,并从分子水平研究其对MDR1mRNA表达的影响。方法采用流式细胞仪测定P-gp底物——罗丹明-123在细胞中的浓度,并分析Caco-2细胞上P-糖蛋白的表达量;采用RT-PCR法分析Caco-2细胞上MDR1基因mRNA的表达量。结果低、中、高浓度(0.1、0.5、1.0μmol.L-1)的姜黄素增加了罗丹明-123的外排,其外排量分别增加了6.2%、22.2%和33.8%(P<0.05);0.1～1.0μmol.L-1姜黄素与细胞孵育72h后,细胞膜上的荧光强度随浓度增加而增强(P<0.05),P-gp表达量是空白对照组的4倍,MDR1基因mRNA表达水平上调了1.58倍。结论姜黄素并不是P-gp的抑制剂,它能在较低浓度以及较短时间内(1h)增强Caco-2细胞上P-gp的功能活性,从而减少罗丹明-123在细胞内的蓄积。长时间(72h)应用姜黄素可以诱导P-gp和MDR1mRNA的表达。姜黄素将有可能引起相应的药物-药物/食物的相互作用。     

川芎嗪对Caco-2细胞p-糖蛋白功能和表达的影响

目的研究川芎嗪对和Caco-2细胞p-糖蛋白功能和表达的影响。方法用p-糖蛋白底物罗丹明123在细胞外排和转运的改变指示细胞膜上p-糖蛋功能的改变,流式细胞仪分析Caco-2细胞膜上p-糖蛋白表达量的变化。结果中、高浓度(120、240μg.mL-1)的川芎嗪能够使罗丹明123从Caco-2细胞的外排量分别减少2.67倍和9.08倍,与细胞孵育72 h后能够使Caco-2细胞表面p-糖蛋白的表达水平下调46.4%和61.2%,在1.5 h使罗丹明123在Transwell的BL侧的累积排放量增加了1.3倍和1.8倍。结论川芎嗪可以显著减小罗丹明123在Caco-2细胞的外排,对罗丹明123跨细胞膜转运也有显著影响。将川芎嗪与Caco-2细胞共同培养72 h后,川芎嗪能够显著降低Caco-2细胞上p-糖蛋白的表达。川芎嗪与p-糖蛋白底物共同应用时要注意发生由p-糖蛋白介导的药物相互作用,川芎嗪可能是一种很有前途的多药耐药逆转剂。     

桑皮苷A逆转K562/阿霉素耐药细胞化疗多药耐药的研究

目的 研究桑皮苷A对人白血病耐药细胞K562/阿霉素耐药细胞（K562/ADM）化疗耐药的影响。方法 实验分为溶媒（DMSO）对照组、阳性对照组(10μmol·L^-1维拉帕米处理48 h,再用5μg·mL^-1阿霉素孵育1 h或2μg·mL^-1罗丹明123孵育1.5 h)、阿霉素单用组(5μg·mL^-1阿霉素孵育1 h)、阿霉素合用桑皮苷A组(用5,10,20μmol·L^-1桑皮苷A处理48 h,再用5μg·mL^-1阿霉素孵育1 h)、罗丹明123合用桑皮苷A组(用5,10,20μmol·L^-1桑皮苷A处理48 h,再用2μg·mL^-1罗丹明123孵育1.5 h)。用噻唑蓝（MTT）实验初步确定桑皮苷A的逆转耐药作用;再以细胞内阿霉素蓄积实验,罗丹明123（Rho123）蓄积及外排实验进一步研究桑皮苷A的逆转耐药作用;分别用聚合酶链反应（PCR）和蛋白质印迹（Western blot）法检测桑皮苷A对K562/AD...     

盐酸度洛西汀对Caco-2细胞P-糖蛋白功能及表达的影响

目的 研究盐酸度洛西汀(DLX)对Caco-2细胞上P-糖蛋白(P-gp)功能和表达的影响.方法 将Caco-2细胞分为阴性对照组、维拉帕米10 μmol/L阳性对照组(VER组)和DLX 0.2、5、10 μmol/L不同浓度处理组.采用流式细胞术检测DLX干预后Caco-2细胞内罗丹明-123的荧光强度和细胞膜上P-gP的表达量.结果 与阴性对照组相比,DLX 0.2、5、10 μmol/L均显著抑制罗丹明-123从Caco-2细胞的外排(96.3±4.5 vs.129.5±14.5、131.2±7.0、135.6±17.1)(P＜0.05),而对P-gp阳性率无明显改变(90％ vs.94％、91％、89％)(P＞0.05).结论 DLX能抑制Caco-2细胞上P-gp的功能,降低罗丹明-123从Caco-2细胞中的外排,但并不影响P-gp的表达.     

白藜芦醇通过拮抗hPXR对P-gp的影响

目的研究白藜芦醇通过拮抗hPXR对P-gp基因(MDR1)、蛋白表达及活性的影响。方法在LS174T细胞中,采用瞬时共转染报告基因实验研究白藜芦醇对PXR介导的MDR1的转录调节作用,并进一步应用Real-Time定量PCR和Western blot方法检测白藜芦醇作用24 h后对利福平诱导的P-gp基因和蛋白变化的影响,罗丹明转运实验考察P-gp活性的变化。结果双荧光素酶报告基因检测结果显示,25和50μmol.L-1白藜芦醇可通过拮抗PXR将利福平对MDR1的诱导作用由4.70倍分别降至1.76倍和0.69倍(P<0.01),在过表达hPXR的LS174T细胞中,50μmol.L-1白藜芦醇可以将利福平诱导的MDR1 mRNA水平由1.8倍降至1.3倍(P<0.05),Western blot结果表明白藜芦醇也可降低利福平诱导的P-gp表达。此外,罗丹明转运实验显示,25和50μmol.L-1白藜芦醇可以将利福平抑制的累积量由77.7%升至91.7%和95.1%(P<0.05),表明白藜芦醇可降低利福平诱导的P-gp活性。结论白藜芦醇可以通过拮抗PXR而影响P-gp的基因、蛋白表达及活性。     

Caco-2细胞模型研究白芷提取物对P-糖蛋白功能的影响

目的:研究白芷提取物对黄酮类成分葛根素、黄芩苷肠道转运的影响,结合白芷提取物对Caco-2细胞上P-gp功能的影响,探讨白芷提取物对葛根素、黄芩苷肠吸收的影响机制。方法:采用Caco-2细胞模型,研究白芷提取物分别对黄酮类成分葛根素、黄芩苷吸收的影响,以P-gp底物罗丹明123(R-123)为荧光探针,评价不同浓度白芷提取物和P-gp抑制剂维拉帕米对R-123细胞蓄积的影响,细胞内的R-123浓度采用荧光分光光度法检测。结果:白芷提取物对葛根中葛根素、黄芩中黄芩苷的吸收均有明显的促进作用,葛根素的表观渗透系数Papp分别提高1.6～3.6倍,黄芩苷的表观渗透系数Papp分别提高2.3～3.3倍;白芷香豆素(0.15～1.5 mg.mL-1)、白芷挥发油(0.24～6.0μL.mL-1)、白芷香豆素+白芷挥发油均能显著增加细胞内Rh-123的摄取,对P-gp显示出明显剂量依赖性的抑制作用。结论:白芷提取物促进葛根素、黄芩苷等黄酮类成分吸收的原因可能与其抑制P-gp外排有关。     

灵芝多糖肽对Caco-2细胞上P糖蛋白功能、表达的影响

目的 研究灵芝多糖肽(ganoderma lucidum polysaccharides peptide,GLPP)对Caco-2细胞P糖蛋白(P-gp)功能和表达的影响.方法 用流式细胞仪测定Caco-2细胞中P-gp底物罗丹明123和抗体的荧光强度,分析药物对P-gp功能和表达的影响.双向跨膜转运实验考查GLPP对罗丹明123转运的影响.结果 10、20、50、100μg·mL-1的GLPP均抑制了Rh-123的外排,其外排分别降低了8％、16％、19％、33％,具有浓度依赖性.高、中浓度的GLPP(50、100 μg·mL-1)对Rh-123的双向转运有一定的抑制,外排率(ER)较阴性对照组降低了15％、18％.细胞与药物作用72 h后,细胞抗体荧光强度降低,P-gp的表达降低.结论 GLPP对P-gp的活性有一定的抑制作用,能在较短的时间内增加细胞内Rh-123的蓄积,抑制Rh-123的双向转运.长期使用GLPP可抑制P-gp的表达.     

黄芩苷通过上调SIRT1保护SH-SY_5Y氧化应激的损伤

观察黄芩苷(baicalin,BL)对过氧化氢诱导SH-SY5Y细胞损伤的作用,并初步探讨SIRT1是否是其发挥作用的靶点及其可能机制。培养的人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞加入黄芩苷(25、50及100μmol·L-1)预孵育12 h,加入H2O2(150μmol·L-1)作用24 h诱导产生氧化损伤,应用MTT比色法检测细胞存活率,测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、一氧化氮(NO)含量;并采用流式细胞仪检测细胞凋亡及应用免疫荧光组化法检测Caspase-3的活性、RT-PCR检测SIRT1水平。结果表明,与H2O2模型组比较,黄芩苷(50和100μmol·L-1)组的细胞存活率增高(P<0.05、P<0.01),而LDH、NO的释放量及细胞凋亡数(P<0.05、P<0.01)、Caspase-3的表达量均减少;SIRT1 mRNA表达明显(P<0.05、P<0.01)。黄芩苷对H2O2损伤的SY5Y细胞具有保护作用,可减轻神经细胞的损伤、抑制细胞的凋亡,其作用机制可能是通过上调SIRT1水平而抑制Caspase-3表达实现的。     

枸杞多糖对Caco-2细胞P-糖蛋白作用的影响

目的 研究枸杞多糖(LBP)对Caco-2细胞P-糖蛋白(P-gp)功能和表达的影响.方法 采用MTT法确定药物实验剂量;采用Rh-123摄取法评价P-gp的功能;利用流式细胞术与免疫荧光抗体检测P-gp的表达;采用经典的Caco-2细胞单层模型,研究P-gp外向转运这一动态过程受枸杞多糖作用后的变化.结果 由MTT法得到枸杞多糖＜100μg·mL-1时,细胞的存活率＞90％;枸杞多糖使细胞内Rh-123累积增加,对功能表现为抑制作用;高浓度组(100μg·mL-1)枸杞多糖对P-gp表达有诱导作用;高浓度组(100μg ·mL-1)枸杞多糖使Caco-2细胞单层模型外排率(ER)降低,对P-gp有抑制作用.结论 枸杞多糖对P-gp功能表现为抑制作用,而对P-gp表达表现为诱导作用.     

柚皮苷保护H9c2心肌细胞对抗阿霉素诱导的心肌毒性

目的探讨柚皮苷(NRG)能否保护H9c2心肌细胞对抗阿霉素(DOX)诱导的心肌毒性。方法应用DOX处理H9c2心肌细胞建立DOX心肌损伤模型。CCK-8比色法测定细胞存活率;谷胱甘肽试剂盒检测GSSG/(GSSG+GSH)的比值;Hoechst 33258核染色法观察细胞凋亡的形态学和数量改变;Western blot法测定葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达水平;双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜摄片检测细胞活性氧(ROS)水平;罗丹明123(Rh123)染色荧光显微镜照像测定线粒体膜电位(MMP)。结果 DOX在3⁷μmol·L-1浓度范围内处理H9c2心肌细胞24 h,呈剂量依赖性降低细胞存活率,其中5μmol·L-1DOX能明显引起心肌细胞损伤,表现为使细胞存活率下降近50%,并呈时间依赖性上调GRP78蛋白的表达;1μmol·L-1NRG预处理60min可明显抑制5μmol·L-1DOX引起的心肌毒性作用,表现为细胞存活率升高,GSSG/(GSSG+GSH)的比值下降,凋亡细胞数目减少,GRP78表达被抑制,细胞内ROS产生及MMP丢失减少。结论 NRG能保护心肌细胞对抗DOX诱导的心肌细胞损伤,保护作用可能与其抗氧化应激及内质网应激有关。     

子宫中隔切除术后预防粘连方法探讨

目的 探讨子宫中隔并不孕患者宫腔镜术后不同处理方法预防宫腔粘连的效果.方法 55例子宫中隔并不孕患者行腹腔镜监护下宫腔镜子宫中隔切除术(TCRS),术后针对不同患者采用不同术后处理措施,包括宫腔放置与不放IUD,是否进行人工周期治疗,部分患者术后使用GnRH-a类药物治疗术后第1、3个月行宫腔镜检查随访,宫内放置IUD的患者;于术后第3个月取环.结果 54例患者术后进行宫腔镜检查随访,其中40例分别于术后第1、3个月完成了术后2次宫腔镜检查,另14例只完成一次检查.宫腔术后放环与否对术后宫腔形态影响无差异(P>0.05),术后使用人工周期治疗患者较未使用者子宫内膜厚,此两者术后第3个月宫腔镜检查发现宫底创面均已有内膜覆盖.使用GnRH-a类药物患者术后官腔形态满意.结论 TCRS术后宫腔放置IUD无助于预防术后粘连的发生;术后人工周期治疗应更个体化并有针对性的使用GnRH-a类药物治疗.术后及时进行宫腔镜检查随访可防止术后宫底新粘连的形成.     

欧洲药典适用性认证介绍

目的介绍欧洲药典适用性认证程序,为国内药品监管机构和原料药生产企业提供信息,促进我国原料药生产企业的国际化。方法通过查阅调研欧盟相关药品法规和与EDQM同行面对面的交流,详细了解欧洲药典适用性认证的组织机构和具体程序。结果与结论欧洲药典适用性认证程序在对原料药的质量控制有重要作用,加强了药典的监管力度,进一步保证了原料药的质量、安全性和有效性。     

10例狂犬病误诊原因分析

狂犬病近年来发病率有逐年增加的趋势,近十二年来,我们共遇见狂大病２３例,其中１０例被误诊为其它疾病,现就其误诊原因进行分析如下。１临床资料１．１ 一般资料：男８例,女２例;年龄最大７８岁,最小４岁。发病季节为３月～１１月。首诊科室,儿科３例、内科３例、转院３例、急诊科１例。１．２ 临床表现：发热７例,恐风５例,恐水６例,怕光３例,流涎１０例,胸闷、气促、呼吸困难４例,烦躁不安１０例,多汗７例,恐惧６例,肢体麻木４例,抽搐４例,恶心、呕吐２例,昏厥１例。所有病例发病至死亡时间为２天～６天,死亡原因为…     

新疆维吾尔自治区基层医院平均住院日调查分析

目的 通过对新疆维吾尔自治区14个县乡级医疗机构住院患者平均住院日及影响因素进行分析,为县乡级医疗机构进一步提高医疗管理质量提供依据.方法 将2009-2010年1504例县乡级医院住院患者平均住院天数,按性别、年龄、院别、付费方式、疾病分类进行描述性统计和秩和检验分析.结果 不同性别间及院别间平均住院日差异均有统计学意义(均P＜0.05),男性平均住院日为10.39 d,女性为8.69d,乡级医院为9.27d,县级医院为9.50 d.不同年龄间平均住院日差异有统计学意义(P＜0.05),小于15岁组、15 ～24岁组、25～44岁组、45 ～65岁组、大干65岁组平均住院日分别为8.10 d、7.66d、8.83 d、10.26 d和11.33 d.自费患者平均住院日为8.39 d,新农合组为9.10 d,商业保险组10.17 d,社会基本医疗保险患者则为11.08 d.不同疾病分类间平均住院日差异明显,妊娠类平均住院日最短,为6.73 d,而肿瘤患者则为14.26 d.结论 不同性别、不同年龄段、不同疾病分类及不同付费方式间平均住院日存在差异,县级医疗机构和乡级医疗机构住院患者平均住院日也存在差异.     

住院患者精神用药情况调查分析

目的：了解目前住院精神患者的药物使用情况。方法：采用一日法调查西安市精神卫生中心403例住院精神患者诊断和治疗情况，并与上海市精神卫生中心2004年调查结果相比较。结果：①传统精神药物使用显著减少，新型精神药物使用占据首位；②抗精神病药物使用趋向小剂量化；③本组联用丙戊酸盐类药物显著增多；④我院精神药物使用情况与上海精神卫生中心比较有显著差异。结论：近年来精神药物使用情况已发生了显著变化，与新型精神药物疗效好，副作用少，患者依从性高有关。