副干酪乳酸杆菌通过诱导负调控因子抑制单核巨噬细胞对脂多糖刺激的炎性细胞因子应答

目的:探讨副干酪乳酸杆菌(Lactobacillus paracacei,L.para)预刺激抑制脂多糖(Lipopolysacchride,LPS)诱导的炎性细胞因子释放的调节机制?方法:用佛波酯诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞样细胞;以L.para预刺激为实验组,小剂量LPS(10 ng/ml)预刺激和TLR2激动剂Pam3CSK4预刺激为对照组,预刺激24 h后,再用LPS大剂量(1 ?滋g/ml)刺激经分化的THP-1细胞;检测预刺激对TLR信号通路负调控因子A20?SOCS1?SOCS3?IRAK3的表达水平,对TLR4和CD14的膜表达水平和mRNA水平,以及对大剂量LPS诱导的炎性细胞因子IL-1β?TNF-α水平的影响?各目的蛋白mRNA水平检测采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)法,TLR4和CD14的膜表达检测采用流式细胞术?结果:L.para等预刺激能够降低LPS诱导的IL-1β?TNF-α表达水平;并能够上调细胞TLR信号途径负调控因子A20?SOCS1?SOCS3?IRAK3的mRNA水平,但不影响细胞膜的TLR4和CD14阳性百分率;IRAK1/4抑制剂能够减弱预刺激诱导的负调控因子表达水平,并减弱预刺激对LPS诱导炎症因子释放的抑制作用?结论:副干酪乳酸杆菌预刺激能够通过上调TLR信号通路负调控因子A20?SOCS1?SOCS3?IRAK3等的表达抑制单核巨噬细胞对LPS刺激的炎性细胞因子的释放?     

三磷酸腺苷对脂多糖诱导内皮祖细胞表达炎症因子的影响及其机制

目的：分析三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导内皮祖细胞 (endothelial progenitor cells,EPCs)表达炎症细胞因子的影响,并探讨其机制。方法：采用密度梯度离心法分离人脐 血单个核细胞,用RT-PCR检测LPS(1 mg/mL)诱导EPCs表达炎症细胞因子的情况,低浓度的ATP(5 μmol/L)对LPS诱 导EPCs表达细胞炎症因子的影响,不同浓度(5,50 μmol/L)的ATP对EPCs中TLR4,MyD88和CD14 mRNA表达的影 响;Western印迹检测LPS(1 mg/mL)对EPCs表达TLR4调节蛋白MyD88和CD14的影响以及信号通路的活化情况,低浓 度ATP(1,5 μmol/L)对LPS诱导EPCs表达TLR4,MyD88和CD14的影响以及信号通路的活化情况。结果：EPCs高表达 TLR4,其配体LPS(1 mg/mL)显著上调IL-1β,MCP-1和ICAM-1的mRNA表达(均P<0.01),并呈时间依赖性上调MyD88和 CD14蛋白的表达,同时活化ERK和NF-κB信号通路。低浓度ATP抑制LPS诱导的IL-1β,MCP-1和ICAM-1 mRNA的表达 (均P<0.05),同时也下调LPS诱导的TLR4,MyD88和CD14蛋白的表达(P<0.01或P<0.05),并抑制LPS诱导的NF-κB信号 通路的活化(P<0.05)。结论：ATP在低浓度时通过负性调节TLR4信号通路而抑制LPS诱导的炎症细胞因子在EPCs中的 表达。     

炎症诱导性早产小鼠血淋巴细胞CD86和CD69分析

目的 分析小鼠血共刺激分子CD86和各淋巴细胞亚群活化分子CD69的表达,探讨Toll样受体4(TLR4)在脂多糖(LPS)诱发的早产中的作用。方法 在预先阻断TLR4或不阻断TLR4的条件下,腹腔注射LPS建立小鼠炎症诱导性早产模型,计算各组(LPS组、抗TLR4组和对照组)的早产率和死胎率。应用流式细胞仪检测血CD45+CD86+、CD3+CD69+、CD19+CD69+和CD49b+CD69+细胞的百分率。结果 LPS组的早产率\[50.0%(8/16)\]和死胎率\[11.0%(9/82)\]均高于对照组\[0(0/16),3.1%(5/163),P<0.01或P<0.05\],抗TLR4组的早产率\[6.3%(1/16)\]和死胎率\[3.9%(6/154)\]均低于LPS组(P<0.01或P<0.05)。预先阻断TLR4明显抑制LPS所致的血CD45+CD86+、CD3+CD69+和CD49b+CD69+细胞水平的升高(P均<0.01)。结论 LPS与其特异性受体TLR4作用,触发CD86+树突状细胞的活化和动员,导致T细胞和NK细胞等淋巴细胞亚群的激活,在早产的发生中具有重要作用。     

脂多糖刺激脐带间充质干细胞上调 IL-1Ra分泌的研究?

目的：探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)激活 Toll 样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)对脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)分泌白介素1受体拮抗剂(interleukin-1 receptor antagonist,IL-1Ra)的影响。方法采用组织块法从脐带华通胶组织中分离培养 UC-MSCs;流式细胞术检测UC-MSCs表面标志物 CD14、CD34、CD29和 CD105的表达;TLR4配体 LPS 以不同剂量和时间刺激 UC-MSCs,采用 qPCR 法和 ELISA 法检测 IL-1Ra 的 mRNA 和蛋白质表达水平。结果原代组织培养7~10 d,组织周边有贴壁细胞爬出,呈长梭形;UC-MSCs 表面标志物 CD29和 CD105呈阳性表达,而 CD14和 CD34呈阴性表达;LPS 刺激 UC-MSCs 后,IL-1Ra 在基因及蛋白质水平的表达均显著增加,差异有统计学意义(P <0.05),并呈剂量与时间依赖性。结论LPS 刺激 UC-MSCs 可上调 IL-1Ra 的分泌。     

Toll样受体2/4在人牙龈上皮细胞的表达研究

目的:探讨Toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR2)和Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)在人牙龈上皮细胞(human gingival epithelial cells,HGECs)的表达情况,以及上述受体在脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激下表达水平的改变?方法:采用逆转录PCR技术检测TLR2?TLR4 在HGECs的基因表达,采用real-time PCR技术和流式细胞技术检测1 μg/ml牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)?LPS或1 μg/ml大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli) LPS刺激后,该细胞TLR2?TLR4表达水平的改变?结果:来自不同个体的HGECs均表达TLR2,TLR4 mRNA?1 μg/ml P.gingivalis LPS刺激后,TLR2基因和蛋白表达水平均明显增高(P < 0.05);1 μg/ml E.coli LPS刺激后,TLR4基因和蛋白表达水平明显增高(P < 0.05)?结论:TLR2?TLR4在HGECs存在稳定表达,并能被LPS的刺激活化,提示上述两种受体可能参与了牙周组织的炎症和免疫反应?     

LPS对BALB/C小鼠肾小管上皮细胞TLR4和TNFα、IL-6表达的影响

目的 探讨TLR4在BALB/C小鼠肾小管上皮细胞(TEC)的表达和内毒素/脂多糖(LPS)刺激后TLR4的变化,以及对产生肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素-6(IL-6)的影响.方法 通过RT-PCR方法 检测TLR4 mRNA、TNFα mRNA和IL-6 mRNA在TEC的表达;流式细胞术检测TEC的TLR4膜蛋白水平;ELISA检测培养的TEC上清中TNFα、IL-6的含量.结果 正常TEC有TLR4 mRNA表达,但TNF αmRNA、IL-6 mRNA表达甚弱.经LPS刺激后,TEC中的TLR4 mRNA、TNF αmRNA和IL-6 mRNA表达均显著增强,TLR4膜蛋白以及培养上清中的TNFα、IL-6水平亦相应增加.结论 TLR4在LPS激活的TEC中表达显著增强,同时TEC分泌的炎症因子TNFα、IL-6的水平也相应上调.     

炎症诱导性早产小鼠胎盘淋巴细胞表型分析

目的 探讨Toll样受体4(TLR4)在炎症诱导性早产中的作用.方法 预先阻断TLR4或不阻断TLR4的条件下,腹腔注射脂多糖(LPS)建立小鼠炎症诱导性早产模型,计算早产率和死胎率.采用流式细胞术检测胎盘CD45+CD86+、CD45+CD49b+和CD49b+CD69+细胞的百分率.结果 LPS组的早产率和死胎率均明显高于对照组,抗TLR4组的早产率和死胎率均显著低于LPS组.预先阻断TLR4明显抑制LPS所致的胎盘CD45+CD86+、CD45+CD49b+和CD49b+CD69+细胞水平的升高.结论 TLR4在炎症诱导性早产中具有重要作用.     

羟基红花黄色素A抑制脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠炎症因子表达的研究

目的探讨羟基红花黄色素A(HSYA)是否可抑制肺部炎症信号转导通路的相关环节。方法以脂多糖(LPS)腹腔注射法建立急性肺损伤模型。将84只雄性昆明鼠随机分为7组,每组12只,包括空白组、LPS组、地塞米松(DXM)组(LPS+DXM)、HSYA低剂量组(LPS+HSYA6 mg/kg)、HSYA中剂量组(LPS+HSYA 15 mg/kg)、HSYA高剂量组(LPS+HSYA 37.5 mg/kg),以及HSYA对照组(生理盐水+HSYA 37.5 mg/kg)。采用ELISA法测小鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)及IL-6水平;RT-q PCR法检测肺组织Toll样受体4(TLR4)mRNA的表达,Western blot法检测肺组织TLR4蛋白的表达。结果 HSYA在浓度分别为6、15、37.5 mg/kg时均可抑制脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠肺组织中TLR4 mRNA和蛋白的表达,以及外周血中TNF-α、IL-1β及IL-6蛋白的表达,且抑制效应随着HSYA剂量升高而增强。DXM抑制效应强于HSYA。结论HSYA对LPS诱导的小鼠急性肺损伤中TLR4、TNF-α、IL-1β及IL-6表达升高有抑制作用,且呈现一定的量效趋势,但其抑制效应弱于DXM。     

2型糖尿病患者单核细胞TLR4信号通路的研究

目的:探讨单核细胞TLR4/NF-κB信号通路在2型糖尿病(2-DM)患者炎症反应中的作用.方法:以TLR4配体LPS刺激正常人及2-DM患者单核细胞,应用实时定量RT-PCR检测单核细胞TLR4mRNA、A20mRNA的变化,FIISA法检测培养上清TNF-α、IL-10浓度.结果:2-DM患者单核细胞TLR4mRNA、A20mRNA相对表达羹高予正常对照组,LPS刺激后无明显上调.2-DM患者单核细胞在LPS刺激后与对照组单核细胞LPS刺激后相比,TNF-α产生更多,IL-10产生较少.结论:单核细胞TLR4/NF-κB信号通路可能参与了2-DM的炎症反应,TLR4表达上调、A20上调不足与炎症反应有关.TLR4通路的激活可能是2-DM患者易患动脉粥样硬化的原因之一.     

福辛普利拉对脂多糖诱导的单核细胞TLR4表达的抑制作用

目的 研究福辛普利拉(Fos)对人白血病单核细胞系THP1 Toll样受体4(TLR4)表达的抑制作用.方法 培养THP1细胞,并将其浓度调整为1×10~+/mL,分为8组:对照组(正常THP1细胞)、脂多糖(LPS)刺激组(THP1细胞+LPS)、DMSO组(THP1细胞+LPS+DMSO)及Fos干预组(THP1细胞+LPS+Fos,Fos质量浓度分别为0.25、0.5、1、5、10 μmol/L).分别采用Real-time PCR法检测THP1细胞TLR4 mRNA的表达;Western blotting检测TLR4和NF-kB蛋白的表达;流式细胞仪检测TLR4蛋白的表达.结景LPS刺激组THP1细胞TLR4 mRNA和蛋白的表达均高于对照组(P<0.05);Fos干预组TLR4 mRNA和蛋白的表达均低于LPS刺激组,其中1、0.5 p.mol/L的Fos作用最明显.LPS刺激组NF-kB蛋白表达明显高于各Fos干预组(P<0.05).结论 Fos能有效下调LPS诱导的THP1细胞中TLR4的表达,并可有效抑制NF-kB的活性.     

穗花杉双黄酮对脂多糖致大鼠急性肺损伤的保护作用及机制研究

目的探讨穗花杉双黄酮对脂多糖(LPS)致大鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用及机制。方法将60只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为对照组、模型组、阳性对照组和穗花杉双黄酮组(简称穗花杉组),每组15只。模型组、阳性对照组和穗花杉组大鼠均通过气道滴注3.0mg/kg LPS100μL,对照组大鼠气道滴注等体积的生理盐水,6h后阳性对照组大鼠腹腔注射2.5mg/kg地塞米松100μL,穗花杉组大鼠腹腔注射2.5mg/kg穗花杉双黄酮100μL,对照组和模型组注射等体积生理盐水。48h后称重测定大鼠肺组织湿/干重比;苏木精-伊红染色(HE)观察各组大鼠肺组织病理;ELISA法检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平;RT-PCR检测肺组织miR-140-5p表达;蛋白印迹法(WB)检测肺组织Toll样受体4(TLR4)、核因子活化B细胞κ轻链增强子(NF-κB)蛋白表达水平。利用LPS刺激肺上皮细胞A549,加入穗花杉双黄酮RT-PCR检测miR-140-5P的表达,加入miR-140-5P抑制剂、mimic-NC干预,RTPCR检测TLR4、NF-κB表达。结果穗花杉组大鼠肺组织湿/干重比明显低于模型组[(4.77±0.19)比(5.84±0.27),P0.05];HE染色结果显示,穗花杉组大鼠肺组织结构较ALI模型组大鼠炎症细胞明显减少,肺泡间隔明显变薄;ELISA结果显示,穗花杉组大鼠血清TNF-α、IL-6和IL-1β水平均明显低于模型组[TNF-α:(395.16±41.23)pg/mg比(846.23±29.26)pg/mg;IL-6:(315.26±30.25)pg/mg比(876.54±45.23)pg/mg;IL-1β:(650.16±29.46)pg/mg比(1056.26±54.16)pg/mg,P均0.05];WB结果显示,穗花杉组大鼠肺组织TLR4、NF-κB表达量明显低于模型组;RT-PCR结果显示,穗花杉组大鼠肺组织和人肺上皮细胞miR-140-5P表达分别高于模型组和刺激组[(0.85±0.13)比(0.34±0.08);(0.81±0.15)比(0.27±0.14),P均0.05];miR-140-5P mimic能明显抑制TLR4、NF-κB表达[TLR4:(0.95±0.12)比(2.31±0.08);NF-κB:(0.97±0.13)比(2.45±0.06),P均0.05]。结论穗花杉双黄酮对LPS诱导的大鼠ALI具有保护作用,其机制可能与促进miR-140-5p mimic表达,抑制ALI炎症过程关键蛋白TLR4、NF-κB表达以及其下游炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β水平有关。     

脂多糖促进人近端肾小管上皮细胞TLR4的表达

目的:研究人近端肾小管上皮细胞(HKC)在脂多糖(LPS)刺激下Toll样受体4(TLR4)的表达及作用。方法:实验细胞分两组,LPS刺激组(50mg/LLPS加入体外培养的HKC)和正常对照组;应用免疫荧光染色在激光共聚焦显微镜下观察LPS刺激24h后TLR4在HKC中的分布及表达强弱;半定量RT-PCR和免疫蛋白印迹检测各组TLR4及内参照β-actin在mRNA水平和蛋白水平的表达量;Annexin V-FITC结合流式细胞仪检测各组细胞的早期凋亡率情况。结果:LPS刺激组TLR4的免疫荧光强度显著高于正常对照组,TLR4主要分布于HKC的胞膜及胞质区;刺激组TLR4 mRNA表达高于正常对照组(1.051±0.082比0.38±0.036),差异有显著性(P<0.01);刺激组TLR4蛋白表达高于正常对照组(0.371±0.033比0.105±0.008),差异有显著性(P<0.01);LPS刺激组细胞的早期凋亡率(41.29%)显著高于正常对照组(2.36%)。结论:LPS能刺激HKC高表达TLR4,且促进HKC的早期凋亡,TLR4可能在LPS诱导的HKC凋亡中发挥一定的作用。     

内毒素脂多糖对胰岛细胞株INS-1细胞活力及胰岛素分泌的影响

目的 观察Toll样受体4(TLR4)在胰岛细胞株(INS-1)中的表达情况,探讨内毒素脂多糖(LPS)对INS-1细胞活力、胰岛素分泌功能以及TLR4表达的影响.方法 采用RT-PCR技术和Western blotting方法检测INS-1细胞和经1 mg/L LPS刺激的INS-1细胞中TLR4 mRNA和蛋白的表达变化;分别用不同质量浓度的LPS (0.01、0.1、1、5、10 mg/L)刺激INS-1细胞,CCK8法检测细胞活力,GSIS法测定胰岛素分泌功能.结果 RT-PCR和Western blotting检测结果显示:LPS刺激使INS-1细胞TLR4mRNA和蛋白的表达显著增加(P＜0.05).当LPS在0.1～ 10 mg/L时,INS-1细胞活力受到抑制,且呈剂量时间依赖性(P＜0.05);1 mg/L LPS刺激可使高糖环境下的INS-1细胞的胰岛素分泌量显著减少(P＜0.05).结论 一定浓度范围内的LPS刺激可抑制INS-1细胞活力,并减少高糖培养条件下细胞胰岛素的分泌量.LPS刺激能上调INS-1细胞TLR4 mRNA和蛋白的表达.内毒素可能通过直接作用损伤胰岛β细胞.     

苦金片对脂多糖诱导巨噬细胞炎症反应的影响

目的 以脂多糖(LPS)刺激小鼠单核巨噬细胞建立炎症反应细胞模型,探讨苦金片对炎症反应的影响及可能机制.方法 细胞分为对照组、LPS组、苦金片组,LPS组细胞予LPS(终浓度1μg/ml)刺激12 h,苦金片组于LPS刺激后加苦金片(1 mg/ml)刺激4 h,对照组不予特殊处理.检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏...     

IL-10对Aa-LPS刺激的兔肺泡巨噬细胞功能的影响

目的研究白细胞介素10(IL-10)在伴放线放线杆菌(Aa)脂多糖(LPS)刺激兔肺泡巨噬细胞(AM)产生炎症反应过程中的免疫调节作用及其机制。方法分离纯化AM,100ng/mL IL-10预孵2h,加入Aa-LPS刺激继续培养24h,流式细胞术检测AM对荧光标记Aa(FITC-Aa)的吞噬指数(PI)情况及AM的活性氧(ROS)水平;荧光定量PCR法检测CD14、TLR4、SRA和MHC-Ⅱ基因表达的变化;硝酸还原酶法检测AM的NO分泌情况。结果 IL-10上调Aa-LPS诱导的AM的PI(P<0.05),下调Aa-LPS诱导的AM膜表面受体CD14、TLR4、MHC-ⅡmRNA的表达(P<0.01),而SRA mRNA表达量升高(P<0.05);IL-10抑制Aa-LPS诱导的AM的ROS和NO水平(P<0.01)。结论 IL-10可以通过上调Aa-LPS诱导的AM SRA基因表达,下调CD14、TLR4、MHC-Ⅱ基因表达,并且抑制其产生ROS和NO的水平,从而调节免疫反应,限制炎症介质的大量释放,同时增强AM的吞噬作用,清除感染。     

高迁移率族蛋白1促进巨噬细胞表达IL-18及其受体

目的:探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)能否激活巨噬细胞表达IL-18及其受体。方法:HMGB1与小鼠腹腔巨噬细胞共孵育后,采用实时RT-PCR、ELISA和流式细胞术分别检测IL-18的基因表达和蛋白含量以及IL-18受体(IL-18R)表达水平。Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)2激动剂Pam3Cys(1μg/ml)和TLR4激动剂脂多糖(LPS,100 ng/ml)设为平行对照。结果:100 ng/ml HMGB1刺激巨噬细胞2 h,IL-18 mRNA的表达明显增加;HMGB1刺激24 h后IL-18蛋白的产生明显增加,并且轻度上调细胞表面IL-18R的表达。TLR2激动剂Pam3Cys和TLR4激动剂LPS也能促进IL-18的基因表达和蛋白产生以及上调IL-18R的表达。结论:HMGB1可以直接激活巨噬细胞表达IL-18及其受体,提示HMGB1在炎症反应中可能通过IL-18加强致炎作用。     

HT-29细胞Toll通路相关分子表达与调控的研究

目的 探讨HT-29结肠癌细胞系经细胞因子TNF-а、IL-1β、IFN-γ及脂多糖(LPS)刺激后,Toll样受体4(TLR4)、髓样分化蛋白2(MD2)及人β防御素2(HBD2)在转录和蛋白水平的表达变化及其与NF-kB激活的关系.方法 HT-29细胞分为8组,分别加入RPMI 1640、TNF-а(20 ng/mL)、IL-1β(20 ng/mL)、IFN-7(20 ng/mL)、LPS(50rig/mL)、TNF-а(20 ng/mL)+LPS(50 ng/mL)、IL-1β(20 ng/mL)+LPS(50 ng/mL)、IFN-γ(20 ng/mL)+LPS(50 ng/mL)干预.ELISA测定各组HT-29细胞上清液IL-8水平,RT-PCR检测各组细胞TLR4、MD2、HBD2 mRNA水平,免疫印迹检测各组细胞TLR4和NF-kB蛋白表达.结果 细胞因子和细胞因子加LPS组上清液IL-8的表达高于对照组(P<0.01);HT-29细胞与细胞因子预孵育后再以LPS刺激,IL-8的表达进一步升高(P<0.01).细胞因子和细胞因子加LPS均能上调HT-29细胞TLR4和MD2 mRNA的水平(P<0.01);HBD2 mRNA水平在IL-1β,LPS协同TNF-а、IL-1β、IFN-γ组升高(P<0.05).细胞因子和细胞因子加LPS均能上调HT-29细胞TLR4和NF-kB蛋白表达(P<0.01);HT-29细胞与细胞因子预孵育后再以LPS刺激,NF-kB蛋白表达进一步增高(P<0.05).结论 细胞因子(TNF-а、IL-1β、IFN-γ)能够增加肠上皮细胞(IEC)的TLR4和MD2表达、增强其对LPS的反应性,造成IEC对常驻菌的过度反应,从而启动或加重肠道炎症;炎症信号(IL-1β、LPS+TNF-а、LPS+IFN-γ)刺激可诱导IEC的HBD2基因转录表达,增强肠道获得性免疫反应,影响肠道炎症进程.     

吸入不同浓度NO对脂多糖所致大鼠急性肺损伤TLR4表达的影响

目的 观察正常大鼠气道Toll样受体4(TLR4)的分布及脂多糖(LPS)对大鼠气道TLR4分布的影响,以及吸入不同浓度NO对TLR4表达的影响.方法 气管内滴注LPS复制大鼠急性肺损伤模型,观察6 h后的病理变化,免疫组化法观察气道内TLR4的变化,以及分别吸入10×10-6,20×10-6,40×10-6, 100×10-6mg/L的NO对大鼠气道内TLR4 mRNA表达的影响.结果 免疫组化和实时荧光定量PCR结果显示TLR4在正常组大鼠气道内有广泛分布和表达.LPS急性肺损伤组大鼠病理检查显示支气管、肺内炎症程度均明显高于正常组,免疫组化及荧光定量PCR结果显示主支气管和肺内细支气管上皮细胞内TLR4表达明显升高.NO 20×10-6mg/L组病理检查结果显示气管和主支气管的炎症程度明显减轻,免疫组化及荧光定量PCR结果提示肺内细支气管上皮细胞内TLR4的表达量较LPS损伤组明显降低.结论 TLR4在大鼠气道内广泛分布,LPS刺激可使TLR4的表达增加,吸入适当浓度NO可降低由LPS引起的肺内细支气管上皮细胞内TLR4表达的升高.     

TLR4在内毒素激活肺泡Ⅱ型上皮细胞过程中的表达及可能作用机制

目的探讨TLR4(toll like receptor 4)在内毒素(LPS)激活肺泡Ⅱ型上皮细胞(ATⅡcells)中的表达及可能作用机制.方法通过RT-PCR的方法检测TLR4 mRNA在ATⅡcells的表达;电泳迁移率改变法检测LPS刺激后的ATⅡcells NF-κB活性的变化;ELISA检测ATⅡcells培养上清中TNF-α和IL-6的含量变化.结果正常ATⅡcells表达有TLR4 mRNA,LPS刺激后表达增强;其表达在1～103 ng/ml LPS范围内呈浓度依赖性增强.LPS刺激后,ATⅡcells NF-κB活性及TNF-α和IL-6的生成均呈浓度依赖性的增强.结论 TLR4在活化的ATⅡcells中的表达呈LPS浓度依赖性并向细胞内传递LPS炎症信号.     

双氢青蒿素抑制LPS诱导的小胶质细胞炎症反应

目的 观察双氢青蒿素(dih ydroartemisinin,DHA)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的BV-2小胶质细胞神经炎症反应的影响及其机制.方法 LPS诱导BV-2小胶质细胞活化建立炎症模型,用不同浓度DHA(0.5、1、2、4μmol/L)处理细胞,CCK-8检测细胞活性;选取lμmol/L DHA干预细胞,倒置相差显微镜下观察细胞形态的变化;RT-PCR检测iNOS、IL-1β、IL-6、TNF-α基因表达水平;ELISA检测培养基中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达水平;Western blot检测NF-κB、IκBα及TLR4的蛋白表达.结果 低剂量的DHA(＜2μmol/L)对BV-2细胞活性无明显影响(P＞0.05),DHA可抑制LPS引起的BV-2细胞形态变化,DHA抑制活化的BV-2细胞iNOS、IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA的表达(P＜0.01),减少IL-1β、IL-6、TNF-α炎症因子释放(P＜0.01),明显降低TLR4的蛋白表达,减少细胞质内IκBα的表达,并抑制NF-κB向核内移位(P＜0.01).结论 DHA可能通过作用于TLR4/NF-κB通路,抑制LPS诱导的BV-2小胶质细胞NF-κB的激活,从而抑制炎症因子的产生,发挥抗炎作用.