三七总皂甙注射液体外诱导HL-60细胞凋亡的研究

目的观察三七总皂甙诱导人白血病细胞株HL-60细胞凋亡作用及机制。方法在体外细胞培养的基础上用200～1600μg/ml三七总皂甙处理HL-60细胞,光镜下观察细胞形态；用MTT法测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测凋亡峰,免疫组化法检测p53和bcl-2凋亡相关基因的表达,采用真彩色图像分析仪定量分析。结果200～1600μg/ml三七总皂甙可抑制HL-60细胞生长,抑制率有剂量依赖性。细胞凋亡峰随药物浓度增大而增加。三七总皂甙800、1600μg/ml可使p53表达上调,bcl-2表达明显下降,表达改变有浓度依赖性。结论三七总皂甙在体外可抑制HL-60细胞生长,诱导其凋亡,其诱导凋亡的作用与凋亡相关基因p53表达上调、而抗凋亡基因bcl-2表达下调有关。     

紫草素对白血病细胞HL-60增殖及凋亡作用的影响

目的研究紫草素诱导人早幼粒白血病HL-60细胞凋亡的作用机制。方法 MTT比色法检测紫草素对HL-60细胞增殖的影响;Annexin V/PI分析凋亡率;半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测bcl-2基因水平,分析白血病HL-60细胞凋亡作用与bcl-2表达水平关系。结果紫草素在1～8μg/mL浓度范围内能抑制HL-60细胞的增殖,具有时间和浓度的依赖性。2μg/mL紫草素能够诱导HL-60细胞凋亡,凋亡呈时间依赖性。在2μg/mL紫草素作用下,HL-60细胞bcl-2表达明显下调。结论紫草素能够诱导HL-60细胞凋亡,其作用机制与下调bcl-2表达有关。     

川芎嗪对白血病U937细胞增殖和凋亡的作用及其机制研究

目的:研究川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对白血病U937细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。 方法:应用CCK-8法检测TMP对U937细胞的增殖抑制,流式细胞仪检测细胞凋亡及周期分布,采用Real-time PCR法检测bcl-2,P27 mRNA表达,Western blot检测bcl-2,caspase-3,cyclin E1,CDK2,P27的表达。 结果:川芎嗪呈时间剂量依赖的方式抑制U937细胞的增殖,作用48 h的IC₅₀为160 mg·L^-1;并且诱导U937细胞凋亡,阻滞细胞周期于G₀/G₁期;Real-time PCR及Western blot结果显示川芎嗪使U937细胞中凋亡相关分子bcl-2表达下调,caspase-3上调,周期相关蛋白cyclin E1,CDK2表达下调,P27上调。 结论:川芎嗪对白血病U937细胞呈抑制增殖及诱导凋亡的作用,其机制可能是通过影响细胞周期分布,下调bcl-2的表达,最终激活caspase-3,启动凋亡途径,诱导细胞凋亡。     

贵州产天冬总皂苷提取物对人早幼粒白血病细胞株HL-60的影响

目的： 提取贵州产天冬中总皂苷（ASP）并研究其对人早幼粒白血病细胞株HL-60增殖和凋亡作用。 方法： 选取贵州产天冬为研究对象,提取其总皂苷成分;以不同浓度梯度的天冬总皂苷提取物作用于人早幼粒白血病细胞株HL-60,采用MTT法检测细胞增殖情况,采用流式细胞术检测细胞凋亡率;应用实时定量（Real-time） PCR检测各组HL-60细胞中B细胞淋巴瘤/白血病2（Bcl-2） mRNA的表达。 结果： 随着天冬总皂苷浓度的升高,其对HL-60细胞增殖的抑制作用明显增强,呈现剂量依赖趋势;与对照组相比,天冬总皂苷组使HL-60细胞凋亡率明显增加;并且能够使HL-60细胞内的Bcl-2 mRNA表达下降。 结论： 贵州产天冬总皂苷提取物下调Bcl-2 mRNA的表达、诱导人早幼粒白血病细胞株HL-60凋亡,可能是其治疗白血病的机制之一。     

桔梗皂苷D抑制人白血病细胞株K562的增殖和诱导凋亡的作用

目的：探讨桔梗皂苷D（PD）抑制人白血病细胞株K562增殖和诱导凋亡及其作用机制。方法：体外培养人白血病细胞株K562,加入终浓度分别为5～20μmol/l的PD。采用MTT法测定药物对细胞的增殖抑制作用,Annexin V/PI双标法检测细胞凋亡,JC-1检测线粒体膜电位的变化;Western blot方法检测桔梗皂苷处理细胞后bcl-2、bax和cleaved-caspase3蛋白表达的变化。结果：PD以时间剂量依赖性方式抑制K562细胞的增殖,与对照组相比,不同浓度的PD作用24h后,细胞凋亡率明显增加且差异显著。随着药物浓度的增加,PD增加bax、cleaved-caspase3蛋白的表达,抑制bcl-2蛋白的表达。结论：PD有抑制白血病细胞K562的增殖和诱导凋亡的作用,通过线粒体途径诱导细胞凋亡。     

联合应用阿霉素和姜黄素增强人白血病细胞株HL-60对阿霉素的敏感性

目的 研究姜黄素是否增强人白血病细胞株HL-60对阿霉素的敏感性及其作用机制.方法 采用MTT法测定药物的体外杀伤作用,应用流式细胞术分析细胞凋亡.应用RT-PCR和Western blot 检测Survivin和XIAP基因的表达.结果 姜黄素(2.00～16.00 μmol·L-1)和阿霉素(0.08～0.64 μmol·L-1)同时给药对HL-60细胞可产生增强的协同杀伤效果,同时,细胞凋亡增加,Survivin和XIAP的表达下降.结论 联合应用阿霉素和姜黄素可以增强人白血病细胞株HL-60对阿霉素的敏感性,下调生存蛋白(Survivin)和X-相关凋亡抑制蛋白(XIAP)表达促进细胞凋亡是其主要作用机制.     

穿心莲内酯对HL-60细胞凋亡、CytC蛋白表达的影响

目的:研究穿心莲内酯诱导人HL-60细胞凋亡及相关机制。方法:以人早幼粒白血病细胞株HL-60为模型,作用于HL-60细胞的穿心莲内酯设3.125、6.25、12.5μg/ml三个受试浓度,实验分为溶媒对照组、穿心莲内酯3.125μg/ml、6.25μg/ml、12.5μg/ml四个组。采用Annexin V/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡率、流式细胞术结合荧光染色检测穿心莲内酯对细胞色素C(Cyt C)蛋白表达的影响。结果:穿心莲内酯能促进HL-60细胞凋亡,且呈剂量依赖性。穿心莲内酯作用HL-60细胞24h,Cyt C蛋白表达增加,12.5μg/ml作用浓度与溶媒对照相比有统计学意义(P0.05)。结论:穿心莲内酯能诱导HL-60细胞凋亡,其诱导凋亡机制可能与Cyt C释放的增加、线粒体通路有关。     

藤黄酸对急性白血病细胞U937增殖和凋亡的影响及对核孔蛋白Nup88的调控作用

目的 观察藤黄酸对白血病细胞株U937增殖和凋亡的影响及其对核孔蛋白Nup88的调控作用,研究藤黄酸诱导凋亡作用与其调节Nup88的相互关系.方法 采用MTT比色法检测细胞增殖活性,Annexin-V FITC/PI双标法及Hoechst 33258染色法分析细胞凋亡的改变,流式细胞术分析细胞周期和细胞内核孔蛋白Nup88的改变,RT-PCR检测藤黄酸对白血病细胞内Nupp88基因表达的调控作用;共聚焦显微镜观察Nup88蛋白的细胞分布情况.结果 藤黄酸能明显抑制U937细胞的增殖,其抑制作用呈时间、剂量依赖性,其24 h的IC50为(1.019±0.134)mg/L;此外,藤黄酸还具有诱导U937细胞凋亡和G0/G1期阻滞的作用.核孔蛋白Nup88弥漫分布于白血病细胞的核浆之间,以细胞浆和核膜为主,经藤黄酸干预后,Nup88的蛋白和mRNA表达水平明显下降,主要集中于核膜的胞浆面,偶见胞浆中表达.结论 藤黄酸能明显抑制U937白血病细胞的增殖,并诱导其凋亡.而藤黄酸诱导的核孔蛋白Nup88的重新分布以及表达量的下调可能参与了其诱导凋亡作用.     

鬼臼毒酮对人白血病细胞株HL-60的增殖凋亡及端粒酶活性的影响

目的：观察鬼臼毒酮对人白血病细胞株HL-60的凋亡作用及bcl-2表达的影响。方法：采用台盼蓝拒染法、MMT法、瑞氏染色法、DNA电泳、观察该药对HL-60增殖抑制和凋亡，RT-PCR检测bcl-2的mRNA。结果：鬼臼毒酮对HL-60有抑制增殖。诱导凋亡和下调bcl-2的作用。结论：鬼臼毒酮体外试验有抗瘤作用，其机制可能是通过抑制增殖和诱导凋亡。     

青蒿琥酯对U937细胞凋亡的诱导作用及其对Bcl-2、Bax、ICAD和Caspase-8表达的影响

目的：探讨青蒿琥酯对急性髓系白血病细胞株U937细胞的凋亡诱导作用及其可能机制。方法：采用MTT比色法检测青蒿琥酯对U937细胞体外生长的抑制作用;细胞形态学、DNA琼脂糖凝胶电泳、DNA的PI染色等观察和检测U937细胞的凋亡;Western-blot法检测U937细胞凋亡过程中Bcl-2、Bax、Caspase-8和ICAD蛋白表达水平的变化。结果：青蒿琥酯对U937细胞的生长有明显抑制作用,且生长抑制率与药物作用浓度呈正相关（P〈0.01）,呈浓度依赖性,48小时IC50值为24.48μg/ml;其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关;随药物浓度的增高Bcl-2和ICAD蛋白表达量逐渐下降,而Bax蛋白表达上调,Caspase-8蛋白出现明显的剪切激活带。结论：青蒿琥酯具有诱导U937细胞凋亡作用,既能通过线粒体途径又能通过外源性途径诱导U937细胞凋亡。     

丹参酮ⅡA诱导白血病细胞凋亡过程中端粒酶活性的改变

目的观察丹参酮Ⅱ_A(TanⅡ_A)对HL60,K562细胞端粒酶活性的抑制作用和对凋亡相关基因的影响,探讨丹参酮Ⅱ_A对造血细胞的作用机理。方法以HL60,K562为靶细胞,应用细胞培养技术,流式细胞术,透射电镜观察TanⅡ_A对HL60,K562细胞的作用,利用PCRTRAP方法检测TanⅡ_A处理前后HL60,K562细胞端粒酶活性的改变。结果经05μg·mL^-1TanⅡ_A作用6d后,HL60,K562细胞生长明显受到抑制,生长抑制率分别为756%和563%。经丹参酮诱导后,HL60,K562细胞发生凋亡,出现亚二倍体峰;同时显著下调HL60及K562细胞的cmyc,bcl2基因表达,上调cfos基因表达。HL60,K562细胞在TanⅡ_A作用后,端粒酶活性受到抑制,端粒酶活性抑制率分别为308%,508%。结论TanⅡ_A可明显抑制HL60和K562细胞的增殖和细胞端粒酶活性,并诱导细胞凋亡。     

Antimutagenic and antiproliferative effects of roasted and defatted peanut dregs on human leukemic U937 and HL-60 cells

The antimutagenic effects on Salmonella typhimurium TA98 and TA100 strains and antiproliferative effects on leukemia cell lines (U937 and HL-60) of peanut protein isolate (PPI), peanut protein isolate enzyme hydrolysate (PPIEH), roasted and defatted peanut dregs (RDPD), and roasted and defatted peanut dregs enzyme hydrolysate (RDPDEH) were investigated. The antimutagenic effects on B(a)P and 4-NQO toward the TA98 and TA100 strains were found to follow a diminishing order: RDPD > RDPDEH > PPI = PPIEH with dose-dependency. Antiproliferative effects on leukemia cells U937 and HL-60 were also detected. RDPD was found to be the most effective of all the peanut preparations. At 100 microg/mL concentration, RDPD inhibited the proliferation of U937 and HL-60 cells by 56% and 52%, respectively. We propose to consider RDPD and RDPDEH in the development of natural chemotherapeutic or chemopreventive dietary supplements against leukemia and to upgrade the utilization of these by-products in peanut oil production.     

银杏外种皮多糖对HL-60细胞的体外实验研究

目的:研究银杏外种皮多糖对体外HL-60细胞的作用.方法:运用MTT方法和流式细胞技术,检测HL-60细胞体外增殖、凋亡以及相关基因的表达.结果:银杏外种皮多糖(40～160 m/L,48h)可抑制HL-60细胞增殖及增殖促进基因c-myc的表达,可诱导HL-60细胞凋亡并下调凋亡抑制基因bcl-2的表达.结论:银杏外种皮多糖对HL-60细胞增殖及凋亡的影响涉及增殖促进基因c-myc和凋亡抑制基因bcl-2.     

大黄素对HL-60细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨大黄素对人白血病细胞HL-60增殖及凋亡的影响。方法:应用MTT法检测大黄素对HL-60细胞增殖的影响;应用流式细胞术、DNA琼脂糖凝胶电泳观察和检测细胞凋亡;蛋白印迹法(Western-Blot)检测Bcl-2蛋白表达水平的变化。结果:在5～20mg/L浓度范围内,大黄素对HL-60细胞增殖的抑制作用呈时间剂量依赖性20mg/L作用72h后,抑制率分别达到(19.8±2.7)%,(58.8±4.4)%和(73.8±5.7)%;流式细胞术检测发现:大黄素5、10和20mg/L作用24h后,细胞凋亡率分别为(15.5±3.4)%、(56.0±3.4)%和(71.1±5.0)%,与对照组(1.01±0.06)%有显著性差异(P<0.05);DNA琼脂糖凝胶电泳显示典型的梯形条带。大黄素作用24h后,Bcl-2蛋白的表达水平随药物波度增加呈逐渐下降趋势。结论:大黄素能够抑制HL-60细胞增殖,并诱导其凋亡。Bcl-2基因可能参与了大黄素抑制HL-60细胞增殖和诱导凋亡的过程。     

miR-223对粒细胞性白血病细胞增殖影响及作用机理

通过在体外将miR-223 duplex转染至粒系白血病细胞株（HL-60、NB4）,观察其对粒系白血病细胞增殖作用的影响,来探讨miR-223对白血病细胞诱导分化及作用机理。以白血病HL-60、NB4细胞株为靶细胞,采用MTT法和半固体集落法观察不同浓度的miR-223对HL-60、NB4细胞增殖的影响;流式细胞术观察粒系细胞分化的表面标志（CD11b＋、CD15＋）表达;RT-PCR检测miR-223对c/EBPα、NFI-A转录因子表达的影响以及用免疫印迹反应观察相应蛋白的表达情况。结果表明：（1）低浓度的miR-223（10nM、20nM）均抑制HL-60、NB4细胞增殖（P〈0.05或P〈0.01）,但在HL-60细胞中随着其浓度的增加（50nM、100nM）,抑制作用与对照组相比无差异;而NB4细胞中随浓度增加抑制作用却没有增强（P〈0.05）。半固体集落培养结果显示与MTT结果相一致。（2）流式细胞术检测用不同浓度的miR-223转染粒系细胞中发现,粒系细胞表面标志CD11b＋表达在低浓度（10nM、20nM）下随其浓度升高而增加,但浓度增至50nM、100nM时表达有所下降;而CD15＋在HL-60细胞中表达无显著差异,NB4细胞中表达趋势与CD11b＋一致。（3）两细胞在miR-223作用前后提取总RNA分别进行RT-PCR检测显示,NB4细胞中NFI-A转录因子表达随浓度增加而降低,分别低于未经处理的0.6倍、2.0倍、1.1倍和1.5倍。c/EBPα基因表达随浓度增加而增加,分别是未经处理细胞的1.5倍、2.0倍、1.8倍和2.0倍。而在HL-60细胞中c/EBPα基因表达无明显差异,NFI-A仅在20nM浓度下表达下降差异显著,低于未经处理细胞的3.0倍。对NB4细胞中的NFI-A蛋白免疫印迹分析发现,经miR-223处理过的细胞中NFI-A蛋白含量随浓度增加而有所下降。结论：转染一定浓度miR-223至粒系白血病细胞中,能够抑制恶性细胞克隆增殖,其作用机制有可能通过竞争性抑制NFI-A转录因子表达,恢复与分化相关的c/EBPα转录因子的表达,来诱导粒系白血病细胞向成熟方向分化。     

油茶皂苷通过内质网应激途径诱导Jurkat细胞凋亡的研究

目的探讨油茶皂苷在体外诱导人白血病细胞Jurkat凋亡的作用及作用机制。方法将1～4μg/mL的油茶皂苷作用于人白血病Jurkat细胞,应用细胞计数考察油茶皂苷对细胞增殖的影响;用Western blot方法分析油茶皂苷对caspase-3、PARP、Bipc、hop、Perk、ATF6和IRE1蛋白表达的影响。结果油茶皂苷(1～4μg/mL)对Jurkat细胞的增殖产生明显的剂量依赖性抑制作用。免疫印迹结果显示,油茶皂苷可以使caspase-3激活,增加Cleaved PARP的表达量,而诱导Jurkat细胞发生凋亡;其作用机制是通过下调Bip和chop的表达,触发Perk、ATF6和IRE1 3个内质网应激跨膜蛋白而产生细胞凋亡的。结论 1～4μg/mL油茶皂苷具有抑制人白血病细胞增殖和诱导其凋亡的作用,其作用机制参与了细胞凋亡的内质网应激途径。     

瑞香狼毒诱导HL-60细胞凋亡和调节SGC-7901细胞bcl-2蛋白表达

目的：探索瑞香狼素（SC）抗肿瘤机制。方法：以HL－60和SGC－7901为靶细胞,用MTT比色法测定细胞增殖抑制,荧光显微镜观察凋亡细胞的形态学改变,DNA电泳和流式细胞仪检测DNA断裂,免疫组化检测bcl-2蛋白表达。结果：含SC药物血清处理细胞48h后,HL－60细胞增殖呈剂量依赖性抑制,并表现出典型的凋亡细胞形态学改变及DNA断裂;即染色体聚集,核固缩,断裂及阶梯状DNA电泳条带,G1期前细胞从11．7％增到57．4％;而SGC－7901细胞bcl-2蛋白表达率从78．3％下降到32．9％。结论：SC可诱导肿瘤细胞凋亡,降低bcl-2蛋白表达。     

黄芪、当归对血管平滑肌细胞粘着斑激酶表达和细胞凋亡的影响

目的：探讨黄芪,当归对体外培养的血管平滑肌细胞（VSMC）粘着斑激酶（FAK）表达和细胞凋亡的影响。方法：应用RT-PCR,Western blot检测黄芪,当归对FAK表达的影响;应用Greiss试剂检测VSMC培养液中NO2^-含量;应用流式细胞仪检测细胞凋亡及bcl-2和caspase-3表达活性。结果：黄芪,当归注射液可以显著抑制由碱性成纤维细胞生长因子所诱导的FAK表达。增加细胞培养液中的NO2^-含量,诱导cas-pase-3表达,下调bcl-2表达,促进体外培养的VSMC凋亡。结论：黄芪,当归诱导VSMC凋亡与其促进NO合成,抑制FAK表达,诱导促凋亡基因caspase-3表达及下调抗凋亡基因bcl-2表达有关。