大豆异黄酮对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:研究大豆异黄酮对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响并探讨其作用机制?方法:分离大鼠胸主动脉,组织贴块法培养VSMC,以AngⅡ为诱导剂,建立VSMC细胞增殖模型?应用MTT法,CellTiter-Glo■ Assay法检测细胞增殖,观察不同浓度的大豆异黄酮及亚硝基-精氨酸甲酯(L-NAME)对AngⅡ诱导的VSMC增殖的影响?硝酸还原酶法检测细胞上清液中一氧化氮(NO)含量;化学比色法测定一氧化氮合酶(NOS),诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平;半定量RT-PCR检测VSMC iNOS mRNA的表达?结果:大豆异黄酮能剂量依赖性的抑制VSMC增殖,该作用可被L-NAME部分抵消;大豆异黄酮能升高NOS?iNOS和NO水平,增加iNOS mRNA的表达?结论:大豆异黄酮可呈剂量依赖性的抑制AngⅡ诱导的VSMC增殖,该作用可能通过上调iNOS基因表达?升高NO水平实现的?     

高胰岛素水平对血管平滑肌细胞NO生成的影响

培养大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）,检测高胰岛素（HI）对VSMC膜蛋白激酶C（PKC）活性的影响,并采用硝酸还原酶法和免疫印迹法检测HI加或不加PKC抑制剂－H7对脂多糖（LPS）＋γ－干扰素（γ－IFN）诱导NO生成和一氧化氮合酶（iNOS) 表达的影响。结果：HI预处理的VSMC,膜PKC活性明显高于对照（P＜0．05）,LPS＋γ－IFN诱导NO生成显著低于对照（P＜0．01）,加H7培育,NO的生成量较HI处理组明显提高,但低于对照（P＜0．01）。免疫印迹示HI处理的VSMC,iNOS表达下降,提示：高胰岛素血症可能通过激活VSMC膜PKC,部分抑制iNOS表达,减少NO产生。     

大鼠尾核内微量注射L-精氨酸对一氧化氮合酶表达的影响

目的探讨大鼠尾核内L-精氨酸（L-Arg）、N^ω硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME）、亚甲基蓝（MB）等对一氧化氮合酶（NOS）表达的影响。方法动物随机分为L-Arg组、L-NAME组、MB组和生理盐水（NS）组，用免疫组织化学结合计算机图像分析的方法观察给药后6、12、24、48和72h尾核内nNOS表达的变化。结果尾核内nNOS神经元散在表达，阳性部位主要在胞浆，神经纤维也有表达。L-Arg组nNOS神经元较正常表达增强（P〈0．05），且随着时间的延长而增强，48h达最高点。MB和L-NAME组nNOS神经元表达较正常减弱（P〈0．05），随时间延长继续减弱，48h达最低点。结论尾核内L-Arg通过NOS生成NO而发挥痛敏作用，L-NAME和MB通过抑制NOS的功能而减少NO的生成产生镇痛作用，NOS是体内合成NO的关键酶。     

通脑精胶囊对急性局灶性脑缺血胰岛素抵抗大鼠NO和TNFα的影响

目的：探讨通脑精胶囊对胰岛素抵抗大鼠急性局灶性脑缺血的保护作用及其机制。方法：高糖饲料喂复制胰岛素抵抗（IR）大鼠模型，再采用大脑中动脉复制急性局灶性脑缺血动物模型，观察急性局灶性脑缺血IR大鼠一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）、超氧化物歧化酶（SOD）和肿瘤坏死因子α（TNFα）含量和活性的变化。结果：通服精胶囊显降低缺血大鼠脑组织中NO含量和NOS活性及血浆TNFα的含量（P＜0．01），增加脑组织中SOD活性（P＜0．01），增加脑组织中SOD活性（P＜0．01）。结论：通脑精胶囊对IR大鼠急性局灶性缺血有保护作用，其机制与降低NO、TNFα含量和NOS活性及增加SOD活性有关。     

NO参与AngⅡ诱导心肌成纤维细胞胶原含量的变化

目的：探讨NO前体L-Arg和NOS抑制剂L-NAME在血管紧张素Ⅱ诱导CFs胶原合成中的作用。方法：用胰酶消化法分离、纯化、培养新生SD大鼠CFs,采用CFs羟脯氨酸含量测定、以羟脯氨酸标准曲线求出样本中羟脯氨酸含量,胶原含量以羟脯氨酸含量×7.4表示。结果：（1）在培养液中加入AngⅡ10-9～10-5mol/L,CFs胶原含量呈明显的剂量依赖性;（2）分别给予Saralasin和PTX对CFs胶原含量均无明显影响,但可明显抑制AngⅡ增强CFs胶原含量的作用;（3）预先给予NO前体L-Arg,再加入AngⅡ,AngⅡ增加CFs胶原含量的效应明显减弱;（4）加入NOS抑制剂L-NAME后,再加入L-Arg和AngⅡ,明显减弱L-Arg对AngⅡ的抑制作用;（5）在用L-NAME抑制NOS的基础上,再加入AngⅡ,其AngⅡ促心脏CFs的作用进一步增强,而单纯应用L-NAME对基础状态CFs胶原含量无明显影响。结论：AngⅡ能剂量依赖性增加CFs胶原含量,此效应是通过AngⅡ受体实现的,可能部分依赖于PTX敏感的G蛋白;NO明显抑制AngⅡ增加CFs胶原含量的作用,CFs内可能存在L-Arg-NO通路,该通路在调控AngⅡ增加CFs胶原含量中有重要作用。     

高糖对大鼠主动脉血管平滑肌细胞产生一氧化氮及其合酶活性的影响

目的：研究高糖对主动脉血管平滑肌细胞产生一氧化氮（ＮＯ）及其合酶（ＮＯＳ）活性的影响。方法：应用ＮＯ及ＮＯＳ试剂盒测定大鼠主动脉血管平滑肌细胞ＮＯ的含量及ＮＯＳ的活性。结果：高糖能显著抑制培养的平滑肌细胞ＮＯ的产生，并能明显降低ＮＯＳ的活性，具有浓度和时间效应。结论：高糖对平滑肌细胞产生ＮＯ的抑制可能是通过抑制其ＮＯＳ的活性而起作用的。     

硝普钠对高血压病患者动脉血管平滑细胞的NO含量及细胞增殖的调节作用

目的　硝普钠 (SNP)对高血压病 (EH)患者动脉血管平滑肌细胞 (VSMC)的一氧化氮合酶 (NOS)活性和一氧化氮(NO)含量、细胞周期、细胞数量、细胞增殖指数的影响 .方法　对血压正常 (NT)者和 EH患者的肠系膜动脉进行分离培养 ,对比观察在基础状态和 SNP作用下 ,EH组和 NT组动脉VSMC的 NOS活性、NO含量、细胞周期、细胞数量、细胞增殖指数的变化 ,从而研究 SNP对 EH患者的动脉 VSMC的NOS- NO系统及细胞增殖的影响 .结果　 1在基础状态下 ,EH组 VSMC的 NO含量、NOS活性低于 NT组 ,而且两组间有显著差异 (P<0 .0 5 ) ;2在 SNP作用下 ,EH组 VSMC的NO含量、NOS活性较 NT组减少 ,但两组间无明显差异 (P>0 .0 5 ) ;3在基础状态下 ,EH组动脉 VSMC的 S期的百分率、细胞增殖指数 (PI)、细胞数量均明显高于 NT组 ,且两组间有明显差别 (P<0 .0 5 ) ;4在 SNP作用下 ,EH组动脉 VSMC的S期的百分率、细胞增殖指数 (PI)、细胞数量均高于 NT组 ,且两组间无明显差别 (P>0 .0 5 ) .结论　 NO的供体药物 SNP可以通过分解产生大量的外源性 NO,纠正 EH患者 VSMC的 NO含量不足的缺陷 ,抑制 EH患者动脉 VSMC的增殖 ,从而抑制 EH患者动脉血管的重构 ,阻止 EH的发生、发展 .     

茶多酚对胰岛素抵抗综合征模型大鼠NO和NOS的影响

目的:研究绿茶中有效成分茶多酚(teapolyphenols,TP)对胰岛素抵抗综合征(insulinresistancesyn drome,IRS)大鼠NO水平和NOS活性的影响。方法:采用高脂、高糖和高盐饲料喂养大鼠,饲养6周时,给予茶多酚,每天1次,连续6周,并于末次给药后测定各组大鼠空腹血糖、血脂、胰岛素水平及血清NO水平和NOS活性。结果:茶多酚高剂量能明显降低IRS模型大鼠血脂和胰岛素水平,提高胰岛素敏感指数(insulinsensitivityindex,ISI),降低NO水平和抑制NOS活性。结论:茶多酚对胰岛素抵抗综合征有一定的改善作用,其作用可能与影响NO生成和抑制NOS活性有关。     

依那普利拉对新生大鼠心肌成纤维细胞增殖及NOS/NO系统的影响

目的：观察血管紧张素Ⅰ转换酶抑制剂（ACEI）依那普利拉（Ena）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞（CFb）增殖及其对一氧化氮合酶/一氧化氮系统（NOS/NO）的影响，探讨Ena抑制心肌成纤维细胞增殖的初步机制。方法：培养的新生Wistar大鼠CFb，分为对照组、模型组和3个剂量Ena给药组，采用胰酶消化、差速贴壁法培养CFb，四氮唑盐（MTT）比色法检测细胞增殖；流式细胞仪测定细胞周期；硝酸还原酶法和分光光度法分别测定不同干预条件下CFb培养液中NOS/NO活性。结果：Ena能够显著抑制AngⅡ诱导的CFb增殖，Ena 3个剂量组作用24、48和72 h时间点的MTT值与模型组比较，差异具有显著性（P<0.05或P<0.01）；与模型组比较，Ena能提高细胞周期G₀/G₁百分率，降低S期百分率，差异具有显著性（P<0.05或P<0.01）；与模型组比较， Ena能够提高CFb上清液中NOS/NO 水平，且随着用药剂量和作用时间增加，NOS活性和NO含量明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：Ena抗CFb增殖的作用与提高CFb NOS/NO 系统活性，拮抗AngⅡ的生物效应有关。     

高糖对大鼠主动脉血管平滑肌细胞产生一氧化氮及其合酶 …

目的：研究高糖对主动脉血管平滑肌细胞产生一氧化氮（ＮＯ）及其合酶（ＮＯＳ）活性的影响。方法：应用ＮＯ及ＮＯＳ试剂盒测定大鼠主动脉血管平滑肌细胞ＮＯ的含量及ＮＯＳ的活性。结果：沆糖能显著抑制培养的平滑肌细胞ＮＯ的产生，并能明显降低ＮＯＳ的活性，具有浓度和时间效应。结论：高糖对平滑肌细胞产生ＮＯ的抑制可能是通过抑制其ＮＯＳ的活性而起作用的。     

辛伐他汀对内皮细胞分泌NO、NOS的影响

目的研究HMG-CoA还原酶抑制剂辛伐他汀对内皮细胞分泌NO和NOS活力的影响，并探讨其机制，以阐明其在治疗动脉粥样硬化中的降脂外作用。方法培养人脐静脉内皮细胞（ECV304），分别用不同浓度TNF-α刺激，在50ng／mlTNF-α刺激的基础上用不同浓度的辛伐他汀（0．1μmol／L、10μmol／L、10．0μmmol／L）及10μmmol／L辛伐他汀＋0．2mmol／L甲羟戊酸共育。用硝酸还原酶法测定培养上清NO的浓度，用化学比色法测定NOS的活力。结果不同浓度的TNF-α刺激24h后．培养液上清液NO浓度、eNOS活力明显低于空白对照组（P〈0．05），iNOS活力明显高于空白对照组（P〈0．05）。与TNF-α（50ng／ml）刺激组相比．各浓度的辛伐他汀明显增加NO的生成，提高eNOS的活性（P〈0．01），降低iNOS活力．而该作用可被甲羟戊酸逆转。结论TNF—α可以抑制血管内皮细胞NO的生成，降低cNOS的活性，辛伐他汀可以增加NO的生成。提高eNOS的活性，而该作用可被甲羟戊酸逆转。辛伐他汀降脂外作用部分是通过抑制甲羟戊酸的合成而实现的。     

一氧化氮部分介导槲皮素的抗高血压作用

目的：观察槲皮素的抗高血压作用及其可能机制。方法：两肾一夹复制肾性高血压大鼠模型。采用Griess反应测定NO含量．血浆及主动脉一氧化氮合酶（NOS）活性应用试剂盘测定，主动脉iNOS mRNA表达分析运用RT-PCR方法。结果：槲皮素能明显降低肾性高血压大鼠血压（174．811．9 vs 142．816．2mmHg．P〈0．01）。并能显著提高血浆NO产量及主动脉NOS活性。槲皮素能增加iNOS mRNA表达。槲皮素的这些作用可被L-NAME部分抑制。结论：槲皮素具有抗高血压作用，其机制部分涉及NO通路。     

硫化氢下调大鼠血小板L-精氨酸/一氧化氮合酶/一氧化氮通路

目的观察硫化氢（hydrogen sulfide，H2S）对血小板L-精氨酸／一氧化氮合酶／一氧化氮（L-Arg／NOS／NO）通路的影响以探讨H2S和NO这两种气体信号分子间的相互作用。方法离体孵育大鼠血小板，加入H2S气体溶液（10^-6～10^-3mol／L）孵育2h，采用Greiss法测定血小板孵育液亚硝酸盐（NO2^-）含量；同位素示踪法检测血小板NOS活性及L-Arg转运。结果一次性给予H2S（10^-3～10^-3mol／L）孵育2h，呈浓度依赖的抑制了L-Arg／NO通路，血小板孵育液中NO2^-含量比对照组分别降低6％、11％（均P〉0.05）、24％、36％和52％（均P〈0．01）；NOS活性分别下降1％、14％（P〉0.05）、25％、37％和42％（P〈0.01）；L-Arg转运分别减少12％（P〉0．05）到72％（P〈0.01）；IC50分别为53、02、41．63及21、53μmol／L（P〈0.01）。结论H2S通过抑制血小板L-Arg转运和NOS活性，下调L-Arg／NOS／NO通路，从而减少血小板NO生成。     

NG-硝基-左旋精氨酸甲酯对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤脂质过氧化的影响

目的 观察一氧化氮（NO）含量的变化对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脂质过氧化的影响。方法 采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,应用Griss反应法测定脑组织NO含量变化,微量测定法测定超氧物歧化酶（SOD）活性和脂质过氧化产物丙二醛以及NO合酶（NOS）抑制剂NG-硝基-左旋精氨酸甲酯（L-NAME）对它们的影响。结果 脑缺血1 h再灌注1 h脑组织匀浆中NO2-含量升高,SOD活性降低,丙二醛（MDA）含量明显升高,与假手术组比较P<0.01;L-NAME能部分抑制SOD活性的降低及NO2－、MDA含量的升高,与生理盐水治疗对照组比较,P<0.01。结论 小剂量NOS抑制剂能减轻急性脑缺血再灌注损伤脂质过氧化损伤。     

生脉片对体外培养软骨细胞一氧化氮合酶的影响

目的：探讨中药生脉片防治骨性关节炎的作用机制。方法：通过体外软骨细胞培养的方法,应用IL-1β诱导软骨细胞产生内源性NO,分空白对照组、生脉组、L-NAME组和IL-1β组观察生脉片对软骨细胞一氧化氮合酶（NOS）的影响。结果：生脉组和L-NAME组的NOS活性明显低于IL-1β组（P〈0．01）。结论：生脉片能够抑制IL-1β诱导软骨细胞合成NOS,具有防治骨性关节炎的作用。     

L—精氨酸对急性缺氧大鼠血浆NO和ET含量变化的影响

目的 为了研究外源性L-精氨酸（L-Arg）对急性缺氧大鼠血浆一氧化氮（NO）和内皮素（ET）含量变化的影响。方法 采用组织化学方法,生化Griess法和放射免疫法分别测定大鼠肺血管内膜一氧化氮合酶（NOS）活性,血浆NO、ET和环腺苷酸（cGMP）含量水平。结果 （1）急性缺氧1h后血浆NO和cGMP含量水平下降,血浆ET含量水平上升,肺血管内膜NOS活性下降。（2）L-Arg干预后血浆NO和cGMP 含量水平较缺氧组明显增加,血浆ET含量水平则明显下降,而局部肺血管内膜NOS活性较缺氧组无显著差异。结论 急性缺氧能导致血浆NO含量水平下降,血浆ET水平升高,肺血管内膜NOS活性下降。应用外源性L-Arg干预急性缺氧可使下降NO水平升高。血浆ET水平下降,从而推测L-Arg有缓解缺氧毒性及缓解性肺动脉高压的作用,故临床上运用L-Arg可望对某些疾病具有有益的治疗作用。     

一氧化氮、内皮素和血管紧张素对VSMC中Cdk2基因表达的调控

目的：研究细胞周期依赖性激酶2（Cdk2）在NO、内皮素1（ET-1）及血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）促血管平滑肌细胞（VSMC）增殖中的作用。方法：应用半定量RT－PCR法测定样品Cdk2水平；3H-TdR参入方法测定细胞DNA合成水平。结果：自发性高血压大鼠（SHR）VSMC中Cdk2的表达明显高于WistarKyotO大鼠（WKY），细胞增殖较快；硝普钠抑制SHRVSMC增殖，CdkZ表达下降；而左旋硝基精氨酸（L－NNA）和ET-1、AugⅡ能够促进WKYVSMCCdk2mRNA的表达和细胞增殖。结论：NO及ET－1、AngⅡ在对VSMC增殖的调节中，Cdk2可能起着重要的作用。     

满药赤雹果水提取物镇痛作用与NO的关系

目的：探讨赤雹果水提取物（WEFTD）的镇痛作用机制。方法：采用小鼠浸尾法观察L-精氨酸（L-Arg）和左旋硝基精氨酸甲酯（L-NAME）对WEFTD镇痛作用的影响,硝酸还原酶法测定血清和脑组织中-氧化氮（NO）的含量。结果：WEFTD2000mg/kg（生药6.2g/kg）组小鼠痛阈显著高于生理盐水（NS）对照组（P〈0.01）,L-Arg可部分拮抗WEFTD的镇痛作用（P〈0.01）;WEFTD2000mg/kg组小鼠血清和脑组织中NO的含量显著低于NS对照组（P〈0.01）,WEFTD＋L-Arg组NO含量高于WEFTD组（P〈0.01）。结论：WEFTD的镇痛作用机制与抑制过量NO的合成有关。     

自分泌一氧化氮对人肝癌细胞Bel-7402增殖及凋亡的影响

目的：观察人肝癌细胞Bel-7402自分泌的一氧化氮对其增殖及凋亡的影响。方法：MTT法观察L-精氨酸（L-Arg）及内毒素（LPS）联合L-Arg对细胞增殖的影响,免疫组化法检测iNOS在细胞中的表达,TUNEL法观察NO对细胞凋亡的影响。结果：低浓度L-Arg对细胞增殖有促进作用,高浓度抑制细胞增殖。LPS使iNOS表达增强,协同L-Arg抑制细胞增殖。高浓度NO促进细胞凋亡。结论：低浓度NO促进细胞增殖,高浓度NO抑制细胞增殖并促进细胞凋亡。     

一氧化氮合酶抑制剂L-NAME抗大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用

许多血管性疾病的产生与一氧化氮(NO)生成不足有关,如:高血压、动脉硬化、PTCA术后再狭窄及与感染性休克相关的血管反应性降低等。NO是由细胞内的左旋精氨酸(L-arginine,L-Arg)经一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)作用而生成的。NO的合成可以被酶抑制剂NG-硝基L-精氨酸甲酯(L-NG-nitro-arginine methyl ester,L-NAME)、氨基胍(aminoguanidine)等抑制。 研究[1,2]发现,L-NAME可以升高大鼠的血压,但不伴心室肥大。因而推测L-NAME可能具有抑制细胞增殖的作用。Mabrouk等[3]在体外试验中证明,L-NAME可以抑制肠动脉平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)的