lnc RNA-AK093407通过EMT促进结直肠癌细胞增殖和转移

目的 研究AK093407对结直肠癌HCT-15细胞的影响及相关机制。方法 Lv5慢病毒感染过表达AK093047,转染siRNA沉默AK093407;qRT-PCR鉴定AK093407的表达;MTT和平板克隆形成实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;划痕修复实验和Transwell检测细胞侵袭和迁移;qRT-PCR和蛋白印记检测EMT相关因子。结果 Lv5慢病毒感染后,AK093407表达升高。过表达AK093407结直肠癌细胞增殖活性升高,促进细胞周期演进,凋亡降低,迁移和侵袭能力增强。q RT-PCR和蛋白印记结果显示,occludin和E-cadherin的转录和翻译水平降低（P<0.05）;β-catenin、vimentin和fibronectin的转录和翻译水平升高（P<0.05）。AK093407沉默后,与上述结果相反。结论 AK093407通过EMT促进结直肠癌细胞增殖、细胞周期、侵袭和迁移并抑制细胞凋亡。     

miR-133a靶向Transgelin2对体内外结直肠癌DLD1细胞侵袭迁移的影响

目的探讨microRNA-133a(miR-133a)/Transgelin2轴对结直肠癌细胞DLD1侵袭迁移的影响,为结直肠癌靶向治疗寻找潜在靶点。方法将pSicoR-miR-133a稳定转染DLD1细胞,通过体内外实验,用qRT-PCR、划痕实验、Western blot检测相应细胞侵袭、迁移能力和miR-133a/Transgelin2的变化。结果体外实验:pSicoRmiR-133a使miR-133a过表达并明显抑制Transgelin2转录,稳定转染miR-133a组与对照组相比较,同时miR-133a、Transgelin2转录水平和蛋白表达均具有统计学意义(P 0.05),转染miR-133a的DLD1细胞侵袭(P=0.003)、迁移(P=0.002)能力明显降低。体内实验:转染miR-133a组肿瘤体积比对照组明显减小(P=0.000),肿瘤组织内miR-133a、Transgelin2转录量明显降低(P=0.000),Transgelin2蛋白表达强度在miR-133a组内也明显减少(P0.05)。结论 miR-133a靶向负性调控Transgelin2,对结直肠癌的侵袭、迁移具有明显抑制作用,miR-133a/Transgelin2可成为结直肠癌治疗的潜在靶点。     

AQP-5对结直肠癌细胞生长的影响及机制

目的 探讨水通道蛋白-5(AQP-5)对细胞增殖及凋亡影响及可能的机制.方法 体外常规培养人结直肠癌COLO 205和SW480细胞,取对数生长期的细胞用于实验.通过siRNA技术抑制内源性AQP-5的表达,并经免疫荧光、PCR检测AQP-5-siRNA转染效率,利用MTT法检测细胞增殖能力,Annexin V-FITC/PI和TUNEL检测细胞凋亡情况,RT-PCR和Western blot检测Bax、Bcl-2表达变化.结果 在COLO 205和SW480细胞株中,转染AQP-5-siRNA后AQP-5表达下调达90%.MTT分析结果显示,与转染NS-siRNA组相比,转染AQP-5-siRNA组的细胞增殖抑制率显著增加(P<0.05);流式细胞分析结果发现,与NS-siRNA组细胞相比,转染AQP-5-siRNA后细胞凋亡率显著增加(P<0.05);荧光实时定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测结果显示:与转染NS-siRNA组相比,转染AQP-5-siRNA明显提升Bax/Bcl-2 mRNA和蛋白的表达.结论 AQP-5-siRNA可体外促进结直肠癌细胞凋亡,其机制可能与Bax/Bcl表达有关.     

PRMT7抑制前列腺癌细胞体外迁移和侵袭的研究

目的研究PRMT7对前列腺癌细胞迁移和侵袭的影响及机制探究。方法使用R软件从TCGA和GTEx数据库中获得正常前列腺和前列腺癌组织中PRMT7的转录组数据。Western印迹法检测细胞中PRMT7的蛋白水平。通过细胞划痕实验、Transwell迁移实验和Transwell侵袭实验评估细胞的迁移和侵袭。使用转录组测序分析和无标记定量蛋白质测序分析评估转录物和蛋白质水平。使用siRNA技术敲低KISS1R的表达。结果TCGA和GTEx数据库显示PRMT7在前列腺癌组织的表达低于正常前列腺组织。PRMT7在前列腺癌细胞系中表达低于正常前列腺上皮细胞。细胞划痕实验、Transwell迁移和Transwell侵袭实验结果表明,PRMT7抑制前列腺癌细胞LNCaP和PC3的迁移和侵袭。全基因组转录组、蛋白质组测序分析以及Western印迹法结果显示,转移抑制基因KISS1R在转录和翻译水平均被PRMT7上调,敲除KISS1R可拯救肿瘤抑制表型。结论本研究揭示了PRMT7在前列腺癌细胞中的抗肿瘤作用,进一步证明了KISS1R是PRMT7调控肿瘤细胞迁移和侵袭的下游效应分子,PRMT7可能是临床治疗前列腺癌的有效靶点。     

circPRKAG2在结直肠癌中的表达及功能分析

目的 分析circPRKAG2在结直肠癌组织中的表达及其对结直肠癌细胞恶性表型的影响。方法 利用qRT-PCR检测circPRKAG2在结直肠癌组织中的相对表达水平,并分析其与临床病理特征的关系。利用siRNA干扰结直肠癌细胞中circPRKAG2的表达,通过体外细胞功能实验,分析circPRKAG2对细胞恶性表型的影响。结果 与癌旁非肿瘤组织比较,circPRKAG2在癌组织中的表达水平降低(P<0.001),且与结直肠癌的肿瘤浸润深度、淋巴结转移、远处转移以及TNM分期等呈负相关(P<0.05)。在结直肠癌细胞中利用siRNA干扰circPRKAG2的表达,体外实验显示,干扰circPRKAG2导致细胞克隆形成、增殖、迁移及侵袭能力显著升高(P<0.05)。结论 circPRKAG2在结直肠癌组织中呈现低表达,其低表达与肿瘤进展相关;靶向抑制circPRKAG2显著促进结直肠癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力,提示circPRKAG2可能在结直肠癌中发挥抑癌作用。     

沉默circ_0000745通过靶向 miR-296-5p对结直肠癌细胞增殖及转移的影响

摘要:目的 探讨circ_0000745对结直肠癌细胞增殖及转移的影响及其可能的作用机制。方法 收集2013年3月 ~2016年7月在四川省人民医院确诊的结直肠癌及癌旁组织65例,采用实时定量 PCR(qRT-PCR)法检测结直肠癌组 织、癌旁组织中circ_0000745与 miR-296-5p表达,分析circ_0000745与 miR-296-5p表达与结直肠癌患者预后的关系。 将人结直肠癌细胞 HCT-116分为si-NC组、si-circ_0000745组、miR-NC组、miR-296-5p过表达组、si-circ_0000745+anti-miR-NC组、si-circ_0000745+anti-miR-296-5p组;采用 CCK-8法、平板克隆形成实验、Transwell实验分别检测各组细 胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭;采用双荧光素酶报告实验检测circ_0000745与 miR-296-5p的靶向关系;采用 Western blot法检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达量。结果 与癌旁组织比较,结直肠癌组 织中circ_0000745的表达升高(P<0.05),miR-296-5p的表达降低(P<0.05);随访5年,65例患者中死亡9例,存活56 例,与存活患者相比,死亡患者的circ_0000745明显增高(P<0.05),miR-296-5p明显降低(P<0.05)。与 HT-29细胞 相比,HCT-116细胞的circ_0000745mRNA 表达升高(P<0.05),miR-296-5p的表达降低(P<0.05),选择 HCT-116细 胞进行下一步研究。与si-NC组比较,si-circ_0000745组细胞存活率、MMP-2、MMP-9蛋白、细胞克隆形成数、迁移及侵 袭细胞数减少(均P<0.05);circ_0000745可靶向调控 miR-296-5p的表达;与 miR-NC组比较,miR-296-5p过表达组细 胞存活率、MMP-2、MMP-9蛋白、细胞克隆形成数、迁移及侵袭细胞数减少(均 P<0.05);与si-circ_0000745+anti-miRNC组比较,si-circ_0000745+anti-miR-296-5p组细胞存活率、MMP-2、MMP-9蛋白水平、细胞克隆形成数、迁移及侵袭 细胞数增多(均P<0.05)。结论 结直肠癌组织中circ_0000745呈高表达,miR-296-5p呈低表达,高表达circ_0000745 及低表达 miR-296-5p可用于评估结直肠癌患者预后,circ_0000745通过靶向 miR-296-5p促进结直肠癌细胞增殖及转 移,沉默circ_0000745可为结直肠癌治疗提供新思路。     

MTA3通过β-hCG调控上皮性卵巢癌侵袭转移的机制研究

目的探讨上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer, EOC)转移相关基因3(metastasis associated gene 3, MTA3)的表达及其与肿瘤 侵袭转移的关系。方法 收集晚期(FIGO Ⅲ-Ⅳ期)EOC术中冰冻标本(8例)及石蜡标本(21例),qRT-PCR和IHC检测卵巢部位肿瘤组织和转移瘤组织中MTA3的表达;Transwell细胞迁移实验观察下调MTA3、下调β-hCG、同时下调MTA3和β-hCG的EOC细胞株(SKOV3和ES-2)体外迁移力的变化。EOC细胞体外分别转染50、100、200nmol/L siRNA-MTA3,qRT-PCR检测分析MTA3和β-hCG的表达相关性;qRT-PCR及Western印迹法检测分析下调MTA3对β-hCG以及上皮间质转化(EMT)标记物E-cadherin、N-cadherin表达的调控作用。结果 qRT-PCR、IHC示EOC转移瘤组织中MTA3的表达显著低于卵巢部位肿瘤组织(P<0.05);Transwell细胞迁移实验示下调MTA3显著增强了EOC细胞的迁移能力(P<0.001),下调β-hCG显著降低了EOC细胞的迁移能力(P<0.001),下调MTA3下调β-hCG显著降低了EOC细胞的迁移能力(P<0.001);qRT-PCR示MTA3与β-hCG的表达呈显著负相关(P<0.05);qRT-PCR、Western印迹法示MTA3下调时,β-hCG和N-cadherin的表达显著上调,而E-cadherin的表达则显著下调。结论 MTA3可能通过β-hCG干预EMT进程,进而调控上皮性卵巢癌侵袭转移。     

内皮素3基因对结直肠癌LoVo细胞迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨内皮素3(endothelin 3,EDN3)基因对结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响及其相关机制.方法 实时荧光定量PCR检测EDN3 mRNA在人结直肠癌组织及对应癌旁组织中的表达情况,半定量PCR检测EDN3及内皮素受体B(endothelin receptor B,EDNRB) mRNA在结直肠癌细胞(CaC02、LoVo、HT-29)中的表达情况.将包装过载体pCDH-CMV-MCS-EFl-Puro-EDN3的病毒感染至结直肠癌细胞LoVo,MTS、克隆形成法、划痕法、Transwell检测EDN3对细胞增殖、克隆、迁移和侵袭能力的改变.Western blot检测LoVo中p-ERK1/2和t-ERK 1/2蛋白改变.结果 EDN3在人结直肠癌组织和细胞中表达降低.表达EDN3基因的重组载体成功感染至LoVo细胞.MTS和克隆实验结果显示,实验组和对照组细胞增殖和克隆形成差异无统计学意义(P＞0.05),划痕实验和Transwell实验提示实验组细胞迁移和侵袭能力明显低于对照组(P＜0.01).Western blot检测结果显示磷酸化的ERK1/2蛋白表达下降(P＜0.01).结论 EDN3在结直肠癌组织和细胞中表达降低,过表达EDN3能抑制结直肠癌LoVo细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与ERK1/2信号通路有关.     

EphA2在结直肠癌细胞中的生物学功能及其信号调控机制

[目的]探讨EphA2在结直肠癌细胞中的生物学功能及其信号调控机制。[方法]qRT-PCR法检测EphA2在结直肠癌细胞系中的表达情况,筛选得到表达量较高细胞株系,利用si RNA沉默该细胞系中EphA2的表达,利用MTT、Transwell、Western blot、qRT-PCR法检测细胞生物学功能变化及Wnt/β-catenin信号通路相关基因及蛋白的表达变化。[结果]在人结肠癌细胞HCT116、HT29和SW480中筛选得到EphA2高表达细胞HCT116,构建载体EphA2-si RNA并成功转染细胞HCT116。MTT、Transwell法检测结果显示,与对照组相比,EphA2-si RNA组中细胞的增殖、侵袭和迁移能力明显受到抑制,差异具有统计学意义(P<0.05)。qRT-PCR和western blot分析表明,与对照组相比,EphA2-si RNA组中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白E-cadherin、TCF-4、β-catenin和p-GSK-3βSer9的表达量均呈现下降趋势,差异具有统计学意义(P<0.05)。[结论]结直肠癌细胞中EphA2的表达与结直肠癌的进展和侵袭转移密切相关,EphA2可能通过调控Wnt/β-catenin信号通路影响结直肠癌的进展。     

miR-27a靶向调控SFRP1对结直肠癌生物学行为的影响

目的 探讨miR-27a在结直肠癌中的表达,并分析其靶向调控分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)对人结直肠癌细胞HCT116生物学行为的影响。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结直肠癌组织及癌旁正常组织中miR-27a和SFRP1 mRNA的表达情况;Western blot检测结直肠癌组织及癌旁正常组织中SFRP1蛋白表达水平;运用TargetScan预测软件及双荧光素酶报告基因实验检测miR-27a对SFRP1的靶向调控作用;将miR27a模拟物(miR-27a mimic)、miR-27a抑制物(miR-27a inhibitor)及阴性对照(NC)转染至HCT116细胞中;采用qRT-PCR测定各组细胞中miR-27a和SFRP1 mRNA的表达水平;运用四唑盐(MTT)比色法检测各组细胞增殖情况;Transwell实验评估各组细胞侵袭和迁移能力;Western blot检测各组细胞中SFRP1、Wnt/β-catenin信号通路中的关键因子Wnt4和β-catenin的蛋白表达水平。结果 与癌旁正常组织相比,miR-27a在结直肠癌组织中高表达,而SFRP1在结直肠...     

Lnc-CRCMSL在结直肠癌中的表达及对癌细胞生长的影响

目的探讨长链非编码RNA-CRCMSL(Lnc-CRCMSL)在结直肠癌组织和癌细胞中的表达及对癌细胞生长的影响。方法采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测Lnc-CRCMSL在结肠癌组织和癌旁正常组织、正常结肠上皮细胞及结直肠癌细胞中的表达特点。建立SW480耐药株SW480/DDP,并通过基因干扰实验过表达其Lnc-CRCMSL水平,采用流式细胞术测定细胞的凋亡率,CCK-8测定细胞的增殖活力,划痕愈合实验测定细胞的迁移能力,Transwell测定细胞的侵袭能力,免疫蛋白印迹实验测定基质金属蛋白酶2(MMP2)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的蛋白表达。结果Lnc-CRCMSL在结直肠癌组织的表达低于癌旁正常组织,在Ⅱ期、Ⅲ期结直肠癌组织中的表达低于Ⅰ期,且在结直肠癌细胞中的表达量低于正常结肠上皮细胞(P＜0.05)。过表达Lnc-CRCMSL提高了SW480/DDP的凋亡率,抑制了SW480/DDP的增殖、迁移和侵袭活力(P＜0.05)。同时,过表达Lnc-CRCMSL降低了SW480/DDP的MMP2和MMP9表达水平(P＜0.05)。结论Lnc-CRCMSL在结直肠癌中表达异常,对结直肠癌细胞的增殖、凋亡、迁移及侵袭行为具有调控作用。     

FGFR4在结直肠癌组织中表达及其对SW620细胞生物学功能的影响

目的 探究成纤维细胞生长因子受体4(fibroblast growth factor receptor 4,FGFR4)在结直肠癌组织中的表达情况及其对SW620细胞生物学功能的影响。方法 利用癌症基因图谱(the cancer genome atlas, TCGA)数据库中结直肠癌的数据分析FGFR4 mRNA在结直肠癌组织中的表达。使用基因集富集分析(gene set enrichment analysis, GSEA)进行生物信息学分析寻找FGFR4影响的相关信号通路。构建pcDNA3.1-FGFR4过表达载体，分为实验组与对照组。分别采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)实验、流式细胞凋亡检测、细胞划痕实验和Transwell实验检测过表达FGFR4对SW620细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。结果 TCGA数据库数据分析结果显示FGFR4 mRNA在结直肠癌中的表达高于癌旁组织(P<0.05),GSEA结果显示FGFR4高表达在碱基切除修复、谷胱甘肽代谢、磷酸戊糖途径、核糖核酸聚合酶、硒氨酸代谢等通路富集(P<0.05)。C...     

miRNA-143对人鼻咽癌细胞CNE-2Z增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨miRNA-143对鼻咽癌细胞CNE-2Z增殖、迁移和侵袭的影响.方法 利用荧光定量PCR检测人永生化鼻咽上皮细胞(NP69)、高分化鼻咽癌细胞(CNE-1)、低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)中miRNA-143的表达水平.利用感染慢病毒的方式建立稳定过表达miRNA-143的CNE-2Z细胞,并用荧光定量PCR法进行检测.通过CCK-8法检测过表达miRNA-143对CNE-2Z细胞增殖的影响,通过Transwell迁移和侵袭试验分析过表达miRNA-143对CNE-2Z细胞迁移和侵袭的影响.结果 低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)中miRNA-143的表达水平显著低于CNE-1和NP69细胞(P<0.01).稳定过表达miRNA-143的CNE-2Z细胞(CNE-2Z/miR-143)中miRNA-143的表达水平显著高于CNE-2Z细胞(P<0.01)和慢病毒对照组细胞(CNE-2Z/miR-NC)(P<0.01).细胞增殖能力检测显示,与CNE-2Z组和CNE-2Z/miR-NC组相比,CNE-2Z/miR-143组在72 h和96 h时细胞活力显著降低(P<0.05,P<0.01).Transwell迁移和侵袭试验结果显示,CNE-2Z/miR-143组与CNE-2Z组和CNE-2Z/miR-NC组相比细胞迁移和侵袭能力显著下降(P<0.01).结论 miR-143能够抑制鼻咽癌细胞CNE-2Z的增殖、迁移和侵袭能力,提示其可能对鼻咽癌的诊断、治疗及预后评价有重要意义.     

长链非编码RNA HSALNT0000015对结直肠癌细胞生物学行为的影响

目的 探讨长链非编码RNA（lncRNA）HSALNT0000015对结直肠癌细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测80例结直肠癌组织及配对的15例癌旁组织,同时检测人结直肠癌细胞（Lovo、SW480、HT-29、HCT116）和正常人肠黏膜上皮细胞HIEC中lncRNA HSALNT0000015的表达水平;将HCT116细胞分为空白组、对照组及实验组,分别不感染慢病毒、只感染空载质粒及感染sh-HSALNT0000015-慢病毒,采用MTT法检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,免疫印迹法检测转录因子Slug、上皮钙黏素（E-Cadherin）及波形蛋白（Vimentin）的表达。结果 结直肠癌组织lncRNA HSALNT0000015表达水平高于癌旁组织（P?<0.05）。结直肠癌细胞中lncRNA HSALNT0000015的表达水平均高于正常人肠黏膜上皮细胞（P?<0.05）。细胞培养12、24、48及72 h后,实验组光密度值（490 nm）低于空白组和对照组（均P?<0.05）。敲减lncRNA HSALNT0000015后,HCT116迁移及侵袭能力下降（均P?<0.05）,E-cadherin表达水平上升（P?<0.05）,转录因子Slug和Vimentin表达水平下降（均P?< 0.05）。结论 lncRNA HSALNT0000015可能通过上皮间质转化过程促进结直肠癌细胞迁移及侵袭。     

心肌素基因在结直肠癌中的抑癌作用

摘要:目的 研究心肌素(myocardin,MYOCD)基因对结直肠癌(colorectalcancer,CRC)细胞增殖、迁移侵袭能力的 影响及机制。方法 TCGA 数据库、荧光实时定量 PCR与 Westernblot检测结直肠癌组织与正常组织中的 MYOCD 基 因表达差异;构建高表达 MYOCD结直肠癌细胞系,CCK-8实验检测细胞增殖能力,Transwell迁移实验、Transwell侵袭 实验、划痕实验检测 CRC细胞迁移、侵袭能力,运用生物信息学方法研究 MYOCD对 CRC组织干细胞特性的影响,并用 克隆形成实验进一步验证。结果 CRC组织中 MYOCD与正常组织相比呈低表达状态,MYOCD的过表达可抑制 CRC 细胞的增殖,但对 CRC细胞的迁移与侵袭无明显影响,生物信息学分析提示 MYOCD 可抑制 CRC细胞的干细胞特性, 细胞实验进一步证明过表达 MYOCD 可 抑 制 CRC 细 胞 的 CD133 表 达,并 明 显 抑 制 CRC 细 胞 克 隆 形 成 能 力。结论 MYOCD基因可抑制 CRC细胞的增殖但对细胞迁移、侵袭能力无明显影响,该过程可能是通过抑制 CRC的干细胞特性 实现。     

KLK11对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探究激肽释放酶相关肽11(KLK11)对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法:qRT-PCR及Western blot技术检测卵巢癌细胞中KLK11基因的表达水平。Western blot评估siRNA特异性抑制KLK11在A2780和HO8910细胞株中表达的抑制效率。CCK-8、划痕实验及Transwell实验检测KLK11对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。Western blot检测卵巢癌细胞中上皮-间质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、锌指转录因子(Snail)的表达水平。结果:与人正常卵巢上皮细胞相比,KLK11在卵巢癌细胞株中表达上调(P<0.01);与Control组相比,si-KLK11组卵巢癌细胞中KLK11蛋白表达降低(P<0.01),卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力被抑制(P<0.01);同时,si-KLK11组A2780和HO8910细胞中Vimentin、Snail蛋白表达水平均下调(P<0.01),而E-cadherin蛋白表达水平上调(P<0.01)。结...     

MicroRNA-122-5P通过靶向MMP-9抑制TPA诱导的SW480细胞侵袭迁移能力

目的:研究miR-122-5p对TPA诱导人结直肠癌SW480细胞MMP-9表达及侵袭迁移的影响。方法:利用生物信息学筛选结直肠癌差异基因，预测其靶基因miRNA。用TPA(100nM)处理SW480细胞，通过RT-qPCR、Western blot法检测基因和蛋白表达水平；明胶酶谱法检测MMP-9细胞外分泌情况；Transwell检测细胞侵袭和迁移能力。结果:MMP-9在结肠癌组织中高表达，筛选出上游靶基因miR-122-5P;TPA诱导MMP-9 mRNA表达呈时间依赖性上调(P<0.01),诱导miR-122-5p的表达下调(P<0.01);过表达miR-122-5p明显下调TPA诱导的MMP-9 mRNA和蛋白表达(P<0.05),且MMP-9胞外分泌减少，细胞的侵袭、迁移能力显著下降(P<0.01)。结论:miR-122-5p可能通过调控TPA诱导MMP-9的表达，进而抑制结直肠癌SW480细胞侵袭和迁移能力，为克服结直肠癌转移研究提供新的思路。     

长链非编码RNAH19促进结直肠癌细胞株增殖的研究

目的 研究长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA) 家族分子母源性印迹基因19 转录因子(H19 )在结直肠癌组织及细胞株中的表达情况及其对人结直肠癌SW620细胞增殖的影响。方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测20例结直肠癌组织及其癌旁组织,以及结直肠癌细胞株SW480、HCT116、SW620和正常结直肠上皮NCM460细胞中H19的表达。结直肠癌SW620细胞分别转染H19 siRNA(si-H19 组) 和阴性对照序列(si-NC组) ,分别采用流式细胞技术、细胞克隆形成实验和CCK8检测两组细胞的增殖情况。qRT-PCR和Western blot检测两组细胞G₁/S-特异性周期蛋白-D1(CyclinD1)和细胞周期素依赖激酶（cyclin dependent kinase 4, CDK4）的表达情况。结果 与癌旁组织和正常结直肠上皮NCM460细胞相比较,结直肠癌组织和细胞株中H19的表达水平升高（ P＜0.05);si-H19组细胞H19表达水平低于si-NC组,且细胞活力和细胞克隆数均低于si-NC组,以上差异均有统计学意义（ P＜0.05);同时,相较于si-NC组,si-H19组CyclinD1和CDK4基因和蛋白的表达受到了明显抑制（ P＜0.05)。结论 结直肠癌组织及细胞株中H19 呈高表达,沉默H19 表达能明显抑制结直肠癌细胞的增殖能力,为结直肠癌的靶向治疗提供了潜在策略。     

结直肠癌组织CypB表达及其对癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的 观察伴或不伴淋巴结转移的结直肠癌组织中亲环素B(CypB)的表达变化,研究CypB质粒敲除对结直肠癌细胞迁移和侵袭能力的影响.方法 采用免疫组织化学法检测结直肠癌组织芯片中59例结直肠癌组织CypB表达,其中31例无淋巴结转移.28例伴淋巴结转移.构建CypB的RNA干扰质粒,测序鉴定后转染结直肠癌细胞系SW1116(SW1116-siCypB),设立阴性对照(SW1116-NC);Western blotting分析CypB敲除效果.分别采用划痕实验和细胞侵袭实验评估和检测CypB敲除对SW1116细胞迁移和侵袭能力的影响.结果 伴淋巴结转移结直肠癌组织中CypB表达显著高于无淋巴结转移结直肠癌组织(P<0.01).与SW1116-NC比较,SW1116-siCypB的CypB表达明显减少,细胞迁移和细胞侵袭能力均显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.01).结论 CypB在结直肠癌淋巴结转移过程中具有重要作用,有望成为防治结直肠癌淋巴结转移的分子靶点.     

MYPT1通过RhoA/ROCK信号通路抑制结直肠癌细胞增殖和迁移

目的 探讨实肌球蛋白磷酸酶靶亚基1（MYPT1）在结直肠癌发生发展中的作用及其可能的作用机制。方法 RT-PCR检测mRNA表达水平,Western blot检测蛋白表达水平,CCK-8法检测细胞增殖活性,Transwell法检测结直肠癌细胞迁移能力,生物信息学软件筛选可与MYPT1相互作用的蛋白质,通过TCGA数据库分析MYPT1表达水平及与RAS同源基因家族成员A（RhoA）和锌离子相关的RhoA蛋白1（ROCK1）的相关性。根据实验方案进行分组,分为空白对照组、阴性对照组、MYPT1过表达组、RhoA过表达组、MYPT1过表达+RhoA空载组和MYPT1过表达+RhoA过表达组。结果 和癌旁正常组织及正常肠粘膜细胞相比,MYPT1在结直肠癌组织和细胞中低表达（P＜0.05）。过表达MYPT1可抑制结直肠癌细胞增殖和迁移（P＜0.05）。MYPT1负调控RhoA和ROCK1的表达（P＜0.05）。过表达RhoA促进结直肠癌细胞增殖和迁移（P＜0.05）。MYPT1通过下调RhoA的表达抑制ROCK1表达（P＜0.05）。MYPT1通过负调控RhoA抑制细胞增殖和迁移（P＜0.05）。结论 MYPT1在结直肠癌组织和细胞中低表达,其通过RhoA/ROCK信号通路调控结直肠癌细胞增殖和迁移。