格林巴利综合征患者脑脊液髓鞘碱性蛋白抗体测定及其抗原制备

目的探讨格林巴利综合征(GBS)是否存在中枢神经系统脱髓鞘现象.方法应用酸提法从胎儿大脑白质中提取髓磷脂碱性蛋白(MBP),经Sephdex-G150柱层析纯化和SDS-PAGE圆盘电泳分析,以纯化的MBP为抗原,用EUSA法测了44例GBS患者、38例其他神经疾病(OND)患者和33例正常人.结果经酸提后的碱蛋白,共有3个洗脱峰;SDS-PAGE证实第三峰中含1.7kD和2.1kD两条区带;GSF-MBP-EgG检测,GBS组阳性率为38.6%(17/44),OND组阳性率为34%(13/38),对照组阳性率为9%(3/33).结论MBP作为髓鞘的主要蛋白在GBS的自身免疫性脱髓鞘的过程中起重要作用.     

MBP、TNF-α在Guillain-Barré综合征与MS发病机制作用的比较

[摘要] 目的 了解Guillain-Barré综合征（GBS）和多发性硬化(MS)患者血清髓鞘碱性蛋白(MBP)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平,探讨MBP及TNF-α在GBS和MS发病过程中的作用。方法 采用ELISA对24例GBS和36例MS患者的血清MBP和TNF-α进行测定,并与28例其他神经系统疾病(OND组)和30例正常对照(NC组)进行比较。结果 MS组和GBS组的MBP,TNF-α水平均高于OND组及对照组(均P<0.01),且GBS组的MBP,TNF-α的水平高于MS组(P<0.01)。结论 MBP,TNF-α水平在GBS和MS均升高,尤其是在GBS中,MBP、TNF-α升高较明显。MBP,TNF-α在GBS和MS发病机制中起重要作用。     

ROC曲线在评价髓鞘碱性蛋白早期诊断Guillain-Barre综合征中的应用

目的运用受试者工作特征（ROC）曲线评价脑脊液（CSF）及血清（Serum）中髓鞘碱性蛋白（MBP）早期诊断Guillain-Barre综合征（GBS）的价值。方法用ELISA法检测GBS组（36例）中MBP的水平并和对照组（33例）相比较。运用ROC曲线评价CSF及Serum中MBP诊断GBS的敏感性及特异性。结果GBS组CSF中MBP的水平明显高于对照组（P〈0．01）,Serum中MBP水平和对照组相比差异无统计学意义。CSFMBP诊断GBS的ROC曲线下面积（AUC）为0．804&#177;0．056,最佳分界值为0．65pg／mL。以CSFMBP≥0．65pg／mL来预测GBS,敏感性为80．6％,特异性为78．8％。Serum MBP ROC曲线的AUC为0．548&#177;0．070,最佳分界值为0．20pg／mL。以Serum MBP≥0．20pg／mL来预测GBS,敏感性为44．4％,特异性为69．7％。两条曲线AUC的差异有统计学意义（P〈0．01）。结论CSFMBP水平对诊断早期GBS有一定的准确性,可以作为早期诊断GBS较为敏感的指标。     

小鼠黑色素瘤凝集的分离纯化

目的：制备并纯化小鼠黑色素凝集素（MMA）。方法：利用亲合层析及凝胶过滤层桥从小鼠B16黑色素瘤中分高纯化小鼠黑色素瘤凝集素（MMA）。结果：利用亲和层材制备的凝集素,经SDS-PAGE显示出一条分子量12．4kD的主要蛋白带和两个分子量为35kD和67kD的痕迹蛋白带;经凝胶过滤层析则出现分子量为26kD主峰及分子量为35kD和67kD的两个小峰。26kD的蛋白成分经SDS－PAGE和等电聚焦电泳显示出一条均一的蛋白带。26kD的蛋白成分特异性识别会多聚乙酰氢基乳精的糖链,活性依赖于巯基而非钙离子。结论：26kD的成分为MMA,利用经亲和层析和凝胶过滤层析等可得到成分均一的MMA,MMA为S型凝集素。     

ROC曲线在评价髓鞘碱性蛋白早期诊断Guillain-Barré综合征中的应用

目的运用受试者工作特征(ROC)曲线评价脑脊液(CSF)及血清(Serum)中髓鞘碱性蛋白(MBP)早期诊断Guillain-Barré综合征(GBS)的价值。方法用ELISA法检测GBS组(36例)中MBP的水平并和对照组(33例)相比较。运用ROC曲线评价CSF及Serum中MBP诊断GBS的敏感性及特异性。结果GBS组CSF中MBP的水平明显高于对照组(P<0.01),Serum中MBP水平和对照组相比差异无统计学意义。CSF MBP诊断GBS的ROC曲线下面积(AUC)为0.804±0.056,最佳分界值为0.65pg/mL。以CSF MBP≥0.65pg/mL来预测GBS,敏感性为80.6%,特异性为78.8%。Serum MBP ROC曲线的AUC为0.548±0.070,最佳分界值为0.20pg/mL。以Serum MBP≥0.20pg/mL来预测GBS,敏感性为44.4%,特异性为69.7%。两条曲线AUC的差异有统计学意义(P<0.01)。结论CSF MBP水平对诊断早期GBS有一定的准确性,可以作为早期诊断GBS较为敏感的指标。     

MBP、抗神经节苷脂抗体与格林-巴利综合征亚型及严重度相关性分析

目的：通过检测格林-巴利综合征（GBS）患者血清麦芽糖结合蛋白（MBP）和抗神经节苷脂抗体水平,探讨其与格林-巴利综合征亚型及严重度的相关性。方法选用2009年3月至2012年3月在我院治疗的格林-巴利综合征患者90例作为观察组,选取同期其他神经系统疾病患者90例作为对照1组和健康体检者100例作为对照2组。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测三组受试者的血清MBP和抗神经节苷脂抗体水平,并进行对比分析。结果（1）观察组血清MBP水平、抗神经节苷脂抗体阳性率均显著高于对照1组和对照2组,其差异均有统计学意义（P〈0.05）;对照1组血清中MBP水平显著高于对照2组,两组MBP差异具有统计学意义（P〈0.05）。（2）急性炎性脱髓鞘性多发性神经根神经病（AIDP）患者血清MBP水平与急性运动轴索型神经病（AMAN）、急性运动感觉轴索型神经病（AMSAN）及米勒费雪症候群（MFS）比较差异均无统计学意义（P〉0.05）;AIDP患者血清抗神经节苷脂抗体阳性率显著高于AMAN、AMSAN及MFS ,其差异均有统计学意义（P〈0.05）。（3）病情等级越高GBS患者血清中MBP水平、抗神经节苷脂抗体阳性率越高,不同等级间的差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 MBP、抗神经节苷脂抗体与格林-巴利综合征严重度呈正相关,抗神经节苷脂抗体可能与格林-巴利综合征亚型AIDP相关。     

格林-巴利综合征患者脑脊液和血清中髓鞘碱性蛋白与IL-16的检测

格林-巴利综合征（GBS）又称急性感染性多发性神经炎、急性炎症性脱髓鞘性多发性神经病，常可导致全身性瘫痪，是病因未明，病情进展迅速而大部分可恢复的运动神经疾病。我们对24例GBS病例的血清和脑脊液（CSF）髓鞘碱性蛋白（MBP）和IL-16和进行了研究。现报告如下。     

结核分支杆菌Ag85B融合蛋白表达载体的构建及纯化

目的：构建结核分支杆菌Ag85B基因在大肠杆菌的融合表达载体,制备MBP／Ag85B融合蛋白并将其纯化。方法：常规方法构建重组表达质粒pMAL-p2-Ag85B,内切酶EcoRⅠ/HindⅢ酶切鉴定;重组表达质粒pMAL-p2-Ag85B转化大肠杆菌,经0．3mmol／L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（isopropyl-β-D thiogalactoside,IPTG）诱导表达产生融合蛋白（MBP／Ag85B）,Western blot鉴定表达产物。pMAL纯化树脂（Amylose resin）对MBP／Ag85B融合蛋白纯化。结果：重组质粒pMAL-p2-Ag85B经EcoRⅠ／HindⅢ酶切后,1％琼脂糖凝胶电泳证实Ag85B正向插入pMAL-p2载体,重组菌经IPTG诱导后,有约70kD蛋白表达,与预期的融合蛋白分子量相符,蛋白表达量约占细菌总蛋白量的40％;Western blot显示,MBP／Ag85B融合蛋白与人抗结核IgG抗体呈特异性反应;经Amylose resin纯化后,MBP／Ag85B融合蛋白的纯度可达95％以上。结论：成功构建结核分支杆菌Ag85B重组融合蛋白表达质粒并制备及纯化其融合蛋白,为进一步研究Ag85B生物学功能及其抗原表位分析奠定了物质基础。     

MBP、IL-16在Guillain-Barré综合征发病中的机制

目的 探讨髓鞘碱性蛋白(MBP)和白细胞介素16(IL-16)在Guillain-Barré综合征(GBS)发病过程中的变化.方法 用ELISA法检测GBS组(36例)中MBP和IL-16的水平,并与多发性硬化(MS)组(45例)及对照组(33例)相比较.结果 GBS、Ms和对照组3组中CSF MBP的水平均明显高于Serum MBP的水平(P＜0.01),而CSF IL-16的水平均明显低于Serum IL-16的水平(P＜0.01).GBS组CSF中MBP的水平明显高于对照组(P＜0.01)但低于MS组(P＜0.01),Serum中MBP水平和对照组相比无明显差异但低于MS组(P＜0.01).CSF中的IL-16水平明显高于对照组(P＜0.05),但与MS组相比无明显差异,Serum中IL-16的水平低于对照组(P＜0.01)但与MS组相比无明显差异.结论 GBS发病早期神经根髓鞘的脱失可能更严重,中枢神经系统局部产生的IL-16参与了GBS神经根脱髓鞘的炎症过程.     

结核分支杆菌38KD蛋白基因克隆及在大肠杆菌中的表达

目的构建和克隆结核分枝杆菌38kD蛋白的基因，以转基因技术导入大肠杆菌，诱导表达，以获得大量38kD抗原。方法根据GenBank上编码38kD蛋白的基因系列，设计一对特异引物，通过PCR技术从结核分支杆菌H37Rv基因扩增出38kD蛋白基因片段；目的基因连接到克隆载体pMD 18-T Simple Vector，测序鉴定，目的片段双酶切下来克隆到原核表达载体pET-30a中，成功构建成带有N末6His-tag的融合表达载体。表达载体用化学转化法转化E．coli BL21（DE3），用菌落PCR筛选得到阳性克隆；经1mmol／L IPTG诱导4h表达外源蛋白；而且在37℃时蛋白表达量最高；二烷基磺酸钠一聚丙稀酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）分析结果。结果38kD序列与GenBank报道完全一致；用菌落PCR筛选得到阳性克隆；经1mmol／L IPTG诱导4h表达外源蛋白；而且在37℃时蛋白表达量最高；二烷基磺酸钠-聚丙稀酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）分析结果显示，在大约38kD处有表达产物特异条带；可溶性分析表明，该重组蛋白在大肠杆菌中主要以包涵体的形式存在；纯化的包涵体纯度达到90％。结论获得38kD蛋白工程菌株，为将此抗原用于临床诊断应用打下基础。     

利用序列特异性DNA亲和层析分离纯化一种前列腺细胞核蛋白

目的：分离纯化RFA结合蛋白并加以鉴定，为进一步深入研究RFA及其结合蛋白相互作用和参与AR介导的PSA基因表达奠定基础。方法：培养人前列腺癌细胞PC-3，提取核蛋白，以PFA序列为探针进行亲和层析分离纯化目的蛋白，层析前后均用电泳迁移率变动分析（EMSA）检测目的蛋白的功能。经SDS-PAGE测定纯化蛋白的分子量，然后切下目的蛋白条带，进行蛋白质鉴定，结果：纯化蛋白在SDS-PAGE图谱上36kD附近呈现单一条带，氨基酸组成分析和质谱分析显示纯化蛋白条带含有2种蛋白，与核内不均一核糖核蛋白A1，A2（hnRNPA1,A2)高度同源。结论：（1）以DynalM-280链亲和素磁珠为固相介质的DNA亲和层析，具有简便，快速、无毒的优点，可在对目的蛋白了解甚少的条件下，以较高的纯度将其纯化；（2）RFA结合蛋白与hnRNP超家族成员hnRNAA1，A2高度同源，其与RFA相互作用的具体机制和意义有待进一步研究。     

炎性脱髓鞘疾病患者S-100b和MBP的检测及其意义

目的:通过检测炎性脱髓鞘疾病患者脑脊液(CSF)中S-100b和碱性髓鞘蛋白(MBP)的含量及其相互关系,对炎性脱髓鞘疾病的发病机制进行探讨,并对S-100b的临床意义进行评价。方法:对43名多发性硬化患者(MS)、25名格林-巴利患者(GBS)和39名正常对照者分别采用酶联免疫吸附试验检测脑脊液S-100b水平,同时应用改良的酶联免疫吸附同步法检测MBP含量以及应用改进的Thompson聚丙稀酰胺凝胶电泳法检测寡克隆IgG区带。结果:MS组和GBS组CSF中的S-100b及MBP水平均显著升高,与正常对照组比较有显著性差异(P<0.01),两者具有相关性(P<0.01);两组CSF IgG-OB阳性率(分别为83.7%、68.0%)也显著高于正常对照组(均为P<0.01)。结论:S-100b可能参与了炎性脱髓鞘疾病的发病机制,S-100b、MBP水平在一定程度上反映了脱髓鞘患者的严重程度,有助于病情预后的判断。     

Guillain-Barre综合征54例回顾性分析

目的：回顾性分析54例以植物神经功能障碍（AD）为首发症状的Guillain—Bane综合征（GBS）患者的临床特征、实验室检查及误诊率。方法：对54例以AD为首发症状的GBS综合征患者的临床资料进行回顾性分析。结果：94．舭的患者有肌无力，以肢体远端为主；83．3％患者有感觉障碍；电生理检查86．0％患者有周围神经脱髓鞘性改变；53．7％患者合并颅神经损害；心电图异常率为38．9％。结论：以AD为首发症状的GBS临床上较多见，早期误诊率高，应引起临床高度重视。     

福建产舟山眼镜蛇毒细胞毒素的快速分离纯化及鉴定

目的 从舟山眼镜蛇毒中分离纯化细胞毒素(CTX)，并鉴定其理化性质。方法 采用SP—Sephadex C-25阳离子交换色谱及Sephasil Peptide C18反相高效液相色谱法从舟山眼镜蛇毒中分离纯化CTX，SDS—PAGE(Tris—Tricine系统)鉴定纯度，Edman降解法测定N端氨基酸序列。结果 粗毒经阳离子交换色谱，得到14个蛋白峰，其中第X～XⅢ峰具CTX活性；再分别经反相色谱纯化，得到4个CTX．总得率为32.48％；SDS—PAGE显示为均一蛋白，分子量依次为：7．28，7．33，7．24和7．38kD；测定它们N端20个氨基酸序列。结论 采用阳离子交换和反相高效液相色谱可快速、高效地从眼镜蛇毒中获得4个CTX纯品。     

葡萄糖转运蛋白1对恶性胸腔积液的诊断价值

目的评价葡萄糖转运蛋白1（GLUT-1）在恶性胸腔积液中的诊断价值。方法收集嘉峪关市第一人民医院病理科2007年1月至2010年4月送检的胸腔积液85例,其中经组织学和临床资料证实的原发性肺癌32例、转移性肺癌12例、恶性间皮瘤3例、非肿瘤性胸腔积液38例。采用免疫细胞化学SP法检测胸腔积液中细胞GLUT-1的表达情况。结果 GLUT-1表达阳性率在腺癌组为90%（18/20）,鳞癌组为100%（12/12）,转移性肺癌组为91.7%（11/12）,恶性间皮瘤组为100%（3/3）。GLUT-1诊断恶性胸腔积液的敏感度和特异度为93.6%（44/47）和97.4%（37/38）。传统细胞学诊断恶性胸腔积液的特异度为100%（38/38）,但敏感度仅为66.0%（31/47）。结论恶性胸腔积液GLUT-1的表达阳性率较高,GLUT-1对恶性胸腔积液的诊断具有较高的敏感度和特异度,可以作为鉴别恶性胸腔积液的可靠标记。     

Cloning and expression and purification of Hepatitis B e-antigen precursor in Escherichia coli

目的：研究仅存在宿主细胞内的HbeAg前体蛋白（25kD）在乙型肝炎发病机制中的作用和QIAGEN表达和纯化系统在HBV研究中的价值。方法：HBV前C/C基因被克隆到表达载体pQE30中,HbeAg前体蛋白（25kD）在大肠杆菌中表达后纯化,经ELISA和western blot检测其是否具有成熟HbeAg（17kD）的抗原性。结果：表达载体中的克隆片段经测序后证实为ayw亚型。在T5启动子的调节下可表达25kD的可溶性溶合蛋白,合成的HbeAg前体蛋白在与抗Hbe反应方面具有与成熟HbeAg（17kD）相同的抗原性。表达的HbeAg前体蛋白经纯化后纯度可达89.6％。每升诱导后的菌液可得到HbeAg前体蛋白2.4mg。结论：HbeAg前体蛋白（25kD）具有与成熟HbeAg相同的反应原性,在乙型肝炎的发病机制中可能起着重要作用。     

应用ROC曲线评价髓鞘碱性蛋白对多发性硬化的诊断价值

目的 运用受试者工作特征(ROC)曲线评价脑脊液(CSF)及血清中髓鞘碱性蛋白(MBP)诊断多发性硬化(MS)的价值.方法 用ELISA法检测MS组(45例)患者CSF及血清中MBP水平,并与Guillain-Barre综合征(GBS)组(36例)及对照组(33例)相比较.运用ROC曲线评价CSF及血清中MBP诊断MS的敏感性及特异性.结果 MS组中CSF和血清中MBP水平均显著高于GBS组(P<0.01)及对照组(P<0.01).CSF中MBP诊断MS的ROC曲线下面积(AUC)为0.853±0.037,最佳分界值为0.87 pg/ml.以CSF中MBP≥0.87 pg/ml来预测MS,敏感性为83.7%,特异性为78.3%.血清MBP ROC曲线的AUC为0.761±0.046,最佳分界值为0.25 pg/ml.以血清MBP≥0.25 pg/ml来预测MS,敏感性为62.8%,特异性为73.9%.两条曲线AUC的未达统计学差异(P>0.05).结论 CSF及血清MBP水平对诊断MS均有一定的准确性,两者联合可以作为诊断MS较为敏感的指标,CSF中MBP比血清MBP敏感性更高.     

人类8型疱疹病毒K8.1N基因编码包膜糖蛋白的原核表达及其抗原特异性分析

目的：制备人类8型疱疹病毒（HHV-8）K8.1N基因编码包膜糖蛋白的原核表达融合蛋白,并鉴定其抗原特异性。方法：将重组质粒pET41a-K8.1N转化大肠杆菌BL21感受态细胞,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导表达谷胱甘肽S转移酶（GST）/K8.1N融合蛋白,经Glutathione Sepharose4B亲和层析柱纯化。采用Western blot法观察GST/K8.1N融合蛋白（作为抗原）与新疆地区、法国卡波西肉瘤（KS）患者血清以及四川健康儿童血清的血清学反应。结果：IPTG诱导后的菌体裂解蛋白,经12%聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）后,显示有一个46kD的融合蛋白表达,经Westernblot法鉴定此融合蛋白能被KS患者血清特异性地识别,新疆地区KS患者血清检出率为78.6%,法国KS为12.0%,四川健康儿童血清无一例与GST/K8.1N融合蛋白发生反应。结论：HHV-8包膜糖蛋白编码基因在大肠杆菌BL21中获得正确表达,并与KS患者血清具有特异识别性。     

大麻素对双环己酮草酰二腙诱导的脱髓鞘模型小鼠髓鞘的修复作用

目的：探讨大麻素（WIN55212-2）对双环己酮草酰二腙（cuprizone）诱导的脱髓鞘模型小鼠髓鞘的修复作用,阐明其可能机制。方法：选取C57BL/6小鼠95只,随机分为空白对照组、模型组（0.2%的cuprizone饲料喂养6周）、二甲基亚砜（DMSO）组（0.2% cuprizone饲料喂养3周后开始腹腔注射等量的DMSO混合液）和治疗组（0.2% cuprizone饲料喂养3周后开始腹腔注射1 mg·kg^-1 WIN55212-2）。采用黑金Ⅱ髓鞘染色技术对小鼠髓鞘组织染色,观察其组织形态表现;采用Western blotting法检测小鼠大脑组织中结侧蛋白（JN）、髓鞘碱性蛋白（MBP）和转录因子Nkx2.2蛋白表达水平。结果：黑金Ⅱ髓鞘染色,空白对照组小鼠大脑胼胝体区域有明显的着色,模型组小鼠大脑胼胝体区着色较浅。与空白对照组比较,模型组小鼠大脑组织中JN和MBP蛋白表达水平均明显降低（P<0.05）;与模型组和DMSO组比较,治疗组小鼠大脑组织中JN和Nkx2.2蛋白表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：大麻素可能通过转录因子Nkx2.2蛋白促进cuprizone诱导的脱髓鞘模型小鼠大脑组织中JN蛋白表达,促进髓鞘再生和修复。     

PTEN在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的：研究抑癌基因PTEN在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及其意义。方法：收集78例NSCLC及临床资料。采用免疫组织化学SP法检测PTEN蛋白表达情况。结果：PTEN蛋白表达阳性率在NSCLC中为57．69％（45／78），其中在鳞癌为54．00％（27／50），腺癌为64．29％（18／28）（P〉0．05）；PTEN蛋白表达阳性率随NSCLC分化程度的降低而降低，在高分化组为76．47％（13／17），中分化组为60．00％（24／40），低分化组为38．10％（8／21），低分化组与高分化组、中分化组之间比较差异均有显著性（P〈0．01，P〈0．05）；在Ⅰ、Ⅱ期者为72．92％（35／48），Ⅲ、Ⅳ期者为33．33％（10／30）（P〈0．01）；有淋巴结转移的病例为47．92％（23／48），无转移的病例为73．33％（22／30）（P＜0．05）；PTEN蛋白表达阳性者两年生存率为65．67％，表达阴性者为9．09％，两者之间差异有显著性（P〈0．01）。结论：PTEN蛋白表达阳性率的降低与NSCLC的分化程度差、TNM分期高、淋巴结转移及病人的生存期降低相关，可能作为判断预后的指标之一。