福建产眼镜王蛇毒神经毒素的分离及活性测定

目的 从眼镜王蛇蛇毒中分离神经毒素，测定其活性和毒性。方法 应用CM—Sephadex C-50离子交换色谱，阶段梯度洗脱分离粗毒；用Sephadex G-50凝胶过滤纯化组分；用大鼠体外膈神经-膈肌标本鉴定分离组分对神经-肌肉接头的作用性质；观察神经毒素对乙酰胆碱(Ach)引起蛙体外腹直肌收缩的量效曲线的影响；以Meier法测定神经毒索对小鼠的半数致死量(LD50)。结果 眼镜王蛇粗毒经阳离子交换色谱后获得A～N共14个蛋白峰，经鉴定E、F、G，H、I、K等6个蛋白峰具有阻断神经一肌肉接头传导的作用，被鉴定为神经毒素，约占粗毒的48．3％；通过凝胶过滤对E、G和K组分进行初步纯化；E、G和K组分可使Ach引起的蛙腹直肌收缩的量效曲线平行右移，它们与N2-胆碱受体(N2-AchR)的解离常数(KD)分别为：145．87，73．53和20．04ng／mL；E、G和K组分小鼠静脉注射的LD50分别为：0．884，0．749和1．58mg／kg。结论 眼镜王蛇粗毒经离子交换色谱获得6个神经毒索组分，经鉴定E、G和K组分为N2-AchR的竞争性拮抗剂。     

舟山眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶的分离纯化、理化及酶学性质

目的 从舟山眼镜蛇蛇毒中分离L-氨基酸氧化酶(LAO),测定其理化和酶学性质.方法 应用Sephadex G-100凝胶色谱和POROS CM20离子交换色谱分离纯化LAO;Wellner和Lichtenberg法测定LAO活力,SDS-PAGE法测定相对分子质量.结果 舟山眼镜蛇蛇毒经Sephadex G-100凝胶色谱和两次POROS 20离子交换色谱后,获得LAO纯品(暂定名NA-LAO).NA-LAO在非还原和还原条件下相对分子质量均为58 kD左右;其反应最适pH为8.0,最适温度为60℃,对L-苯丙氨酸的米氏常数(Km)为3.08 mmoL/L.结论 应用凝胶过滤色谱和离子交换色谱可从舟山眼镜蛇毒中分离纯化LAO.     

广西产圆斑蝰蛇毒神经生长因子的分离纯化及鉴定

目的 从蝰蛇蛇毒中分离纯化神经生长因子(NGF)。方法 粗毒采用CM52阳离子交换柱层析，DEAE Sephadex A-50阴离子交换柱层析及Sephadex G-75凝胶过滤进行分离纯化。洗脱峰利用PCI2细胞测定活性，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)，聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦圆盘电泳(EFG)等方法，进行理化性质的鉴定。结果 从粗毒6．0g中得到电泳纯的神经生长因子3．64mg，分子量为36kD，由两个亚基通过二硫键交联组成二体结构。等电点pI为6．7，在0．5～5．0μg／mL时，对PCI2细胞有良好的促进分化作用。结论 本法可从广西产圆斑蝰蛇毒粗毒中得到电泳纯的神经生长因子。     

舟山眼镜蛇毒细胞毒素-F对人鼻咽癌细胞和乳鼠心肌细胞的抑制作用

目的 观察舟山眼镜蛇毒细胞毒素-F(CTX—F)对人鼻咽癌细胞(CNE)和乳鼠心肌细胞的抑制作用，了解CTX—F对人癌细胞株的选择性抑制作用，并初步探讨其作用机制。方法 以磺胺邻二甲氧嘧啶法观察CTX—F0．625，1．25，2．5，5和10μg／mL对体外培养CNE和乳鼠心肌细胞的杀伤作用及作用的量效关系，同时观察CTX—F作用0．5，1，2，4和8h的时效关系，并比较CTX—F对上述两种细胞作用的差异；采用透射电镜观察CTX—F对CNE细胞形态的影响。结果 CTX—F在0．625μg／mL作用0．5h时即可抑制CNE细胞的生长，生长抑制率约为7％，10μg／mL作用0．5h，生长抑制率即可达70．3％，作用存在明显的剂量依赖性，其IC50(μg／mL)为1．52，CTX—F作用0．5h对CNE细胞的IC50为3．83，8h为1．53，有明显的时效关系。CTX-F乳鼠心肌细胞也有破坏作用，但敏感性较低，IC50为5．92，约为CNE细胞的4倍。CNE细胞经CTX—F(0．625μg／mL)作用0．5h后，电镜下可见到细胞核内染色质边集或固缩成团聚集在细胞的一侧，时间延长，可见细胞死亡。结论 舟山眼镜蛇毒CTX—F对CNE细胞有剂量和时间依赖性杀伤作用，其敏感性高于乳鼠心肌细胞。     

人Leptin的高效表达、纯化及生物学活性研究

将人Leptin表达质粒pBV200-OB转化宿主菌E.coli JM109，热诱导获得目的蛋白的表达。经SDS－PAGE鉴定分析，目的蛋白表达量占菌体总蛋白的40％以上，且以包涵体的形式表达。通过包函体分离，Sephacryl S200HR凝胶和DEAE52离子交换层极及Hypersil C18柱反相色谱纯化，获得纯度在95％以上，内毒素含量小于10EU／Mg的高纯度的重组人Leptin.Westem-blot鉴定表明，纯化表达产物能和抗Leptin抗体特异结合；蛋白质N端15个氨基酸序列分析结果和预期的序列一致。纯化产物经复性处理，其分子中Cys96和Cys146形成二硫键。体内活性检测显示，纯化和复性的rh-Leptin明显抑制BALB／c小鼠的进食和体重增长，提示其具有明显的生物学活性。     

蝮蛇蛇毒类纤溶酶的分离纯化及一些特性的研究

蝮蛇(Agkistrodon haly palls)蛇毒先用Sephadex G-100柱层析分离出有纤溶活性的第2、3峰,再用DEAE-Sephadex A-50分离有纤溶活性的第14峰,经PAA圆盘电泳仍有多条区带.该组分用高效液相配用Mono-Q阴离子交换柱层析二次纯化,得有纤溶活性的第2峰,PAA圆盘电泳为第二条紧靠的区带,SDS/PAGE测得该纤溶组分分子量为21000±1000;pI为3.9±0.05,对酪蛋白有一定水解能力,EDTA能降低酶活性,氨基酸组成分析为酸性氨基酸居多的蛋白质.     

尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶Agacutin的亚基的拆分和氨基酸残基测序

目的 测定Agacutin两个相近亚基的N端15个氨基酸残基序列,酶分子的2个亚基需拆分以获得亚基单肽链并测序.方法 通过生物化学方法获得高纯化Agacutin,经SDS-PAGE电泳分离、亚基胶条回收及PVDF膜电转移技术等方法制备了可供鉴定和测序的单亚基样品,后者通过Edman降解法,测定了亚基N端15个氨基酸残基序列.结果 大亚基(16 kDa)的序列为:DCSSGWSSYEEHQYY,小亚基(15kDa)序列为DSSGWSSYEGHEYYV.结论 测序结果经NCBI数据库检索发现,Agacutin为新的蛇毒类凝血酶.     

非融合型重组人白细胞介素-18的纯化及鉴定

目的　获得高纯度的重组人白细胞介素 18(rhIL 18)。方法　采用溶菌酶加超声破菌的方法抽提包涵体 ,以8mol/L尿素溶解包涵体 ,变性条件下以阴离子柱层析进行首步纯化 ,复性后再进行凝胶过滤层析。对纯化的样品进行了SDS PAGE、HPLC、N端氨基酸序列、免疫印迹及生物学活性分析。结果　rhIL 18在大肠杆菌中以不溶性包涵体形式存在 ,所提取的包涵体中重组蛋白纯度可达到 80 %以上 ,包涵体经二步柱层析纯化后 ,HPLC分析纯度达 98%以上 ,SDS PAGE测定其分子质量约 19× 10 3 ,N端 15个氨基酸序列与预期一致 ,生物学活性分析证实纯化的rhIL 18具有诱导人外周血单个核细胞 (PBMC)产生IFN γ的能力。结论　所建立的纯化rhIL 18的方法简便有效 ,为开展rhIL 18的结构活性关系研究及其大规模纯化打下了良好的基础。     

子宫内膜黏液抗菌肽的分离纯化及鉴定

目的从人子宫内膜黏液酸溶性提取物纯化及鉴定抗菌多肽,探讨子宫内膜的抗菌机制。方法采用酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳琼脂糖弥散法分析人子宫内膜黏液酸溶性提取物的抗菌活性,切下相应的抗菌条带进行洗脱电泳,并用反相高效液相色谱进一步分离纯化。用琼脂糖弥散法检测纯化分子抗菌活性;Trieine-SDS-PAGE电泳检测其相对分子质量。根据N端氨基酸序列和质谱分析的测序结果推导纯化分子的氨基酸序列,并进行生物信息学分析。结果从人子宫内膜酸溶性提取物中纯化出一种相对分子质量为6777的抗菌肽HUP-39,经鉴定为人血红蛋白α链N端第33-95的氨基酸残基片段。该片段富含碱性氨基酸,包含3个完整的α螺旋跨膜结构域,对大肠埃希菌氨苄西林耐药株ML-35p、标准株ATCC25922和临床分离株54080有较强的抑菌活性。结论本研究从人子宫内膜黏液酸溶性提取物中分离纯化出的抗革兰阴性菌多肽,为人血红蛋白α链片段。子宫内膜黏液中的抗菌分子不仅来源于上皮细胞和白细胞,也可来源于红细胞。     

蛇毒cystatin基因合成及其在大肠杆菌的表达

目的　研究蛇毒 cystatin基因的合成并在大肠杆菌系统内表达。　方法　根据中华眼镜蛇毒 cystatin蛋白的氨基酸序列合成 cystatin基因的 4个片段 ,通过缓慢退火 PCR方法将其拼接为完整的 cystatin基因 ,经Bam H 及 Sac 双酶切后定向克隆到原核表达载体 p ET- 4 2 a(+)中 ,PCR及测序鉴定 ,转化宿主菌 BL 2 1 (DE3) ,异丙基硫代 -β- D半乳糖苷 (IPTG)诱导 ,SDS- PAGE凝胶电泳分析表达产物 ,GST· Mag琼脂糖树脂纯化融合蛋白 ,Western- blot鉴定。　结果　成功合成蛇毒 cystatin基因 ,并构建原核表达质粒 p ET- 4 2 a(+) /GST- cystatin,在大肠杆菌 BL 2 1 (DE3)中表达融合蛋白 GST- cystatin,SDS- PAGE凝胶浓度扫描显示表达量占菌体总蛋白的 30 % ,Western- blot证实纯化蛋白为重组 cystatin蛋白。　结论　合成蛇毒 cystatin基因并在大肠杆菌中表达 ,为进一步研究其生物学活性及抗肿瘤转移功能奠定基础     

两种抗体纯化方法对乙肝核心抗体酶标试剂盒质量的影响

采用亲和层析和离子交换层析两种方法从武汉抗乙肝病毒核心抗原鼠单克隆抗体杂交瘤细胞株WHBC－3腹水中提纯抗－HBc单克隆抗体制备ELISA试剂盒。结果显示亲和层析法提纯的抗体收获率和抗体效价高于离子交换法，与Abbott ELISA试剂盒对照检测临床标本496份，两种纯化方法制备试剂盒的特异性为100％，符合率分别为99．80％和97．58％。提示采用亲和层析法纯化抗体所制备的ELISA试剂盒的特异性、敏感性和精密性均具有良好的临床应用价值。     

HPLC analysis and cell surface receptor binding activities of the crude aqueous and methanolic extract of Sesamum indicum

ObjectiveTo identify the possible functional molecules for therapeutic uses by screening the crude aqueous and methanolic extracts derived from sesame seeds (Sesamum indicum) in vitro.MethodsHigh performance liquid chromatography was used to scan the functional molecules present in the extracts.ResultsThe crude aqueous extracts showed the possibilities to present caffeine and cetirizine or its derivatives like molecules. On the other hand, the crude methanolic extract may contain Loratadine or its derivatives like molecules. Both type of extracts showed hemagglutination inhibition activities in all types of human blood samples tested. However, they showed stronger binding with AB+ blood group than those of A+ and B+ blood.ConclusionsSesame seeds may be considered as a functional food.     

甜菜碱的提取分离及测定方法研究进展

通过总结甜菜碱的提取、分离及测定方法的研究进展,为甜菜碱本身药理作用及其相关中药有效成分的深入研究提供参考。甜菜碱的提取方法大致可分为水提和醇提;分离方法主要有薄层层析法、离子交换法;含量测定方法多样,高效液相色谱法操作简便、高效。     

离子色谱法鉴定厌氧菌

作者用国产SL-01型离子色谱仪测定厌氧菌代谢性脂肪酸,以资鉴定厌氧菌。结果表明,11种标准酸一次进样后可于15分钟内出峰完毕。40株厌氧菌的代谢性脂肪离子色谱图谱与VPI(Virginia Pol-ytechnic Institute)手册中记录的气相色谱图谱基本一致。与气相色谱法比较,离子色谱法的灵敏度高、定量准确、重复性好,标本无须复杂的预处理,挥发性与非挥发性脂肪酸可一次进样出峰。     

川芎药材指纹图谱研究与产地比较(Ⅰ)

目的：对川芎药材进行指纹图变研究，对来源于不同地区的川芎进行了比较。方法：采用Kromasil KR100-5C18分析柱，0．5％H3PO4－H2O与0．5％H3PO4－CH3OH梯度洗脱，流速1mL/min，柱温25℃，DAD检测器，检测波长280nm，参比波长360nm。结果：确定了川芎药材指纹图谱的高效液相分析条件，建立了川芎的特征指纹图谱。结论：川芎中各成分均得到很好分离，可作为川芎的专属性的指纹图谱。     

超高液相在药物分析领域中的应用

超高效液相色谱（UPLC）具有传统HPLC色谱所不具备的高分离能力、高灵敏度及专属性优势,针对超高液相在药物分析领域的广泛应用,本文对超高液相色谱及其与质谱联用技术在药物分析领域取得的成果,分别从药物成分分析、药代动力学两方面进行了详细阐述与总结。     

低分子量有机酸含量测定方法探讨

目的: 用色谱法构建一种简洁、快速、准确度高的检测低分子量有机酸的方法。方法: 气相色谱法和
离子色谱法同时测定甲酸、乙酸、丙酸、丁酸和乳酸。结果: 由于甲酸和乳酸的沸点问题,用气相色谱法不能同时
测定,而离子色谱法前处理简单,操作方便,可以同时测定。结论: 离子色谱法是同时测定低分子量有机酸含量
的有效方法。     

培元颗粒质量初步研究

目的 建立培元颗粒的质量标准。方法 采用薄层色谱法对培元颗粒中人参、黄芪、淫羊藿进行定性鉴别,采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定培元颗粒中人参皂苷Rb1与黄芪甲苷的含量。色谱柱为Phenomenex C18（250 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相为乙腈-水（梯度洗脱）,流速为1.0 mL/min,柱温为30 ℃。蒸发光散射检测器的漂移管温度为100 ℃,雾化温度为30 ℃。结果 薄层色谱法能检出人参、黄芪、淫羊藿,斑点清晰,且阴性对照无干扰;人参皂苷Rb1和黄芪甲苷分别在2.46～20.5 μg/mL、1.54～7.69 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好,平均加样回收率分别为96.84%、97.58%,RSD分别为1.15%、1.34%。结论 所建立的方法操作简单,重复性好,可以用于培元颗粒的质量控制。     

钩吻总生物碱中钩吻素子的提取与分离

目的 研究钩吻中总生物碱的提取、总量测定方法及其中主要成分钩吻素子的分离、鉴定方法。方法 采用加热回流提取与氯仿萃取相结合的方法提取总生物碱;采用碱性硅胶柱层析、梯度洗脱法分离钩吻素子并用薄层层析法和紫外分光光度法定性鉴别。结果 从钩吻中分离得到了无色棱柱状钩吻素子晶体。结论 本实验所采用的提取钩吻总生物碱及分离钩吻素子的方法行之有效。     

血中去痛片有效成分的分析

目的 建立血中去痛片有效成分的薄层色谱法（TLC）和气相色谱/质谱联用（GC/MS）的分析方法。方法 样品分别在pH=2和pH=10两种条件下用乙醚萃取，比移值结合光密度扫描图TLC法定性分析，体内药物用GC/MS全扫描定性分析，选择离子扫描定量分析。结果 在pH=2条件下非那西汀、咖啡因、苯巴比妥的提取回收率高于63%;在pH=10条件下非那西汀、咖啡因、氨基比林提取回收率高于66%。四种成分在薄层色谱法和气相色谱/质谱联用法中彼此分离良好。结论 薄层色谱法和气相色谱/质谱联用法测定血液中去痛片的四种有效成分具有快速、简便、准确的特点，可用于去痛片中毒的法医学检验。