鼠胚胎神经干细胞的体外培养及诱导分化

背景：随着神经干细胞培养技术条件的成熟,为颅脑损伤后神经系统功能重建、神经再生和神经系统疾病治疗提供了新的思路和途径。但移植所用的细胞来源及移植后的神经干细胞能否分化为神经细胞是急需解决的重要问题。 目的：拟将体外分离培养的鼠胚胎神经干细胞稳定增殖传代,并诱导分化出神经系统的3种基本细胞。 设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2007-06/2008-06在新疆维吾尔自治区人民医院完成。 材料：14~16 d孕龄Wistar大鼠胚胎,由新疆自治区实验动物研究所和新疆医科大学实验动物中心提供。 方法：取胎鼠额叶大脑皮质,组织块消化法体外分离培养神经干细胞,在表皮生长因子、碱性成纤维生长因子和B27联合作用下使其稳定增殖。原代培养7 d后,加入含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基诱导14 d。 主要观察指标：倒置显微镜下观察神经干细胞的生长形态,并行巢蛋白免疫荧光染色鉴定。应用免疫组化染色检测诱导后神经干细胞的分化情况。 结果：原代培养一两天细胞散在分布,胞体较小,呈圆形,折光性较好,3 d后逐渐形成由数个细胞组成的细胞球;传代后贴壁细胞多数分化为长梭形或扁平形的胶质细胞,10 d时可见大量由数十至数百个细胞组成的较大细胞球,其生长速度基本与原代培养相同,但成球速度明显加快;免疫荧光染色呈巢蛋白阳性反应。以含体积分数为10%胎牛血清的培养液诱导后,免疫化学染色示神经干细胞球呈神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白、髓鞘碱性蛋白阳性表达。 结论：实验成功从鼠胚胎脑皮质分离培养出神经干细胞,并诱导分化为神经元细胞、星形胶质细胞和少突胶质细胞。 关键词：神经干细胞;体外培养;诱导分化     

饮食诱导肥胖大鼠模型下丘脑、胰、肝脏G蛋白耦联的内向整流型K离子通道蛋白4的表达

目的 研究饮食诱导的肥胖大鼠模型下丘脑、肝、胰等组织器官中G蛋白耦联的内向整流型K离子通道蛋白4(GIRK4)的表达.方法 30只SD大鼠按随机数字表分两组,肥胖大鼠组(20只,高脂高糖饮食构建肥胖大鼠模型)和正常对照组(10只,正常饮食).建模成功处死两组大鼠后分离下丘脑、肝、胰等组织器官,提取蛋白,Western免疫印迹检测GIRK4表达.对肥胖大鼠组与正常对照组大鼠体质量、体长、脂肪系数等指标进行分析比较.结果 肥胖大鼠组大鼠体长、体质量、脂肪系数显著高于正常对照组[雌:(22.00±0.71)比(20.80±0.45)cm,(289.10±29.06)比(239.60±10.08)g,(3.47±1.54)比(1.14±0.56);雄:(26.32±0.87)比(24.80±0.84)em,(432.00±28.14)比(352.00±37.37)g,(3.20±0.56)比(1.11±0.27);均P＜0.05],但下丘脑、肝、胰脏的GIRK4表达却显著低于正常对照组(P＜0.05).结论 大鼠下丘脑、肝脏、胰脏较高表达的GIRK4可能与脂肪代谢、饮食诱导型肥胖的发生有关.     

肥胖大鼠模型脑组织中GIRK4的表达研究

目的 研究饮食诱导肥胖大鼠G-蛋白偶联（门控）内向整流钾离子通道（GIRK4）基因在脑组织中的表达,探讨GIRK4与肥胖的相关性.方法 30只SD大鼠,雌雄各半,对照组（n=10）予以普通饲料饲喂作为,实验组（n=20）以高脂肪高热量饮食饲喂8周,建立肥胖大鼠模型,肥胖大鼠体重超过正常饮食饲喂大鼠20％以上为成功模型,处死大鼠,提取两组大鼠的脑组织,提取脑组织中的总蛋白,应用Western blot法检测GIRK4蛋白表达,Quantity One软件处理实验结果.结果 （1）15只大鼠进入肥胖组（体重大于正常对照组20％）.（2）肥胖组血清总胆固醇及甘油三酯水平高于对照组（P＜0.05）,高脂高糖饮饲喂建立大鼠模型,肥胖大鼠脑中表达GIRK4蛋白较正常饲喂大鼠低,两组间差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 GIRK4在肥胖大鼠脑组织中表达水平降低,且在肥胖大鼠中表达,可能与饮食诱导肥胖的发生相关.     

孕鼠腹腔注射脂多糖合并缺氧环境造成宫内胎鼠脑部损伤

目的 探讨孕鼠宫内感染合并缺氧致幼鼠脑瘫的模型制作及评价方法.方法 实验动物分为3组:脂多糖缺氧组:健康Wistar孕鼠脂多糖腹腔注射,12 h后置于缺氧环境中2.5 h,4 h后再次腹腔注射脂多糖;颈动脉结扎缺氧组:7 d龄Wistar幼鼠结扎右侧颈动脉结合缺氧环境;对照组:7 d龄Wistar幼鼠仅行颈正中切门.于术后4周行足印分析试验、股四头肌复合肌肉动作电位(CMAP)及病理学检测.结果 与对照组相比,脂多糖缺氧组和颈动脉结扎缺氧组前后肢足印重复性差,表现为间距较大,且间距不稳定(P<0.05);CMAP引出最大波幅所需的刺激强度增大,引出波幅降低(P<0.05),脑室旁正常组织结构破坏,细胞排列紊乱,局部大小不等圆形软化灶;胞浆内容物缺失,部分核膜破损,核内容物外溢.结论 应用孕鼠宫内感染合并缺氧的方法制作幼鼠脑瘫模型稳定可靠,与单侧颈动脉结扎缺氧模型相比具有微创、简单易行、更逼真地模拟人类在怀孕晚期宫内感染缺氧致胎儿脑部损伤的优点.     

鼠胚胎神经干细胞的体外培养及诱导分化

背景:随着神经干细胞培养技术条件的成熟,为颅脑损伤后神经系统功能重建、神经再生和神经系统疾病治疗提供了新的思路和途径.但移植所用的细胞来源及移植后的神经干细胞能否分化为神经细胞是急需解决的重要问题.目的:拟将体外分离培养的鼠胚胎神经干细胞稳定增殖传代,并诱导分化出神经系统的3种基本细胞.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-06/2008-06在新疆维吾尔自治区人民医院完成.材料:14～16d孕龄Wistar大鼠胚胎,由新疆自治区实验动物研究所和新疆医科大学实验动物中心提供.方法:取胎鼠额叶大脑皮质,组织块消化法体外分离培养神经干细胞,在表皮生长因子、碱性成纤维生长因子和B27联合作用下使其稳定增殖.原代培养7 d后,加入含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基诱导14 d.主要观察指标:倒置显微镜下观察神经干细胞的生长形态,并行巢蛋白免疫荧光染色鉴定.应用免疫组化染色检测诱导后神经干细胞的分化情况.结果:原代培养一两天细胞散在分布,胞体较小,呈圆形,折光性较好,3 d后逐渐形成由数个细胞组成的细胞球;传代后贴壁细胞多数分化为长梭形或扁平形的胶质细胞,10 d时可见大量由数十至数百个细胞组成的较大细胞球,其生长速度基本与原代培养相同,但成球速度明显加快;免疫荧光染色呈巢蛋白阳性反应.以含体积分数为10%胎牛血清的培养液诱导后,免疫化学染色示神经干细胞球呈神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白、髓鞘碱性蛋白阳性表达.结论:实验成功从鼠胚胎脑皮质分离培养出神经干细胞,并诱导分化为神经元细胞、星形胶质细胞和少突胶质细胞.     

GIRK4基因多态性与新疆维吾尔族人胰岛素抵抗的相关性研究

目的 探讨G蛋白偶联内向整流钾通道(G-protein-activated inwardly rectifying K+ channel,GIRK4)基因多态性与新疆维吾尔族人胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)的相关性.方法 采取横断面流行病学调查为基础的病例-对照研究,随机选取1295位(324例IR患者和971名对照)新疆维吾尔族研究对象,随机抽取其中48例IR患者测序筛查维吾尔族人GIRK4基因功能区的变异位点,然后选取代表性的变异位点,在1295名研究对象中基因分型并进行关联分析研究.结果 年龄≤50岁维吾尔族人群中,rs11221497位点变异与IR相关(基因型模型P=0.017,显性模型中P=0.009),Logistic分析校正混杂因素(年龄、性别、吸烟、饮酒)后,显性模型CC基因型携带者患IR的OR值为1.833(95%CI:1.157~2.905).结论 GIRK4基因多态性可能与新疆维吾尔族人IR相关;rs11221497位点CC基因型是IR的危险因素.     

GIRK4在肥胖大鼠模型心肺组织中的表达研究

目的 研究饮食诱导肥胖大鼠G-蛋白偶联（门控）内向整流钾离子通（GIRK4）基因在心肺组织中的表达,探讨GIRK4与肥胖的相关性.方法 30只SD大鼠,雌雄各半,10对照组（n=10）,予以普通饲料饲喂作为,实验组（n=20）,以高脂肪高热量饮食饲喂8周,建立肥胖大鼠模型,肥胖大鼠体重超过正常饮食饲喂大鼠20％以上为成功模型,处死大鼠,提取两组大鼠的心肺组织,分别提取心肺的总蛋白,应用Western blot检测技术,检测GIRK4蛋白表达,Quantity One软件处理实验结果.结果 ①15只大鼠进入肥胖组（体重大于正常对照组20％）;②肥胖组血清总胆固醇及甘油三酯水平高于对照组（P＜0.05）,高脂高糖饮饲喂建立大鼠模型,肥胖大鼠心、肺中表达GIRK4蛋白较正常饲喂大鼠低,两组间差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 GIRK4在大鼠心、肺均有表达,可能与肥胖时心律失常及肺损伤相关.     

产前接触脂多糖合并缺氧制作围产期脑性瘫痪动物模型：模拟人类实际状况的可能性

目的 探讨孕鼠宫内感染合并缺氧致幼鼠脑瘫的模型制作及评价方法。 方法 实验动物分为三组：（1）脂多糖＋缺氧组:选用孕16～18天健康Wistar雌性大鼠脂多糖腹腔注射（0.4mg/kg）,12小时后置于缺氧环境中缺氧2.5小时,4小时后再次腹腔注射脂多糖(0.4mg/kg);（2）颈动脉结扎＋缺氧组：组出生后第7天Wistar幼鼠结扎右侧颈动脉结合缺氧环境的方法制作幼鼠脑瘫模型;（3）对照组：仅行颈正中切口,然后缝合切口。于术后4周对三组实验动物进行足印分析试验、股四头肌复合肌肉运动诱发电位及病理学检测。 结果 （1）足印分析试验：脂多糖＋缺氧组和颈动脉结扎＋缺氧组实验鼠前后肢足印重复性差,表现为间距较大,且间距不稳定,明显大于对照组（P<0.05）;（2）两实验组动物后肢股四头肌CMAP与对照组相比,引出最大波幅所需的刺激强度增大,引出波幅降低（P<0.05）; （3）HE染色光镜观察两实验组脑室旁正常组织结构破坏,细胞排列紊乱,局部大小不等圆形软化灶,在颈动脉结扎＋缺氧组以损伤侧脑室周围变化明显。 结论 应用孕鼠宫内感染合并缺氧的方法制作幼鼠脑瘫模型稳定可靠,此模型与成熟的单侧颈动脉结扎缺氧模型相比具有微创的、简单易行、逼真的模拟人类在怀孕晚期宫内感染缺氧致胎儿脑部损伤的优点,值得推广。     

GIRK4在肥胖大鼠脂肪组织中的表达

目的 研究饮食诱导肥胖大鼠G蛋白耦联(门控)内向整流钾离子通道(GIRK4)基因在脂肪组织中的表达,探讨其与肥胖的相关性.方法 30只Sprague-Dawley大鼠随机分为两组:对照组(n=10),予以普通饲料饲喂;肥胖组(n=20),予以高脂肪、高热量饮食饲喂.8周后处死大鼠,提取两组的白色脂肪组织和棕色脂肪组织,...     

奎屯氟和氟砷中毒患者血浆钙、磷含量测定

新疆奎屯地区在 2 0世纪 6 0年代以前 ,居民饮用地面水 ,没有地方性氟中毒出现。随着我国工业化的发展 ,6 0年代后居民饮用井水 ,由于没有把好水质检验关 ,于 70年代出现地方性氟中毒及氟砷联合中毒 [1 ]。 1985年底该地区进行了改水防治。我们于改水后测定了与骨牙代谢关系密切的血浆钙、磷含量 ,以期了解其与氟砷中毒的关系。1　对象与方法1.1　对象　所有受检者为新疆奎屯车排子地区居民和乌鲁木齐市青年。分为 3组。原氟中毒患者组 6 1例 ,改水前曾长期饮用含氟量为 3.3ppm、含砷量为 0 .0 6 ppm的井水。临床诊断为慢性氟中毒 ,有氟斑牙…