检测结核分枝杆菌rpoB基因突变的研究

目的：建立聚合酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP）检测结核分枝杆菌rpoB基因突变的方法，并评价共临床应用的价值。方法：依据结核分枝杆菌rpoB基因的耐利福平决定区设计引物，用PCR从临床分离株和直接从痰标本中扩增rpoB基因片段；对扩得的rpoB基因片段做DNA SSCP分析，并随机测定rpoB片段的序列。结果：PCR从所有212株结核分枝杆菌中均扩得230bp片段135份抗酸染色阳性的痰标本中，有113份扩得阳性片段（83．7％），在SSCP分析中，140份经L－J药敏试验检测为利福平耐受的结核分枝杆菌，有130份有rpoB基因突变（符合率为92．9％），72份经L－J药敏试验检测为利福平敏感的菌，有67份的rpoB基因无突变（符合率为93．1％），测序分析发现57份经SSCP检测为突变的rpoB片段均有序列改变，10份经SSCP分析为无突变的有8份无序列改变，SSCP与测序结果的符合率为94．0％，在本研究的菌株中，耐多药结核病（MDR－TB）占76．4％（107／140），有92．5％（99／107）耐多药菌株经SSCP检测有rpoB突变。结论：建立的PCR－SSCP分析方法，是一种较准确和稳定的检测结核分枝杆菌rpoB基因突变的方法，可用于临床快速分析患者结核分枝杆菌对利福平的耐药性，并可作为MDR－TB判断的一个重要指标。     

黑龙江立克次体外膜蛋白B基因表达及表达重组蛋白的抗原性分析

黑龙江立克次体为远东蜱传斑点热病原体,本文以黑龙江立克次体基因组为模板,扩增ompB的4段基因,利用原核表达载体构建重组表达质粒,IPTG诱导重组质粒转化的大肠杆菌表达重组目的蛋白,并对其抗原性进行分析.免疫印迹反应表明,重组表达的4个蛋白均与黑龙江立克次体感染小鼠血清反应.该4个重组蛋白分别免疫小鼠后,分析其血清的特...     

Q热立克次体单克隆抗体的产生及其特性的研究

Q热立克次体存在相变异的现象。随着相变异的出现,Q热立克次体的生物学特性、理化性质和抗原性等方面均有变化。这种变化的发生与Q热立克次体的表面结构和抗原组分的改变有密切关系。为了在分子水平上研究Q热立克次体,阐明相变异的机制或研究Q热立克次体的致病性、血清免疫学诊断、疫苗制备等方面的问题,单克隆抗体的应用都是必不可少     

分支杆菌分子分型及鉴定的研究进展

分支杆菌属于裂殖菌纲、放线菌目、分支杆菌科、分支杆菌属。分支杆菌种类繁多，有报道分支杆菌已达150种以上。分支杆菌属分为结核分支杆菌复合群[(mycobacteria tuberculosis complex，MTC)，包括结核分支杆菌、牛分支杆菌、非洲分支杆菌、田鼠分支杆菌]、麻风分支杆菌以及非结核分支杆菌(nontuber—     

伯氏考克斯体新桥株感染BALB/c小鼠的实验研究

目的:分析伯氏考克斯体新桥株对BALB/c小鼠的感染性.方法:用伯氏考克斯体新桥株腹腔接种感染小鼠,于感染后7,14,21,28 d分别处死小鼠,采用伯氏考克斯体特异的荧光定量PCR检测感染小鼠肝、脾、肺组织样本中伯氏考克斯体含量.采用间接免疫荧光法检测感染小鼠血清特异性抗体水平.结果:感染后28 d内,小鼠肝、脾、肺组织中均检出大量伯氏考克斯体,第7天检出量最高,脾的含量显著高于肝和肺,肝的含量显著高于肺.随着感染时间延长,伯氏考克斯体检出量呈下降趋势,但血清特异性抗体水平则不断升高.结论:伯氏考克斯体新桥株为强毒株,可以引起BALB/c小鼠较长时间的稳定感染;BALB/c小鼠可以用作伯氏考克斯体感染模型.     

套式PCR和DNA探针技术检测Q热立克次体

目的 建立套式PCR（NPCR）和DNA探针技术用于检测Q热立克次体。方法 依据已知的Cb 23s rRNA基因序列,设计两对引物用于建立套式PCR技术,并将扩增片段制成探针进行斑点杂交。结果 9株Cb分离株均可扩增出阳性产物带,而对照菌均为阴性,扩增灵敏度可达0.1pg Cb DNA,实验感染第6天的豚鼠血、小鼠血、小鼠脾脏均可扩增出阳性带;用七医株扩增片段制成的探针与9株Cb分离株的全DNA呈阳性杂交,对照菌为阴性,探针杂交灵敏度为0.5ng Cb DNA,感染的豚鼠血、小鼠血、小鼠脾脏均可呈阳性反应。结论 我们的NPCR和DNA探针技术具有很好的特异性和灵敏度,可将二者联合用于Q热的病原学诊断。     

用全细胞抗原作ELISA检测Q热立克次体单克隆抗体

酶联免疫吸附试验(ELISA)要求包被抗原纯度高,吸附固相载体好,能保持其免疫活性,一般多用可溶性抗原包被。用超声波裂解Q热立克次体制备的可溶性ELISA抗原,已成功地应用于Q热立克次体抗体的检测,鉴于Q热立克次体体积小、胞壁较坚固,常难以获得理想的超声波抗原,而且考虑到抗原决定簇易分布于菌体表面,因     

五日热巴通体重组外膜蛋白HbpA的研制和抗原性分析

为克隆并表达五日热巴通体外膜蛋白HbpA的基因,并对其抗原性进行初步分析,采用PCR方法从五日热巴通体基因组DNA扩增hbpA基因,将目的基因片段插入原核表达质粒pET32a（＋）,构建重组质粒pET32a（＋）-hbpA;将构建的重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）并诱导目的基因表达,以SDS-PAGE电泳以及免疫印迹实验分析表达的目的蛋白。SDS-PAGE电泳分析发现pET32a（＋）-hbpA转化菌高效表达一48kDa重组蛋白;免疫印迹分析发现该蛋白与其免疫血清发生强烈反应;间接免疫荧光分析发现该重组蛋白免疫血清能特异识别五日热巴通体。实验结果表明五日热巴通体外膜蛋白HbpA的基因已在大肠杆菌中高效表达。     

普氏立克次体120kDa表面蛋白N端和C端重组蛋白的抗原特异性研究

用免疫印迹和酶联免疫吸附试验分析普氏立克次体N端和C端重组蛋白,发现2个重组蛋白除与普氏立克次体免疫血清发生特异性反应外,并与立氏立克次体免疫血清发生反应,这2种立克次体也被这2个重组蛋白免疫血清所识别,提示这2个重组蛋白含有普氏和立氏立克次体的共同抗原决定簇。