4-羟基他莫昔芬对体外培养前列腺平滑肌细胞的作用

目的 研究4-羟基他莫昔芬(OHT)对原代培养的前列腺平滑肌细胞增殖与凋亡以及雌、雄激素受体表达的影响.方法 以不同浓度的雌二醇(E2)、乙烯雌酚(DES)和OHT分别作用于原代培养的前列腺平滑肌细胞,采用流式细胞术检测增殖和凋亡,免疫细胞化学检测雌、雄激素受体表达.结果 DES和E2在一定浓度范围内起促增殖作用(均P<0.05),但未发现明显的浓度相关性(DES:r=-0.101,P=0.328;E2:r=-0.115,P=0.188).OHT浓度在1×10-8moL/L时,前列腺平滑肌细胞增殖率为5.04%±0.65%,随着浓度由1×10-6mol/L升高为1×10-5mol/L,细胞增殖率由2 79%±0 54%下降为0.93%±0.40%.在更高浓度下显示与浓度相关的促凋亡作用(5.83%±0.78%、13.70%±0.71%、19.53%±0.90%),以上作用不能被相同甚至更高浓度的E2所逆转.OHT对雌、雄激素受体表达的影响与雌激素相近.结论 OHT在一定浓度范围内对原代培养的前列腺平滑肌细胞具有明显的抑制增殖和促凋亡作用,且该作用可能不依赖于雌激素受体途径.口服他莫昔芬后OHT血药浓度较低和OHT上调雄激素受体表达可能是他莫昔芬治疗前列腺增生效果不佳的原因.     

乳康舒对未孕雌性大鼠乳腺增生药效的初步研究

目的通过用乳康舒与消乳散结两种药物对大鼠乳腺增生模型的病理结果对比,筛选临床上适合未孕女患者的药物.方法采用肌肉注射苯甲酸雌二醇和黄体酮改进法制作大鼠乳腺增生模型,对乳腺导管上皮细胞数量、小叶腺泡数量和腺泡的平均面积、周径、腺泡腔内分泌物做定量定性对比.结果乳康舒较消乳散结对模型大鼠乳腺导管上皮细胞数量减少不明显,小叶腺泡面积和周径减小明显,腺泡腔内分泌物减少或消失,两者比较有统计学意义.结论乳康舒治疗临床上以小叶增生为主的未孕女患者效果更佳.     

维甲酸对大鼠气道上皮细胞增殖影响实验研究

目的 探讨维甲酸对体外培养大鼠气道上皮细胞增殖的影响.方法 原代无血清培养法获取大鼠气道上皮细胞,细胞角蛋白CK19免疫组化染色进行鉴定,不同浓度维甲酸（10^-9～10^-4g/L）作用于气道上皮细胞,MTT法观察维甲酸对细胞增殖的影响,不同组进行PCNA免疫组化染色计阳性细胞数.结果 原代培养气道上皮细胞CK19免疫组化染色阳性,维甲酸作用后细胞增殖率高于对照组,其中10^-7g/L浓度组作用最强,PCNA阳性细胞数最高.结论 低浓度维甲酸可促进体外培养气道上皮细胞增殖.     

姜黄素抑制原代兔结膜上皮细胞增殖的实验研究

目的探讨姜黄素对原代培养的兔结膜上皮细胞增殖的影响,为预防翼状胬肉术后复发探讨新的策略。方法制备原代兔结膜上皮细胞,以不同浓度的姜黄素(0、10、20、40、60μmol/L)作用于体外培养的第3～5代结膜上皮细胞,分别于处理后24、48、72h后采用MTT法检测细胞增殖情况。此外,采用上述浓度姜黄素处理结膜上皮细胞24h后,采用流式细胞仪检测细胞周期变化。结果 20μmol/L以上浓度的姜黄素可以显著抑制兔结膜上皮细胞增殖,且随浓度增加效果增强,随着时间增加抑制率显著增加(P<0.05)。此外,姜黄素作用24h后的细胞周期变化结果显示,G0/G1期细胞数量增加,细胞增殖受到显著抑制(P<0.05)。结论姜黄素能够抑制体外培养的原代兔结膜上皮增殖,姜黄素有可能作为抑制翼状胬肉术后复发的药物。     

4种异黄酮改构化合物对人离体子宫内膜腺上皮细胞增殖活性的比较

目的观察4种异黄酮改构化合物（F8、F11、ZF3和ZF7）对人离体子宫内膜腺上皮细胞增殖的影响。方法采用胶原酶消化十二次筛网过滤法原代培养人子宫内膜腺上皮细胞。MTT法检测并比较4种化合物对人离体子宫内膜腺上皮细胞增殖的影响。结果成功培养原代人离体子宫内膜腺上皮细胞并稳定传代。4种异黄酮化合物作用于人子宫内膜腺上皮细胞24h后，低剂量（25μmol／L）F8显著促进细胞增殖（P〈0．05），中高剂量（50、100μmol／L）F11显著抑制细胞增殖（P〈0．05）；作用48h后，中剂量（50μmol／L）F11和ZF3显著抑制细胞增殖（P〈0．05），高剂量（100μmol／L）化合物均显著抑制细胞增殖（P〈0．05）；作用72h后，除低剂量（25μmol／L）F8、ZF3和ZF7未明显抑制细胞增殖外（P〉0．05），各化合物在不同剂量下均抑制细胞增殖效应（P〈0．05）；该生物学效应具有时间和剂量依赖性。结论4种异黄酮化合物在一定剂量下作用一段时间后可抑制人离体子宫内膜腺上皮增殖。F11抑制细胞增殖活性最强。     

大鼠子宫内膜异位症模型的建立和评价

目的 建立大鼠子宫内膜异位症模型及实验方法。方法 手术制备大鼠子宫内膜异位模型，观察形态学改变，配合子宫内膜抗体及雌二醇、孕酮水平的检测。结果 大鼠子宫内膜异位模型组中抗子宫内膜抗体阳性率、血清雌二醇和孕酮均较假手术组及丹那些组为高(P＜0．01)。病理学观察，模型组异位于宫的内膜腺体中腺腔扩大，腺上皮呈柱状或立方形。丹那些治疗组的异位内膜腺体及腺上皮明显萎缩。结论 手术制备大鼠子宫内膜异位症模型，操作简单，价格低廉，成功率高，为寻找治疗异位症的新药提供了药效学研究的模型及评价方法。     

雷公藤甲素对人晶状体上皮细胞生长影响的实验研究

目的 研究雷公藤甲素（Triptolide，Tri）对人晶状体上皮细胞（Human Lens Epithelial Cells，HLEC）增殖抑制作用。方法 原代培养人晶状体上皮细胞，Tri不同浓度、不同作用时间后吖啶橙试剂（AO）染色，荧光显微镜下观察细胞核的形态变化；MTr法测定人晶状体上皮细胞增殖抑制率。结果 雷公藤甲素对细胞的生长有明显的抑制作用，且呈浓度时间依赖性。结论 一定剂量的Tri可抑制体外培养的人晶状体上皮细胞的增殖，为预防后囊混浊提供了新途径。     

孕酮的生物学行为及与乳腺的关系

众所周之,孕酮具有抗雌激素,抗增殖作用,对子宫内膜具有保护作用.人们一直期望孕酮对乳腺上皮细胞也具有同样的作用;但研究表明孕酮对乳腺的作用远非如此.因此,有人提出了一系列的问题:为什么在黄体期乳腺上皮细胞增殖更明显?为什么在激素替代治疗中,孕酮类的药物使乳腺上皮细胞的密度增加,这在单用雌二醇才可观察到的结果.为什么在口服避孕药时,孕酮可预防卵巢癌和子宫内膜癌,但不是乳腺癌.美国(WHI)和英国(NNS)流行病学研究发现雌激素+孕酮比单用雌激素引起乳腺癌的危险性高.鼠转基因动物模型发现孕酮对乳腺的作用表现为两方面,既具有使乳腺上皮增生,又具有抑制作用.只有理解了孕酮受体及其复合物的作用,才能解释孕酮的多面性.     

低剂量碘化钾治疗大鼠实验性乳腺纤维囊性增生

目的：观察低剂量碘化钾对大鼠乳腺纤维素囊性增生的防治作用和对血雌激素，孕激素分泌的影响。方法：采用SD雌大鼠复制乳腺纤维囊性增生模型，低剂量碘化钾灌胃或在造模同时预防性灌胃。放射免疫方法测定给药前后血雌激素，孕激素和黄体生成素水平；用分法评定用药前后鼠乳腺病理学改变，并与他莫昔芬的作用进行比较。结果：模型忿 给予碘化钾可减轻乳腺纤维囊性增生的病理改变，剂量依赖性地降低血雌二醇和雌二醇和雌三醇的水平，升高血孕酮和黄体生成素的水平，预防性给低剂量碘化钾一定程度抑制了乳腺纤维囊性增生。结论：低剂量碘化钾长期口服可能有预防和治疗乳腺纤维囊性增生的作用。     

有血清和无血清培养基联合法培养原代人牙龈上皮细胞

目的:探讨一种方便、快速、原代培养成功率高的人牙龈上皮细胞培养方法.方法:用含血清的DMEM培养基培养人牙龈组织上皮层7～10 d,然后换用无血清的EpiLife角化上皮细胞专用培养基加速已移出的上皮细胞分裂、增殖和游走.对培养出的上皮细胞进行组织学、形态学检测、单克隆角蛋白的鉴定和生长曲线测定.并比较联合培养方法和其他两种单独应用有血清DMEM培养基或无血清EpiLife培养基对上皮细胞生长的影响.结果:17～22 d内可获得供实验用上皮细胞,原代培养成功率为90.6%.倒置显微镜下见上皮细胞排列紧密,呈铺路石样生长.免疫组化染色角蛋白抗体阳性.同有血清培养基相比,无血清培养基能促进上皮细胞的迁移、游走,加速其分裂、增殖.结论:用有血清培养基和无血清培养基联合培养,可以方便、快速、成功地培养出人原代牙龈上皮细胞.     

Effects of Estradiol and Tamoxifen on Proliferation of Human Breast Cancer Cells and Human Endometrial Cells

Estradiolplaysimportantrolesinthegrowthandprogressionofhumanbreastcancer Tamoxifen(TAM ) ,anon steroidalanti estrogenmaterial,isthefirst lineendocrinetherapyforthetreatmentofadvancedhumanbreastcancer Unfortunately ,long termtherapywouldbringtheproblemsofTAMresis tanceorTAMinsensitive ThepurposeofthisstudywastoinvestigatetheinfluenceofTAMontheprolif erationofhumanbreastcancercellsandendometrialcellsanddiscusstherelationshipbetweentheeffectoftamoxifeninvitroandthetypesofcells 1　MATERIAL…     

人类晶体上皮细胞的体外培养与观察

目的：建立人类晶体上皮细胞培养的简便方法并观察原代和传代细胞的生物学特征和组织学变化。方法：将人工晶体植入术中取下的前囊膜分割成小碎片，吸管转移至培养瓶底部进行原代培养，7—10d后常规方法进行传代培养，采用相差显微镜观察活体细胞的增殖活动和形态学变化。结果：人类晶体上皮细胞在体外培养时可以存活并传代，但是其生存能力与供体年龄有关。传代后期细胞发生纤维化改变。结论：本方法简便，有效。可用于实验研究。     

简便微囊制备法——卵巢细胞微囊化的制备与功能检测

目的探讨微囊化制备在卵巢细胞体外增殖培养研究中的作用。方法将卵巢细胞分离培养并使用简便微囊制备法将卵巢细胞微囊化,观察细胞体外增生及测定培养液中雌激素和孕酮的含量,以检测卵巢细胞的内分泌功能和微囊的通透性能。结果增生培养至第6代与原代卵巢细胞雌、孕激素的分泌量相近,而且微囊化后雌、孕激素的分泌量差异无统计学意义(P>0.05)。结论体外培养的卵巢细胞有内分泌功能,微囊化后不影响其分泌物的释放。     

双自杀基因系统诱导乳腺癌细胞凋亡的体内外实验研究

目的探讨VEGF启动子驱动的双自杀基因体系对人乳腺癌细胞MCF-7靶向治疗作用以及该体系能否诱导体内外MCF-7细胞的凋亡。方法选择表达VEGF的MCF-7细胞和不表达VEGF的原代培养的乳腺上皮细胞，用重组腺病毒Ad—VEGFP—CD／TK感染之，荧光显微镜观察其感染效率。R．T—PCR．方法检测受感染细胞目的基因的表达，给予前药GCV和5-FC后于倒置显微镜观察，采用流式细胞仪检测细胞内DNA含量的变化。建立荷人乳腺癌的裸鼠动物模型，观察各治疗组的治疗效果，应用透射电镜观察移植瘤细胞超微结构。结果携带双自杀基因和报告基因（GFP）的重组腺病毒载体，感染复数为100时，95％以上的受感染MCF-7和乳腺上皮细胞中有GFP表达。RT—PCK检测发现MCF-7细胞有目的基因的表达。而乳腺上皮细胞无表达。倒置显微镜下观察用药组细胞出现凋亡征象；用流式细胞仪测定用药组出现典型的凋亡峰。在MCF-7裸鼠移植瘤模型中，治疗组裸鼠移植瘤的生长明显受到抑制，其余各组肿瘤生长情况无明显差别；在透射电镜下可见治疗组多量的凋亡细胞。结论体内外实验均表明VEGF启动子可调控双自杀基因体系靶向性诱导人乳腺癌细胞MCF-7细胞凋亡。     

针刺和中药对乳腺增生的抑制作用研究

[目的]研究针灸和中药对乳腺增生的抑制作用。[方法]将实验大鼠随机分为正常组、模型组、针剌组、中药组、针刺加中药组(简称针药组)以及三苯氧胺西药组(简称西药组)共6组;除正常组外,以肌注苯甲酸雌二醇和黄体酮造成乳腺增生大鼠模型;对除模型组外的4个治疗组分别施以针刺、中药、中药加针剌和三苯氧胺的治疗措施;检测各组治疗前后的乳头高度,计算治疗后大鼠第2对乳腺标本在光镜下的乳腺每小叶腺泡数、腺泡腔直径及导管直径情况,并采用免疫组化法检测各组乳腺组织雌激素受体(ER)及孕激素受体(PR)的表达情况。[结果]模型组乳头高度比正常组高,乳腺导管扩张,小叶、腺泡数明显增加,乳腺组织ER受体和PR受体表达的计分值也比正常组高(均P<0.01),说明造模成功;经治疗,针刺、中药、针刺加中药以及三苯氧胺均使乳头高度降低(均P<0.01),乳腺每小叶腺泡数、腺泡腔直径及导管直径减少(P<0.05或P<0.01),乳腺组织ER、PR受体表达降低(P<0.05或P<0.01),但均未恢复到正常组水平(均P<0.05);其中针药组和西药组对乳腺增生的抑制作用均比单纯针刺组或单纯中药组略优,针药组和西药组两者作用相仿。[结论]过度雌激素的刺激可能主要通过ER、PR的介导使大鼠乳腺组织增生,针刺、中药和西药三苯氧胺均对乳腺增生有抑制作用,而针     

MMTV-PyMT转基因小鼠自发成瘤乳腺癌细胞的分离培养及鉴定

目的：分离培养小鼠乳腺肿瘤病毒介导多瘤病毒中间T抗原（MMTV-PyMT）转基因小鼠自发成瘤的乳腺癌细胞,初步研究其生长特性、分子表型、体内成瘤和转移能力。方法：取MMTV-PyMT小鼠自发成瘤的乳腺癌组织（n=3）,采用酶解贴壁培养法进行原代细胞分离并传代培养,倒置显微镜下观察细胞形态特征;采用CCK-8检测细胞的增殖能力;通过Western印迹检测细胞的雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和人表皮生长因子受体2(HER2)表达以鉴定细胞分子亚型。将分离培养的细胞接种于C57BL/6雌性小鼠（n=4）乳腺脂肪垫,观察细胞成瘤能力和生长特性;取肿瘤组织和内脏器官,制备组织切片后采用苏木精-伊红（HE）染色,观察组织形态学特点;采用免疫组织化学（IHC）染色检测ER、PR、HER2及Ki-67蛋白表达,分析分子分型。结果：成功分离得到MMTV-PyMT转基因小鼠自发成瘤的乳腺癌细胞（MMTV-PyMT细胞）并可稳定生长和传代,细胞倍增时间为56.0 h;MMTV-PyMT细胞可在C57BL/6雌性小鼠乳腺脂肪垫成瘤并生长,但未见远处内脏转移。该细胞在细胞学和组织学中的分子分型皆为HER...     

人卵巢组织两种超低温冻存方法的研究

【目的】探索两种人卵巢组织冷冻方案用于生殖细胞保存的效果。【方法】活检卵巢组织来自15名经知情同意的手术患者。组织被随机分配到新鲜组、玻璃化冷冻组和慢速冷冻组。观察和比较各组卵巢组织冻融后的原始卵泡形态完整率,并通过体外培养系统测定培养液中的雌二醇和孕酮水平,观察和比较冻融后卵巢组织内分泌功能。【结果】本研究中新鲜组、慢速冻融组和玻璃化冻融组的原始卵泡形态完整率分别是97.6%、72.6%和80.3%。两冻融组与新鲜组相比明显下降(P<0.001),而在两冻融组间差异并无统计学意义(P=0.237)。在体外组织培养期间,两种冻融卵巢组织都能持续分泌雌二醇和孕酮,两组间差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】本研究中两种人类卵巢组织超低温冷存的方法是可行的,可适应不同需要。     

人上皮性卵巢癌组织中肿瘤相关成纤维细胞的培养

目的:通过分离、纯化、培养及鉴定,获得人上皮性卵巢癌组织中肿瘤相关成纤维细胞。方法:采用酶消化法获得原代细胞,再通过酶消化+反复贴壁法,传代获得第4代纯化细胞,并绘制细胞生长曲线,通过形态学观察和免疫细胞化学染色,对所得细胞进行鉴定。结果:获得典型卵巢癌相关成纤维细胞。形态学上,细胞呈长梭形,胞核不明显,细胞大小不一致。其生长潜伏期较肿瘤细胞长,生长相对缓慢。免疫细胞化学上,肿瘤相关成纤维细胞中,成纤维细胞特性蛋白-1、波形蛋白、结蛋白及α-平滑肌动蛋白均表达阳性,而血管内皮细胞、间充质细胞标志均表达阴性。细胞角蛋白在较早传代的细胞中少量表达,通过纯化后基本消失。结论:本方法可获得典型上皮性卵巢癌相关成纤维细胞,为进一步研究该细胞自身生物学特性及其与卵巢癌间的相互作用提供了必要的细胞学基础。     

体外培养人胚晶状体上皮细胞生长特性的研究

目的观察体外培养人胚晶状体上皮细胞的生物学特性。方法组织块贴壁法培养人胚晶状体上皮细胞,通过倒置相差显微镜、透射电子显微镜,采用免疫细胞化学法分析人胚晶状体上皮细胞的生长特性。结果体外培养的原代人胚晶状体上皮细胞在组织块贴壁48～72 h后从组织块边缘长出,具有上皮细胞的形态特点,第10天达到融合。第二代人胚晶状体上皮生长曲线近＂S＂形,经过1～2 d的潜伏期后进入对数生长期,需10 d左右达到融合,细胞形态呈六角形或椭圆形、超微结构保持正常,免疫细胞化学SABC法染色结果显示细胞浆内α-晶状体蛋白染色阳性。结论人胚晶状体上皮细胞具有增殖能力,第二代人胚晶状体上皮细胞是进行白内障相关研究的合适实验对象。     

丹栀逍遥散对焦虑模型大鼠相关脑区形态结构变化的干预作用

目的观察天敌暴露饮水冲突模型大鼠海马、杏仁核相关脑区的形态结构变化以及疏肝清热健脾中药丹栀逍遥散对其的干预作用。方法经Open-Field行为学评分后,将雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、中药组、西药组,每组8只。模型组、中药组、西药组采用天敌暴露、饮水冲突应激方法建立焦虑模型。于第15天开始,正常组、模型组予蒸馏水灌胃,西药组予盐酸丁螺环酮2 mg/(kg·d)灌胃,中药组予丹栀逍遥散10.5 g/(kg·d)灌胃,各组连续给药7 d。光镜下观察海马、杏仁核形态结构变化。结果正常组海马锥体细胞及杏仁核神经细胞核大而圆,细胞之间连接紧密,排列整齐。模型组海马、杏仁核可见大量的神经元出现细胞核染色质向核膜下边聚集,核固缩,形态不规则,细胞之间排列紊乱疏松无规则,细胞周围存在空隙,尤其以海马的CA2和CA3区明显。中药组和西药组较模型组有明显的改善,细胞排列尚紧凑整齐。结论疏肝清热健脾法代表方丹栀逍遥散对焦虑模型大鼠相关脑组织损伤具有一定的改善作用,可促进其损伤的恢复。