电针经p38 MAPK信号通路对坐骨神经损伤大鼠脊髓中AQP1和AQP4表达的影响＊

目的 探讨电针（electroacupuncture，EA）治疗对坐骨神经损伤大鼠脊髓中水通道蛋白AQP1和AQP4表达的影响，并揭示其可能作用机制。方法 将60只SD大鼠随机分成假手术组（Sham组）、模型组（Model组）、电针组（EA组）、抑制剂组（SB203580组）和电针 + 抑制剂组（EA + SB203580组），每组12只。采用钳夹法复制坐骨神经损伤大鼠模型，并给予电针和p38抑制剂SB203580干预14天。分别于干预前及干预后第7天和14天检测坐骨神经功能指数（SFI）；HE染色观察损伤处远端坐骨神经组织病理学变化；BL-410电生理系统检测大鼠神经传导速度（NCV）；qRT-PCR检测脊髓AQP1和AQP4 mRNA表达水平；Western blot检测脊髓AQP1、AQP4、p-p38MAPK和p38MAPK蛋白表达水平。结果 与Sham组比较，Model组大鼠坐骨神经组织结构不完整，出现明显炎症浸润和病理损伤，EA组和SB203580组大鼠坐骨神经组织相较于Model组坐骨神经组织炎症浸润和病理损伤得到明显缓解，EA + SB203580组与SB203580组的差异不大。与Sham比较，Model组大鼠脊髓中AQP1和AQP4 mRNA和蛋白表达水平以及p-p38MAPK/p38MAPK蛋白比值均显著增加，而SFI值和NCV显著降低（P < 0.01）；与Model组比较，EA组和SB203580组大鼠脊髓中AQP1 和AQP4 mRNA和蛋白表达水平、p-p38MAPK/p38MAPK蛋白比值均显著降低，而SFI值和NCV显著升高（P < 0.01）；与SB203580组比较，EA + SB203580组检测指标无显著性变化（P > 0.05）。结论 电针刺激可抑制脊髓中AQP1和AQP4表达，改善大鼠坐骨神经损伤，其可能与抑制p38MAPK信号通路活化有关。     

二十五味鬼臼丸通过Wnt/β-catenin信号通路改善去卵巢大鼠骨质疏松症

目的 探讨藏族药二十五味鬼臼丸通过经典Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路改善去卵巢大鼠的骨质疏松症的机制。方法 将48只3月龄SD雌性大鼠随机分为模型组（OVX）、假手术组（Sham）、雌二醇组（E₂）、二十五味鬼臼丸高、中、低剂量组,除假手术组大鼠摘取卵巢附近部分脂肪组织外,其余各组大鼠均摘取卵巢构建去卵巢骨质疏松大鼠模型。术后2周开始给药处理,雌二醇组给予戊酸雌二醇0.1 mg·kg^-1,二十五味鬼臼丸组给予二十五味鬼臼丸高剂量800 mg·kg^-1,中剂量400 mg·kg^-1,低剂量200 mg·kg^-1,模型组及假手术组给予同体积的生理盐水,连续灌胃12周,每日1次。取材后,苏木素-伊红（HE）染色法观察大鼠右侧股骨及腰椎的骨形态变化;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b（TRAP5b）、Ⅰ型胶原C端肽（CTX-Ⅰ）、骨特异性碱性磷酸酶（BALP）、Ⅰ型前胶原氨基端原肽（PINP）、骨钙素（BGP）的水平,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测股骨中β-catenin、矮小相关转录因子2（Runx2） mRNA表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测β-catenin、Runx2和低密度脂蛋白受体相关蛋白-5（Lrp‐5）蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠骨小梁紊乱且稀疏,骨小梁间连接较少,血清BALP、BGP、PINP水平显著下降（P<0.01）,CTX-Ⅰ、TRAP5b水平显著升高（P<0.01）;股骨组织中β-catenin、Runx2 mRNA的表达水平下降（P<0.01）;Lrp‐5、β‐catenin和Runx2的蛋白表达显著下降（P<0.01）。与模型组比较,二十五味鬼臼丸高、中、低剂量组大鼠上述指标的异常改变得到不同程度的恢复（P<0.05,P<0.01）。结论 藏族药二十五味鬼臼丸对于治疗去卵巢大鼠骨质疏松症具有较好的效果,其机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关,通过上调信号通路中成骨相关基因的表达影响骨代谢。     

温经汤加味对EM肾虚血瘀证大鼠局部微环境MMP-9、TNF-α、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ的影响及其意义＊

目的 探讨子宫内膜异位症（Endometosis，EM）肾虚血瘀证大鼠异位病灶局部MMP-9，TNF-α，CollagenⅠ、Collagen Ⅲ表达水平，以及温经汤加味对其干预作用及机制。方法 SPF级雌性未孕健康SD大鼠设为空白组；构建肾虚血瘀证大鼠模型，造模成功后，设为假手术组（仅开腹）；其余大鼠以自体内膜移植法构建EM肾虚血瘀证模型，造模成功后的大鼠分为模型组（不用药物干预）、阳性药（达那唑）组、温经汤加味组（低、中、高3种剂量）。阳性药对照组给予达那唑63 mg·kg^-1连续4周灌胃，中药低、中、高剂量组分别以5 g·kg^-1、10 g·kg^-1、20 g·kg^-1连续4周灌胃。取各组大鼠子宫内膜组织观察组织病理变化；免疫组化法（IHC）检测各组大鼠子宫内膜组织MMP-9，TNF-α的蛋白表达；蛋白免疫印迹法（WB）、实时荧光聚合酶链式反应法（RT-PCR）检测各组大鼠子宫内膜组织MMP-9、TNF-α、CollagenⅠ、Collagen Ⅲ基因表达。结果 与空白组、假手术组比较，EM肾虚血瘀证模型组大鼠在位、异位内膜组织中MMP-9、TNF-α、CollagenⅠ、Collagen Ⅲ蛋白及其基因表达在模型组子宫内膜组织升高（P < 0.01）；与模型组比较，阳性药对照组、温经汤加味治疗组大鼠MMP-9、TNF-α、CollagenⅠ、Collagen Ⅲ蛋白及其基因表达水平均降低（P < 0.01或P < 0.05）。结论 局部微环境免疫抑制微血管新生导致异位内膜侵袭是EM发生、发展过程中的重要病理表现，MMP-9、TNF-α、CollagenⅠ、Collagen Ⅲ过度表达可能促进了这一过程的发生、发展；温经汤加味通过“逆转”MMP-9、TNF-α、CollagenⅠ、Collagen Ⅲ等细胞因子异常升高，起到了解除局部微环境免疫抑制、阻断微血管新生的作用，在治疗EM肾虚血瘀证过程中表现出确切的疗效。     

桔梗皂苷D通过Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路抑制细胞凋亡保护急性肺损伤的机制研究＊

目的 探讨桔梗皂苷D对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤的保护机制。方法 35只雄性SPF级SD大鼠，随机分为假手术组、桔梗皂苷D对照组、模型组、桔梗皂苷D给药组和地塞米松组，每组7只。除假手术组和桔梗皂苷D对照组外，其余各组采用脂多糖诱导大鼠急性肺损伤模型。造模24 h后，牺牲大鼠并称体重及两肺重量，计算肺指数；脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEL）法检测肺组织细胞凋亡并计算凋亡指数（Apoptosis Index，AI）；透射电镜下观察大鼠肺组织超微结构的改变；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肺组织凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2），Bcl-2相关X蛋白（Bax），半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3），多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1（PARP1）蛋白及活化的天冬氨酸蛋白水解酶-3（Cleaved Caspase-3），Cleaved PARP1的表达水平。结果 与假手术组比较，模型组大鼠肺指数显著升高（P < 0.01），肺组织细胞凋亡指数（AI）显著升高（P < 0.01），肺组织Bcl-2及Bcl-2/Bax蛋白表达显著下调（P < 0.01），Bax，Cleaved Caspase-3/Caspase-3，Cleaved PARP1/PARP1蛋白表达均显著升高（P < 0.01）；透射电镜下可见到凋亡小体，影响并改变了肺组织细胞超微结构；与模型组比较，桔梗皂苷D给药组及地塞米松组肺指数明显降低（P < 0.01），肺组织AI明显降低（P < 0.01），肺组织中Bcl-2及Bcl-2/Bax蛋白表达显著上调（P < 0.01），Bax，Cleaved Caspase-3/Caspase-3，Cleaved PARP1/PARP1蛋白表达均显著降低（P < 0.01）；透射电镜下，桔梗皂苷D给药组和地塞米松组肺组织细胞超微结构状态较好。结论 桔梗皂苷D对脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤具有保护作用，其作用机制与抑制Bax/Bcl-2/Caspase-3信号通路，减轻肺组织细胞凋亡密切相关。     

内异方对子宫内膜异位症大鼠的治疗作用以及对异位内膜VEGF、HIF-1α、NF-κB和PTEN表达的影响＊

目的 本研究通过观察内异方对子宫内膜异位症（endometriosis,EM）大鼠的治疗作用，并进一步阐明可能的作用机制。方法 清洁级雌性成年（9-10周龄）未孕SD大鼠，体重190-210 g，随机分为假手术组、模型组、内异方治疗组和阳性对照组，每组最终纳入10只大鼠。大鼠在第3个动情期时采用子宫内膜自体移植法建立EM大鼠模型。造模成功后，内异方治疗组给予内异方水煎剂灌胃，阳性对照组给予达那唑溶液灌胃，假手术组和模型组大鼠给予同体积生理盐水灌胃，各组连续给药4周。治疗结束后，解剖异位内膜，采用HE染色观察异位内膜的病理形态学改变情况；采用Western blot检测异位内膜中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、第10号染色体缺失的磷酸酶(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)与核转录因子-Kappa B(nuclear factor-Kappa B,NF-κB)蛋白表达水平。结果 HE染色结果显示，内异方改善EM大鼠的异位内膜病理学结构改变。Western blot结果显示，内异方抑制EM大鼠的异位内膜组织的VEGF、HIF-1α和NF-κB蛋白表达水平，但促进PTEN蛋白表达水平。结论 内异方具有改善大鼠EM的作用，这种作用可能与抑制异位内膜组织中VEGF、HIF-1α和NF-κB蛋白表达并促进PTEN蛋白表达相关。     

枸杞丹参对RCS大鼠视网膜组织中Bcl-2、Bid表达的影响＊

目的 观察枸杞加丹参对视网膜色素变性大鼠视网膜Bcl-2、Bid表达的影响。方法 实验对象分五组。空白组：RCS（rdy+/+,p+/+）大鼠，8只，雌雄均4只，（n = 8），灌胃生理盐水；将RCS（rdy-/-,p-/-）雌性及雄性大鼠均随机分为4组，分别为：模型组、枸杞组、丹参组和枸杞加丹参组（杞参组），每组雌雄均4只，每组8只，分别给予灌胃生理盐水、生理盐水、枸杞、丹参、枸杞加丹参。灌胃28天后，免疫组化、Real-time PCR、WB检测各组RCS大鼠视网膜Bcl-2、Bid的相对表达量。结果 ①免疫组化检测显示：RCS（rdy-/-,p-/-）杞参组大鼠视网膜上Bcl-2蛋白阳性表达较RCS（rdy-/-,p-/-）大鼠模型组明显增多；RCS（rdy-/-,p-/-）杞参组大鼠视网膜上Bid蛋白阳性表达较RCS（rdy-/-,p-/-）大鼠模型组明显减少，但较RCS（rdy+/+,p+/+）大鼠空白组多。②RT-qPCR检测显示：RCS（rdy-/-,p-/-）杞参组Bcl-2 mRNA相对表达量明显高于RCS（rdy-/-,p-/-）模型组，差异有统计学意义（P < 0.05），且接近RCS（rdy+/+,p+/+）大鼠空白对照组。RCS（rdy-/-,p-/-）杞参组Bid mRNA相对表达量明显低于RCS（rdy-/-,p-/-）模型组，差异有统计学意义（P < 0.05），且接近RCS（rdy+/+,p+/+）大鼠空白对照组。③WB检测显示：RCS（rdy-/-,p-/-）杞参组Bcl-2蛋白相对表达量明显高于RCS（rdy-/-,p-/-）模型组，差异有统计学意义（P < 0.05），且接近RCS（rdy+/+,p+/+）大鼠空白对照组。RCS（rdy-/-,p-/-）杞参组Bid蛋白相对表达量明显低于RCS（rdy-/-,p-/-）模型组，差异有统计学意义（P < 0.05），且接近RCS（rdy+/+,p+/+）大鼠空白对照组。结论 视网膜色素变性经典动物模型RCS(rdy-/-,p-/-）大鼠视网膜组织中Bcl-2表达下降、Bid表达上升；枸杞加丹参灌胃促进RCS(rdy-/-,p-/-）大鼠视网膜抗凋亡因子Bcl-2表达上调，同时，下调促凋亡因子Bid表达，在抗线粒体凋亡途径上减轻视网膜色素变性大鼠的视网膜细胞凋亡，从而保护视功能。     

基于骨组织Runx2、Osterix启动子甲基化探究鹿茸中药复方对去卵巢骨质疏松症大鼠的疗效机制＊

目的 基于骨组织Runx2、Osterix启动子甲基化水平，探究鹿茸中药复方对去卵巢骨质疏松症大鼠的疗效机制。方法 去卵巢复制绝经后骨质疏松症（PMOP）大鼠模型，将其分4组，分别为：正常组、模型组、鹿茸中药复方组、仙灵骨葆阳性对照组。灌胃14周后，X射线吸收测量法检测骨密度、质谱法检测Runx2、Osterix启动子甲基化水平。结果 ①与正常组比较，模型组第1~6腰椎骨密度明显降低（P < 0.01）；骨组织Runx2启动子-955 bp~-456 bp CpG1、CpG2甲基化水平明显升高（P < 0.05）；骨组织Osterix启动子-1082 bp~-583 bp CpG1、CpG2甲基化水平明显升高（P < 0.01）。②与模型组比较，鹿茸中药复方组、仙灵骨葆阳性对照组第1~6腰椎骨密度明显升高（P < 0.05）；鹿茸中药复方组骨组织Runx2启动子-955 bp~-456 bp CpG1、CpG3甲基化水平明显降低（P < 0.05），Osterix启动子-1082 bp~-583 bp CpG1甲基化水平明显降低（P < 0.05）；仙灵骨葆阳性对照组骨组织Runx2启动子-955 bp~-456 bp CpG1、CpG2甲基化水平明显降低（P < 0.05），Osterix启动子-1082 bp~-583 bp CpG1、CpG2甲基化水平明显降低（P < 0.01）。结论 鹿茸中药复方通过降低骨组织Runx2、Osterix启动子甲基化水平的表观遗传学机制，有效防治PMOP。     

甲炎康泰对自身免疫性甲状腺炎大鼠T-bet/GATA3的影响＊

目的 观察甲炎康泰（JYKT）复方颗粒对自身免疫性甲状腺炎（autoimmune thyroiditis，AIT）大鼠Th1/Th2细胞转录因子T-bet/GATA3的影响。方法 50只Lewis大鼠，雌性，每组10只随机分为正常对照组、模型组、JYKT低、中、高剂量组。模型组与给药组大鼠皮下多点注射猪甲状腺球蛋白和弗化剂的方法建立自身免疫性甲状腺炎大鼠（AIT大鼠），大鼠造模6周后，正常、模型组大鼠每日予以0.9 mL/100 g双蒸水，中药组大鼠予以同体积药物混悬液连续8周。给药结束后RT-PCR检测各组大鼠脾脏中T-bet、GATA3 mRNA的表达情况；Western Blot检测各组大鼠脾脏中T-bet、GATA3的蛋白表达情况；免疫组化法测定大鼠甲状腺组织T-bet、GATA3蛋白的表达情况。结果 与正常组比较，模型组T-bet、GATA3 mRNA及蛋白表达均显著上升（P < 0.01）；与模型组比较，甲炎康泰低、中、高剂量组T-bet、GATA3 mRNA及蛋白均下降（P < 0.05，P < 0.01）。结论 T-bet/GATA3是影响Th1/Th2平衡的关键转录因子，甲炎康泰可调控T-bet/GATA3表达，从而影响了自身免疫性甲状腺炎的发生与发展。     

酸枣仁汤对老年慢性睡眠剥夺模型大鼠核受体PPARγ及其共激活因子PGC-1α表达的影响＊

目的 研究酸枣仁汤对老年慢性睡眠剥夺模型大鼠核受体PPARγ及其共激活因子PGC-1α表达的影响。方法 将50只雄性Wistar大鼠随机分为环境对照组、模型组、阳性对照组、酸枣仁汤低、高剂量组，除环境对照组外，其余各组均皮下注射D-半乳糖，于末次给药后进行多平台水环境睡眠剥夺，造模结束后各组开始灌胃给药，连续给药7天。采用自主活动仪检测大鼠光照环境活动时间、黑暗环境活动时间、总活动时间，采用比色法检测大鼠下丘脑ATP含量的变化，采用Real Time-PCR、Western-blot和免疫组化分别检测大鼠下丘脑核受体PPARγ及其共激活因子PGC-1α mRNA和蛋白表达水平。结果 与环境对照组比较，模型组大鼠光照环境活动时间、黑暗环境活动时间、总活动时间均显著增加（P < 0.01）；与模型组比较，阳性对照组、酸枣仁汤高剂量组光照环境活动时间、黑暗环境活动时间、总活动时间均显著减少（P < 0.05，P < 0.01）；与环境对照组比较，模型组下丘脑ATP含量显著降低（P < 0.01）；与模型组比较，阳性对照组、酸枣仁汤高剂量组下丘脑ATP含量显著升高（P < 0.05）；与环境对照组比较，模型组核受体PPARγ及其共激活因子PGC-1α mRNA和蛋白表达水平显著降低（P < 0.01，P < 0.05）；与模型组比较，阳性对照组、酸枣仁汤高剂量组核受体PPARγ及其共激活因子PGC-1α mRNA和蛋白表达水平显著升高（P < 0.01，P < 0.05）。结论 酸枣仁汤有可能基于PPARγ及其共激活因子PGC-1α同时调控昼夜节律与能量代谢。     

电针对慢传输型便秘大鼠结肠Cajal间质细胞自噬相关蛋白表达的影响研究＊

目的 探讨电针治疗慢传输型便秘大鼠（Slow transit constipation，STC）的可能机制。方法 将40只雄性SD大鼠按随机数字表法分为空白组（10只）、STC组（30只）。采用复方地芬诺酯灌胃法复制STC模型，造模14天后评价造模效果，造模成功后STC组大鼠随机分为模型组（10只）、电针组（10只）、假电针组（10只）。电针组采用毫针交替针刺同侧“大肠俞”、“天枢”，后接韩式电针仪（HANS-200E）。假电针组针刺腧穴同电针组，夹持电极但不予通电。以上两组每次均干预30 min，每日1次，5次为1个疗程，疗程之间休息2天，共治疗10次。空白组、模型组仅抓取固定。干预结束后观测各组大鼠首粒黑便排出时间及小肠推进率，Western Blot检测结肠Cajal间质细胞（Interstitial cell of Cajal，ICC）标志物C-kit蛋白及自噬相关蛋白Beclin1、P62的表达水平。结果 与空白组比较，模型组大鼠首粒黑便排出时间延长（P < 0.01），小肠推进率明显降低（P < 0.01），结肠组织C-kit蛋白、P62蛋白表达下调，Beclin1蛋白表达上调（P < 0.01）；与模型组比较，电针组大鼠首粒黑便排出时间缩短（P < 0.01），小肠推进率明显升高（P < 0.01），结肠组织C-kit蛋白、P62蛋白表达上调，Beclin1蛋白表达下调（P < 0.01）；与假电针组比较，电针组大鼠首粒黑便排出时间减少（P < 0.05），结肠组织C-kit蛋白、P62蛋白表达上调，Beclin1蛋白表达下调（P < 0.01）。结论 电针可能通过抑制结肠ICC过度自噬，促进ICC数量和结构的恢复，从而改善STC模型大鼠肠道动力障碍。     

The effects of Liuwei Dihuang on canonical Wnt/β-catenin signaling pathway in osteoporosis

Ethnopharmacological relevance

The Liuwei Dihuang (LWDH), a wellknown classic traditional Chinese medicine formula, consists of six herbs including Rehmannia glutinosa Libosch. (family: Scrophulariaceae), Cornus officinalis Sieb. (family: Cornaceae), Dioscorea opposite Thunb. (family: Dioscoreaceae), Alisma orientale (G. Samuelsson) Juz (family: Alismataceae), Poria cocos (Schw.) Wolf (family: Polyporaceae) and Paeonia suffruticosa Andrews (family: Paeoniaceae). It has been used clinically in the treatment of many types of diseases with signs of deficiency of Yin in the kidneys for more than 1000 years in China. The purpose of this study was to observe the effects of LWDH on canonical Wnt/β-catenin signaling pathway in osteoporosis.

Materials and methods

Osteoporosis model was induced by ovariectomy (OVX) in 8-week-old female Sprague–Dawley (SD) rats. After 12 weeks of treatment with LWDH by intragastric administration, the rats were put to death in batch. The changes of alkaline phosphatase (ALP), osteocalcin (BGP) and estradiol (E2) in serum were determined, bone mineral density (BMD) and histomorphology of right femur were observed, biomechanics of lumbar vertebra were measured, and the expression of Lrp-5, β-catenin, Runx2, Osx involving the canonical Wnt/β-catenin signaling pathway were detected by RT-PCR. In addition, osteoblasts isolated from neonatal rat calvariae were used in this study to investigate the effects of LWDH on the canonical Wnt/β-catenin signaling pathway. Cell proliferation and differentiation were observed by the MTT test, ALP activity and calcified nodules. The expression of Lrp-5, β-catenin, Runx2, Osx mRNA of cells were also detected. All the data were analyzed by SPSS 13.0.

Results

Twelve weeks of treatment with LWDH could significantly decrease the level of ALP and BGP in serum, increase the BMD of femurs, and improve the biomechanical capabililty of vertebral body in maximum loading and elastic modulus. Concerning histomorphology, we found ordered arrangement of trabeculae, slightly thinning of trabeculae and none obvious slight fractures in femurs after twelve weeks of treatment with LWDH. In osteoblast, serum containing LWDH elicited significantly increase in cell viability (at day 6), alkaline phosphatase activity (at days 2, 4 and 6) and amount of calcified nodules. The expression of Lrp-5, β-catenin, Runx2 and Osx involved in the canonical Wnt/β-catenin signaling pathway were significantly up-regulated in the presence of LWDH both in vivo and in vitro experiment.

Conclusions

Our results suggest that Liuwei Dihuang could alleviate osteoporosis induced by ovariectomy, in part, through up-regulation of canonical Wnt/β-catenin signaling pathway of osteoblast.     

鹿茸健骨滴丸对骨质疏松症大鼠肾组织TRPV5表达的影响

目的: 通过观察鹿茸健骨滴丸对糖皮质激素性骨质疏松症(GIO)大鼠股骨骨密度(BMD)及肾组织钙转运通路蛋白(TRPV5) mRNA和蛋白表达的影响,探讨GIO的病理机制及鹿茸健骨滴丸的疗效。 方法: 将82只Wistar大鼠随机分为正常对照组(A组)、模型组(B组)、鹿茸健骨滴丸组(C组) 及骨疏康组(D组)。采用后肢肌注地塞米松(2.5 mg·kg^-1,每周2次)造模,造模同时,C,D 组分别按0.88, 2.1 g·kg^-1·d^-1 剂量ig给药,造模及给药9周后,应用XR-26型双能X射线骨密度仪测定BMD,采用实时定量PCR法及Western blot法测定肾组织TRPV5 mRNA和蛋白表达。 结果: 与正常组比较,模型组大鼠BMD明显降低(P<0.01),肾组织TRPV5 mRNA与蛋白表达均明显下降(P<0.01);与模型组比较,鹿茸健骨滴丸组BMD明显升高(P<0.01),TRPV5 mRNA与蛋白表达亦明显上调(P<0.01)。 结论: 地塞米松对肾钙转运过程产生抑制作用,是其诱发GIO的重要病理机制之一,鹿茸健骨滴丸通过上调肾组织TRPV5 mRNA与蛋白表达而促进肾钙重吸收,达到治疗GIO的作用。     

老鹳草素对小鼠骨髓基质干细胞成骨分化相关基因表达的影响

目的:观察老鹳草素对小鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)向成骨细胞分化的影响,并对成骨分化过程中相关基因表达进行检测。方法:分离、培养小鼠BMSCs,加入不同浓度老鹳草素(1×10-9,1×10-8,1×10-7mol·L-1)培养,另设空白组,分别于成骨诱导第7,14天采用碱性磷酸酶(ALP),骨钙素(OCN)试剂盒测定ALP活性及OCN含量,并进行ALP染色。于成骨诱导第21天时采用茜素红染色检测成骨分化过程中钙结节形成数量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)检测BMSCs成骨分化过程中OCN,ALP,骨涎蛋白(BSP),Runt相关转录因子2(Runx2)mRNA和蛋白表达的变化。结果:与空白组比较,成骨诱导后第7,14天时,老鹳草素各剂量组ALP活性,OCN含量及ALP染色强度均明显升高(P0.05),成骨诱导第21天时,老鹳草素各剂量组矿化结节数量及OCN,ALP,BSP,Runx2 mRNA和蛋白表达均明显升高(P0.05)。结论:老鹳草素能够明显促进BMSCs向成骨方向分化,成骨相关基因OCN,ALP,BSP,Runx2均参与这一过程。     

蒙药蓝刺头调控FoxO/Wnt/β-catenin通路抗氧化应激防治绝经后骨质疏松研究

目的:探讨蒙药蓝刺头抗氧化应激防治骨质疏松症(OP)作用;阐明蒙药蓝刺头调控FoxO/Wnt/β-catenin信号通路介导成骨细胞分化、骨形成机制。方法:77只SD雌性大鼠,随机分7组。制备绝经后骨质疏松症(PMOP)模型,阴道上皮角化实验验证造模成功。造模后90d除模型组、假手术组予0.9%氯化钠溶液灌胃,其余各组予相应药物灌胃。采血离心血清;处死剔除双侧完整股骨并标记,右侧股骨4%多聚甲醛溶液固定,左侧股骨-196℃液氮贮存罐保存。右侧股骨采用骨密度仪测定离体骨骨密度(BMD)(股骨近端BMD)。ELISA法测定大鼠血清氧化应激指标。左侧股骨Western Blot法测骨p-p66(S36)、p66、β-catenin、Wnt2、FoxO3a蛋白。结果:蒙药蓝刺头可有效抑制FoxO转录,增强Wnt信号通路调控能力,促进骨成骨分化,使骨形成大于骨吸收;蒙药蓝刺头干预去卵巢PMOP模型大鼠,骨髓间充质干细胞抑制(BMSCs)向成骨方向分化,有效下调破骨细胞(OC)的形成。结论:蓝刺头能显著改善PMOP大鼠氧化应激状态;可交叉调控FoxO/Wnt/β-catenin通路,抑制氧化应激FoxO转录,上调Wnt表达,促进模鼠骨成骨分化、骨形成。     

鹿茸不同组分对去卵巢骨质疏松症大鼠骨组织的作用及其机制

目的:考察鹿茸不同组分对去卵巢所致骨质疏松症大鼠骨组织的影响及作用机制,明确鹿茸健骨作用的主要物质基础,并探讨其健骨作用的机制。方法:雌性SD大鼠56只,随机分为7组,分别为正常组,模型组,仙灵骨葆组(468 mg·kg~(-1)),补佳乐组(80 mg·kg~(-1)),鹿茸多糖组(50 mg·kg~(-1)),鹿茸多肽组(175 mg·kg~(-1)),鹿茸多糖多肽组(50 mg·kg~(-1)+175 mg·kg~(-1))。采用切除大鼠双侧卵巢的方法复制骨质疏松症模型,连续给药12周后,采用骨密度仪检测大鼠骨密度、酶联免疫吸附测定(ELISA)检测各组大鼠骨组织中骨源性碱性磷酸酶(BALP),骨钙素(OT),骨形成蛋白-2(BMP-2),Smad1,Smad5,Runt相关转录因子2(RUNX2)等指标活性;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测骨组织中BMP-2,Smad1,Smad5,Runx2 mRNA及蛋白的表达水平。苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠骨组织进行形态学变化。结果:与正常组比较,模型组大鼠骨密度明显降低(P 0. 05),骨组织中BALP,OT,BMP-2,Smad1,Smad5,Runx2活性明显降低(P 0. 05),骨组织中BMP-2,Smad1,Smad5,Runx2 mRNA及蛋白表达明显降低(P 0. 05),骨组织结构破坏;与模型组比较,鹿茸多糖组、鹿茸多肽组、鹿茸多糖多肽组可明显提高去卵巢大鼠骨密度(P 0. 05),促进骨组织中BALP,OT,BMP-2,Smad1,Smad5,Runx2活性(P 0. 05);上调骨组织中BMP-2,Smad1,Smad5,Runx2 mRNA及蛋白表达(P 0. 05),预防骨组织破坏。结论:鹿茸不同组分对去卵巢所致的大鼠骨质疏松症均有治疗作用,其作用可能是与上调BMP-2/Smad1,Smad5/Runx2信号通路有关。     

左归丸对去卵巢大鼠股骨中核心结合因子α1 mRNA表达的影响

目的:观察左归丸对去卵巢骨质疏松大鼠股骨中核心结合因子α1 mRNA表达的影响,探讨其对骨质疏松的防治机制.方法:280只SPF级SD雌性大鼠,分为3组:正常组40只、假手术组40只、其余采取双侧背部卵巢切除术进行绝经后骨质疏松症造模.21 d后,随机分为5组:模型组、尼尔雌醇组、左归丸高、中、低剂量组.左归丸高、中、低剂量组分别给予ig6.4,3.2,1.6 g·kg-1剂量的左归丸混悬液,1次/d;尼尔雌醇组ig尼尔雌醇混悬液0.21 mg·kg-1,每周1次.于连续给药60,120,180 d,分别取大鼠左后肢股骨近端1/3部分,采用RT-PCR方法测定核心结合因子α1的mRNA表达水平.结果:与正常组比较,模型组股骨中核心结合因子α1 mRNA水平明显降低(P＜0.01);和模型组比较,给药60,120,180 d的左归丸各剂量组,股骨中核心结合因子α1 mRNA水平显著升高(P＜0.05).结论:骨组织中核心结合因子α1 mRNA表达水平的下调可能是PMOP发生的重要机制之一,左归丸能够上调骨组织中核心结合因子α1 mRNA表达,从而有效防治骨质疏松.     

微应变环境下柚皮苷对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的 探讨在微应变环境下,柚皮苷体外对培养的骨髓间充质干细胞（MSCs）向成骨细胞分化的影响及其机制。方法 将体外培养的兔MSCs接种于硅橡胶膜上,利用EF3200力学试验仪搭载的BioDynamic生物反应舱系统,对细胞进行周期性循环牵张微应变（微应变）加载。实验分成8组：对照组（常规培养）,微应变组,柚皮苷不同质量浓度（2、20、200 ng/mL）组,微应变＋柚皮苷（2、20、200 ng/mL）组。流式细胞仪检测各组MSCs的增殖指数;RT-PCR检测各组MSCs骨钙蛋白（OCN）、成骨特异性转录因子（Runx 2）与I型胶原（Col I）基因的表达。结果 在微应变环境下,柚皮苷使MSCs呈现明显的极性排列趋向,且细胞长轴平行力学刺激方向;显著提高MSCs的增殖活性;柚皮苷200 ng/mL显著上调OCN基因表达;不同质量浓度的柚皮苷均显著上调Runx 2基因表达,且与质量浓度呈正相关;低质量浓度柚皮苷促进Col I基因表达,而高质量浓度柚皮苷抑制了Col I基因的表达。结论 柚皮苷可增强在微应变环境下MSCs的增殖并能够促进其向成骨分化。     

哈蟆油蛋白对骨质疏松预防及ALP,Osteocalcin,Runx-2基因表达的调节作用

目的:观察哈蟆油蛋白(ROP)的抗骨质疏松作用,并探讨其对骨生长相关基因的调节作用。方法:采用去势法建立大鼠骨质疏松模型,随机分为空白组,模型组,戊酸雌二醇组,ROP高、中、低剂量组(0.15,0.075,0.037 5 g·kg~(-1));利用X射线技术测量股骨和腰椎骨密度(BMD);利用骨骼强度仪检测股骨的最大载荷量;应用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术检测骨生长相关基因的表达。结果:与空白组比较,模型组股骨、腰椎骨密度明显降低(P0.05,P0.01),碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP),Osteocalcin,Runx-2基因表达均显著下调(P0.01);与模型组比较,ROP高、中剂量组腰椎BMD均有显著增加(P0.01),ROP高剂量组ALP,Osteocalcin,Runx-2基因表达显著上调(P0.01)。结论:ROP能显著提高大鼠BMD和最大载荷量;ROP可能通过上调ALP,Osteocalcin,Runx-2基因的mRNA表达,促进成骨分化,调节骨代谢平衡,从而发挥防治骨质疏松的作用。     

壮骨止痛胶囊对去卵巢雌鼠骨质疏松症骨强度和生物力学的影响

目的：为验证壮骨止痛胶囊对去卵巢雌鼠骨质疏松症骨强度和生物力学的影响。方法：选取10～12月龄雌性SD大白鼠60只，随机分为假手术组、去卵巢模型组、骨松宝对照组、壮骨止痛胶囊低、中、高剂量组共6组，每组10只。术后5d拆线后开始给药，连续13周。取血尿骨标本从骨密度、骨生物力学指标、骨组织病理形态学等几个方面进行研究。结果：1．壮骨止痛胶囊能明显增加去卵巢模型鼠股骨、胫骨、腰椎骨矿含量和骨密度（P〈0．01）。2．壮骨止痛胶囊能显著提高模型鼠左胫骨弹性应力和最大抗弯强度（P〈0．01）。3．壮骨止痛胶囊能明显提高模型鼠左股骨颈梁髓比和左股骨头区域的平均骨小梁密度（P〈0．01）。结论：壮骨止痛胶囊能增加去卵巢模型鼠骨密度，改善骨的生物力学性能，逆转骨质疏松症的病理形态学改变。     

淫羊藿素与RANKL蛋白靶点结合抑制破骨细胞分化抗骨质疏松作用研究

目的探讨淫羊藿素(IT)与核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)蛋白靶点结合能力,并阐明其抗骨质疏松作用机制。方法采用分子对接技术模拟并预测RANKL与IT的相互作用,并通过切除大鼠双侧卵巢制备骨质疏松模型,评价IT对模型大鼠体质量、骨吸收血清指标碱性磷酸酶(ALP)和抗酒石酸盐酸性磷酸酶-5b(TRACP-5b)、骨密度(BMD)以及骨组织形态的调节作用。结果 IT可与靶蛋白RANKL发生稳定对接,IT组大鼠体质量较模型组显著降低(P0.05),IT能显著降低模型大鼠血清ALP、TRACP-5b水平(P0.01),显著降低模型大鼠股骨表面积与体积比值(BS/BV)、骨小梁分离度(Tb.Sp)值(P0.01),显著增加BMD、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th N)、骨小梁数目(Tb.N)值(P0.01)。结论 IT能通过与RANKL蛋白靶点结合,抑制破骨细胞分化并发挥抗骨质疏松作用。