人类甲状腺癌c—erbB—2癌蛋白和mRNA表达的研究

目的 观察人类甲状腺癌中ｃ－ｅｒｂＢ－２癌蛋白和ｍＲＮＡ的表达及其关系。方法 应用免疫组化和同位素点要交技术对新鲜浆冻甲状腺组织ｃ－ｅｒｂＢ－２癌蛋白和ｍＲＮＡ的表达进行研究。结果 ２１例甲状腺乳头癌癌中１４例ｃ－ｅｒｂＢ－２癌蛋白表达阳性,百其他类型肿瘤和非肿瘤组织均未见ｃ－ｅｒｂＢ－２表达。ｃ－ｅｒｂＢ－２、２ｍＲＮＡ表达研究显示,乳头状癌和淋巴结转移灶中ｍＲＭＡ的表达水平明显高于其他类型肿瘤     

癌基因c-erbB-2特异性核酶对胃癌细胞恶性表型的逆转

目的 探讨ｃ－ｅｒｂＢ－２特异性核酶对胃癌细胞恶性表型的影响。方法 根据计算机设计的人癌基因ｃ－ｅｒｂＢ－２特异性核酶ＲＺ１,合成ＲＺ１基因并构建其真核表达载体ｐＤＯＲ－ＲＺ１,在Ｌｉｐｏｆｅｃｔ ＡＭＩＮＥ＾ＴＭ的介导下转染胃癌细胞ＳＧＣ－７９０１。流式细胞仪分析转染的胃癌ｃ－ｅｒｂＢ－２产物Ｐ１８５的表达。     

PCNA和p53,c—erbB—2癌基因蛋白在乳腺癌前病变及癌 …

目的 研究乳腺非典型增生及癌变过程中ＰＣＮＡ及癌基因蛋白ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２的变化规律,并探讨在此过程中细胞增殖活性与ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因蛋白表达的关系。方法 应用免疫组化法分析了８６例良恶性乳腺组织中的ＰＣＮＡ,癌基因蛋白ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２表达及其相互关系。结果 ＰＣＮＡ、ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２的表达随非典型增生程度的增加而增多。ｐ５３、ｃ－ｅｒｂＢ－２阳性表达病例ＰＣＮＡ     

切割bcl-2 mRNA核酶对人胆管癌细胞致瘤性的影响

目的 研究切割ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ核酶对人胆管癌细胞致瘤性的影响。方法 将合成的切割ｂｃｌ－ｍＲＮＡ核酶基因与真核细胞表达载体重组,并用重组后的载体转染人胆管癌细胞,再将经转染的胆管癌细胞接种于裸鼠皮下,观察该肿瘤细胞的致瘤情况。结果 转染切割ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ核酶基因的胆管癌细胞的ｂｃｌ－２表达水平及裸鼠体内致瘤性（０／５）较对照组（８／１０和５／５）明显下降。结论 该切割ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ核酶能     

鼻咽癌中C—erbB—2癌基因产物表达与AgNOR值定量关系的探讨

我们对我院１９９３年－１９９６年６月８５例鼻咽癌作Ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因蛋白产数计数，及ＡｇＮＯＲ胶银计数，鼻咽癌中Ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因，阳性率为２９．４１％和ＡｇＮＯＲ〉６／核，无差别显著性，Ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因阳性率为２９．４１％和ＡｇＮＯＲ≤４创性表达率的差别有高度显著性。以上数据表明Ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因产物及ＡｇＮＯＲ数目多少不仅可视为一种标志，而且与鼻咽癌肿瘤的分化程度有着密切的关     

乳腺癌c—erbB—2癌基因表达与预后的关系

乳腺癌ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因表达与预后的关系高维实张境吴晓梅胡小丽德力郑建华杜纯礼近年来，一些作者认为ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因蛋白在乳腺癌过度表达提示患者预后不良，已将它视为确定乳腺癌病人预后的一项指标。我们对我院乳腺癌病人进行随访，探讨ｃ－ｅｒｂＢ－...     

切割bcl-2 mRNA核酶诱导人胆管癌细胞凋亡的形态学改变

研究切割ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ核酶诱导胆管财亡的形态学改变。方法将合成的切割ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ核酶民真核细胞表达载体重组,并用重组后的载体转染人胆管癌细胞,通过光镜及扫描和透射电镜手段,观察转染后的胆管癌细胞,通过光镜及扫描和透射电镜手段,观察传染后的胆管癌细胞凋亡的形态学改变。     

c—myc基因特异核酶的设计及其对靶mRNA的切割

目的：针对ｃ－ｍｙｃ基因第二外显子部分序列设计核酶，探讨生理温度下核酶的切割活性，方法：计算机模拟分析ｃ－ｍｙｃ基因第二外显子部分二级结构，选择核酶切位点，设计核酶，分别构建ｃ－ｍｙｃ基因第二外显子部分序列和核酶体外转录载体并经双脱氧末端终止法测定核酶序列正确无误，体外转录核酶和靶ＲＮＡ分子，生理温度下测定核酶切割活性，结果：所设计的核酶可有效地切割靶ｍＲＮＡ分子。结论：所设计的核酶在生理温度下具     

C—erbB—2癌基因蛋白与类固醇激素受体联合检测在乳腺癌预后中…

探讨Ｃ－ｅｒｂＢ－２癌基因蛋白五粝固醇激素受体联合检测在乳腺癌预后判断中的价值及两者的关系。用免疫组化技术对５７例乳腺良恶性肿瘤进行了Ｃ－ｅｒｂ－Ｂ－２癌基因蛋白，类固醇激素受体的检测。结果５０例乳腺癌中２１例Ｃ－ｅｒｂＢ－２过度表达，均为浸润性导管癌。７例良现变均为阴性，ＥＲ，ＰＲ，ＡＲ阳性率分别为７２％，６２％，６６％。     

c—erbB—2和PCNA在子宫内膜良恶性病变表达的定量研究

目的：探讨宫内膜良恶性病变癌基因ｃ－ｅｒｂＢ－２和ＰＣＮＡ阳性细胞体数密度有无明显差别。方法：应用免疫组化技术对１０８ 例宫内膜增生过长、宫内膜癌中癌基因ｃ－ｅｒｂＢ－２、ＰＣＮＡ表达的阳性细胞进行体视学计数。结果：在宫内膜恶性病变中两者阳性细胞的体数密度明显高于良性病变,差别有统计学意义（Ｐ＜ ０．０１）。结论：测定ｃ－ｅｒｂＢ－２和ＰＣＮＡ阳性细胞体数密度可以作为临床判断宫内膜病变良恶性的辅助指标     

核酶抑制N2a细胞血栓素合酶mRNA的表达

根据“锤头状结构”核酶的设计原理,以小鼠全长血栓素合酶（TXS）mRNA为靶系更,计算机预测其二级结构,设计核酶,并人工合成核酶对应的DNA片段,克隆入真核表达载体pEGFP-C1,经脂体转染N2a细胞,用原位杂交的方法检测TXSmRNA的表达水平。结果表明：针对小鼠TXSmRNA的核酶R15、R544、对内毒素刺激的N2a细胞TXSmRNA的表达具有显著的抑制作用,核酶R15、R544可望用于基因治疗,抑制病理条件下TXSmRNA的表达。     

Bcr—abl特异性系列核酶体外切割活性比较及诱导K562细胞凋亡？…

构建单、双及三单位核酶、鉴定其体外切割活性及对Ｋ５６２生物学特性的影响,探讨核酶用于基因治疗的前景。方法首先针对ｂｃｒ－ａｂｌ融合位点设计并合成３个单核酶,耐后通过基因重组构建单、双及三核酶载体,以体外切试验鉴定并比较其活性。     

Effect of hammerhead ribozyme that specifically cleaves c—myc mRNA on proliferation of vascular smooth muscle cells

Ojective:To investigate the effect of hammerhead ribozyme that specifically cleaves c-myc mRNA on the proliferation of vascular smooth muscle cells (VSMCs).Methods:Based on the computer analysis of the secondary structure of c-myc mRNA,nt 2029 in rat c-myc oncogene was selected as a cleaving site for hammerhead ribozyme and the ribozyme was designed.With automatic DNA synthesizer,the two complementary DNA strands of the ribozyme were synthesized.The ribozyme gene was cloned into pGEM3Zf( ) vector and subcloned into eukaryotic expression pcDNA3 vector.The recombinant pcDNA-Rz was transfected into the cultured rat VSMCs by lipofectAMINE mediated DNA transfection protocol and individual cell clones were selected by G418.Results:The sequence of ribozyme gene inserted in pGEM3Zf( ) vector was proved to the perfectly correct.In VSMCs transfected with recombinant pcDNA-Rz, flow cytometry analysis showed that the Sphase and G2/M fractions were decreased significantly and cell proliferation stagnated in the G0/G1 phase.Conclusion:The results suggest that hammerhead ribozyme the specifically cleaves cmyc mRNA can significantly inhibit the proliferation of VSMCs.     

c-myc基因mRNA核酶对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的：构建特异性切割c-myc基因mRNA的锤头状核酶（Ribozyme)真核表达载体。探讨核酶对血管平滑肌细胞（VSMCs)增殖的影响。方法：计算机分析大鼠c-myc基因mRNA的二级结构，选择第2029位点作为锤头状核酶的切割位点并设计相应的核酶。采用DNA合成仪合成核酶基因，以克隆技术将核酶基因构建人pGEM3Zf( )体外转录载体，以Sanger双脱氧末端终止法测定核酶基因的序列后，通过亚克隆将核酶基因构建入pcDNA3真核表达载体；核酶真核表达载体以阳离子脂质体LipofectAMINE作为介导，转染体外培养的第5代SD大鼠VSMCs，经G418筛选出细胞克隆，流式细胞仪测定VSMCs的细胞周期。结果：核酶基因准确克隆入pGEM3Zf( )载体，DNA序列测定表明所克隆入的核酶基因序列正确；经过亚克隆将核酶基因准确克隆入pcDNA3载体（pcDNA-Rz);pcDNA-Rz转染VSMCs经G418筛选出多个抗性细胞克隆，扩大培养获得转染细胞；细胞周期分析显示，pcDNA-Rz转染细胞的细胞周期有明显变化，S期和G2/M期比率明显减少，细胞生长阻滞于G0/G1期，细胞增殖指数明显降低。结论：特异性切割c-myc基因mRNA核酶对体外培养VSMCs的增殖具有明显的抑制作用。     

c-myc基因核酶对靶mRNA的切割作用

目的：构建c—myc基因核酶及其靶mRNA的体外转录载体，探讨核酶对靶mRNA的体外切割作用。方法：通过计算机分析c—myc基因mRNA的二级结构，设计核酶基因序列，采用DNA合成仪合成核酶基因，以克隆技术将核酶基因构建入pGEM3Zf( )体外转录载体，将大鼠c—myc基因第2外显子及部分第3外显子的基因片段克隆入pGEM7Zf(-)体外转录载体，分别进行体外转录获得核酶及靶mRNA。在含有Mg^2 的反应体系中，进行核酶对靶mRNA的体外切割反应。结果：经限制性内切酶酶切鉴定，核酶基因准确克隆入pGEM3Zf( )载体，经DNA自动序列分析仪测序分析，大鼠c—myc基因第2外显子及部分第3外显子的基因片段准确克隆入pGEM7Zf(-)载体。核酶对靶mRNA的体外切割活性约为64．5％。结论：该核酶具有切割靶mRNA的活性，可进一步用于细胞内和体内研究。     

Bridge Sequence对M1GS核酶体外切割活性的影响

目的探讨B ridge Sequence(桥序列)对M1GS核酶体外切割活性的影响,从而为人工M1GS核酶的优化设计提供一定的理论依据。方法以含大肠杆菌核酶P催化单位(M1 RNA)基因的pFL117质粒作为模板,通过巧妙设计不同的下游引物,经PCR扩增、扩增产物克隆及克隆基因的体外转录,构建一组具有不同桥序列的人工M1GS核酶。进一步将所构建的上述人工M1GS核酶分别与同位素标记的底物RNA片段进行体外切割试验,并通过同位素扫描成像系统对各M1GS核酶的切割产物加以分析。结果成功构建了针对HCMV UL54mRNA T7靶位的、四种不同桥序列长度的M1GS核酶,其桥序列长度分别为0n、t6nt、20nt和88nt,并依次命名为M1GS-T7(0)、M1GS-T7(6)、M1GS-T7(20)和M1GS-T7(88)。经体外切割试验证实,M1GS-T7(88)的靶向切割活性最强,M1GS-T7(20)的切割活性相对较弱,而M1GS-T7(0)及M1GS-T7(6)则无明显的切割活性。结论人工M1GS核酶中桥序列的长度对于其体外切割活性具有重要影响,提示在人工M1GS核酶的优化设计时,桥序列的长度是不可忽视的因素之一。     

抗乙型肝炎病毒特异联合型核酶的体外切割作用

目的：探讨单一及多位点核酶对乙型肝炎病毒靶ＲＮＡ的切割作用。方法：利用计算机辅助设计针对乙型肝炎病毒Ｃ基因的三个单一核酶及特异联合型核酶,构建三个核酶各自及三个核酶串联的自剪切转录载体（ｐＧＥＭＲｚ１２３）观察单一及串联核酶（Ｒｚ１２３）对靶ＲＮＡ的切割作用。结果：构建的串联核酶自剪切转录载体体外转录后,在顺式核酶发生自剪切后可将目的核酶正确地释放出来,计算机设计的单一核酶体外可剪切靶ＲＮＡ,串联     

核酶对膀胱癌细胞系多药耐药性的逆转研究

目的：探讨核酶对膀胱癌多药耐生的逆转效应。方法：设计针对ｍｄｒ１ｍＲＮＡ１９５９位ＧＵＣ的“锤头状”（Ｈａｍｍｅｒｈｅａｄ）核酶（Ｒｉｂｏｚｙｍｅｌ,ＲＺ１）基因,定点克隆于逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ的ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ位点上,重组出带有核酶基因的逆转录病毒质粒ｐＬＸＳＮ－ＲＺ１。应用脂质体ＤｏＴａｐ将ｐＬＸＳＮ－ＲＺ１导入到耐药的人膀胱癌细胞少。结论：本研究中设计的核酶能明显逆转膀胱癌细胞系多     

针对bcr-abl融合基因不同位点的三个单核酶体外切割活性的比较

目的：针对ｂｃｒ－ａｂｌ融合基因设计并构建了３个针对不同位点的特异性单核酶体转录载体,通过体外切割试验比较其对ｂｃｒ－ａｂｌ合基因的切割效率,为慢粒基因治疗打下基础。方法：（１）首先针对ｂｃｒ－ａｂｌ融合位点设计,合成３个相邻的锤头状核酶,将其定向克隆入改建的ｐＤＥＳ载体中,构建３个单核酶体外转录载体并进行序列测定。（２）同时通过ＰＣＲ方法扩增ｂｃｒ－ａｂｌ融合位点３７６ｂｐ序列,克隆人ｐＢｌｕｅ