人→猪脾块移植嵌合细胞的体内转归

目的：建立人→猪异种移植物抗宿主反应（GVHD）模型来模拟猪→人异种移植时人免疫系统对猪的攻击。方法：以中国内江猪为实验动物，经环磷酰胺静注行免疫抑制后，腹膜腔内植入人脾块悬液，术前、术后定期采集猪外周血行血常规检查监测猪被免疫抑制程度。行流式细胞术检查监测人细胞在猪外周血中嵌事情况，行细胞介导的淋巴细胞毒试验动态监测人抗猪和猪抗人的细胞毒活性。结果：各试验猪存活良好，给药后4d各猪外周血白细胞总数可降至正常值的15％左右，移植后第2天和第2周左右，人细胞在猪体内可形成两个较明显的嵌合高峰，尽管人抗猪淋巴细胞毒性于术后2周时有明显升高，但在术后1个月内猪抗人淋巴细胞毒性始终明显高于人抗猪淋巴细胞毒性。结论：人→猪脾块移植后，受猪体内的供受细胞呈现一个两元（猪细胞、人细胞）三态（微嵌合、宿主抗移植物反应、移植物抗宿主反应）的动态平衡过程。     

人脐血移植SCID小鼠的实验研究

目的　探讨人脐血造血细胞在严重联合免疫缺陷 (SCID)小鼠体内植入、分化及造血调控。方法　采用流式细胞技术及克隆形成细胞体外培养方法观察了移植后受鼠体内的造血细胞植入情况、造血生长因子对其的影响及移植物抗宿主反应。结果　 1静脉输注 1～ 5× 10 7个脐血单个核细胞 (MNC) /只鼠可使受鼠体内表达嵌合体 ,而经腹腔注射不能建立人 -鼠移植模型。 2人脐血细胞移植 SCID小鼠 :可以重建造血功能并在小鼠骨髓微环境中分化表达 ,其表达水平与外源细胞因子的使用无关 ;可引起受鼠移植物抗宿主反应 ,并与输入细胞剂量有关。结论　脐血造血干细胞不仅可以在受鼠骨髓微环境中存活 ,还可进一步分化为各系特异细胞 ,重建造血。     

混合胸腺移植诱导皮肤移植物免疫耐受的实验研究

目的通过建立混合胸腺移植模型,对混合胸腺移植诱导皮肤移植物免疫耐受及其机制进行初步研究.方法混合胎胸腺移植3个月后,进行异基因皮肤移植,观察异种皮肤移植物的存活情况,并利用流式细胞仪检测各组受体动物外周血中CD4 CD25 T细胞的百分率,利用免疫组化观察宿主骨髓源细胞在胸腺移植物内的分布情况.利用脾细胞过继转移,观察对异种供体抗原已产生耐受的受者脾细胞,能否将耐受状态过继转移至正常BALB/c小鼠.结果混合胸腺移植3个月后,受体外周血白细胞中CD4 CD25 T细胞的百分率为(2.83±0.20)% ,与正常BALB/c小鼠相比,相差不显著.免疫组化染色显示,在移植胸腺内宿主源MHC-Ⅱ分子阳性细胞主要位于髓质,并具有典型树突样外观.将对F344大鼠皮肤已产生耐受的脾细胞,过继转移至免疫健全的BALB/c小鼠,可特异延长胸腺供体来源的F344大鼠皮肤移植物的平均存活时间.结论通过胸腺移植诱导的免疫耐受,主要是以胸腺内的中枢排除机制以及调节性T细胞的免疫抑制作用为主,而且此种耐受具有一定的"可转传性".     

荷人结肠癌裸鼠移植瘤模型的建立和放射免疫显像的研究

目的：应用人结砀癌建株ＬｏＶｏ细胞接种裸鼠,鼠间移植传代,建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型。方法：观察移植瘤大体形态和组织病理学检查,测定其肿瘤组织与宿主血液中的癌胚抗原（ＣＥＡ）值,并应用免疫组化观察肿瘤细胞中ＣＥＡ分布以及＾１５３Ｓｍ标记抗ＣＥＡ单抗的荷瘤裸鼠体内放射免疫显像。结果：移植瘤的形态和功能特性与原发肿瘤基本相似,移植瘤的移植成功率为１００％;放免显像显示标记机能浓聚于肿瘤部位,经腹腔注标     

CD34+造血干细胞混合CD3+T细胞移植分离移植物抗宿主病和移植物抗白血病效应

目的探讨在异基因造血干细胞移植中能否采用纯化CD34+造血干细胞混合一定量纯化CD3+T细胞移植达到既控制移植物抗宿主病(GVHD)又保留移植物的抗白血病效应(GVL). 方法 (C57BL/6×615)F1代接种L615白血病细胞株建立小鼠白血病模型作为移植受鼠,利用免疫磁珠纯化骨髓CD34+造血干细胞及脾脏CD3+细胞,流式细胞仪分析纯化前后CD34+、CD3+细胞百分比,观察单纯移植CD34+细胞及混合不同数量级CD3+细胞后受鼠生存时间、GVHD、GVL效应,移植后骨髓造血重建细胞来源. 结果纯化CD34+细胞1×10+6移植组100%死于白血病复发;CD34+细胞+纯化CD3+细胞(1×10+7)移植组生存期明显延长,50%死于白血病复发,无GVHD表现;CD34+细胞+CD3+细胞(5×10+7)移植组长期存活,无白血病复发,无GVHD表现;CD34+细胞+CD3+细胞(1×10+8)移植组62.5%死于GVHD,37.5%长期存活;CD34+细胞+CD3+细胞(1.5×10+8)移植组100%死于GVHD.移植后生存时间>60 d的受鼠骨髓造血重建细胞y染色体检出率为100%. 结论移植物中CD3+细胞数量与GVHD和GVL效应密切相关,通过限定移植物中的CD3+淋巴细胞的含量能够保留GVL作用而有效控制GVHD发生.     

耐受T细胞抑制NK细胞和巨噬细胞对大鼠皮肤移植物的排斥

目的 了解NK细胞和巨噬细胞在T细胞缺乏或T细胞成功重建的情况下对异种移植物排斥的作用。方法在无胸腺裸小鼠、通过混合胸腺移植重建T细胞后裸小鼠和正常免疫健全小鼠分别进行F344大鼠皮肤移植,观察异种皮肤移植物的存活情况,并利用流式细胞仪检测各组受体动物外周血中CD4+和CD8+T细胞的百分率,利用ConA增殖实验和混合淋巴细胞培养检测其体外功能状态。结果 在没有清除受体体内NK细胞和巨噬细胞的情况下,正常无胸腺BALB/c裸小鼠上移植的F344大鼠皮肤移植物发生了排斥,平均存活时间为(20.50±2.38)d;而在裸小鼠左肾包膜下移植的F344胎大鼠胸腺组织,却能够正常发育,并有效重建了受体的T细胞免疫,而且诱导了F344大鼠皮肤移植物的长期存活。结论NK细胞和巨噬细胞在异种移植物的排斥中起十分重要的作用,不同组织对NK细胞和巨噬细胞细胞毒性的易感性可能存在一定的差异。对异种供体抗原已产生耐受的T细胞可抑制受体体内NK细胞和巨噬细胞对异种移植物的排斥。     

成人睾丸组织在裸鼠体内的存活情况研究

目的以成人睾丸组织为供体,免疫缺陷小鼠为受体,研究成人睾丸组织中生精细胞异种移植后的存活及变化情况。方法将成人正常睾丸组织植入去势裸鼠背部,于移植后110d取出移植物,进行组织形态学观察。结果在一例移植前显示非正常生精上皮结构标本的移植物中,大多数生精小管中只含有Sertoli细胞,而另一例移植前显示出正常生精上皮结构的标本,在移植到裸鼠背部110d后,仍然观察到圆形和长形精子细胞存在。结论将成人睾丸组织移植到免疫缺陷小鼠体内,110d后仍观察到有生精细胞的存活。     

蒿甲醚对胰腺肿瘤细胞的抑制作用

目的 观察蒿甲醚(ART)在体外对人胰腺癌SW-1990细胞的杀伤作用和对细胞增殖和凋亡的影响,以及在体内对荷瘤裸鼠移植瘤的抑制作用.方法 采用MTT法检测ART对SW-1990细胞的杀伤作用;采用流式细胞仪检测ART对SW-1990细胞周期和凋亡的影响.建立人胰腺癌裸鼠移植瘤模型,通过测量裸鼠体质量、移植瘤瘤径和瘤质量,计算肿瘤体积和抑瘤率,观察ART在体内的抗肿瘤活性.结果 MTT结果显示,ART对SW-1990细胞的杀伤作用与时间-剂量呈正相关 (P《0.05);流式细胞仪检测显示,ART使SW-1990细胞阻滞于G0/G1期,并诱导细胞凋亡;荷瘤裸鼠体内实验显示,中、高剂量的ART(4、8 mg)对裸鼠移植瘤的生长抑制效果显著(P《0.05),抑瘤率分别为48.10%和53.51%.结论 ART在体外及荷瘤裸鼠体内对SW-1990细胞有明显的抑制作用;其抑制作用与阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡有关.     

骨髓间充质干细胞对急性淋巴细胞白血病小鼠骨髓移植后GVHD和GVL的影响

目的:观察骨髓间充质干细胞(BMMSC)对急性淋巴细胞白血病(ALL)小鼠异基因骨髓移植(allo-BMT)后移植物抗宿主病(GVHD)和移植物抗白血病(GVL)的影响。方法:以ALL小鼠为动物模型,对其进行al-lo-BMT的同时,静脉输注经体外培养的供鼠BMMSC,同时设立单纯allo-BMT对照组。流式细胞仪检测受鼠CD4+、CD8+T细胞亚群的差异;记录受鼠存活时间;观察受鼠发生GVHD一般反应及病理学变化。结果:BMMSC减少受鼠CD4+T细胞数量的同时增加CD8+T细胞的数量;明显延长ALL小鼠allo-BMT后的生存时间;推迟GVHD发生的时间。结论:BMMSC与allo-BMT联合移植具有一定的GVL;BMMSC能抑制ALL小鼠allo-BMT后GVHD的发生,但同时具有一定程度的GVL。     

外周血干细胞移植治疗血液肿瘤283例临床观察

目的 观察外周血干细胞移植(PBSCT)治疗血液肿瘤临床疗效.方法 自2001年3月～2007年4月,对283例血液肿瘤患者施行外周血干细胞移植,其中自体移植231例,异基因移植52例,观察其临床疗效和并发症.结果 除1例ALL外,230例患者行自体外周血干细胞移植后造血功能均快速重建.异基因移植中急性移植物抗宿主病发生率23.1%,慢性移植物抗宿主病发生率21.2%,其中局限型占15.4%;9例患者于移植后1 ～16个月分别死于移植物抗宿主病、感染和疾病复发或进展,35例患者已无病存活3～46个月.结论 外周血干细胞移植是治疗血液肿瘤的有效方法,依据患者疾病诊断、年龄、身体状况、供者情况选择移植方式.