干扰乳酸脱氢酶A表达对ErbB2高表达乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响

目的 探讨体外干扰乳酸脱氢酶A（LDHA）表达对人类表皮生长因子受体2（ErbB2）高表达乳腺癌SK-BR-3和MDA-MB-453细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法 用siLDHA转染（以转染scramble siRNA为阴性对照）SK-BR-3和MDA-MB-453细胞干扰LDHA的表达;Western blot法检测LDHA蛋白表达水平;Transwell小室检测细胞的迁移和侵袭能力;采用乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒测定细胞的LDH活性;采用葡萄糖和乳酸检测试剂盒分别测定培养基中的葡萄糖浓度和乳酸浓度,计算细胞对葡萄糖的摄取量和乳酸生成量。结果 与阴性对照组比较,siLDHA下调SK-BR-3和MDA-MB-453细胞LDHA的蛋白水平（ P<0.01）;降低细胞的迁移和侵袭能力（ P<0.001）;下调SK-BR-3细胞的LDH活性,减少两种细胞葡萄糖摄取量和乳酸生成量,差异均有统计学意义（ P<0.05）。结论 干扰LDHA表达通过降低糖酵解从而抑制ErbB2高表达乳腺癌细胞的迁移和侵袭。     

Heregulin-β1诱导的糖酵解对乳腺癌细胞MCF7迁移的影响

目的 探讨heregulin-β1（HRG-β1）对糖酵解的诱导作用及其诱导的糖酵解在乳腺癌细胞MCF7迁移中的作用。 方法 用PBS （对照组）或HRG-β1处理MCF7细胞12、24和48 h,或HRG-β1+草氨酸盐（oxamate, OX）联用处理MCF7细胞24 h,收集培养基测定葡萄糖消耗量和乳酸生成量,收集细胞用Western blot检测乳酸脱氢酶A（lactate dehydrogenase A, LDHA）蛋白的表达。用PBS（对照组）、HRG-β1或HRG-β1+OX联用处理MCF7细胞48 h,划痕实验检测伤口愈合率以反映细胞的迁移能力。结果 HRG-β1处理MCF7 细胞12、24和48 h 组的葡萄糖消耗量、乳酸生成量和LDHA蛋白水平增加均在24 h达最大值,与对照组比较差异有统计学意义（ P<0.05）;与HRG-β1诱导组比较,HRG-β1+OX联用组的葡萄糖消耗量差异无统计学意义（ P>0.05）,乳酸生成量降低（ P<0.01）, LDHA蛋白表达量减少（ P<0.05）;MCF7细胞划痕48 h后,对照组和HRG-β1+OX联用组的伤口愈合率相当（ P>0.05）,均低于HRG-β1诱导组,差异有统计学意义（ P<0.001）。结论 HRG-β1通过上调LDHA诱导糖酵解从而促进乳腺癌细胞MCF7的迁移。     

单链抗体JZC00联合2-脱氧葡萄糖的抗肿瘤活性

探讨单链抗体JZC00和糖酵解抑制剂2-脱氧葡萄糖(2-deoxyglucose,2-DG)的联合用药对小鼠非小细胞肺癌细胞LLC、小鼠乳腺癌细胞4T1的抗肿瘤作用。利用大肠埃希菌表达并纯化单链抗体,用SDS-PAGE和Western blot法鉴定JZC00;MTT法分析JZC00/2-DG联用组对肿瘤细胞体外增殖的抑制作用;葡萄糖和乳酸测定试剂盒测定培养基中葡萄糖和乳酸浓度,并计算肿瘤细胞葡萄糖摄取抑制率及乳酸释放抑制率;给药周期为15 d,给药同周期内测量肿瘤质量及体积。结果显示:经原核表达的JZC00相对分子质量正确,在体外能够抑制肿瘤细胞的增殖;JZC00及2-DG单独给药均能够抑制肿瘤细胞糖酵解,且JZC00/2-DG联合使用能够协同抑制糖酵解,当在体外模拟缺氧环境时JZC00抑制作用下降,加入2-DG后能够逆转其对糖酵解的抑制作用;两组体内模型显示与JZC00单药组相比,联合用药组抑瘤作用显著提高,2-DG能够提高抗血管生成抗体抑瘤效果,提示其联合在治疗实体瘤方面具有潜在价值。     

凝溶胶蛋白抑制乳腺癌细胞MCF7／Her2增殖及迁移侵袭的作用

目的研究凝溶胶蛋白（gelsolin,GSN）对雌激素受体α（ERα）阳性、人表皮生长因子受体2（Her2）过表达乳腺癌细胞MCF7／Her2生长的作用。方法构建GSN的真核表达载体,并稳定转染MCF7／Her2细胞,以RT-PCR及WesternBlot鉴定得到稳定过表达GSN的乳腺癌细胞系McF7／Her2／GsN。以空载体转染的稳定表达细胞MCF7／Her2／V作对照,比较其细胞形态、增殖和迁移能力的改变;WesternBlot及RT-PCR检测Her2、组织金属蛋白酶抑制剂-3（TIMP3）表达和细胞外调节蛋白激酶（ERK）的活化,探索深层次的作用机制。结果MCF7／Her2稳定过表达GSN后,细胞形态改变且增殖及迁移、侵袭能力明显低于对照细胞;发现Her2表达下降,TIMP3的表达上调,而雌激素导致的MCF7／Her2细胞ERK活化增强被逆转。结论凝溶胶蛋白能降低Her2的表达,并通过下调ERK的活化及上调TIMP3的表达,抑制乳腺癌细胞MCF7／Her2增殖及迁移侵袭作用。     

2-脱氧葡萄糖通过激活AMPK通路抑制类风湿关节炎血管新生

通过观察2-脱氧葡萄糖（2-DG）对佐剂关节炎（AA）大鼠滑膜组织血管翳形成的抑制及对人脐静脉内皮细胞 （HUVEC）增殖、迁移和体外成管的作用,探讨2-DG抑制类风湿关节炎血管新生的机制。方法采用滑膜病理组织HE染色观察 滑膜组织血管翳形成;CCK-8法检测HUVEC的细胞增殖活性;Transwell小室法检测HUVEC的迁移;体外基质胶成管实验检 测HUVEC 的成管数;Western blot 检测p-AMPK 以及抗凋亡蛋白Bcl-2 的表达;使用AMPK 阻断剂Compound C 阻断 HUVEC细胞的AMPK信号通路。结果2-DG（200 mg/kg）明显减轻AA大鼠滑膜组织血管翳生成（P<0.01）;体外实验结果显 示,2-DG（0.5 mmol/L和/或5 mmol/L）可明显抑制HUVEC的增殖、迁移和体外成管（P<0.01或P<0.001）,加入AMPK受体阻断 剂Compound C（5 μmol/L）,2-DG对HUVEC的活化的抑制作用被明显阻断（P<0.01）;Western blot结果显示2-DG（5 mmol/L） 可以增加P-AMPK的蛋白表达,减少Bcl-2的蛋白表达,差异有统计学意义（P<0.05）。结论2-DG可能通过激活AMPK通路减 少Bcl-2的表达抑制内皮细胞增殖、迁移和体外成管,从而抑制类风湿关节炎血管新生。     

缺氧对前列腺癌细胞糖酵解及迁移侵袭能力的影响

目的  探讨缺氧状态下前列腺癌细胞糖酵解和体外迁移侵袭能力的改变。方法  将前列腺癌细胞DU145和/或PC-3分别置于常氧及缺氧环境中培养24和48 h,侵袭小室实验检测前列腺癌细胞体外迁移及侵袭能力改变。分别检测上清液中葡萄糖含量、乳酸含量;实时定量逆转录-聚合酶链反应（qRT-PCR）检测糖酵解相关基因的表达改变。结果  前列腺癌细胞DU145经缺氧处理后,体外迁移及侵袭能力较常氧处理增强。同时缺氧处理后,DU145和PC-3细胞培养上清液中葡萄糖含量减少,肿瘤细胞摄入葡萄糖能力提高,糖酵解代谢产物乳酸在上清液中增加。qRT-PCR结果表明,缺氧处理后DU145细胞糖酵解相关基因。结论  缺氧处理能增强前列腺癌细胞的体外迁移及侵袭能力,同时通过改变糖酵解相关基因的表达,对前列腺癌细胞的糖酵解过程发挥调控作用。

     

miR-19影响人乳腺癌MCF7细胞增殖、迁移及侵袭的研究

目的探讨miR—19对人乳腺痛MCF7细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法体外培养人乳腺癌MCF7细胞,分别转染pre—miR—19和miR—19抑制物,然后应川俞盼蓝法检测MCF7细胞活性和增殖情况．应用transwell小审法测定MCF7细胞迁移和侵袭能力改变。结果pre—miR—19转染组的MCF7细胞生长抑制率下降,细胞活性和增殖能力增强,细胞迁移侵袭能力增强;miR-19抑制物转染组的MCF7细胞生长抑制率增高,细胞活性和增殖能力F降,细胞迁移侵袭能力减弱。结论仵乳腺癌的发牛发展过程中,miR-19发扦原癌基因作用,促进乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭。     

2-脱氧葡萄糖可增强TRAIL诱导的口腔癌细胞凋亡的敏感性

目的探讨糖基化抑制剂2-脱氧葡萄糖（2-DG）对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）诱导肿瘤细胞凋亡作用的影
响。方法MTT法检测不同浓度（0、0.625、1.25、2.5、5、10 mmol/L）2-DG及不同浓度2-DG与TRAIL（200 ng/ml）合用对口腔癌
细胞KB的增殖抑制作用。集落克隆法检测2-DG及TRAIL对口腔癌细胞KB的增殖抑制作用。溴化丙啶（PI）单染法检测
2-DG（5 mmol/L）对TRAIL诱导口腔癌细胞KB凋亡的影响;Western blot检测2-DG（5 mmol/L）处理口腔癌细胞KB不同时间
（0、6、16、24 h）,DR5 的表达以及联合TRAIL处理后Caspase-3 的表达。结果5 mmol/L 2-DG作用于口腔癌细胞KB 24、48、
72 h细胞存活率分别为75.25%、69.06%、59.19%,但24 h细胞凋亡率仅为15.9%。5 mmol/L 2-DG与TRAIL联合作用于口腔癌
细胞KB 24 h的凋亡率为72.5%,高于TRAIL本身诱导凋亡率45.3%,并且2-DG可增强TRAIL抑制口腔癌细胞KB的集落克隆
形成的作用。2-DG上调DR5的表达并且增强Caspase-3的激活。结论2-DG能增强TRAIL诱导口腔癌细胞的凋亡,其机制可
能是上调DR5的表达及增强Caspase-3的激活。
     

CBL通过泛素化降解NCK2抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭

目的 阐明Casitas B系淋巴瘤（CBL）蛋白对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响并探讨其作用机制。方法 乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MCF7常规培养,实验分为NC组、过表达CBL组和siNC组、siCBL组,采用克隆形成法和细胞计数试剂盒-8（CCK-8）、伤口愈合实验、Transwell实验检测过表达（沉默）CBL对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;流式细胞术和Western blot验证CBL对乳腺癌细胞周期进程、细胞周期标志物和上皮-间充质转化（EMT）的影响;罗丹明标记的鬼笔环肽染色细胞骨架观察CBL对细胞丝状伪足数量的影响。采用IP-质谱法筛选CBL的相互作用蛋白并确定NCK2为研究对象。实验分为CBL组、NCK2组、CBL+NCK2组,通过免疫共沉淀（IP）和免疫荧光共定位实验验证CBL与NCK2蛋白互作情况。通过环己酰亚胺追踪实验和泛素化实验检测CBL对NCK2蛋白稳定性和泛素化的影响。采用CCK-8和Transwell实验检测NCK2对CBL介导的乳腺癌细胞增殖及迁移能力的影响。结果 过表达CBL组的细胞增殖、迁移、侵袭能力显著降低（P<0.05）;沉默CBL组的细胞增殖、迁移、侵袭能力显著增加（P<0.01）。沉默CBL促进MCF7细胞周期G1/S转换（P<0.05）。过表达CBL下调乳腺癌细胞周期相关蛋白 CDK2/4（P<0.01）、Cyclin A2/B1/D1/D3/E2（P<0.05）、EMT 相关蛋白 Snail、N-Cadherin、Claudin-1（P<0.05）,同时上调E-Cadherin（P<0.05）;沉默CBL上调乳腺癌细胞周期相关蛋白CDK2/4/6（P<0.05）、Cyclin A2/B1/D1/D3/E2（P<0.05）,EMT相关蛋白Snail、Vimentin、Claudin-1（P<0.05）,同时下调E-Cadherin（P<0.05）。过表达CBL使乳腺癌细胞系MDA-MB-231中丝状伪足数量减少;沉默CBL使乳腺癌细胞系MCF7中丝状伪足数量增加。NCK2与CBL相互作用。过表达CBL抑制NCK2蛋白稳定性（P<0.05）,并促进其泛素降解（P<0.01）。过表达NCK2能够逆转CBL介导的乳腺癌细胞增殖和迁移的抑制作用（P<0.01）。结论 CBL可通过泛素化降解NCK2抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

桑寄生提取物对人结肠癌HT-29细胞侵袭迁移的影响及作用机制

目的探讨桑寄生提取物对人结肠癌HT-29细胞侵袭迁移的影响及作用机制。方法不同浓度（0、0.5、1、2、4、8g/ml）的桑寄生提取物处理HT-29细胞24、48或72h后,分别采用细胞计数试剂盒法、侵袭小室法、划痕实验、免疫印迹试验检测不同浓度桑寄生提取物对HT-29细胞增殖、侵袭、迁移能力以及细胞侵袭迁移相关蛋白、PI3K/AKT信号通路相关蛋白的影响。结果桑寄生提取物可明显抑制HT-29细胞增殖,呈浓度和时间依赖性;与空白对照组（0g/ml）相比,桑寄生提取物能降低HT-29细胞侵袭、迁移能力,呈剂量依赖性;能下调细胞侵袭迁移相关蛋白[基质金属蛋白酶2（MMP-2）、MMP-9、血管内皮生长因子（VEGF）]及p-AKT、p-PI3K蛋白表达。结论桑寄生提取物能抑制人结肠癌HT-29细胞的增殖、侵袭及迁移,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

过氧化氢对人肝癌细胞株HepG2增殖的促进作用

目的:探讨低剂量过氧化氢(H2O2)对人肝癌细胞株HepG2的促增殖作用及该作用与NF-κB和细胞周期的关系. 方法: 不同剂量H2O2直接作用于培养的HepG2细胞;20 μmol/L NF-κB抑制剂(PDTC)预处理细胞2 h, 50 μmol/L的H2O2作用HepG2细胞;50 μmol/L H2O2分别作用于G1, G2/M, S期细胞,MTT法测定细胞增殖活性. 结果: 50 μmol/L的H2O2具有明显的促进HepG2细胞生长的作用,此作用可以被PDTC抑制;50 μmol/L的H2O2可以明显的促进G1期HepG2细胞生长. 结论: 低剂量H2O2可诱导HepG2细胞增殖,该过程可能包含依赖NF-κB的信号途径的参与;H2O2诱导HepG2细胞增殖在细胞周期的不同时相效应敏感性不同,主要诱导G1期细胞增殖.     

CHADS_2/CHA_2 DS_2-VAS_C评分的应用

临床上CHADS2评分和CHA2DS2-VASC评分主要用来对非瓣膜性心房颤动(房颤)血栓栓塞的风险进行评估。由于CHA2DS2-VASC评分系统更为全面,并能筛选出不需要抗凝治疗的"真正的低危患者",因此现多应用此评分系统。然而,两种评分系统所包含的危险因素同样适用于其他心血管疾病,两者也可以被用来对房颤风险、左心房功能进行评估,同时也可对非房颤患者进行预后评估。     

评价房颤CHADS2评分及其衍生评分对冠心病及其严重程度的预测价值

目的：探讨房颤评分系统CHADS2(欧洲)评分及其衍生评分对冠心病及其严重程度的预测价值。方法纳入2013年1月1日-2013年12月1日就诊于本院心血管内科怀疑冠心病并行冠状动脉造影检查的连续病例429例,根据其造影结果分为对照组(n=51)及冠心病组(n=378)。根据患者的临床资料计算其CHADS2、CHA2DS2-VASc和CHA2DS2-VASc-HSF评分,根据其冠状动脉造影结果计算Gensini积分评价其病变严重程度,并对3种评分的冠心病预测能力进行评价。结果 CHADS2、CHA2DS2-VASc和CHA2DS2-VASc-HSF评分与病变支数(r=0.317,P＜0.01;r=0.332,P＜0.01;r=0.330,P＜0.01)及Gensini积分均有一定相关性(r=0.240,P＜0.01;r=0.274,P＜0.01;r=0.295,P＜0.01)。截断点分析显示, CHA2DS2-VASc-HSF评分≥3对冠心病的预测价值最高,其灵敏度、特异度、曲线下面积分别为0.860、0.804、0.832(95%CI：0.766~0.898)。结论 CHADS2及其衍生评分对冠心病有一定的预测价值,尤其是CHA2DS2-VASc-HSF评分≥3对冠心病有较高的预测价值。     

抗人胸腺细胞单克隆抗体2G_2B_2和2G_2C_2的制备及特性鉴定

用杂交瘤技术制备２株单克隆抗体（单抗）２Ｇ２Ｂ２、２Ｇ２Ｃ２。经研究发现,它们主要与胸腺细胞、脐血及ＰＨＡ激活的外周血单个核细胞等反应;免疫组化显示其主要作用于皮质胸腺细胞;与造血系统中分化早期的瘤细胞、骨髓瘤细胞等反应阳性率较高。生物学特性鉴定结果提示,单抗均属免疫球蛋白ＩｇＧ１亚类,腹水效价达１：１２８０００,所识别抗原分子量为４５／４６ＫＤａ,无抗原调变作用。故２Ｇ２Ｂ２、２Ｇ２Ｃ２是类似ＯＫＴ１０的抗ＣＤ３８单抗,但竞争抑制结果表明三者分别作用于不同的抗原决定簇,即２Ｇ２Ｂ２、２Ｇ２Ｃ２是两个抗ＣＤ３８新单抗。     

2－（2－甲氧基苯氧）乙胺的合成

２－（２－甲氧基苯氧）乙胺Ⅰ是合成某些抗高血压药物的重要中间体，本研究探索二种途径制备。一是以２－甲氧基苯酚为起始原料，经相应的苯氧乙酸、苯氧乙酰胺，再用ＺｎＣｌ２－ＫＢＨ４－ＴＨＦ－Ｃ６Ｈ５－ＣＨ３体系还原，得目的物，并将Ⅰ转变成盐酸盐Ⅱ。二是通过Ｇａｂｒｉｅｌ反应制备目的物。结果表明第一种途径总收率（５８．１％）高于其他路线，并有原料易得、操作简便的优点     

Dab2/DOC-2基因的研究进展

Dab2/DOC-2是具有信号转导功能的磷蛋白,在丝裂原信号转导途径中起作用,通过蛋白质的相互作用和蛋白磷酸化发挥作用,参与控制细胞生长的信号通路而发挥生长抑制效应,Dab2/DOC-2又作为胞质衔接蛋白,参与细胞内蛋白运输。在肿瘤中纯合子基因缺失时被激活,是抑癌基因的候选成员。其在多种肿瘤中低或失表达,如卵巢癌,乳腺癌,绒毛膜癌和前列腺癌等,重新表达能抑制肿瘤的生长。Dab2也在胚胎的发生过程中发挥重要的作用。     

pD_2和pA_2的测定

本文采用大鼠肛尾肌分别介绍测定苯肾上腺素ｐＤ＿２和其拮抗剂哌唑嗪ｐＡ＿２的方法。同时讨论了ｐＤ＿２和ｐＡ＿２的意义和推导过程。     

2型糖尿病患者血浆TXA2和PGI2失衡及PLA2活性变化

目的：探讨2型糖尿病（DM）患者血栓素A2（TXA2）和前列环素（PGI2）失衡及PLA2活性变化。方法：以放免法测定血栓素B2和6－酮－前列腺素含量,以改良Zieve法测定血浆PLA2活性,同时观察空腹血糖（FBG）、空腹胰岛素（FINS）、甘油三酯（TG）等的变化。结果：①2型DM患者存在TXA2和PGI2合成异常,且Ⅱ组（有微血管病变组）较I组（无微血管病变组）更为严重;②2型DM患者组血浆PLA2显著低于正常对照组,但I组与Ⅱ组之间无显著差异;③2型DM患者组TXB2与FBG、TG显著正相关,6－K－PGF1a与FINS显著负相关,TXB2与6－K－PGF1a均与血浆PLA2无显著相关性。结论：①TXA2和PGI2失衡在2型糖尿病及微血管病变的发生发展中起重要作用;②血浆分泌型PLA2活性变化与2型糖尿病密切相关,但在糖尿病患者TXA2和PGI2失衡及微血管病变中可能不起直接作用;③糖脂代谢紊乱以及高胰岛素血症在TXA2和PGI2失衡及DM微血管病变中起重要作用。     

KIR2DS2基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

目的构建携带KIR2DS2基因短发夹状干扰RNA(short hairin RNA,shRNA)的RNAi慢病毒载体.方法针对已经筛选确定的KIR2DS2基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ酶切后的pSicoR-GFP载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接产生LV-shKIR2DS2慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.用LV-shKIR2DS2及Packaging system质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒颗粒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度.结果PCR和测序证实,成功构建KIR2DS2shRNA的慢病毒载体LV-shKIR2DS2.293T细胞测定病毒滴度为6×108TU/ml.结论成功构建携带KIR2DS2基因短发夹状干扰RNA的RNAi慢病毒载体.     

煤矽肺患者血清铜,锌,铁,镁,钙水平变化观察

目的：血清铜、锌、铁、镁、钙含量的变化与煤矽肺发生发展的关系及临床价值。方法：使用Ｐ－Ｅ１１００Ｂ型原子吸收分光光度计，检测４９例（平均年龄６９．６５岁）各期单纯矽肺患者及５０例健康老年人（平均年龄６２．５岁），对照组血清铜、锌、铁、镁、钙５种元素的含量。结果：患和血清铜、铜／锌、及镁显著高于正常对照组，血清锌、铁及钙含量怀健康对照组差异无显著性。结论：煤矽肺患者血清铜及铜／锌上升，由于吸入ＳｉＯ