海马缺血神经元反义c-fos寡核苷酸对bcl-2、bax蛋白表达的影响

目的 :了解即早基因 c- fos在海马缺血再灌注神经元损伤中的作用。方法 :以大鼠四血管闭塞建立全脑缺血再灌注实验动物模型 ,向一侧海马内注射反义 c- fos寡核苷酸 ( ODNs)以阻断受损神经元 FOS蛋白的表达。采用免疫组织化学方法 ,显示 c- fos对海马受损神经元 bcl- 2、bax蛋白表达的影响 ;用 H- E染色观察海马神经元的病理变化。结果 :海马在缺血 2 0 min,再灌注 2 4 h后 ,注射正义 ODNs、随意 ODNs及 PBS组海马 CA1、CA2 区bcl- 2、bax蛋白阳性表达较注射反义 c- fos ODNs组明显 ( P<0 .0 5 ) ;H- E染色显示注射反义 c- fos ODNs侧海马神经元形态大致正常 ;注射正义 ODNs、随意 ODNs、PBS侧海马区有较多神经元呈核浓缩、胞浆明显红染的缺血性改变。结论 :c- fos在脑缺血再灌注损伤中对神经元具有损害作用 ,而且可能对 bcl- 2基因家族有间接的调控作用     

黄连解毒汤对小鼠脑缺血慢性神经损伤的保护作用

目的:观察黄连解毒汤对小鼠脑缺血慢性神经损伤的保护作用.方法:以大脑中动脉阻塞(MCAO)15 min诱导小鼠短暂性局灶性脑缺血.从术前7 d开始,用药组灌服黄连解毒汤2 g/kg和4 g/kg,实验对照组和假手术组灌服生理盐水,均连续给药21 d,一日一次.缺血后35 d(5周)内进行神经症状评分、斜板试验,并记录小鼠的最终生存率.实验结束后,测定脑损伤体积和神经元数量.结果:黄连解毒汤4 g/kg能显著提高小鼠MCAO术后35 d的最终生存率,2 g/kg和4 g/kg均明显改善术后的神经症状,降低脑梗死体积、减轻脑萎缩.黄连解毒汤4 g/kg可明显增加缺血侧海马CA1区、纹状体和皮层的神经元密度,2 g/kg明显增加缺血侧海马CA1区的神经元密度.结论:黄连解毒汤对小鼠局灶性脑缺血慢性神经损伤有保护作用,能提高小鼠的最终生存率并促进神经功能的恢复.     

5-脂氧酶在全脑缺血海马CA1神经元损伤中的作用

目的:观察全脑缺血后海马神经元损伤中5-脂氧酶(5-LOX)的表达变化,并探讨5-LOX选择性抑制剂zileuton对全脑缺血海马神经元损伤的保护作用。方法:在双侧颈总动脉阻断结合降压药诱导大鼠全脑缺血模型,Western blot方法检测脑缺血损伤中5-LOX的表达改变;免疫组织化学及免疫荧光双标染色方法观察5-LOX的分布特征。应用5-LOX选择性抑制剂zileuton(10、30、50 mg/kg,缺血前后2 h灌胃给药,以后每日2次,共3 d)观察脑缺血后海马神经元的损伤变化。结果:大鼠全脑缺血后3～14 d,海马CA1神经元产生迟发性神经元死亡;海马5-LOX表达在全脑缺血后1～7 d增高,并于3 d达高峰;在海马CA1区,5-LOX主要表达在神经元胞浆,脑缺血后5-LOX发生核移位现象。5-LOX抑制剂zileuton(30和50 mg/kg)能减少全脑缺血后海马CA1神经元的死亡。结论:5-LOX参与大鼠全脑缺血诱导的海马神经元损伤,5-LOX抑制剂zileuton对全脑缺血海马神经元损伤有保护作用。     

补阳还五汤对小鼠脑缺血再灌注后海马神经元的保护作用

目的：观察补阳还五汤对小鼠脑缺血再灌注后海马神经元的保护作用。方法：将24只昆明小鼠随机分为假手术组、缺血损伤组和补阳还五汤组。通过阻断双侧颈总动脉血流制作小鼠脑缺血模型,缺血20min再灌注7d后采用病理学方法观察小鼠海马CA1区组织学分级,并计数1mm区段内正常形态的锥体神经元数目——神经元密度。结果：补阳还五汤能够明显降低小鼠脑缺血再灌注后海马CA1区组织学分级（与缺血损伤组相比P〈0．05）,提高神经元密度（与缺血损伤组相比P〈0.01）。结论：补阳还五汤对小鼠脑缺血再灌注引起的海马神经元损伤具有明显的预防和保护作用,其机理有特进一步研究。     

辛伐他汀对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化和中心动脉压的影响

目的：探讨辛伐他汀对载脂蛋白E基因敲除（ApoE-/-）小鼠动脉粥样硬化和中心动脉压的影响及后两者的相关性。方法：5周龄雄性ApoE-/-小鼠和C57小鼠,分为野生组、ApoE-/-组和辛伐他汀组,予以高脂饮食喂养。辛伐他汀组8周龄开始给予辛伐他汀（50 mg·kg-1·d-1）,干预3周后测量主动脉根部动脉粥样硬化斑块面积、中心动脉压及血脂水平。结果：野生组未形成动脉粥样硬化斑块;与ApoE-/-组比较,辛伐他汀组ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块面积减小［（89 81805±16 98093） μm2比（34 93701±13 28065） μm2,P<005］。同时,ApoE-/-组中心动脉压的收缩压、舒张压、平均动脉压和脉压均明显高于野生组（均P<005）;与ApoE-/-组相比,辛伐他汀组ApoE-/-小鼠中心动脉压的收缩压、平均动脉压和脉压均降低（均P<005）,舒张压降低无统计学意义（P>005）。此外,中心动脉压的收缩压（n=8,r=07152,P=00461）和脉压（n=8,r=07594,P=00288）与动脉粥样硬化斑块面积成正相关。与野生组相比,ApoE-/-组血清三酰甘油、总胆固醇与低密度脂蛋白水平均升高,而高密度脂蛋白水平降低（P<005）;辛伐他汀组血清三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白水平与ApoE-/-组差异无统计学意义（P>005）。结论：辛伐他汀通过非降脂途径降低ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块面积和中心动脉压,且其对中心动脉压的调节可能在抑制动脉粥样硬化过程中发挥作用。     

褪黑素对反复脑缺血再灌注小鼠学习记忆能力及海马CA1区细胞数的影响

目的　观察褪黑素 (melatonin,MT)对反复缺血再灌注小鼠学习记忆能力及海马CA1区细胞数的影响。方法　采用清醒小鼠造成反复脑缺血再灌注模型 ,电迷宫法观察小鼠学习记忆情况 ;行为学检测结束后 ,处死动物 ,取出全脑 ,固定切片 ,进行形态学观察。结果　褪黑素中、高剂量组学习及记忆能力与模型组有显著差异 (P<0 .0 5) ,褪黑素 3个剂量组海马 CA1区的细胞数与模型组有显著差异 (P<0 .0 5,P<0 .0 1,P<0 .0 0 1) ,并与褪黑素有量效关系。结论　褪黑素对反复脑缺血再灌注小鼠学习记忆障碍有预防作用 ,这种作用可能与褪黑素保护海马 CA1区神经细胞有关     

赤土茯苓苷对小鼠海马CA_1区神经元的缺血再灌注损伤的保护作用

目的 :研究赤土茯苓苷 (Smiglabran,Smi)对小鼠海马 CA1 区神经元的缺血再灌注损伤的保护作用。方法 :采用结扎双侧颈总动脉造成小鼠脑缺血再灌注损伤 ,分别观察了不同再灌注时间 (1、3、5 d)小鼠的存活率及海马 CA1 区神经元的普通病理改变 ,同时观察了赤土茯苓苷对上述改变的影响。结果 :Smi10 0、2 0 0 mg/ kg能明显提高脑缺血后再灌流 3d、5 d小鼠的存活率 ,脑缺血再灌注的早期 ,海马 CA1 区神经元数目及形态即发生改变 ,再灌注 5 d时光镜下绝大部分细胞脱失 ,而用药组 (Smi10 0、2 0 0 mg/ kg)小鼠海马 CA1 区神经元在相应时间点上形态数目变化较轻 ,5 d时仍有超过半数以上 (6 8.1%、74.1% )细胞存活 ,细胞密度分别为 (95 .4± 8.0 )个 / 2 mm和 (10 3.8± 3.2 )个 / 2 mm,明显高于缺血对照组 (5 1.8± 7.8)个 / 2 mm,P <0 .0 0 1。结论 :Sm i对小鼠短暂脑缺血再灌注造成的海马 CA1 区神经元的病理损伤具有显著的保护作用     

孕期吸入异氟醚对子代大鼠认知功能及海马GAP-43和NPY表达的影响

目的:探讨大鼠孕期吸入异氟醚对子代认知功能以及海马生长相关蛋白-43(GAP-43)和神经肽Y(NPY)表达的影响。方法:选取孕龄为18 d的SD大鼠12只,随机分为异氟醚处理组和对照组(n=6)。异氟醚组使用1.3%的异氟醚处理6 h,对照组吸入含30%氧气的空氧混合气体。待幼鼠出生4周后,使用水迷宫实验,检测幼鼠空间学习记忆能力。测试结束后,取其海马组织行免疫组织化学染色,观察GAP-43和NPY在两组仔鼠海马CA1区表达的差异。结果:在水迷宫测试中,与对照组仔鼠相比,异氟醚组仔鼠平均逃逸潜伏期时间明显延长(P<0.05)、第三象限活动时间和穿越平台次数明显减少(P<0.05)。异氟醚组仔鼠海马CA1区神经细胞内GAP-43和NPY的表达均较正常对照组明显下降,差异有显著性意义(P<0.01)。结论:1.3%异氟醚处理孕18 d的大鼠6 h可导致仔鼠学习记忆功能降低,这可能与海马CA1区GAP-43和NPY表达下调有关。     

Balb／c 与 C57 BL／6小鼠海马皮层突触素表达的比较

目的：比较突触素在Balb／c 与C57BL／6小鼠海马各区中表达的差异。方法采用 Balb／c和C57 BL／6小鼠各10只,心脏灌注多聚甲醛固定后取脑,使用冰冻切片机切片,通过免疫组织化学染色,观察突触素在Balb／c和C57BL／6小鼠海马各区中的表达。结果突触素在Balb／c和C57BL／6小鼠海马皮层各区均有广泛表达,突触素在C57BL／6小鼠海马CA1区锥体细胞层中的表达强度高于在Balb／c小鼠相同区域的表达强度（ P＜0.05）,在Balb／c小鼠中CA3区锥体细胞层中的表达强度高于在C57BL／6小鼠相同区域的表达强度（P＜0.05）。结论突触素在Balb／c和C57BL／6小鼠海马各区表达的差异可能是其行为学差异的神经解剖学基础。     

氧化苦参碱对脑缺血损伤的保护作用

目的 探讨氧化苦参碱对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤和小鼠急性脑组织缺血的保护作用.方法 大鼠缺血前给予氧化苦参碱10、20、40 mg·kg-1,灌胃7天,末次给药1 h后制备大鼠大脑中动脉阻断短暂局灶性缺血模型,缺血1.5 h,再灌注24 h,苏木精-伊红染色观察大脑的纹状体、海马和皮质的病理学改变.小鼠缺血前给予氧化苦参碱5、20、80 mg·kg- 1,灌胃7天,末次给药1 h后采用断头法制备小鼠的急性脑缺血模型,然后记录小鼠断头后的喘息时间和小鼠断头后张口次数.结果 氧化苦参碱可使局灶性脑缺血再灌注大鼠的海马CA1区,纹状体和皮质区的损伤程度明显改善,神经元存活数增多.小鼠断头后的喘息时间明显延长,小鼠断头后张口次数明显增加.结论 氧化苦参碱对大鼠局灶性脑组织缺血损伤及小鼠急性脑缺血有明显的保护作用.     

水通道蛋白4基因敲除对博莱霉素诱导小鼠肺纤维化的影响

目的：评价水通道蛋白4（AQP4）在博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化中的作用。方法：采用博莱霉素3 mg/kg气管内注射诱导AQP4基因敲除（AQP4-/-）小鼠发生肺纤维化,以野生型小鼠为对照,造模后第3、7、14、28天处死动物,检测肺系数、血清转化生长因子 β1（TGF β1）、肿瘤坏死因子 α（TNF α）水平和肺组织羟脯氨酸含量,作肺组织病理切片行HE染色和Masson染色观察肺部炎症及纤维化程度。结果：造模第14天,野生型小鼠肺系数增高为野生型对照小鼠的19倍（1269 ± 605与680 ± 082,q=4204,P<005）;AQP4-/-小鼠肺系数增高为AQP4-/-对照小鼠的23倍（1405 ± 582与605± 058,q=5172,P<001）,但与野生型小鼠比较,AQP4基因敲除对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化过程中肺系数增高无明显影响（P>005）。小鼠肺组织羟脯氨酸含量随造模时间逐步增加,造模第28天,野生型小鼠肺组织羟脯氨酸含量增加为对照的155倍［（085 ± 022）μg/mg与（055 ± 014）μg/mg,q=4313,P<005］;AQP4-/-小鼠肺组织羟脯氨酸含量增加为对照的14倍［（084 ± 013）μg/mg与（060 ± 014）μg/mg,q=4595,P<005］,但与野生型小鼠比较,AQP4基因敲除对小鼠肺纤维化过程中肺组织羟脯氨酸含量增加无明显影响（P>005）。造模后,小鼠血清TGF β1、TNF α水平有增加趋势,但这两个指标在野生型和AQP4-/-小鼠间差别无统计学意义（均P>005）。肺组织病理学检查结果表明AQP4基因敲除对博莱霉素诱导的小鼠肺部炎症和纤维化无明显影响。结论：AQP4基因敲除对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化未产生明显影响。     

丹皮酚对血管性认知障碍小鼠认知功能的保护作用

目的：探讨丹皮酚对血管性认知障碍（VCI）小鼠认知功能及海马神经元损伤的影响。方法：雄性C57BL/6小鼠60只,随机分为假手术（Sham）组、模型（VCI）组、丹皮酚（Pae）低、中、高剂量治疗组,每组12只。采用双侧颈总动脉结扎（2VO）制备小鼠反复缺血再灌注VCI模型,Morris水迷宫检测小鼠的认知功能,尼氏染色观察小鼠海马神经元的形态学变化,比色法检测海马SOD活性、MDA和NO含量的变化。结果：VCI小鼠认知功能下降（P〈0.01）,海马CA1区神经元变性坏死,MDA和NO含量增加,SOD活性降低（P〈0.01）;丹皮酚中、高剂量治疗可显著提高VCI小鼠的学习记忆能力,减少VCI所致的海马CA1区神经元死亡,并降低MDA和NO含量,升高SOD活性（P〈0.05或P〈0.01）。结论：丹皮酚可有效增强VCI小鼠的认知功能,并改善海马神经元病理改变,可能与其抗氧化应激有关。     

DBA/1小鼠与C57BL/6小鼠胶原诱导性关节炎模型的比较研究

目的：对胶原诱导性关节炎（collagen-induced arthritis,CIA）在不同品系小鼠（DBA/1小鼠和C57BL/6小鼠）的发病情况进行比较研究,以期寻找出一种适合制备CIA模型的小鼠品系。方法：用鸡Ⅱ型胶原（typeⅡcollagen, CⅡ）乳剂分别免疫DBA/1小鼠和C57BL/6小鼠诱导CIA,进行关节外观的观察及关节炎临床评分。结果：免疫后第31天, DBA/1小鼠出现关节红肿,关节炎临床评分升高,在第39天达到高峰。随着时间的推移,小鼠关节红肿等急性炎症现象有所减退。用改进方法免疫的C57BL/6小鼠于第21天开始出现关节红肿、临床评分升高现象。结论：在制备CIA模型时建议首选DBA/1小鼠。     

增殖细胞核抗原PCNA在大鼠缺血再灌注脑组织中的表达

目的:研究大鼠全脑缺血再灌注后增殖细胞核抗原PCNA的表达时程及其与凋亡的关系。方法:采用4-VO法建立全脑缺血再灌注损伤模型,将各组各时间点脑组织切片分别进行HE染色:光镜下观察海马回CA1区神经元形态结构改变;免疫组化染色:观察PCNA蛋白在CA1区的表达情况;TUNEL染色:观察海马回CA1区神经细胞凋亡情况,统计阳性细胞表达情况,计算细胞凋亡指数;将PCNA蛋白免疫组化切片进行图象分析测得平均灰度值。结果:PCNA蛋白于再灌注后2h在海马CA1区可见表达下降,再灌注后6～24h组明显下降,之后持续低表达。缺血再灌注后6h凋亡细胞开始增加,主要位于CA1区,24～48h为高峰,至72h明显减少。结论:PCNA蛋白主要在缺血再灌注后早期即24h前DNA损伤未积累到严重程度时执行抗凋亡的作用,对损伤神经元进行修复。     

调整精卵交汇时间提高C57BL6J小鼠超数排卵的受精率

目的通过调整精卵交汇时间,提高C57BL/6J小鼠超数排卵的受精率。方法实验一以常规超排方法作为对照组,计算受精率;实验二验证C57BL/6J雄鼠受精能力;实验三在合笼后三个时间点检栓,确定超排鼠交配时间,计算精卵相遇时间;实验四将C57BL/6J雌鼠超排处理,停留6.5 h后配雄鼠,计算受精率,比较方法改进的效果。结果对照组取受精卵10.88枚/只;实验二取受精卵20.55枚/只,表明雄鼠的精子可以使卵子高比例受精,精子、卵子交汇时间是影响受精率的关键因素;实验三,在合笼后4 h雌鼠见栓鼠最多,确定对照组精卵交汇时间需7 h;根据以上实验结果,实验四将合笼时间推迟6.5 h,取受精卵22.27枚/只,比对照组提高了105%。结论调整精子、卵子交汇时间可显著提高C57BL/6J小鼠超数排卵受精率。     

neuroplastin65对小鼠神经功能的影响

目的探讨neuroplastin65对小鼠神经细胞的作用和影响。方法 25~30 g SPF C57BL/6野生雄性小鼠4只,同体质量的NP65（-/-）雄性小鼠4只,分为两组,多聚甲醛和生理盐水灌注固定取材,以14μm冰冻切片。使用尼式染色,对比观察海马神经元的密度。25~30 g的C57BL/6,野生型雄性小鼠8只,同质量NP65（-/-）雄性小鼠8只,线栓法制备局灶性脑卒中模型,缺血损伤2 h后再灌注,7 d以后分别取野生小鼠和NP65（-/-）小鼠大脑组织,灌注固定取材,以4μm石蜡切片,尼氏染色观察两组小鼠神经元存活情况以及TUNEL染色观察神经元凋亡情况。结果 NP65（-/-）小鼠海马和皮质神经元与野生小鼠神经元数量无明显差别;敲除组小鼠的神经元的存活数量较野生型小鼠多;TUNEL染色结果显示,野生小鼠神经元的凋亡数量较NP65（-/-）小鼠多。结论 neuroplastin65的敲除对小鼠神经元产生了影响,这可能会导致小鼠某些神经功能的改变。     

PPARα转基因对小鼠的生理、生化等影响研究

目的 通过与正常C57BL/6小鼠作对照,在不同月龄分析PPARα转基因小鼠生理、生化等数据,比较其差异性,观察PPARα基因对小鼠的生理、生化是否会产生影响.丰富转基因小鼠数据库内容,为该模型实际应用于临床前药物评价提供理论依据.方法 实验分为4组,分别为PPARα雄性组、PPARα雌性组、C57BL/6雄性组和C57BL/6雌性组,9只/组.在动物10周龄、14周龄、18周龄、22周龄、34周龄分别检测血常规、血生化指标,在动物26周龄时观察其心、肝、肾脏器病变情况,并观察动物的一般生长情况.结果 PPARα转基因小鼠与C57B L/6小鼠比较①体重：6周龄到23周龄的PPARα转基因小鼠体重与C57BL/6小鼠体重比较差异无显著性（P＞0.05）.②血常规：10周龄PPARα雌性转基因小鼠红细胞计数（RBC）、嗜碱性粒细胞百分比（BAS％）、淋巴细胞百分比（LYM％）明显高于C57BL/6雌性小鼠,差异有显著性（P＜0.01）.14周龄PPARα雄性转基因小鼠白细胞计数（WBC）、淋巴细胞百分比（LYM％）明显高于C57BL/6雄性小鼠,差异有显著性（P＜0.05）.③血生化：10周龄PPARα雄性小鼠血尿素氮（BUN）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）明显高于C57BL/6雄性小鼠,差异有显著性（P＜0.05）.14周龄PPARα雄性小鼠天冬门氨酸氨基转移酶（AST）、甘油三酯（TG）明显低于C57BL/6雄性小鼠,差异有显著性（P＜0.05）.④组织病理：26周龄PPARα转基因小鼠与C57BL/6小鼠比较,心脏无明显的改变,但肝细胞出现透明病变,肾小管上皮细胞出现脂肪变性.结论 系统收集了PPARα转基因小鼠的体重、血常规、血生化、病理等背景资料,成功分析了其与野生型C57BL/6小鼠之间的差异,为该模型的应用提供参考数据.     

Zileuton对脑缺血后空间学习记忆障碍的改善作用

目的观察5-脂氧酶选择性抑制剂Zileuton对全脑缺血后空间学习记忆能力的改善作用。方法以两侧颈总动脉阻断合并低血压法诱导大鼠全脑缺血模型,Zileuton 30 mg/kg灌胃给药,共7天。应用Morris水迷宫实验检测大鼠空间学习记忆能力,海马切片观察CA1神经元病理变化。结果 Morris水迷宫实验表明,全脑缺血后大鼠活动总路径和逃避潜伏期明显延长,空间学习记忆能力下降（P〈0.05或P〈0.01）;Zileuton 30 mg/kg提高全脑缺血大鼠Morris水迷宫实验学习记忆成绩（P〈0.05）。海马病理切片观察显示,全脑缺血后海马CA1神经元损伤（P〈0.01）,Zileuton减轻脑缺血后神经元损伤（P〈0.05）。结论 5-脂氧酶抑制剂Zileuton能改善大鼠全脑缺血后空间学习记忆障碍,其机制与药物对海马CA1神经元的神经保护作用有关。     

小分子干扰RNA沉默Notch1后增加胰腺癌细胞凋亡活性而提高吉西他滨化疗敏感性

目的：探讨应用小分子干扰RNA（siRNA）沉默Notch1信号通路对胰腺癌吉西他滨化疗敏感性的影响及其可能机制。方法：Notch1 siRNA转染AsPC 1、BxPC 3、MIAPaCa 2 和Panc 1这4种胰腺癌细胞株。实时PCR检测胰腺癌细胞株Notch1受体相对表达量;应用Notch1 siRNA转染后,CCK 8法计算吉西他滨（10 μmol/L）作用时细胞抑制率,蛋白质印迹法检测促凋亡蛋白Bax表达水平,CaspACETM比色法检测caspase 3活性。结果：4株胰腺癌细胞中BxPC 1 Notch1受体相对表达量最高,Panc 1最低。Notch1 siRNA转染组吉西他滨作用抑制率较对照siRNA转染组明显增高,同时伴随促凋亡蛋白Bax表达上调,caspase 3活性明显增高（均P<005）。结论：应用siRNA降低Notch1信号通路活性可通过激活凋亡活性而增加胰腺癌吉西他滨化疗敏感性。