东北部分地区蜱传埃立克体DNA的检测

目的 了解东北部分地区一些蜱种中是否携带埃立克体。方法 应用16SrRNA基因构建的特异性引物进行半套式PCR,检测蜱标本中埃立克体DNA,并对扩增产物进行克隆和序列测定,与基因库中已知序列进行同源性比较。结果从辽宁清原和吉林抚松、和龙、敦化、珲春的全沟硬蜱(Lpersuleatus)和森林革蜱(D．silvarum)中均扩增出了查菲埃立克体DNA,扩增片段与美国分离株(基因库M73222)相对应片段完全一致,同源性为100％;另外从吉林抚松、珲春的全沟硬蜱中扩增出了粒细胞埃立克体DNA,扩增片段与美国分离株(基因库U02521)相对应片段相差2个碱基,同源性为99.7％。结论 发现东北部分地区存在埃立克体病的病原学迹象,提示该地区可能存在埃立克体病的自然疫源地。     

三种蜱媒传染病在媒介蜱和鼠类中复合感染的研究

目的 了解中国部分地区埃立克体病和其他蜱媒传染病病原体的复合感染情况。方法 运用聚合酶链反应方法对内蒙古自治区、黑龙江省、北京市的蜱和鼠类标本粒细胞埃立克体、莱姆病螺旋体、斑点热群立克次体的感染进行检测，对福建省的蜱和鼠脾脏标本中查菲埃立克体、斑点热立克次体及莱姆病螺旋体的感染情况进行检测。结果 内蒙古采集的全沟硬蜱408只，人粒细胞埃立克体感染率68％，莱姆病螺旋体感染率7．8％，斑点热群立克次体感染率45．6％，其中粒细胞埃立克体与莱姆病螺旋体复合感染标本5份(5／408)，粒细胞埃立克体与斑点热群立克次体复合感染标本1份(1／408)。黑龙江采集的46只全沟硬蜱中人粒细胞埃立克体感染率6．5％，莱姆病螺旋体感染率10．8％，斑点热群立克次体感染率34．8％，其中粒细胞埃立克体与莱姆病螺旋体复合感染标本1份(1／46)。北京市采集的蜱类标本922只，有2只检测到莱姆病螺旋体的DNA片段。福建省宁化地区采集的优势蜱种越原血蜱283组(659只)中，查菲埃立克体最小阳性率为3．8％(25组阳性)，38份野鼠脾脏的阳性率为564％(21只阳性)，检测出有2只(2／659)蜱同时感染了粒细胞埃立克体和斑点热群立克次体，野鼠的脾脏标本中，也发现有一只同时感染了查菲埃立克体和斑点热立克次体。结论 人粒细胞埃立克体和莱姆病螺旋体复合感染以及查菲埃立克体和斑点热群立克次体复合感染可能在特定地区发生；其地区的蜱类、鼠类存在着极低的复合感染。     

大兴安岭地区人群埃立克体感染的调查

目的：了解我国大兴安岭地区可疑人群是否存在人埃立克体感染。方法：用16SrRNA基因特异引物进行半巢式多聚酶链反应及基因序列分析技术,检测大兴安岭地区的一些人血标本中查菲埃立克体（Ehrlichia chaffeensis,EC）和人粒细胞埃立克体（human granulocytic ehrlichia）的16S rRNA基因,并进行序列分析,将测出的序列与CenBank中注册的基因序列进行最大同源性比较。结果：从蜱咬后出现发热等疾病的35例病人和近一年内有蜱咬史的林场工人血中检测到这两种埃立克体的16SrRNA基因片段;对1份可疑埃立克体病人血标本进行了人粒细胞埃立克体16SrRNA全基因扩增,测出的序列与美国1株人粒细胞埃立克体的该基因仅差1个碱基。结论：初步认为我国大兴安岭地区存在人埃立克体感染人群。     

东北林区鼠类粒细胞埃立克体感染的调查

目的了解东北林区啮齿动物感染粒细胞埃立克体病原体的情况。方法运用聚合酶链反应方法对吉林、黑龙江、内蒙古林区采集的啮齿动物标本粒细胞埃立克体的16S rRNA和gltA基因片段进行检测并测序,将所测序列与GenBank中注册的基因序列进行比较分析。结果共检测鼠标本276份,其中吉林长白山林区102份,黑龙江小兴安岭林区61份,内蒙古大兴安岭林区113份,阳性率分别为8.82%、1.64%及0.00%。体表有寄生蜱的鼠感染危险性是体表无寄生蜱鼠的11.30倍(P=0.002)。吉林、黑龙江林区鼠标本及其寄生蜱标本16S rRNA基因序列完全相同,与美国、瑞典、日本等国家检出的粒细胞埃立克体对应序列的同源性为97%-99%。gltA基因核苷酸序列与GenBank注册的相应片段比较相似性为87%-97%,推导的氨基酸序列相似性为84%-99%。结论吉林及黑龙江林区存在粒细胞埃立克体宿主动物感染。     

应用半巢式PCR检测我国北方一些蜱种中的查菲埃立克体

目的 :了解我国北方一些蜱种中是否携带查菲埃立克体 (Ehrlichiachaffeensis,简写为EC)。方法 :应用半巢式PCR检测蜱的带菌率 ,利用 16SrRNA基因测序方法鉴定所测序列。结果 :从内蒙古莫尔道嘎林业局采集的全沟硬蜱和森林革蜱中扩增出查菲埃立克体的 16SrRNA基因 ,阳性率分别是 39.0 6 %和 10 .0 0 % ;并从新疆精河采集的全沟硬蜱和草原革蜱中也测到相同的序列 ,最小阳性率分别为 5.79%和 1.6 7%。对莫尔道嘎采集的蜱标本进行 12 2 0bp的EC16SrRNA基因分析 ,结果与美国 1株查菲埃立克体 (GenBankU2 350 3)的相应序列只差 1个碱基。结论 :所使用的两套半巢式PCR扩增引物 ,可以简便快速地检测和分析蜱标本中可能存在的EC     

2016—2019年内蒙古大兴安岭林区立克次体关联细菌群监测

目的了解内蒙古大兴安岭林区蜱中立克次体关联细菌群的流行情况和分子特征。方法 2016—2019年,在内蒙古东部林区采集游离蜱样本,利用形态学特征和18S rRNA分型法鉴定蜱种。提取蜱DNA,对斑点热立克次体(gltA和rOmpA)、无形体属(msp2/p44)和埃立克体属(omp1/p28)等特异性基因进行PCR扩增。扩增序列测序后进行同源性比对和系统进化分析。结果共采集成蜱3 251只,隶属于3属4种。PCR检测结果显示,斑点热立克次体阳性率为43.3%,扩增出的gltA序列与已注册Candidatus R. tarasevichiae(MN450397)和R.heilongjiangensis(AY285776)的同源性为100%,检出率分别为40.1%和3.1%。无形体msp2阳性率为8.1%,埃立克体omp1阳性率为7.0%。2016—2019年连续监测的结果显示,Candidatus R. tarasevichiae一直保持较高的检出率,为31.0%～46.6%,R.heilongjiangensis的检出率为2.6%～3.5%,无形体和埃立克体的阳性率分别为5.7%～10.6%、6.7%～7.9%。其中,全沟硬蜱Candidatus R. tarasevichiae的阳性率基本呈现上升的趋势,且感染率均高于其它蜱类。结论该地区全沟硬蜱为优势蜱种,Candidatus R. tarasevichiae和R.heilongjiangensis为优势菌种,且在该地区蜱中的高感染率,表明人类接触该菌的风险很高,需加强监控。     

东北部分地区蜱携带几种病原立克次体的分子检测

目的为了解东北地区蜱中携带立克次体的情况。方法应用人工小时布旗法采集东北部分地区不同生境的游离蜱,采用PCR作斑点热立克次体、查菲埃立克体、人粒细胞无形体DNA检测。结果从东北地区全沟硬蜱和森林革蜱检出查菲埃立克体DNA,全沟硬蜱平均阳性率为3.29%,森林革蜱为1.88%;从全沟硬蜱检出人粒细胞无形体DNA,平均阳性率为2.98%;从嗜群血蜱检出斑点热立克次体DNA,其平均阳性率(6.67%)明显高于全沟硬蜱(1.69%)和森林革蜱(2.36%)。结论东北地区全沟硬蜱和森林革蜱可能是查菲埃立克体、人粒细胞无形体的主要携带媒介,嗜群血蜱主要携带斑点热立克次体,提示东北地区存在三种蜱媒立克次体病的自然疫源地。     

金东区鼠类检出埃立克体及无形体DNA片段

目的 了解金华市金东区某地鼠类自然感染埃立克体及无形体的状况。方法 对当地监测捕获的多种鼠类取肝、脾脏器标本，用巢式PCR扩增无形体科16S rDNA的5’端片段。结果 在184只鼠中，检出阳性6只，总阳性率为3．26％；其中黄毛鼠阳性率为4．12％（4／97），社鼠阳性率为4．17％（1／24），黑线姬鼠阳性率为4．35％（1／23）。经序列比对分析，4份与牛埃立克体相应片段最为接近，属无形体科，无形体属；1份与反刍动物埃立克体相应片段区最为接近，属无形体科，埃立克体属；1份与无形科新成员Ehrlichiasp．‘Ratusswain＇最为接近。结论 在当地鼠类检出埃立克体及无形体DNA片段，提示可能存在埃立克体病自然瘦源地。     

用聚合酶链方法对北京林区莱姆病疫源地及莱姆病病原体基因型的探索性研究

目的：进一步明确北京林区是否存在莱姆病的自然疫源地及其分布，方法基于莱姆病螺旋体外膜蛋白A基因建立半巢式聚合酶链式反应(polymerase chain reactio,PCR)方法，对从北京6个林区采集的蜱和鼠进行检测和基因分型，选择阳性标准本进行克隆和序列测定，与已知序进行同源性比较，间接免疫荧光法检测抗莱姆病螺旋体IgG抗体，从长角血蜱中分离莱姆病螺旋体。结果：从门头沟区东灵山采集的标本中检测到莱姆病螺旋体DNA片段，3只游离全沟硬蜱1只检测阳性，57只寄全沟硬蜱若蜱中1只检测阳性；119只野鼠中9只检测阳性，其中8只，B.garinii阳性，1只B.afzelii阳性。50份野鼠血清有5份莱姆病螺旋体IgG抗体阳性，采集采的160只长角血蜱（20只／组）。未分离到莱姆病螺旋体菌株。结论：北京门头沟区东灵山可能存在莱姆病的自然疫源地，包括两个基因型，全沟硬蜱可能是莱姆病的传播媒体，野鼠可能是贮存宿主。     

人埃立克体病

埃立克体病是由严格白细胞内寄生的埃立克体所〗致的疾病，目前，人埃立克体病包括３种：一种是由Ｅｈｒｌｉｃｈｉａｓｅｎｎｅｔｓｕ引起的Ｓｅｎｎｅｔｓｕ热，第二种是由Ｅ．ｃｈａｆｆｅｅｎｓｉｓ引起的人单核细胞埃立克体病（ＨＭＥ）。第三种是人粒细胞埃立克体病（ＨＧＥ），它是由侵犯粒细胞的埃立克体所致。Ｓｅｎｎｅｔｓｕ热主要流行在日本和东南亚，与吃生鱼有关，ＨＭＥ由钝眼蜱和革蜱传播，而ＨＧＥ是由硬蜱属的蜱传     

Detection and sequential analysis of Granulocytic ehrlichia 444-Epank gene]

OBJECTIVE: To provide further pathogenic evidence of Granulocytic ehrlichia infection in China. METHODS: Specific primers derived from 444-Epank gene were used to amplify Granulocytic ehrlichia DNA from specimens of ticks, animals and human blood. PCR products of ticks were cloned and sequenced. RESULTS: 444 bp specific DNA fragments were amplified from 2 of 62 pools of Ixodes persulcatus collected from Heilongjiang province and 1 of 129 blood specimens from forest workers in Inner Mongolia. Eight animal specimens were negative. PCR products from ticks were then cloned and sequenced. It differed at 23 positions in comparison to American strain (AF047897) with 94.9% homology. The homology of deduced ammonia was 88.44%. CONCLUSION: Our findings further confirmed that Granulocytic ehrlichia infection did exist in China.     

Genetic characterization and molecular survey of Babesia sp. Xinjiang infection in small ruminants and ixodid ticks in China

Babesia sp. Xinjiang is a large ovine Babesia species that was recently isolated in China. Compared with other ovine Babesia species, it has different morphological features, pathogenicity and vector tick species. The known transmitting vector is Hyalomma anatolicum. In this study, the distribution and the presence of Babesia sp. Xinjiang in small ruminants and ixodid ticks in China were assessed by specific nested-PCR assay based on the rap-1a gene. A total of 978 blood samples from sheep or goats from 15 provinces and 797 tick specimens from vegetation from 10 provinces were collected and analysed for the presence of the Babesia sp. Xinjiang. Full-length and partial rap-1a of Babesia sp. Xinjiang were amplified from field samples. The PCR results were further confirmed by DNA sequencing. Overall, 38 (3.89%) blood samples and 51 (6.4%) tick samples were positive for Babesia sp. Xinjiang infection. The highest presence (26.92%) was found in blood samples from Yunnan province, while H. qinghaiensis ticks with the highest presence of infection (21.3%) were from Gansu province. This study identified for the first time Babesia sp. Xinjiang infection in H. longicornis tick species. The rap-1a sequences of Babesia sp. Xinjiang from field blood and tick samples indicated 100% identity. The presence of Babesia sp. Xinjiang infection may increase in China. Novel potential transmitting vectors might be more extensive than previously thought.     

吉林延边地区蜱复合感染新塔拉塞维奇立克次体及SFTSV调查研究

  目的  为了解吉林省延边地区蜱类新塔拉塞维奇立克次体(candidatus rickettsia tarasevichiae，CRT)和复合感染新布尼亚病毒(sever fever thrombocytopenia syndrome virus，SFTSV)的感染情况。  方法  采集吉林省延边朝鲜族自治州(延边州)延吉、汪清、珲春、敦化、安图、和龙6个县游离蜱，进行形态学分类，通过巢式多聚核苷酸链式反应(nested polymerase chain reaction，nested PCR)和实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR)方法检测蜱体内CRT和SFTSV。对其CRT进行目标DNA测序，分析同源性和系统进化关系。  结果  此研究共采集各种蜱类1 032只，分别为全沟硬蜱(ixodes persulcatus)(35.56%)、森林革蜱(dermacentor silvarum)(20.64%)、日本血蜱(haemaphysalis japonica)(20.45%)、长角血蜱(haemaphysalis longicornis)(10.47%)、嗜群血蜱(haemaphysalis concinna)(8.33%)以及其他种类(4.55%)。全沟硬蜱、长角血蜱、日本血蜱、森林革蜱检测出CRT，最低感染率(minimum infection rate per 100 ticks，MIR)为10.47%。嗜群血蜱、日本血蜱、全沟硬蜱、长角硬蜱、森林革蜱检测出SFTSV，最低感染率为2.52%。全沟硬蜱、日本血蜱、森林革蜱3种蜱存在CRT和SFTSV复合感染现象，复合感染MIR为1.26%。本研究CRT ompA和17kDa基因序列与中国河南信阳株(KX365196.1)序列同源性达100%。系统进化分析，延边地区蜱CRT ompA基因序列和该河南信阳株基因序列成为一簇，而17kDa基因则形成独立分支。  结论  本研究首次从吉林省延边地区游离蜱中检测出CRT，全沟硬蜱为主要媒介宿主。因此，可以明确该地区为新塔拉塞维奇立克次体病自然疫源地。同时发现，延边地区蜱类存在CRT与SFTSV复合感染的现象。因此，在该地区必须加强新塔拉塞维奇立克次体病和发热伴血小板减少综合征(sever fever thrombocytopenia syndrome，SFTS)疫情监测。     

内蒙古地区2015—2019年不同寄生蜱的种群分布及病原体多样性分析

目的 了解内蒙古地区2015—2019年不同寄生宿主蜱的蜱种分布、病原体感染及复合感染状况。方法 在每年蜱活跃高峰期采集蜱标本,经体视显微镜和特异性18S rRNA基因分型法进行蜱种鉴定。提取蜱基因组DNA,并对斑点热立克次体gltA和rOmpA基因、无形体msp2基因、埃立克体omp1基因、莱姆病螺旋体flaB基因和新型回归热螺旋体glpQ基因等病原体进行PCR检测。结果 本次共采集蜱虫6 465只,隶属于1科5属8种。游离蜱多为全沟硬蜱（79.0%）;羊和牛寄生蜱多为草原革蜱（68.2%,52.0%）;马和骆驼寄生蜱均为亚洲璃眼蜱;犬寄生蜱均为图兰扇头蜱。立克次体gltA阳性率为39.4%,其中羊、骆驼、马、牛等家畜寄生蜱阳性率均超过平均值;其他4种病原体多为游离蜱携带,其阳性率分别为12.3%、10.1%、11.0%、17.0%。内蒙古地区蜱媒疾病复合感染率为12.6%,其中,游离蜱复合感染率高于寄生蜱。结论 家畜感染立克次体较严重。游离蜱的复合感染情况较严重,因此要重点加强东部大兴安岭一带蜱媒传染病的监测工作。     

某部驻区蜱传斑点热自然疫源地调查

目的了解某部驻区蜱传斑点热的自然疫源地情况。方法进行蜱类与啮齿动物调查，利用立氏立克次体190kD外膜蛋白A(R．rOmpA)基因序列设计引物，对683只蜱类标本和146个鼠类脏器标本进行PCR检测，随机抽取一株森林革蜱阳性扩增产物进行序列测定。结果调查地区存在3种蜱、5种啮齿动物；从森林革蜱、嗜群血蜱和啮齿动物脏器标本中检测斑点热立克次体DNA片段，阳性率分别为53．81％、7．41％和6．16％；所测序列与前苏联的DaS 14株的同源性为100％，与我国检测的BJ-90、HLJ-054的同源性分别为88％和86％。结论调查地区存在与DaS14株型别一致的斑点热立克次体株。     

对福建省宁化林区鼠蜱类中斑点热群立克次体的检测

目的 了解福建省宁化林区斑点热自然疫源地存在情况。方法 用聚合酶链反应对该林区鼠、蜱类中感染斑点热群立克次体(SFGR)进行扩增。用限制性酶切片段长度多态分析(RFIP)法对分离株NH-97进行鉴定,并同已知的西伯利亚立克次体等国际标准株进行比较。结果 从越原血蜱、金泽革蜱、微小牛蜱中扩增出SFGR特异的DNA片段,NH-97分离株的聚合酶链反应产物经PstI和RsaI酶切后发现它们的酶切图谱与西伯利亚立克次体246国际标准株相同。从社鼠、黄胸鼠脏器中扩增出康氏立克次体DNA片段。由不同来源批次的越原血蜱中扩增出近缘于日本立克体DNA片段和相关序列提示：可能是斑点热群立克次体新成员。结论 福建宁化林区除存在西伯利亚立克次体外,还可能存在康氏立克次体、日本立克次体等多种斑点热群立克次体的疫源地。     

吉林省珲春地区蜱中伯氏疏螺旋体与斑点热群立克次体复合感染研究

目的了解吉林省珲春地区伯氏疏螺旋体与斑点热群立克次体的复合感染情况.方法运用PCR方法对吉林省珲春地区采集的蜱标本,进行伯氏疏螺旋体5S～23S rRNA间隔区基因与斑点热群立克次体外膜蛋白A（ompA）基因的检测.测序并用PHYLIP软件进行序列分析.结果全沟硬蜱中伯氏疏螺旋体感染率为36.0%,在全沟硬蜱中检测到了斑点热群立克次体的感染,其感染率为2 0%.二者的复合感染率为2.0%;森林革蜱中伯氏疏螺旋体感染率30.9%,斑点热群立克次体感染率29.1%,二者的复合感染率16.8%.伯氏疏螺旋体的序列分析显示吉林地区的伯氏疏螺旋体都属于B.garinii基因型,同源性较高.对斑点热阳性片段序列分析表明新测序列与斯洛伐克新发现的IRS3株和IRS4株核苷酸序列同源性为97%.结论吉林省珲春地区全沟硬蜱及森林革蜱中检测到伯氏疏螺旋体与斑点热群立克次体的感染,并检测到2种病原体的复合感染情况.