基于TLR4/NF-κB 信号通路研究木犀草素对幼鼠急性肺损伤的作用机制

目的研究木犀草素对幼鼠急性肺损伤（ALI）的保护作用,并探究其作用机制。方法将50 只SPF 级 SD 幼鼠随机分为5 组：正常组,模型组,地塞米松组,木犀草素高、低剂量组,每组10 只。除正常组外,其 余各组幼鼠雾化吸入脂多糖（LPS）建立急性肺损伤模型,正常组大鼠雾化吸入等量生理盐水。模型复制前3 d 起及模型复制后1 h,木犀草素高、低剂量组大鼠分别灌胃40、20 mg · kg-1 的木犀草素,地塞米松组于模型复 制前2 h 注射5 mg·kg-1 地塞米松,正常组和模型组大鼠灌胃等量0.5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）。模型复制 后12 h,采用ELISA 法检测血清及肺泡灌洗液（BALF）中白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）、肿瘤 坏死因子α（TNF-α）和肺组织超氧化物歧化酶（SOD）活力、丙二醛（MDA）含量;检测大鼠肺组织湿干质量 比（W/D）;HE 染色检测肺组织病理变化;Western Blot 法和qRT-PCR 法检测肺组织Toll 样受体4（TLR4）、核 因子κB（NF-κB）p65 蛋白和mRNA 的表达水平。结果与正常组比较,模型组血清及BALF 中IL-1β、IL-6、 TNF-α 的表达水平明显升高,W/D 值升高,肺组织SOD 活力降低,MDA 含量升高,肺损伤明显,TLR4、 NF-κB p65 蛋白和mRNA 的表达水平增加（P＜0.05）。与模型组比较,木犀草素降低了血清及BALF 中 IL-1β、IL-6、TNF-α 水平和W/D 值,提高了肺组织SOD 活力,降低了MDA 含量,肺损伤得到改善,同时也 降低了肺组织中TLR4、NF-κB p65 蛋白和mRNA 的表达水平（P＜0.05）。结论木犀草素对幼鼠急性肺损伤 具有保护作用,其作用机制与抑制TLR4/NF-κB 信号通路的活化有关。     

虎杖苷对慢性阻塞性肺疾病大鼠气道炎症及TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的:探究虎杖苷对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道炎症的缓减作用,并初步探究其作用机制。方法:将大鼠随机分为空白对照组、模型组、虎杖苷30、60、120mg/kg组、地塞米松0.09mg/kg组。采用肺功能检测仪检测用力肺活量(FVC)、第0.1秒用力呼气容积(FEV0.1)、呼气峰流速(PEF)、最大呼吸中段气流(MMF)、肺顺应性(Cldyn);吉姆萨染色法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数及中性粒细胞(PMN)、肺泡巨噬细胞(AM)、淋巴细胞(LYM)比例;酶联免疫吸附法检测BALF中TNF-α、IL-8、IL-1β水平;HE染色观察肺组织病理学变化;高碘酸希夫氏染色(PAS)观察支气管病理学变化;免疫印迹法检测肺组织中TLR4、NF-κB、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9蛋白表达;免疫组化法检测肺组织中TLR4、NF-κB蛋白阳性表达率。结果:与对照组相比,模型组肺组织病理半定量评分显著升高;FVC、FEV0.1、PEF、MMF、Cldyn明显降低,BALF中AM细胞比例明显降低,白细胞总数、PMN、LYM细胞比例明显升高,TNF-α、IL-8、IL-1β水平明显升高,支气管气管壁、平滑肌厚度升高,肺组织中TLR4、NF-κB p65、MMP-2、MMP-9蛋白表达及TLR4、NF-κB p65蛋白阳性表达率明显升高。与模型组相比,虎杖苷各组、地塞米松组肺组织病理半定量评分显著降低。FVC、FEV0.1、PEF、MMF、Cldyn升高,BALF中AM细胞比例显著升高,白细胞总数、PMN、LYM细胞比例显著降低,TNF-α、IL-8、IL-1β水平显著降低,支气管气管壁、平滑肌厚度降低,肺组织中TLR4、NF-κB p65、MMP-2、MMP-9蛋白表达及TLR4、NF-κB p65蛋白阳性表达率显著降低。结论:虎杖苷可改善肺组织、支气管组织形态,降低大鼠气道炎症反应,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路有关。     

复方银花解毒颗粒对脂多糖致幼龄大鼠急性肺炎模型的抗炎作用及TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路的影响

目的研究复方银花解毒颗粒(Compound Yinhua Jiedu Granule)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致幼龄大鼠急性肺炎模型的抗炎作用及Toll样受体4(Tolllikereceptor4,TLR4)/核转录因子-κB(nuclearfactor-κB,NF-κB)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)信号通路的影响。方法将120只幼龄大鼠随机分为6组,分别为对照组、模型组、布洛芬颗粒组(0.8g/kg)及复方银花解毒颗粒低、中、高剂量(1.25、2.5、5 g/kg)组,ig给药1周,末次给药1 h后尾iv LPS(1 mg/kg)制备急性肺炎模型,6 h后采用麻醉后颈椎脱臼处死。采用ELISA试剂盒检测各组大鼠肺泡灌洗液及血清中炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-17、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平的变化;HE染色观察肺组织形态学变化;运用免疫组化染色法检测肺组织TLR4,入核NF-κB和NLRP3蛋白的表达,Westernblotting法检测肺组织中TLR4、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)、磷酸化核转录因子-κB抑制蛋白α(nuclear factor-κB inhibitor proteinα,p-IκBα)和NLRP3蛋白的表达。结果复方银花解毒颗粒预处理对LPS诱导幼龄大鼠急性肺损伤具有较强的保护作用,可降低模型大鼠肺泡灌洗液及血清中炎症因子IL-1β、IL-17、TNF-α的水平,减少肺组织中TLR4、NF-κB的激活和NLRP3蛋白的表达。结论复方银花解毒颗粒对LPS致幼龄大鼠急性肺炎模型具有抗炎作用,其机制可能与下调TLR4/NF-κB/NLRP3炎症信号通路有关。     

加味小青龙汤对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织核转录因子-κB、锌指蛋白A20表达的影响

目的:观察加味小青龙汤对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织核转录因子-κB 65(NF-κB65)、锌指蛋白A20蛋白及其基因表达的影响。方法:Wistar大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、地塞米松和加味小青龙汤组。采用脂多糖气管滴注联合烟熏方法建立COPD大鼠模型,检测支气管肺泡灌洗液中TNF-α、IL-1β含量,检测肺组织NF-κB65、A20蛋白及其基因表达,观察加味小青龙汤对上述指标及肺组织病理形态学变化的影响。结果:与正常组比较,模型组TNF-α、IL-1β、NF-κB和A20蛋白及其基因表达均明显上调;与模型组比较,加味小青龙汤组TNF-α、白介素-1β、NF-κB蛋白表达明显降低,加味小青龙汤组A20基因表达显著上调。病理观察结果显示,与正常组比较,模型组肺组织炎症细胞浸润,管腔中有大量中性粒细胞及黏液聚集,管壁明显增厚,胶原染色显示肺间质纤维组织大量增生;加味小青龙汤组肺组织病理改变明显轻于模型组,加味小青龙汤组肺组织少数呈轻度间质性肺炎,仅见少量的纤维组织增生。结论:加味小青龙汤能够减轻COPD模型大鼠肺组织损伤,对COPD模型肺组织有保护作用,其机理可能与其降低TNF-α和白介素-1β含量、下调NF-κB蛋白表达、上调A20基因表达有关。     

肺康颗粒通过TLR4/NF-κB信号通路干预COPD大鼠炎症的相关机制

目的观察肺康颗粒对Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的影响,探讨其干预慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠炎症的机制。方法将60只SD大鼠随机分成6组:正常组,模型组,肺康颗粒低、中、高剂量组(10.11,20.22,40.44 g·kg~(-1),以生药量计),地塞米松组(1 mg·kg~(-1))。采用持续熏烟(20周)联合气管滴注脂多糖(LPS)法建立大鼠COPD模型。第5周开始,灌胃给予肺康颗粒进行干预,连续给药16周。采用苏木素-伊红(HE)染色观察COPD模型大鼠肺脏组织病理变化;检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数及其种类;酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠BALF中炎症细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6及IL-17含量;qRT-PCR法检测肺组织中TNF-α、IL-6、TLR4 mRNA表达;Western Blot法检测肺组织细胞胞浆蛋白TLR4、p-IκB、IκB及胞核蛋白NF-κB p65的蛋白表达。结果与模型组比较,肺康颗粒各剂量组治疗后肺泡结构均有所恢复;肺康颗粒中、高剂量组的IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-17含量明显降低(P0.01);肺康颗粒各剂量组的白细胞总数明显降低(P0.01),肺康颗粒中、高剂量组的中性粒细胞及高剂量组的淋巴细胞亦明显减少(P0.05,P0.01);肺康颗粒中、高剂量组肺组织中TNF-α、IL-6 mRNA的表达量均明显下调(P0.05,P0.01),而TLR4 mRNA表达则明显上调(P0.01);肺康颗粒各剂量组的TLR4、IκB蛋白表达明显上调(P0.05,P0.01),胞核蛋白p65的表达明显下调(P0.01),肺康颗粒高剂量组的p-IκB蛋白表达亦显著下调(P0.01)。结论肺康颗粒可能通过TLR4/NF-κB信号转导通路干预炎症基因的表达,减轻COPD大鼠的炎症反应。     

复方佛耳草合剂对慢性阻塞性肺疾病大鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响

目的 探讨复方佛耳草合剂对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响。方法 大鼠随机分为空白组(10只)和造模组(50只),造模组连续12周采用香烟烟雾联合气管注射LPS建立COPD大鼠模型。将造模成功的大鼠随机分为模型组、地塞米松组(0.5 mg/kg)和复方佛耳草合剂低、中、高剂量组(6.8、13.6、27.2 g/kg),每组10只。给药干预24周后,采用动物肺功能仪检测大鼠肺功能,HE染色法观察肺组织病理变化,ELISA法检测血清TNF-α、IL-1β、IL-6、MDA水平及SOD活性,RT-qPCR法检测肺组织TLR4、MyD88、NF-κB及caspase-3 mRNA表达,Western blot法检测肺组织TLR4、MyD88、NF-κB及TNF-α蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠存在肺通气功能障碍,肺组织和支气管受损明显,SOD活性降低(P<0.01),血清TNF-α、IL-1β、IL-6及MDA水平升高(P<0.01),肺组织TLR4、MyD88、NF-κB、caspase-3 mRNA表达和TLR4、MyD8...     

益肺健脾方对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠气道炎症和气道黏液高分泌的影响

目的观察益肺健脾方对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)模型大鼠的防治作用,从气道炎症和气道黏液高分泌角度探讨其作用机制。方法采用烟熏和大鼠气管内注入脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)的方法建立COPD模型。将雄性SD大鼠随机分为空白对照组(对照组)、模型组、益肺健脾方组(中药组),每组6只。采用肺功能仪检测大鼠用力肺活量(forced vital capacity,FVC)、0.1秒用力呼气容积(forced expiratory volume in 0.1 second,FEV0.1)、FEV0.1/FVC、呼气峰值流速(peak expiratory flow,PEF),HE染色观察大鼠支气管、肺组织病理变化。采用阿尔辛蓝-过碘酸雪夫(AB-PAS)染色观察气道杯状细胞。采用ELISA法检测各组大鼠支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中IL-8、IL-17及TNF-α的含量。采用免疫组织化学法检测大鼠气道中黏附分子1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)、核因子κB(nuclear factor-κb,NF-κB)、黏蛋白5AC(mucin 5AC,Muc5AC)和T0ll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)蛋白的表达。采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,real-time qPCR)检测支气管肺组织中Muc5AC和TLR4 mRNA的表达。结果模型组大鼠支气管、肺组织改变符合COPD病理表现。与模型组比较,中药组肺损伤程度减轻。与对照组比较,模型组FVC、FEV0.1、FEV0.1/FVC、PEF降低(P0.01),BALF中IL-8、IL-17和TNF-α含量升高(P0.01),支气管肺组织中ICAM-1、NF-κB、Muc5AC蛋白、TLR4蛋白、Muc5AC mRNA及TLR4 mRNA表达水平升高(P0.01)。与模型组比较,中药组FVC、FEV0.1、FEV0.1/FVC、PEF升高(P0.01,P0.05),其余各指标均降低(P0.01,P0.05)。结论益肺健脾方可降低COPD模型大鼠BALF中IL-8、IL-17、TNF-α水平,抑制气道和肺组织内ICAM-1、NF-κB、Muc5AC和TLR4蛋白的表达,通过减轻气道炎症和气道黏液高分泌作用达到防治COPD目的。     

复制COPD大鼠模型的心得体会

目的:探讨复制COPD大鼠模型的方法并总结其经验。方法:从184只SD大鼠中随机选取18只纳入假手术组,其余166只用于造模。采用气道注射脂多糖加烟熏的方法复制COPD大鼠模型,假手术组于同一日气道注射等量生理盐水。观察大鼠一般情况及呼吸系统体征;光镜下观察大鼠肺组织;用ELISA法检测BALF中IL-1β、IL-6、IL-8、NF-κB、TNF-α炎性因子水平。结果:假手术组大鼠肺组织镜下见异常率为18.8%,模型组为92.1%;模型组大鼠BALF中IL-1β、IL-6、IL-8、NF-κB、TNF-α的含量与假手术组相比均有显著差异,提示造模成功,造模过程中死亡率为46.4%。结论:气道注射脂多糖加烟熏的方法可成功复制COPD大鼠模型,但尚需改善具体细节以降低死亡率。     

养阴清热化瘀方对急性放射性肺炎大鼠TLR-4/NF-κB信号通路的影响

目的:探讨养阴清热化瘀方对大鼠急性放射性肺炎的防护作用及可能机制。方法:采用随机数字表法将48只雌性Wistar大鼠随机分为空白对照组(NC)、模型组(MD)、养阴清热化瘀方提前干预组(YHF-EI)及养阴清热化瘀方组(YHF-ST),分别于照射后4周时采集血清及取出右肺。观察大鼠的一般情况,应用HE染色观察肺组织病理改变,ELISA法检测血清中含量, RT-PCR和Western-blotting法分别检测肺组织内TLR4、NF-κB p65 mRNA和蛋白的水平。结果:养阴清热化瘀方能显著减轻大鼠放射性肺炎的炎症表现; 与空白对照组比较,血清中TNF-α、IL-6、TGF-β的含量升高,TLR4和NF-κB p65 mRNA转录活性增强,肺组织中TLR4和NF-κB p65的蛋白表达水平升高; 与模型组比较,两组养阴清热化瘀方组血清中TNF-α、IL-6、TGF-β的含量降低,TLR4和NF-κB p65 mRNA转录活性下降,肺组织中TLR4和NF-κB p65的蛋白表达水平降低。结论:养阴清热化瘀方可能通过抑制“TLR4/NF-κB”信号通路,从而抑制TNF-α、IL-6、TGF-β的产生,起到抵抗放射性肺炎的发生,从而发挥放射防护作用。     

中药黄龙汤对CPL大鼠回肠组织中TLR4/NF-κB信号通路调控的实验研究

目的:通过检测中药黄龙汤干预后CPL模型大鼠中血清中IL-1β、TNF-α含量,回肠组织TLR4、Myd88、NF-κB表达水平,探讨中药黄龙汤通过调控TLR4/NF-κB通路途径的抗炎作用机制。方法:SD大鼠70只,采用盲肠结扎穿孔术复制CPL大鼠模型,并经口给予中药黄龙汤干预,连续干预3 d。末次给药后1 h,采集全血,分离血清,同时取回肠组织冻存。采用ELISA法检测各组大鼠血清中IL-1β、TNF-α含量;Western-blot法检测回肠组织中TLR4、Myd88、NF-κB表达水平。结果:与假手术组比较,模型对照组大鼠血清IL-1β、TNF-α含量显著升高,回肠组织中TLR4、Myd88、NF-κB表达水平显著上调;与模型对照组比较,西药组和黄龙汤联合西药组大鼠血清IL-1β、TNF-α含量显著降低,回肠组织中TLR4、Myd88、NF-κB表达水平显著下调;与西药组比较,黄龙汤联合西药组大鼠血清IL-1β、TNF-α含量及回肠组织中TLR4、Myd88、NF-κB表达水平显著下调,差异有统计学意义。结论:黄龙汤联合西药美罗培南对CPL模型大鼠具有抗炎作用,能够显著抑制血清IL-1β、TNF-α的表达,该作用可能是通过调控回肠组织中TLR4/NF-κB信号通路活化实现的。     

通腑泻肺法对ALI/ARDS大鼠炎症反应的调控作用

目的探讨通腑泻肺中药对ALI/ARDS大鼠炎症反应的可能作用机制。方法 27只大鼠随机分为空白组、模型组、中药组,每组9只。模型组与中药组尾静脉注射内毒素8 mg/kg,空白组大鼠静脉注射生理盐水。中药组在造模完成后给予通腑泻肺中药灌胃,每次0.01 m L/g,每日1次,共7 d,空白组与模型组予等量生理盐水灌胃。通过ELISA法检测大鼠血清及BALF中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10表达,免疫组化染色及Real-Time PCR方法检测肺组织PPARγ、NF-κB p65、TLR4蛋白及其m RNA表达。结果模型组大鼠肺组织中NF-κB p65和TLR4的m RNA表达升高,PPARγ的m RNA表达下降(P0.05),炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10显著升高(P0.05);与模型组相比,中药组NF-κB p65、TLR4的m RNA表达降低,PPARγ的m RNA表达升高(P0.05),炎症因子显著降低(P0.05)。结论通腑泻肺中药可以上调ALI/ARDS状态下PPARγ的表达,降低TLR4及NF-κB表达,减轻TLR4介导的炎症反应。     

阳和平喘颗粒对哮喘大鼠HMGB1相关信号通路蛋白及炎症因子的影响

目的 探讨阳和平喘颗粒对哮喘大鼠相关炎症因子及高迁移率组蛋白（HMGB1）、Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)信号通路调控的影响。方法 60只SD雄性大鼠按随机数字表法分为正常组，模型组，地塞米松组（0.25 g/kg），阳和平喘颗粒（简称阳和）低（3.87 g/kg）、中（7.74 g/kg）、高（15.48 g/kg）组，每组10只。联合应用氢氧化铝和卵蛋白致敏诱发大鼠，建立哮喘的动物模型，药物干预4周。采用HE染色观察肺组织病理炎症评分和形态学变化；吉姆萨染色计肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞（Eos）、中性粒细胞（Neu）、淋巴细胞（Lym）数量；动物肺功能仪检测各组大鼠肺功能；免疫组化法检测肺组织HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表达量；酶联免疫吸附测定法检测大鼠血清中IL-5、IL-4、IL-13含量；Western Blot法检测各组大鼠肺组织HMGB1、TLR4、磷酸化核因子-κB(p-NF-κB)、磷酸化核因子-κB抑制蛋白（p-IκB）蛋白表达情况；实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）检测各组大鼠肺组织HMGB1、TLR4、NF-κB、核因子-κB...     

外感清热解毒方对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤的影响

目的：探讨外感清热解毒方对脂多糖（LPS）诱导急性肺损伤（ALI）大鼠的影响及作用机制。方法：20只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、外感清热解毒方组、miR-495抑制剂组。气管滴注LSP（5 mg/kg）成功复制ALI大鼠模型，给予相应干预。定量PCR检测大鼠肺组织miR-495水平；苏木精-伊红（HE）染色观察肺组织病理改变；酶联免疫吸附试验检测肺泡灌洗液（BALF）中白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-1β、IL-18、IL-10炎症介质和髓过氧化物酶（MPO）活性；蛋白质免疫印迹法检测肺组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）、凋亡相关微粒蛋白（ASC）、胱天蛋白酶-1（Caspase-1）、GSDMD蛋白表达。结果：与对照组比较，模型组大鼠肺组织miR-495表达下调（P<0.05），出现病理损伤，BALF中IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-18含量升高，IL-10含量下降，MPO活性增强；肺组织NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达增加（均P<0.05）。与模型组和miR-495抑制剂组比较，外感清热解毒方组大鼠肺组织miR-495表达上调（P<0.05），病理损伤减轻，BALF中IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-18含量下降，IL-10含量升高，MPO活性减弱；NLRP3、ASC表达下调（均P<0.05），Caspase-1表达差异无统计学意义（P>0.05）。除对照组外，均可见GSDMD蛋白切割，外感清热解毒方组蛋白切割表达水平明显低于模型组和miR-495抑制剂组。结论：外感清热解毒方对ALI大鼠具有保护作用，其机制可能与调控miR-495/NLRP3/GSDMD信号通路，减轻炎症反应，抑制细胞焦亡有关。     

双藤痹痛凝胶膏剂对胶原诱导性关节炎模型大鼠血浆炎性因子和滑膜组织相关因子的影响

目的观察双藤痹痛凝胶膏剂对胶原诱导性关节炎(CIA)模型大鼠血浆炎性细胞因子和滑膜组织Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(My D88)、核因子-κB(NF-κB)表达的影响,探讨其相关作用机制。方法大鼠尾部皮下注射胶原乳剂制作CIA模型。大鼠随机分为正常组、模型组和双藤痹痛凝胶高、低剂量组,ELISA检测血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β及IL-6的含量,RT-PCR检测滑膜组织TLR4、My D88、NF-κB的mRNA表达,Western blot检测滑膜组织TLR4、My D88、NF-κB的蛋白表达。结果与模型组比较,双藤痹痛凝胶高、低剂量组大鼠血浆TNF-α、IL-1β及IL-6含量显著降低,滑膜组织TLR4、My D88、NF-κB mRNA和蛋白表达明显降低。结论双藤痹痛凝胶膏剂可能是通过抑制炎症反应、调节滑膜组织TLR4/NF-κB信号通路相关靶点表达发挥抗炎作用。     

三草降压汤对自发性高血压大鼠心脏NF-κB/NLRP3/IL-1β信号通路的影响

目的观察三草降压汤(Sancao Jianya decoction,SCD)对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)心脏组织的NF-κB/NLRP3/IL-1β通路相关因子的表达。方法 50只雄性SHR大鼠,随机分为模型组、卡托普利组、SCD高剂量组、SCD中剂量组、SCD低剂量组,10只WKY大鼠作为对照组,分别灌胃给药8周后取材。检测各组大鼠动脉压、左心室重量指数(left ventricular mass index, LVMI)、心脏组织病理变化;酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β, IL-1β)含量;Western blot法检测心脏组织中核因子κB(nuclear factorκB, NF-κB)、NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3, NLRP3)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1, Caspase-1)、IL-1β蛋白表达;荧光定量PCR法检测NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1、IL-1βmRNA的含量。结果与空白组相比较,模型组血压、LVMI、心肌病理损害、TNF-α、IL-1β含量、NF-κB/NLRP3/IL-1β通路相关因子的表达均显著增加(P0.05);与模型组相比,SCD高、中剂量组、卡托普利组均出现不同程度的血压下降、LVMI减低、心肌病理损害减轻(P0.05),各治疗组大鼠均出现不同程度TNF-α、IL-1β含量、NF-κB/NLRP3/IL-1β通路相关因子的表达下降。结论 SCD可调节NF-κB/NLRP3/IL-1β通路相关因子的表达、抑制炎症反应、保护高血压心脏损害,该通路可能是其发挥降压作用的分子学机制。     

4种归肺经中药对肺热证小鼠TLR2,NF-κB表达变化的研究

目的:研究麻黄、干姜、黄芩、桑白皮4味归肺经中药对肺热证小鼠肺组织TLR2,NF-κB p65表达的影响,探讨这4味中药干预肺热证的作用机制。方法:将100只健康KM种小鼠随机分为正常对照组、模型组、麻黄、干姜、黄芩、桑白皮组(20,10 g·kg^-1),鼻腔滴入肺炎链球菌菌液建立小鼠肺热证模型,分别给予不同中药治疗,应用免疫组化法检测肺组织TLR2,NF-κB p65蛋白含量,Real-time PCR法检测肺组织TLR2,NF-κB p65 mRNA表达水平。结果:与对照组比较,模型组TLR2,NF-κB p65蛋白含量升高（P<0.01）,mRNA表达上调（P<0.01或P<0.05）;与模型组比较,麻黄高、低剂量组、干姜低剂量组、黄芩高剂量组TLR2蛋白表达降低（P<0.05或P<0.01）;麻黄高、低剂量组、干姜低剂量组、黄芩高、低剂量组、桑白皮高、低剂量组NF-κB p65蛋白含量降低（P<0.05或P<0.01）;麻黄高、低剂量组、干姜高、低剂量组、黄芩高剂量组、桑白皮高剂量组TLR2 mRNA表达下调（P<0.01或P<0.05）。结论:麻黄、干姜、黄芩、桑白皮可能通过下调TLR2,NF-κB p65蛋白及mRNA表达,介导TLR2/NF-κB炎症信号通路,从而减轻小鼠肺热证肺组织损伤。     

肺宁颗粒对AECOPD大鼠肺组织肺保护作用和血清TLR4、NF-κB、SOD水平的影响

目的:观察肺宁颗粒对慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性期模型大鼠肺组织病理及血清TLR4、NF-κB、SOD水平的影响,初步探索肺宁颗粒在COPD急性期的肺保护作用机制。方法:将60只雄性Wistar大鼠随机分为6组,组别设立为空白组、AECOPD模型组、肺宁颗粒低、中、高剂量组、抗生素干预组,成功建立AECOPD大鼠模型后,各干预组对应给予药物治疗,共计1周。治疗结束后观察肺组织病理,治疗第4天和第8天采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清TLR4、NF-κB、SOD含量。结果:肺组织病理结果显示符合COPD病理性改变;肺宁颗粒各剂量组及抗生素干预组肺组织病变较前减轻,结果发现,第4天和第8天,AECOPD模型组大鼠血清中TLR4、NF-κB水平较空白组升高,SOD水平较空白组降低,且具有统计学差异(P0.05);AECOPD大鼠各用药组血清中TLR4、NF-κB水平较模型组降低,血清中SOD水平较模型组升高,且具有统计学差异(P0.05)。NF-kB表达水平测定中,肺宁颗粒三个剂量组第4天和第8天前后比较,均有统计学差异(P0.05)。TLR4表达水平测定中,第8天的肺宁颗粒高剂量组与低剂量组之间比较,具有统计学差异(P0.05)。结论:肺宁颗粒一定程度上抑制AECOPD中TLR4和NF-κB因子的表达,且肺宁颗粒干预组SOD活性明显升高,肺宁颗粒对感染所致慢性阻塞性肺疾病急性加重模型大鼠肺损伤具有一定的保护作用。     

当归芍药散对慢性盆腔炎大鼠子宫组织NF-κB信号通路蛋白的影响

目的:探讨当归芍药散对慢性盆腔炎大鼠子宫组织NF-κB信号通路蛋白的影响。方法:以SD雌性大鼠为研究对象,采用金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及解脲脲原体混合菌接种法建立慢性盆腔炎模型。HE染色法探究当归芍药散对大鼠子宫组织炎症的缓解作用;ELISA检测大鼠血清中促炎因子IL-1β、IL-8、TNF-α和抗炎因子IL-4、IL-10、IL-13的水平;Western blotting检测大鼠子宫组织内NF-κB蛋白的表达情况。结果:HE染色结果显示,当归芍药散能够缓解大鼠子宫组织的炎症;ELISA结果显示,模型组大鼠血清中IL-1β、IL-8和TNF-α的含量明显高于对照组,而IL-4、IL-10、IL-13的含量明显低于对照组;当归芍药散各剂量组大鼠血清中促炎因子IL-1β、IL-8和TNF-α的含量明显低于模型组,抗炎因子IL-4、IL-10、IL-13的含量明显高于模型组,且随着当归芍药散剂量增大效果越好。Western blotting结果显示,模型组大鼠子宫组织中p50、p52、p65以及NF-κB蛋白的表达明显高于对照组;经当归芍药散治疗后,慢性盆腔炎大鼠子宫组织p50、p52、p65以及NF-κB蛋白的表达明显低于模型组。结论:当归芍药散能够抑制慢性盆腔炎模型大鼠子宫组织p50、p52、p65以及NF-κB蛋白的表达,并减少血清中促炎因子的水平、增加抗炎因子的水平,且具有明显的剂量依赖性。当归芍药散可能通过抑制NF-κB信号转导通路,降低炎症反应,发挥抗炎免疫作用。     

补肺汤对HMGB1诱导的特发性肺纤维化相关细胞TLR2/NF-κB信号通路的影响

目的?观察补肺汤对高迁移率族蛋白B1（HMGB1）诱导的人非小细胞肺癌细胞（A549）和人肺成纤维细胞（HFL1）形态损伤、炎症反应和Toll样受体2/髓样分化蛋白88/核因子-κB（TLR2/MyD88/NF-κB）信号通路的影响。方法?使用冷冻技术制备补肺汤冻干粉，大鼠补肺汤灌胃4周后取含药血清。将A549细胞和HFL1细胞随机分为空白组、HMGB1组（HMGB1诱导）、补肺汤冻干粉预培养加HMGB1组（冻干粉组，冻干粉浓度分别为0.10%、0.15%、0.20%、0.25%、0.30%）、补肺汤含药血清预培养加HMGB1组（含药血清组，含药血清浓度分别为5%、10%、15%、20%、25%）、阳性药物组（甲泼尼松龙）及空白血清组，按照分组处理细胞。电镜下观察各组细胞形态和超微变化，ELISA法检测细胞中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、NF-κB含量，Western Blot法检测细胞中TLR2、MyD88、NF-κB蛋白表达。结果?电镜显示HMGB1组细胞形态和超微结构损伤明显，补肺汤冻干粉和含药血清能有效恢复细胞形态和超微结构损伤，且浓度越高，恢复效果越显著。与空白组比较，HMGB1组细胞中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、NF-κB含量均升高（P<0.01），TLR2、MyD88、NF-κB蛋白表达升高（P<0.01）；与HMGB1组比较，冻干粉组和含药血清组能浓度依赖性地降低细胞中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、NF-κB含量，且0.25%和0.30%冻干粉组及15%、20%和25%含药血清组含量降低（P<0.05，P<0.01）；浓度依赖性抑制TLR2、MyD88、NF-κB蛋白表达，且0.30%冻干粉组和25%含药血清组抑制作用明显（P<0.01）；补肺汤冻干粉与含药血清各浓度组间各指标比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论?补肺汤冻干粉及含药血清对HMGB1 诱导的A549和HFL1细胞损伤有保护作用，并能减轻炎性因子的释放，机制可能与下调TLR2/MyD88/NF-κB信号通路有关。     

清肺化痰汤对慢性阻塞性肺疾病大鼠模型气道炎症和黏液分泌的调控作用研究

目的:探讨清肺化痰汤对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)大鼠模型气道炎症和黏液分泌的调控机制研究。方法:建立COPD大鼠模型。50只大鼠随机分为对照组、COPD模型组和清肺化痰汤低、中、高剂量组。Real-time RT-PCR法检测肺组织MUC5AC mRNA的表达,免疫组织化学法检测肺组织MUC5AC蛋白表达,ELISA检测肺泡灌洗液中MUC5AC的表达,ELISA检测肺组织TNF-α和IL-1β的表达,Western Blot检测肺组织中NF-κB的表达。结果:(1)COPD模型组大鼠肺组织中MUC5AC mRNA明显升高,和正常对照组比较有统计学差异(P0.05),清肺化痰汤治疗后MUC5AC mRNA的表达水平下降,呈剂量依赖性,和模型组相比较,中剂量组和高剂量组差异有统计学意义;(2)免疫组化结果显示,对照组呈弱阳性表达,COPD模型组可见大量的MUC5AC表达,清肺化痰汤各组治疗后MUC5AC的表达明显下降;(3)ELISA结果显示COPD模型组大鼠肺泡灌洗液中MUC5AC蛋白量明显高于正常对照组(P0.05);清肺化痰汤各组治疗后,肺泡灌洗液中MUC5AC蛋白量明显低于COPD模型组(P0.05);(4)ELISA结果显示COPD模型组大鼠肺组织中TNF-α和IL-1β蛋白量明显高于对照组(P0.05);清肺化痰汤各组治疗后,大鼠肺组织中TNF-α和IL-1β蛋白量明显低于COPD模型组(P0.05),呈剂量依赖性;(5)Western Blot结果显示COPD模型组大鼠肺组织中NF-κB表达明显高于对照组(P0.05);清肺化痰汤各组治疗后,大鼠肺组织中NF-κB的表达水平低于COPD模型组(P0.05),呈剂量依赖性。结论:清肺化痰汤通过抑制NF-κB信号通路调节TNF-α、IL-1β炎症因子的表达,从而抑制气道上皮MUC5AC的表达。