肺动脉高压血浆内皮素-1和一氧化氮水平变化及临床意义

目的探讨肺动脉高压患者血浆内皮素-1(ET-1)和一氧化氮(NO)水平变化及临床意义。方法选择88例肺动脉高压患者(观察组)和30例健康体检者(对照组),抽取空腹静脉血4 mL分别测定ET-1和NO,并进行对照比较。结果观察组血浆ET-1水平为(108.04±21.11)ng.L-1,对照组为(52.52±16.00)ng.L-1,观察组显著高于对照组(P<0.01);观察组和对照组NO水平分别为(88.26±25.28)μmol.L-1和(128.16±38.36)μmol.L-1,观察组显著低于对照组(P<0.01);且ET-1和NO水平与病情程度呈明显相关(P<001)。结论肺动脉高压患者血浆ET-1水平显著增高,NO水平显著降低,且与病情程度呈明显相关性。     

先天性心脏病肺动脉高压心内直视手术患者吸入NO对再灌注肺功能的影响

目的　评价先天性心脏病合并肺动脉高压患者吸入一氧化氮 (NO)对再灌注肺功能的影响 .方法　先天性心脏病合并中重度肺动脉患者 4 4例 ,分为对照组 (2 2例 )和吸入NO组 (2 2例 ) .吸入 NO组在升主动脉开放即刻连续吸入NO2 0 m L· L- 1 2 4 h,监测和计算平均动脉压 (m Bp)、平均肺动脉压 (m PA)、肺血管阻力 (PVR)、心排出量 (CO) ;氧分压(Po2 )、二氧化碳分压 (Pco2 )、肺泡动脉氧分压差 (A- a Do2 )、肺内动静脉分流 (Qs/ Qt) .结果　吸入 NO组 m PA肺再灌注后3,6 ,12 ,2 4 h分别为 (5 .8± 1.9) ,(5 .6± 1.6 ) ,(5 .1± 1.3)和 (4.4± 1.1) k Pa,对照组为 (7.8± 1.6 ) ,(7.3± 1.7) ,(6 .8± 1.5 )和 (6 .9± 1.5 ) k Pa,吸入 NO组下降显著 (P<0 .0 5 ) ;吸入 NO组 m PVR肺再灌注后 3,6 ,12 ,2 4 h分别为(87± 17) ,(79± 12 ) ,(6 7± 9)和 (6 0± 9) k Pa· s· L- 1 ,对照组为 (14 5± 2 2 ) ,(135± 16 ) ,(130± 14 )和 (114± 11) k Pa· s- 1·L- 1 ,吸入 NO组下降明显 (P<0 .0 5 ) ;吸入 NO组肺再灌注后 6 ,12 ,2 4 h分别为 (4.2± 1.2 ) ,(4.5± 0 .9)和 (4.4± 1.2 )L· min- 1 ,对照组为 (3.3± 0 .8) ,(3.4± 0 .8)和 (3.5± 0 .9)L· min- 1 ,吸入 NO组明显升高 (P<0 .0 5 ) .与对照     

风湿性心脏病心房纤颤和非心房纤颤患者心房肌细胞内钙离子浓度变化

目的　观察风湿性心脏病 (RHD)心房纤颤 (AF)患者心房肌细胞内是否存在 Ca2 + 超载 .方法　急性分离 RHD伴 AF和非 AF患者的心房肌细胞 ,用 Fluo- 3作为钙指示剂 ,用共聚焦显微镜测定细胞内 Ca2 +浓度 .结果　 AF组心房肌细胞内 Ca2 +浓度明显高于非 AF组心房肌细胞内 Ca2 +浓度(5 17± 98) nmol· L- 1 vs(2 6 2± 6 5 ) nmol· L- 1 ,两组间差异显著 (P<0 .0 1) .结论　 RHD伴 AF患者心房肌细胞内存在Ca2 +超载     

高浓度胰岛素对无血清培养的人脐静脉内皮细胞一氧化氮产生的影响

目的　观察无血清培养条件下 ,高浓度胰岛素对人脐静脉内皮细胞 (HU VECs)产生一氧化氮 (NO即 EDRF)功能的影响 .方法　第 2～ 4代的 HUVEC以普通 DMEM培养液培养 3d后 ,试验组换用含 14.35 ,2 8.70和 5 7.40 nmol· L- 1重组人胰岛素的无血清无酚红 DMEM培养液培养 ,对照组采用普通无血清无酚红 DMEM培养液培养 .每 2 4h换液 1次至72 h,换液时利用 Griess反应比色法检测细胞培养上清中 NO代谢产物— NO2 - 离子的 2 4h累积量 .结果　无血清培养条件下 2 8.70和 5 7.40 nmol· L- 1 胰岛素培养 48h可以使HU VEC培养上清 NO2 -离子的 2 4h累积量显著减少 .对照组 (4 7.0± 4.0 ) nmol,2 8.70 nmol·L- 1 胰岛素组 (4 0 .9± 3.4)nm ol;5 7.40 nm ol· L- 1胰岛素组 (38.1± 1.9) nmol,P<0 .0 5 .结论　高浓度胰岛素 (>2 8.70 nmol· L- 1 )长时间 (>48h)作用可以减少无血清培养的 HUVEC NO的产生 .由于NO是心血管系统重要的保护因子 ,高浓度胰岛素可能通过本途径直接促进心血管系统疾病的发生和发展 .     

一氧化氮对精子膜功能完整性的影响

目的 :研究一氧化氮 (NO)对人精子膜功能完整性的影响 .方法 :采用镀铜镉还原荧光法检测NO代谢产物硝酸盐 (NO-3 ) ;伊红Y水试验检测精子膜功能完整性 .用考马斯亮蓝 (CBB)G2 5 0染色法检测顶体完整率 ,用NO供体硝普钠 (SNP)与精子共同体外作用后涂片染色 ,在显微镜下分析顶体反应率 .结果 :生育组精液NO含量 (4 0 .8± 1 .5 )nmol·L-1 ,精子膜功能完整率 :B E型和为 (6 4± 4 ) % ,精子头部未着色(73± 1 0 ) %和精子顶体完整率 (91± 6 ) % ,与不育组 (78.5±1 .6 )nmol·L-1 ,(4 4± 1 1 ) %、(5 9± 1 6 ) %和 (71± 1 0 ) %呈非常显著性差异 (P <0 .0 1 ) .NO对精子顶体反应率在低浓度为(80± 4 ) % ,中浓度为 (76± 3) % ,高浓度为 (2 5± 4 ) % .结论 :NO对精子膜功能具有两重性 ,在低浓度时有保护作用 ,而在高浓度时对精子膜有毒害损伤作用 .其机制可能是低浓度NO与活性氧迅速结合 ,减少脂质过氧化反应 ,保护了精子膜的损伤 ,高浓度NO与活性氧结合后 ,过量的NO作用于精子膜的不饱和脂肪酸 ,增加了精子膜脂质过氧化反应而损害精子膜功能     

米槁精油对豚鼠胆囊收缩的影响

目的 :观察米槁精油拮抗组胺 (Hist) ,乙酰胆碱 (ACh) ,高K+和Ca2 +所致豚鼠胆囊收缩的影响。方法 :用豚鼠胆囊 ,观察米槁精油对Hist、ACh、KCl、CaCl2 所致豚鼠胆囊收缩量效曲线的影响。结果 :米槁精油 10 -4 g·L-1和 2× 10 -4 g·L-1可使Hist、ACh、KCl、CaCl2 所致胆囊收缩的量效曲线非平行右移 ,最大反应压低 ,其抑制率分别是 :米槁精油两剂量使Hist所致豚鼠胆囊收缩降致 (6 4± 13) %和 (4 0± 12 ) % ;使ACh所致豚鼠胆囊收缩降致 (5 4± 18) %和 (31± 11) % ;使Ca2 +所致豚鼠胆囊收缩降致 (5 5± 14) % ;使高K+所致胆囊收缩降致 (70± 17) %和 (35± 11) %。结论 :米槁精油对豚鼠胆囊有松驰作用 ,其机理可能与拮抗Ca2 +有关。     

雌激素对大鼠心肌细胞钙的调控作用研究

目的　观察雌激素对大鼠心肌细胞钙转运的调控作用 .方法　应用膜片钳全细胞记录方法观察 L型钙通道电流 (ICa.L) ,共聚焦显微镜系统分析细胞内钙浓度 ([Ca2 +]i)的变化 .结果　应用 10 μmol· L- 1和 30 μmol· L- 1的 17β- Estradiol,分别使 ICa.L抑制到正常的 (4 8.1± 4.5 ) %和 (2 9.3± 5 .2 ) % (n=5 ,P<0 .0 1) . 10μmol· L- 1 的 17β- Estradiol可升高静息的培养心肌细胞[Ca2 +]i,荧光强度 (FI)值由 5 4.2± 13.6增加到 86 .5± 15 .3(n=6 ,P<0 .0 1) ;而对具有自发收缩的心肌细胞钙瞬变幅度有明显的抑制作用 ,由给…     

洗涤红细胞保护液肺动脉灌注对体外循环术后肺损伤的影响

目的观察心内直视手术中采用低温洗涤红细胞保护液肺动脉灌注对肺损伤的影响。方法选择风湿性二尖瓣病变伴中重度肺动脉高压(PH)的患者30例,分为肺动脉灌注组和对照组(各15例)。灌注组在升主动脉阻断后,经主肺动脉间断灌注低温洗涤红细胞保护液,测定并记录两组患者围术期的肺血管阻力(PVR)、静脉血与动脉血白细胞计数比值(V/A)、肺循环血浆丙二醛(MDA)含量及氧合指数(OI)、机械辅助通气时间。结果(1)PVR:转流结束即刻、术后12、24h灌注组(46·4kPa·s·L-1±8·1kPa·s·L-1、48·5kPa·s·L-1±7·0kPa·s·L-1、36·1kPa·s·L-1±6·3kPa·s·L-1)明显低于对照组(65·7kPa·s·L-1±5·3kPa·s·L-1、79·8kPa·s·L-1±8·7kPa·s·L-1、47·9kPa·s·L-1±7·1kPa·s·L-1,均P<0·05)。(2)MDA含量:转流结束即刻、术后12、24h灌注组(分别为14·3mmol/L±0·8mmol/L、16·1mmol/L±0·7mmol/L、13·3mmol/L±0·5mmol/L)明显低于对照组(18·9mmol/L±0·9mmol/L、21·6mmol/L±0·4mmol/L、22·5mmol/L±0·7mmol/L,均P<0·05)。(3)V/A比值:转流结束即刻、术后12h灌注组(1·16±0·05、1·20±0·05)明显低于对照组(1·53±0·07、1·68±0·25,均P<0·01)。(4)OI:转流结束即刻、术后12、24h灌注组(370±33、388±41、414±40)明显高于对照组(217±30、210±36、222±33,均P<0·05)。(5)机械辅助通气时间:灌注组(13h±4h)显著低于对照组(27h±6h,P<0·01)。结论洗涤红细胞保护液肺动脉灌注可以减轻体外循环术后肺损伤。     

野百合碱诱导肺动脉高压模型大鼠血浆ET-1和NO水平的变化

目的:探讨野百合碱(MCT)诱导肺动脉高压(PH)模型大鼠血浆内皮素-1(ET-1)和一氧化氮(NO)水平的变化。方法:成年雄性SD大鼠20只随机分为正常对照组(n=10)和MCT模型组(n=10)。通过腹腔注射MCT建立肺动脉高压大鼠模型,用放免测定法和比色分析法分别测定血浆中ET及NO的含量。结果:在注射MCT3周后,平均肺动脉压对照组为(18.13±4.33)mmHg,模型组为(31.65±8.52)mmHg(P<0.01),血浆ET明显升高(61.08±9.46vs95.92±15.78),NO下降(115.32±27.15vs52.24±8.71)(P<0.01)。结论:野百合碱引起肺动脉高压的作用机制可能与其改变内皮素、一氧化氮血管活性物质含量有关。     

一氧化氮在慢性缺氧大鼠肺血管低反应机制中的作用

目的　探讨一氧化氮 ( NO)在慢性缺氧大鼠肺血管低反应机制中的作用。方法　采用离体肺动脉环实验。结果　 1用 L-单甲基精氨酸 ( L- NMMA)阻断 NO合成后 ,慢性缺氧鼠肺血管张力增值明显小于正常大鼠 [( 8.7±2 .4) m g vs( 18.2± 3 .1) m g,P<0 .0 5 ];而用 L- arginine促进 NO合成后 ,其张力下降值明显大于正常对照组 [( 9.6± 2 .4) m g vs( 4.8± 1.3 ) mg;P<0 .0 1];2用 L- NMMA阻断 NO的生成 ,可使正常大鼠离体肺动脉环缺氧性肺血管收缩反应 ( HPV)强度几乎减半 ;而对慢性缺氧鼠 HPV无明显变化 ;3 L- arginine可轻度增强正常鼠及慢性缺氧鼠HPV,但两者变化无显著差异。结论　 1慢性缺氧可能使肺动脉 NO生成减少 ,从而降低 NO在维持肺血管低张力中的作用 ;2急性缺氧使肺动脉 NO生成减少 ,从而介导 HPV;3慢性缺氧鼠肺动脉 NO生成减少 ,因而降低 NO在介导HPV中的作用。后者可能是慢性缺氧致离体肺动脉环 HPV钝化的一个重要机制     

丁酸对人肺癌细胞的生长,细胞周期和形态的影响

运用鉴别细胞群体生物学特性的常规方法和流式细胞光度术(FCM),我们研究了正了酸对人肺癌细胞(PLA-801D)的某些生物学作用。当培养液中含2或3mmol/L丁酸时,细胞分裂和增生受到明显抑制,群体倍增时间几乎延长1倍,细胞周期行进受阻,大多数细胞阻断在G1期,平皿集落形成率从23.9％降为1.9％,饱和密度从237.4万/ml降至48.8万/ml,细胞群体提前3d进入饱和状态。与此同时,细胞变扁平,几乎丧失叠堆生长能力,表面膜活动减弱,核形趋于规则,染色质颗粒分散变稀疏,细胞间粘着连接明显增多。以上发现提示丁酸可使PLA-801D肺癌细胞获得一些相对正常的生长特性和表型,显示丁酸对该细胞有一定程度的分化诱导作用和潜在的抗癌作用。     

树突状细胞黏附、趋化及迁移的分子机制

 树突状细胞是体内功能最强的抗原递呈细胞,细胞移行是其接受抗原刺激、激发T细胞免疫反应的基础,两者之间相互协调影响。从血液中的前体细胞到次级淋巴器官中成熟细胞的转化的过程中,趋化因子及其受体、黏附分子及基质金属蛋白酶的共同作用使树突状细胞得以精确迁移,发挥抗原递呈作用。     

Serrin B和Nodosin对HL60、SGC7901、LOVO、U87、AGZY细胞株的毒性作用

目的探讨天然药物Serrin B和Nodosin对人早幼粒白血病细胞株HL60、人胃腺癌细胞株SGC7901、人结肠癌细胞株LOVO、人胶质瘤细胞株U87、人肺腺癌细胞株AGZY的毒性作用。方法将对数期生长的HL60、SGC7901、LOVO、U87、AGZY细胞株接种于96孔板中,细胞贴壁后,分别加入Serrin B或Nodosin,使药物的终浓度分别为0.00、1.25、2.50、5.00、10.00、20.00μmol.L-1,24 h后用四甲基偶氮唑盐法检测细胞株的死亡率。结果 Serrin B对HL60、SGC7901、LOVO、U87和AGZY细胞株均有较强的毒性作用(P<0.01),且其毒性作用呈现剂量-效应关系。Nodosin对HL60、SGC7901、LOVO、U87细胞株具有较强的毒性作用(P<0.05,P<0.01),而对AGZY细胞株无明显毒性作用。结论 Serrin B和Nodosin是中药溪黄草抗癌作用的有效成分,为人类多种肿瘤治疗的新药研究开发提供新的思路。     

分离、鉴定与培养大鼠肝细胞、肝星状细胞和Kupffer细胞

目的：建立稳定的同时分离原代大鼠肝细胞（HC）、肝星状细胞（HSC）和Kupffer细胞（KC）的方法,并初步评估其在体外培养的特征。方法：通过胶原酶原位灌注获得肝脏单细胞悬液,随后行等密度离心结合选择性贴壁纯化肝脏原代细胞,细胞的产量和活力经自动细胞计数仪计算出,纯度经免疫荧光、特殊染色及吞噬等实验进行鉴定。结果：大鼠原代HC产量为（21.0±8.2）×106/g肝组织,活力为92.1%±2.1%,纯度为96.5%±2.2%;原代HSC产量为（2.5±0.8）×106/g肝组织,活力为90.1%±3.8%,纯度为93.1%±1.5%;原代KC产量为（4.1±1.2）×106/g肝组织,活力为96.2%±2.7%,纯度为95.1%±1.4%。分离的HC、HSC和KC适合体外长期培养。HSC在体外培养过程中失去维生素A,逐渐向成纤维细胞表型转变。KC在体外可增殖,至14 d时仍表达CD68,具有较强的吞噬能力。结论：成功建立同时分离和培养大鼠HC、HSC和KC的方法,为进一步研究肝脏病理生理提供细胞基础。     

沉默CCL19对结直肠癌增殖、迁移、侵袭和促血管形成的影响

目的研究趋化因子CCL19在结直肠肿瘤中的作用。方法采用Real—TimePCR和Westernblotting技术筛选高表达CCL19的细胞株SW620细胞作为研究对象,并用siRNA沉默SW620中的CCL19基因。分别采用细胞增殖实验、Transwell迁移、侵袭实验和小管形成实验来检测SW620细胞的增殖、迁移、侵袭和促血管形成能力的变化。结果Westernblotting和Real—TimePCR证实SW620中CCL19相对其他细胞株高表达。经siRNA-CCL19干扰后,SW620细胞在48～120h内细胞增殖能力显著上升（P〈0．05）,细胞迁移、侵袭能力亦明显上升（P〈0．05）,促血管形成能力明显增强。结论SW620是相对高表达CCL19的细胞株,沉默CCL19基因后可以明显促进SW620细胞在体外的增殖、迁移、侵袭和促血管形成能力,因此认为CCL19在结直肠癌发展中起着抑制作用,并有应用于抗癌药物研究的前景。     

银屑病患者皮损中细胞衰老、增殖和凋亡检测

目的：探讨银屑病患者皮损中细胞增殖、衰老和凋亡的变化。方法：应用组织化学、免疫组织化学和末端脱氧核苷酸转移酶（TDT）介导的d-UTP－生物素缺口末端标记（TUNEL）等技术原位检测了20例银屑病患者（试验组）皮损和10例正常人（对照组）皮肤细胞中与衰老细胞相关的β－半乳糖苷酶（SA－β－Gal)、增殖细胞核抗原（PCNA）和凋亡细胞。结果：银屑病皮损中衰老细胞、增殖细胞和凋亡细胞数均比正常人皮肤增多，试验组与对照组阳性率分别为55％／10％、80％／30％、70％／20％，经χ^2检验，P＜0．05，差异有统计学意义。结论：衰老细胞与凋亡细胞的增加共同对银屑病增殖代谢加快起到部分代偿作用。     

人骨形态发生蛋白2，3，6，12对大鼠骨肉瘤 细胞株UMR106的作用

目的：研究人骨形态发生蛋白（human bone morphogenetic proteins, hBMP）对大鼠骨肉瘤细胞株UMR106的作用。方法：用hBMP2,3,6,12重组腺病毒（AdBMP2,3,6,12）干预大鼠骨肉瘤细胞株UMR106,利用台盼蓝拒染法、TUNEL法、吖啶橙/溴乙啶（AO/EB）荧光双染法、Transwell小室和碱性磷酸酶活性测定法分别检测细胞增殖、凋亡、迁移以及成骨分化能力的变化。结果：与空白对照组和实验对照组比较,AdBMPs的干预致骨肉瘤细胞株细胞存活率降低,并呈一定的时间依赖性;凋亡率均随时间延长而增加,并且TUNEL和 AO/EB两种检测方法的结果一致;3个检测时间点的细胞穿膜数均明显减低;碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性在干预第3天开始逐渐增加,至第9天仍可观测到,以上差异均有统计学意义(P＜0.01)。结论：以腺病毒介导基因转入的作用方式,hBMP2,3,6,12可以抑制大鼠骨肉瘤细胞株UMR106的增殖和迁移,并诱导其凋亡和向成骨细胞分化。     

大鼠胚胎神经干细胞的分离培养及鉴定

利用无血清培养和细胞克隆技术从孕鼠(14d)胚胎中分离出神经干细胞，并进行传代培养，采用免疫细胞化学技术检测神经巢蛋白和成熟脑细胞特异性抗原神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase，NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)的表达，同时采用H-E染色法鉴定神经细胞类型。证实从大鼠胚胎大脑皮质分离出的细胞具有连续的克隆能力，并表达神经巢蛋白，分化的细胞表达神经元和神经胶质细胞的特异性抗原，为中枢神经系统的干细胞。     

一种新的子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞的分离纯化及培养方法的探讨

目的:建立一种简捷的分离纯化培养子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞的方法。方法:选择子宫全切育龄妇女的新鲜子宫内膜组织,经单酶消化、二次筛网过滤及贴壁纯化技术分离纯化培养人子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞,光镜及免疫细胞化学染色鉴定细胞纯度。结果:腺上皮细胞漩涡状生长,细胞呈蝌蚪形或类圆型,细胞角蛋白19免疫组化染色阳性,纯度可达92%。基质细胞呈平行状生长,细胞呈梭形或多角形。波形蛋白免疫组化染色阳性,纯度达95%以上。每例子宫肌瘤切除标本可获得(10～25)×106原代基质细胞和(4～6)×106原代腺上皮细胞。结论:该培养方法可获得高产量的纯化的子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞。     

大鼠肝星状细胞的分离、培养与鉴定

目的:改进大鼠肝星状细胞的分离、培养方法,提高其分离质量。方法:取成年雄性Wistar大鼠,用链蛋白酶、胶原酶体内门静脉灌注消化大鼠肝脏细胞,经Nycodenz密度梯度离心分离肝星状细胞。台盼蓝拒染实验鉴定细胞活力,Desmin免疫细胞化学染色鉴定细胞纯度。结果:肝星状细胞得率为2.8×107/肝。肝星状细胞存活率在90%以上。Desmin阳性细胞原代培养达90%以上,传代培养达95%以上。结论:改良大鼠肝星状细胞的分离、培养方法,有利于原代大鼠肝星状细胞的生物学研究。