小分子药物CX-3543对胆管癌QBC939细胞中c-Myc相关miRNA及miRNA靶基因表达的影响研究

目的 探讨在小分子药物CX-3543作用下,胆管癌细胞QBC939中癌基因c-Myc相关的miRNA及miRNA靶基因的表达变化.方法 MTT检测CX-3543对QBC939细胞增殖的影响.Western blot检测CX-3543处理后细胞中c-Myc及c-Myc相关miRNA靶基因的表达,同时,Northern blot检测c-Myc相关miRNA的表达.结果 CX-3543抑制QBC939细胞增殖.CX-3543可抑制QBC939细胞中c-Myc的表达,且与作用时间及剂量正关性.同时CX-3543抑制了c-Myc相关miRNA(miR-9、miR-19和miR-20α)的表达,继而上调了miR-9及miR-19的靶基因E-钙粘蛋白及RB1的表达,下调了miR-20α靶基因Pten的表达.结论 CX-3543可有效抑制胆管癌细胞系QBC939中癌基因c-Myc的表达,影响c-Myc相关miRNA及miRNA靶基因的表达,减弱c-Myc介导的通路对胆管癌的影响.     

miR-145对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的研究miR-145对人宫颈癌细胞系SiHa细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探讨其机制。方法体外培养子宫颈癌细胞和正常宫颈上皮细胞,检测细胞中miR-145表达水平;将SiHa细胞分为miR-145过表达(mimics)组和阴性对照(NC)组,转染48 h后,CKK-8法检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力;应用TargetScan数据库预测miR-145的靶基因并用荧光素酶报告基因实验验证,蛋白免疫印记(WB)检测miR-145过表达对肌球蛋白Ⅵ(MY06)蛋白表达的影响。结果 SiHa、Hela、MS751人子宫颈癌细胞中miR-145表达水平均显著低于正常子宫颈上皮细胞,差异有统计学意义(P0.05)。转染miR-145 mimics后,SiHa细胞中miR-145表达水平显著上调(P0.05);与NC组比较,mimics组SiHa细胞的增殖、迁移、侵袭能力均显著下降(P0.05)。TargetScan数据库预测显示MY06是miR-145潜在靶基因,双荧光素酶报告基因实验证实二者存在靶向关系。WB结果显示miR-145过表达后,MY06蛋白表达水平显著下调。结论 miR-145能通过下调MY06表达抑制人宫颈癌细胞系SiHa细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-145通过IGF1R 与 IRS1逆转胃癌SGC7901/DDP细胞对顺铂的耐药性

目的:研究miR-145对胃癌耐顺铂细胞株SGC7901/DDP顺铂耐药的影响?方法:应用QRT-PCR检测miR-145在胃癌组织?细胞中的表达水平;MTT法和细胞克隆形成实验检测细胞活性与增殖能力;荧光素酶实验验证miR-145的靶基因;Western blot?免疫组化和免疫荧光实验检测相关蛋白表达;流式细胞术检测耐药细胞对顺铂诱导凋亡的影响?结果:miR-145在胃癌组织?各种胃癌细胞株中呈低表达;在胃癌耐顺铂细胞株SGC7901/DDP中,miR-145呈低表达,IGF1R 与 IRS1呈高表达;上调miR-145增强SGC7901/DDP细胞对顺铂的敏感性;荧光素酶报告实验证实IGF1R 与 IRS1为miR-145的靶基因;上调miR-145显著降低靶蛋白表达,抑制SGC7901/DDP细胞增殖,促进顺铂诱导的凋亡?结论:上调miR-145通过靶向IGF1R 与 IRS1逆转胃癌细胞对顺铂的耐药性?     

胃癌SGC7901细胞长春新碱耐药性相关miRNA的初步分析

目的 探讨胃癌SGC7901细胞对长春新碱(VCR)化疗药物耐药相关的微小RNA(miRNA),并预测异常表达miRNA的靶基因.方法 体外培养胃癌SGC7901细胞和胃癌VCR耐药细胞SGC7901/VCR;提取总RNA并质检,采用miRNA 8.0微阵列芯片检测分析miRNA表达谱;荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)验证差异表达的miRNA,生物信息学分析软件预测可能调控的靶基因;采用Western blot方法检测靶基因的蛋白表达水平.结果 芯片检测发现,SGC7901和SGC7901/ VCR细胞中63个异常表达的miRNA;其中miR-1267、miR-221、miR-223、miR-200c、miR-99a表达显著性上调;miR-122、miR-1246、miR-302a、miR-195、miR-124表达显著性下调.在胃癌细胞和胃癌组织中验证结果初步显示,miRNA-122和miR-302a可能分别调控靶基因IGF-IR和WDR62.结论 获得的差异表达miRNA,以及预测的靶基因IGF-IR和WDR62可能在胃癌化疗药物VCR耐药中起关键性作用.     

5-AZA抑制人葡萄膜黑色素瘤细胞增殖的研究

目的 DNA甲基化是一种重要的表观修饰，由DNA甲基化转移酶介导完成，与癌症的发生密切相关。目前，已发现至少有50个与黑色素瘤发生发展相关的关键基因发生异常超甲基化修饰，而DNA甲基化酶抑制剂能抑制DNA甲基转移酶活性，具有调控甲基化状态的潜能。本研究旨在探讨DNA甲基化酶抑制剂5-AZA对人葡萄膜黑色素瘤细胞增殖的影响并初步研究其作用的分子机制。 方法 4 μM 5-AZA处理OCM-1和OCM-3细胞作为实验组，同时溶剂DMSO处理细胞作为对照组，通过MTS[3-(4,5-diethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-etrazolium,inner salt，MTS]实验和细胞克隆形成实验检测5-AZA对细胞增殖的作用；采用流式细胞术分析5-AZA作用于细胞后细胞周期的变化；通过细胞划痕实验评估5-AZA对细胞迁移的影响；分别应用Real-time PCR和Western blotting技术检测5-AZA对细胞周期相关蛋白基因表达水平；所得实验数据使用t检验判定实验组和对照组之间差异是否具有统计学意义。 结果 5-AZA显著抑制人葡萄膜黑色素瘤细胞增殖(P<0.01)以及细胞克隆形成能力；5-AZA诱导人葡萄膜黑色素瘤细胞G₁期阻滞；5-AZA对人葡萄膜黑色素瘤细胞迁移影响不明显；5-AZA显著促进葡萄膜黑色素瘤细胞p21表达上调(P<0.01)，抑制CDK2表达(P<0.01)。 结论 5-AZA能通过上调p21和下调CDK2抑制人葡萄膜黑色素瘤细胞增殖，可作为治疗葡萄膜黑色素瘤的潜在药物。      

miR-145-5p对口腔鳞癌细胞增殖的调控作用及其机制

目的 探究miR-145-5p对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖的调控作用及其机制。方法 利用GEO数据库构建OSCC的miRNA差异表达谱;通过生物信息学技术预测miR-145-5p靶基因并对其进行GO、KEGG及PPI分析;以人OSCC细胞株(HSC-3)为实验对象,将实验分为CN组(未做处理)、NC组(转染mimic NC)和miR-145-5p组(转染miR-145-5p mimic),通过CCK-8法检测不同剂量(50、100、200 nmol/L)miR-145-5p对HSC-3细胞增殖的影响;JC-1和Annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞术检测miR-145-5p对HSC-3细胞的凋亡诱导情况;RT-qPCR检测miR-145-5p调控神经母细胞瘤鼠肉瘤同系物(NRAS)、C-JUN氨基端激酶(C-JUN)、信号转导和转录激活因子1(STAT1)的表达情况。结果 miRNA差异表达谱显示,miR-145-5p在OSCC中表达下调(P<0.05);GO和KEGG分析显示,miR-145-5p靶基因主要调控MAPK信号通路;PPI蛋白互作显示,NRAS是...     

miR-138-5p 靶向 TCF4调节眼葡萄膜黑色素瘤细胞的恶性生物学行为

目的 探讨miR-138-5p与转录因子4(TCF4)对眼葡萄膜黑色素瘤MuM-2B细胞恶性生物学行为的影响.方法 miR-138-5p mimic 和 pcDNA-TCF4分别或共转染 MuM-2B细胞,构建小鼠体内移植瘤模型.RT-qPCR检测细胞转染效率;生物信息学软件预测miR-138-3p和TCF4靶向位点;双荧光素酶报告基因实验验证靶向关系;克隆形成实验检测细胞增殖;Transwell实验检测细胞侵袭能力;Western blot检测TCF4及上皮-间质转化(EMT)相关蛋白表达;免疫组化检测Ki67、VEGF、Vimentin在肿瘤组织中的表达.结果 与对照组相比,转染组miR-138-5p和TCF4均升高(P＜0.05),且miR-138-5p和TCF4是靶向关系.miR-138-5p过表达通过靶向TCF4抑制MuM-2B细胞增殖和侵袭力并下调E-cad-herin和Vimentin蛋白表达量,上调N-cadherin蛋白表达量(P＜0.05).在体内移植瘤中,miR-138-5p过表达减轻肿瘤重量(P＜0.05),miR-138-5 p 过表达下调 Ki67、VEGF、Vim-entin在肿瘤组织中阳性细胞率(P＜0.05).结论 miR-138-5p过表达可下调TCF4水平,进而抑制葡萄膜黑色素瘤MuM-2B细胞增殖、侵袭及EMT.     

微RNA对脊髓损伤小鼠恢复的影响

目的 研究微RNA(miRNA)对脊髓损伤模型小鼠恢复的影响。方法 查询、预测靶基因和miRNA并在293T细胞中验证;构建小鼠脊髓损伤模型并过表达miRNA,进行BBB评分,观察脊髓形态,检测标记基因及靶基因的表达。结果 miR-9、miR-124和miR-125在体外都能引起3个及以上靶基因的下调;miR-9和miR-124组小鼠脊髓钳夹伤口恢复较好;miR-9组小鼠运动功能恢复比对照组好,miR-124组比对照组差;miR-9组小鼠GFAP下调,MAP2和NeuN上调,靶基因GLIS3和CYBRD1下调。结论 脊髓损伤小鼠模型中,miR-9可能通过靶向下调GLIS3和CYBRD1促进脊髓损伤的修复。     

miRNA-210-3p在大肠癌细胞迁移侵袭中的促进作用及其靶基因的生物信息学分析

目的 探讨miR-210-3p在大肠癌细胞迁移、侵袭中的作用,并利用生物信息学方法预测其靶基因及信号通路。方法 采用dbDEMC和OncomiR数据库分析miR-210-3p在大肠癌中的表达情况,通过荧光定量PCR法验证miR-210-3p在大肠癌细胞系中的表达;通过转染miRNA 模拟物、抑制剂上调和下调大肠癌细胞内miR-210-3p的表达量,Transwell法检测转染后大肠癌细胞的迁移和侵袭能力变化;通过miRDB、TargetScan7.2、starBase和miRPathDB数据库预测miR-210-3p靶基因,利用DAVID数据库进行GO分析及信号通路的富集分析,利用GEPIA数据库分析关键基因在大肠癌组织中的表达。结果dbDEMC和OncomiR数据库显示miR-210-3p在大肠癌组织中高表达,并与肿瘤转移和患者预后相关。荧光定量PCR验证miR-210-3p在高转移性结肠癌细胞系HCT-116、LoVo中的表达量高于中转移性细胞系SW480和低转移性细胞系CL187、HCT-8。过表达miR-210-3p能明显增强SW480细胞迁移和侵袭能力;下调miR-210-3p的表达后,LoVo细胞迁移和侵袭能力则明显减弱。共预测出3035个靶基因,其功能主要富集在细胞迁移、黏附、蛋白质代谢等生物学过程以及癌症通路、HIF、Rap1等信号转导通路,GEPIA数据库验证显示RGMA在临床大肠癌组织中呈显著低表达,可能是miR-210-3p的靶基因。结论 miR-210-3p可促进大肠癌细胞迁移和侵袭能力,有望成为大肠癌治疗的新型生物靶点。     

基于miRNA调控网络探究miR-653在肺癌干细胞干性维持中的作用

目的:基于miRNA调控网络探究miR-653在肺癌干细胞干性维持中的作用及其相关机制。方法:miRNA-seq检测肺癌患者肿瘤组织和癌旁组织，根据差异miRNA绘制调控网络，并对靶基因进行KEGG分析。通过脂质体转染法将miR-NC、miR-653、oe-NC、oe-MYC转染至H460肺癌细胞系，分组为：miR-NC组、miR-653组、miR-653+oe-NC组、miR-653+oe-MYC组。qRT-PCR检测各组miR-653、MYC表达；流式细胞术检测CD133、CD24蛋白表达；CCK8检测细胞增殖水平；有限稀释法检测细胞成球比例；通过荧光素酶报告基因检测试剂盒检测miR-653和MYC靶向性。结果:与癌旁组织比较，肿瘤组织中有326个miRNA表达升高，363个miRNA表达降低，其中miR-653表达显著降低(P<0.05)。调控网络预测miR-653靶向22个mRNA,参与细胞干性维持等信号通路。在野生型MYC中，miR-653组荧光强度低于miR-NC组(P<0.05)。与miR-NC组比较，miR-653组miR-653表达升高，MYC表达降低；C...     

MicroRNA 145 may play an important role in uveal melanoma cell growth by potentially targeting insulin receptor substrate-1

Background MicroRNAs （miRNAs） contribute to tumorigenesis by acting as either oncogenes or tumor suppressor genes. In this study, we investigated the role of miR-145 in the pathogenesis of uveal melanoma. Methods Expression profiles of miRNAs in uveal melanoma were performed using Agilent miRNA array. Quantitative real-time polymerase chain reaction was used to screen the expression levels of miR-145 in normal uveal tissue, uveal melanoma tissue, and uveal melanoma cell lines. Lenti-virus expression system was used to construct MUM-2B and OCM-1 cell lines with stable overexpression of miR-145. Cell proliferation, cell cycle, and cell apoptosis of these miR-145 overexpression cell lines were examined by MTT assay and flow cytometry respectively. The target genes of miR-145 were predicted by bioinformatics and confirmed using a luciferase reporter assay. The expression of insulin-like growth factor-1 receptor （IGF-1R）, insulin receptor substrate-1 （IRS-1） proteins was determined by Western blotting analysis. IRS- 1 was knocked down in OCM-1 cells. TUNEL, BrdU, and flow cytometry assay were performed in IRS-1 knocked down OCM-1 cell lines to analyze its function. Results Forty-seven miRNAs were up regulated in uveal melanoma and 61 were down regulated, miR-145 expression was significantly lower in uveal melanoma sample and the cell lines were compared with normal uveal sample. Overexpression of miR-145 suppressed cell proliferation by blocking the G1 phase entering S phase in uveal melanoma cells, and promoted uveal melanoma cell apoptosis. IRS-1 was identified as a potential target of miR-145 by dual luciferase reporter assay. Knocking down of IRS-1 had similar effect as overexpression of miR-145. Conclusion miR-145 might act as a tumor suppressor in uveal melanoma, and downregulation of the target IRS-1 might be a potential mechanism.     

miR-145抑制口腔鳞状细胞癌Tca-8113细胞增殖活性及其与CDK6的靶向关系

目的 在口腔鳞状细胞癌Tca-8113细胞中验证miR-145靶向CDK6对其细胞增殖活性的影响. 方法 构建pcD-NATM6.2-GW-pre-miR-145重组表达质粒并转染入Tca-8113细胞,以荧光实时定量PCR（qRT-PCR）检测转染后癌细胞miR-145的表达水平.MTT法评价miR-145对Tca-8113细胞增殖活性的影响,并通过双荧光素酶报告基因检测miR-145对候选靶基因CDK6的调控作用,同时采用Western blot法检测miR-145对CDK6蛋白表达水平的影响. 结果 成功构建miR-145真核表达载体,qRT-PCR显示miR-145组中miR-145的表达显著高于内源性表达量（P＜0.001）,说明miR-145在Tca-8113细胞中具有较高的转染效率.MTT法提示miR-145的过表达能够显著抑制Tca-8113细胞的增殖（P＜0.01）,同时双荧光素酶报告基因分析表明,共同转入miR-145与CDK6野生型（CDK6-WT）会显著抑制Tca-8113细胞中的荧光酶表达（P=0.002）;Western blot进一步证实了miR-145的过表达能够抑制内源性CDK6蛋白的表达. 结论 miR-145可能通过直接靶向CDK6来抑制口腔鳞状细胞癌Tca-8113细胞的增殖活性.     

MiR-9在人神经胶质瘤中调节CBX7的表达

目的检测CBX7在人神经胶质瘤中的表达,研究人神经胶质瘤中异常表达的microRNA对CBX7的可能调控作用。方法采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测2例正常脑组织、9例胶质瘤组织和3株胶质瘤细胞系中CBX7mRNA和蛋白水平的表达变化。结合Miranda和改良的机器学习法预测调控CBX7的miRNA。采用real-time PCR检测上述组织和细胞系中miR-9的表达,然后在细胞中过表达或敲低miR-9,结合荧光素酶实验和Western blot检测miR-9对CBX7表达的影响。采用MTT实验和流式细胞术分析miR-9敲低后对T98G细胞生长的影响。结果在胶质瘤组织和细胞系中,CBX7的mRNA水平改变不明显,而蛋白水平却明显下调。生物信息学预测CBX7可能受包括miR-9在内的多个miRNAs调控。与正常组织相比,miR-9在胶质瘤中表达明显增高。在293ET细胞中,过表达miR-9能抑制CBX7-3UTR报告基因活性。在T98G细胞中,敲低miR-9可增加CBX7-3UTR报告基因活性,对内源性CBX7的mRNA水平无明显影响,但使CBX7蛋白表达增加。敲低miR-9后,T98G存活细胞数增加,而且G1期细胞数比对照组明显减少。结论由于受到miR-9转录后水平的抑制,CBX7在人神经胶质瘤中表达下调甚至缺失。     

miR-181b通过靶向调控N-myc下游调节基因2影响骨肉瘤细胞的迁移和侵袭

目的探讨miR-181b对骨肉瘤细胞迁移和侵袭的影响。方法培养骨肉瘤细胞,实时荧光定量PCR检测miR-181b在骨肉 瘤细胞中的表达。抑制miR-181b的表达,Transwell检测对骨肉瘤迁移和侵袭的影响;生物信息学分析miR-181b靶基因并采用 荧光素酶报告基因分析miR-181b和靶基因在骨肉瘤中是否直接作用,同时采用Western Blotting检测靶基因在骨肉瘤细胞中的 表达以及Transwell检测靶基因对骨肉瘤迁移和侵袭的影响。结果实时荧光定量PCR结果表明miR-181b在骨肉瘤细胞中高 表达。抑制miR-181b 的表达能够抑制骨肉瘤细胞的迁移和侵袭;生物信息学分析表明N-myc 下游调节基因2（NDRG2）是 miR-181b直接作用的靶基因,荧光素酶报告基因分析验证了该结果;Western blotting检测表明NDRG2在骨肉瘤中低表达,而 抑制miR-181b 能够显著提高NDRG2 的表达。抑制miR-181b 的表达的同时抑制靶基因NDRG2 的表达,能够逆转抑制 miR-181b的表达对骨肉瘤细胞的迁移和侵袭的影响,从而显著提高骨肉瘤细胞的迁移和侵袭。结论miR-181b在骨肉瘤中过 表达,NDRG2为miR-181b直接调控靶基因,抑制miR-181b能够提高NDRG2的表达从而抑制骨肉瘤细胞的迁移侵袭。     

miR-26a下调TET抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖与侵袭

目的探讨TET对宫颈癌HeLa细胞增殖和侵袭的作用及其调控机制。方法siRNA敲低宫颈癌HeLa细胞中TET的表达。细胞计数法、克隆形成实验、Transwell侵袭实验检测TET对宫颈癌HeLa细胞增殖、克隆形成及侵袭能力的影响。TargetScan软件预测TET与miR-26a之间的结合位点,qRT-PCR和双荧光素酶报告基因实验检测TET与miR-26之间的关系。结果TET敲低抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、克隆形成及侵袭能力。经预测miR-26a与TET1、TET2和TET3之间均存在结合位点;共转染野生型TET和miR-26a模拟物可降低荧光素酶活性;转染miR-26a抑制HeLa细胞中TET的表达。结论miR-26a通过下调TET1、TET2和TET3的表达而抑制宫颈癌HeLa细胞增殖与侵袭能力。     

miR-122-5p通过靶向NOP14抑制黑素瘤的细胞增殖

目的探讨在黑素瘤组织中miR-122-5p的表达情况,同时研究miR-122-5p对人黑素瘤细胞株SK-MEL-110和A375细胞 增殖、细胞周期及凋亡的调控效应。方法荧光定量PCR检测miR-122-5p在黑素瘤和色素痣组织中的表达;培养SK-MEL-110 和A375细胞,瞬时转染miR-122-5p inhibitor及阴性对照inhibitor后,荧光定量PCR检测miR-122-5p的表达,MTT及流式细胞 仪方法检测对细胞增殖、周期和凋亡的影响,荧光定量PCR和Western Blot法检测NOP14的mRNA和蛋白水平;应用双荧光素 酶基因报告法进一步验证NOP14是否为miR-122-5p的靶基因。结果miR-122-5p在人色素痣和黑素瘤组织中的相对表达量 分别为1.23±0.270和7.65±1.37。转染miR-122-5p inhibitor后,miR-122-5p在SK-MEL-110和A375细胞中的相对表达量分别 为0.21±0.08和0.17±0.05。miR-122-5p inhibitor可以显著抑制黑素瘤细胞株SK-MEL-110和A-375细胞的增殖能力,明显增加 G1期细胞的比例,但对SK-MEL-110和A-375细胞的凋亡没有明显影响。转染miR-122-5p inhibitor对NOP14 mRNA水平没 有明显的影响,但可以显著提高NOP14的蛋白水平表达。荧光素酶报告基因检测显示,共转染miR-122-5p mimics和野生型 psi-CHECK2-3′UTR质粒组相对荧光素酶活性为0.21±0.14,较NC和野生型psi-CHECK2-3′UTR质粒转染组（0.56±0.1）显著下 降（P<0.01）。结论miR-122-5p在黑素瘤组织中高表达,提示miR-122-5p可能参与黑素瘤的发生发展过程。miR-122-5p 可能 通过NOP14影响SK-MEL-110和A-375细胞的周期,进而抑制细胞的增殖。     

MiR-124通过靶向PRRX1调节结直肠癌细胞的辐射敏感性

目的检测结直肠癌细胞及组织标本中miR-124的表达,探讨其与辐射敏感性的关系。方法qRT-PCR检测结直肠癌细胞 株和组织标本中miR-124的表达,建立过表达和干扰miR-124细胞株,功能实验探讨其对结直肠癌细胞辐射敏感性的影响;生 物信息学预测miR-124下游调控的靶基因,双荧光素酶报告系统进一步验证。结果miR-124在结直肠癌细胞株和组织标本中 表达下调;过表达miR-124 增强结直肠细胞辐射敏感性,反之,抑制miR-124 后细胞辐射敏感性降低;miR-124 通过直接抑制 PRRX1调节结直肠细胞辐射敏感性。结论miR-124可以通过直接靶向PRRX1增加结直肠癌细胞的辐射敏感性,为提高临床 结肠癌辐射敏感性提供一个靶点。     

miR-186通过靶定CEA抑制宫颈癌细胞转移

目的:验证miR-186通过靶定CEA对宫颈癌细胞生物功能的影响。方法:利用表达谱芯片及荧光定量PCR验证miR-186在宫颈癌中的表达水平;通过Transwell及划痕试验阐述miR-186靶定CEA对宫颈癌细胞转移能力的影响;通过双荧光素酶报告基因方法验证miR-186对癌胚抗原(CEA)的靶定关系。结果:转移性宫颈癌组织中miR-186的表达水平较非转移性宫颈癌组织中偏低;在宫颈癌细胞中上调miR-186的表达水平并靶定CEA能够抑制其转移能力;荧光报告载体试验证实CEA为miR-186的靶基因。结论:miR-186抑制宫颈癌的转移,CEA为miR-186的靶基因。     

FOXP3基因3＇-UTR段双荧光素酶报告载体的构建及其活性鉴定

目的：构建FOXP3基因3＇-UTR双荧光素酶基因报告载体,并通过检测荧光素酶活性,初步分析可能调控FOXP3基因表达的miRNAs.方法：利用PCR方法,根据FOXP3基因3＇-UTR序列信息设计其扩增引物,以293T细胞基因组DNA为模板PCR扩增FOXP3基因的3’-UTR序列,将其克隆到pmiRB-REPORT双荧光素酶报告载体中;运用Targetscan软件预测可能与FOXP3基因3’-UTR相互作用的miRNAs;利用LipofectaminTM 2000试剂将miRNAs mimics与构建好的FOXP3基因3’-UTR段双荧光素酶报告载体共转染于常规培养的293T细胞中,然后使用双荧光素酶试剂盒检测荧光素酶活性,并与空白对照相比较.结果：经酶切及基因测序验证,成功构建含有FOXP3基因3’-UTR段双荧光素酶基因报告载体;Targetscan软件预测显示,FOXP3基因3’-UTR可能是miR 608的作用靶位点;双荧光报告显示,miR 608 mimics组比空白对照组[（0.700 0±0.016 41）比（1.000±0.055 75） （P＜0.001）] FOXP3基因3’-UTR双荧光素酶基因报告载体的荧光素酶活性下降30％.结论：FOXP3基因3’-UTR段双荧光素酶基因报告载体构建成功,初步证实miR 608对FOXP3有调控作用.