纳米级羟基磷灰石梯度涂层对成骨细胞表型因子表达的影响

目的研究纳米级羟基磷灰石梯度涂层对成骨细胞表型因子表达的影响.方法对生长于纳米级羟基磷灰石梯度涂层上成骨细胞表达的I型前胶原羧基端肽(PICP)、碱性磷酸酶(ALP)和骨谷氨酸蛋白(BGP),于体外培养第1、5、9、13 d时进行定量分析,扫描电镜观察细胞形态学改变.以普通级羟基磷灰石涂层和钛合金圆片作为对照.结果纳米级羟基磷灰石梯度涂层组的PICP、ALP和BGP表达均高于对照组,成骨细胞形态好于对照组.结论纳米级羟基磷灰石梯度涂层材料能促进成骨细胞表型因子的表达.     

大鼠脂肪间充质干细胞复合羟基磷灰石成骨分化的实验研究

目的 脂肪间充质干细胞可与羟基磷灰石复合向成骨细胞分化,检测两种羟基磷灰石复合细胞成骨能力的差别.方法 通过扫描电镜观察脂肪间充质干细胞与普通羟基磷灰石和纳米级羟基磷灰石复合情况.检测细胞与载体复合后,表达碱性磷酸酶和骨钙素的情况.结果 在将AMSCs细胞种植于两种羟基磷灰石载体表面,向成骨方向诱导4周后,通过扫描电镜观察,羟基磷灰石载体表面有细胞存在.在两种不同的羟基磷灰石(HA)ALP的表达差异有显著性.骨钙素的检测发现,在纳米级羟基磷灰石上的表达要高于普通级羟基磷灰石.结论 ①脂肪间充质干细胞(AMSCs)可在裁体上复合生长.②AMSCs与HA载体复合后,可表达成骨细胞的特征.③诱导成骨后,在纳米级羟基磷灰石上复合表达碱性磷酸酶的量高于普通级羟基磷灰石.     

miR-24-3p靶向BMP8B对成骨细胞功能影响的实验研究

目的:探讨miR-24-3p与骨形态发生蛋白8B(BMP8B)的靶向关系，并分析二者对成骨细胞功能的影响。方法:体外分离培养人牙周膜干细胞(hPDLSCs),并将其诱导分化为成骨细胞，采用碱性磷酸酶(ALP)染色法、茜素红染色法鉴定成骨细胞；将成骨细胞分为空白对照组、阴性对照组(inhibitor-NC组)、沉默miR-24-3p表达组(miR-24-3p-inhibitor组)、共转染组(miR-24-3p-inhibitor+BMP8B-siRNA组)。采用实时荧光定量PCR法检测miR-24-3p、BMP8B mRNA水平；CCK-8法、流式细胞仪分别检测各组成骨细胞增殖、凋亡情况；采用ALP活性检测试剂盒检测ALP活性；免疫印迹法检测各组成骨细胞BMP8B蛋白、功能活性相关蛋白(PICP、BGP、OPN)水平。应用TargetScan数据库预测miR-24-3p与BMP8B靶向关系并用双荧光素酶报告基因实验验证。结果:与空白对照组、inhibitor-NC组比较，miR-24-3p-inhibitor组成骨细胞增殖抑制率、凋亡率降低，ALP活性及PICP、BGP、OPN表达升高...     

功能性梯度纳米HA复合涂层促进早期骨生成

采用犬股骨髁植入功能性纳米羟基磷灰石（nanophase hydroxyapatite，n-HA）功能性梯度材料涂层栓和传统材料等离子喷涂涂层（plasma sprayinyhy droxyapatite,PS-HA）栓，并使用四环素荧光双标记。分别在4、8和12周，取材植入体-骨界面组织，制备硬组织切片，通过光学显微镜、荧光显微镜以及图像分析软件，比较两种材料涂层植人体-骨界面成骨细胞生成、植入体界面骨结合情况等组织学情况，通过测量计算植入体界面骨矿化沉积率等骨动力学参数以及涂层材料降解情况，对功能性n-HA复合梯度材料的生物学特性进行了研究。结果表明功能性n-HA复合梯度材料植入体界面较早出现大时成骨细胞，新骨生成速度较快，与植入体紧密结合，材料降解速度慢于传统羟基磷灰石组，骨动力学参数优于对照组。功能性n-HA复合梯度材料具有良好的生物学特性，能促进植入体界面的早期结合，并具有改善植入体远期固定宦效果的潜力，是一种理想的生活学植入材料，具有一定的临床应用前景。     

粗糙钛表面纳米掺锶羟基磷灰石涂层对 BMSCs成骨分化的影响

目的研究粗糙钛表面纳米掺锶羟基磷灰石涂层对大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM SCs)增殖、成骨分化的影响。方法采用电化学沉积技术在粗糙钛表面沉积薄层纳米掺锶羟基磷灰石、纳米羟基磷灰石,用场发射扫描电子显微镜观察其表征,分析锶元素修饰的纳米羟基磷灰石涂层对大鼠BM SCs增殖、碱性磷酸酶活性、矿化结节形成和成骨相关蛋白骨钙素分泌的影响。结果纳米掺锶羟基磷灰石涂层和纳米羟基磷灰石涂层不影响细胞增殖,与目前临床广泛应用的金属钛种植体粗糙表面一样具有良好的生物相容性。相较于纳米羟基磷灰石涂层和粗糙组,纳米掺锶羟基磷灰石涂层可增强BMSCs碱性磷酸酶活性,促进矿化结节形成,提高细胞骨钙素的分泌。纳米羟基磷灰石涂层亦表现了比粗糙组更好的生物活性。结论应用电化学沉积技术进行纳米掺锶羟基磷灰石涂层的制备,可以促进BMSCs成骨分化、种植体周围新骨早期形成,提高种植体骨组织结合率。     

大鼠骨髓基质细胞接种于纳米-羟基磷灰石构建组织工程骨组织的研究

目的：探讨用骨髓基质细胞(MSC)作为种子细胞，三维多孔纳米-羟基磷灰石为支架材料构建组织工程化骨组织的可行性。方法：建立诱导大鼠MSC分化为成骨细胞的新的骨髓培养法，并进行鉴定。将诱导分化形成的成骨细胞，接种于三维多孔纳米-羟基磷灰石多孔支架中，培养15天后，通过扫描电镜观察诱导分化的成骨细胞与三维多孔纳米-羟基磷灰石支架材料的复合情况。结果：大鼠MSC随着培养时间的延长，其碱性磷酸酶活性和骨钙素的分泌逐渐形成，并不断地增加。接种于三维多孔纳米-羟基磷灰石支架材料上的细胞生长良好，形成许多细小的钙结节和胶原纤维。结论：新的骨髓培养法可使大鼠：MSC分化和增生为具有良好功能特性的成骨细胞，三维多孔纳米-羟基磷灰石是可利用的支架材料。用：MSC作为种子细胞，三维多孔纳米-羟基磷灰石作为支架构建组织工程化骨组织有很多优点，具有广阔的应用前景。     

纳米淡水珍珠粉对成骨细胞成骨活性的影响

目的 研究纳米淡水珍珠粉(nanonized freshwater pearl powder,NFPP)对成骨细胞成骨活性的影响.方法 将NF-PP与成骨细胞在体外共同培养,以纳米羟基磷灰石(nanonized hydroxyapatite,NAHA)作为阳性对照组,空白组作为阴性对照组,以细胞贴壁实验检测成骨细胞的黏...     

脂多糖对体外培养成骨细胞凋亡影响的初步实验研究

目的探讨脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)对成骨细胞凋亡的影响。方法体外培养成骨细胞作为细胞模型,对照组采用10%的FBS的DMEM/F12培养液培养,干预组在对照组正常培养1 d后加入10mmol/LLPS培养。取第3代成骨细胞按实验设计分组,于LPS作用后第1、3、5和7天进行形态学观察及成骨细胞增殖的检测,于LPS作用后第3、7、10和14天进行成骨细胞分化指标检测,于LPS作用后第1天采用流式细胞仪对成骨细胞凋亡进行检测。结果两组第1天细胞增殖差异无显著性(P>0.05),干预组第3、5和7天细胞增殖率低于对照组,差异有显著性(P<0.05或P<0.01)。培养后第3、7、10和14天,对照组细胞碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP)逐渐升高,干预组细胞ALP、BGP逐渐降低(P<0.05);同期比较,干预组细胞ALP和BGP含量低于对照组(P<0.01)。对照组成骨细胞第1天自发性凋亡率低于干预组(1.61±0.39)%<(3.14±0.60)%,差异有显著性(P<0.01)。结论一定浓度的内毒素可以诱导体外培养成骨细胞发生凋亡,并使其增殖与分化能力逐渐减弱。     

慢性乙肝患者骨折修复过程血液骨代谢指标检测

目的 通过检测骨代谢指标，探讨慢性乙肝患者骨折修复过程和骨代谢状况。方法 用放免法和ELISA法测定乙肝患者骨折后血液中骨钙素(BGP)、骨碱性磷酸酶(BAIP)、I型前胶原羧基肽(PICP)、I型胶原交联羧基末端肽(ICTP)，并与正常对照组骨折后骨代谢指标进行比较。结果 乙肝患者破骨细胞功能指标ICTP和反映骨形成增殖期的成骨细胞功能指标PICP与对照组间无差异；反映成骨细胞细胞外基质成熟期和基质矿化期活性的指标BAIP和BGP低于对照组。结论 慢性乙肝患者骨折修复过程骨代谢正常，但由于肝功能受损营养代谢不良，钙和维生素D摄入不足，吸收异常，导致骨折修复迟缓，成熟障碍和基质矿化不良。     

大豆异黄酮对体外原代大鼠成骨细胞增殖、分化的影响

目的 :研究大豆异黄酮对体外培养原代大鼠成骨细胞增殖与分化的影响。方法 :采用新生大鼠颅骨分离培养成骨细胞 ,培养液中加入不同浓度的大豆异黄酮 ,以17- β 雌二醇 (E2)作为阳性对照组 ,测定细胞增殖情况、碱性磷酸酶 (ALP)活性及骨钙素 (BGP)含量。结果 :与正常对照组相比 ,大豆异黄酮可增加成骨细胞数量(P<0.01) ,提高细胞的ALP活性和BGP含量(P<0.01)。除ALP外 ,这些作用均低于E2(P<0.01)。结论 :大豆异黄酮可促进体外培养成骨细胞的增殖、分化 ,其作用与雌激素相似 ,但低于雌激素     

骨康胶囊对老年桡骨远端骨折患者术后愈合的影响

探讨骨康胶囊辅助手术治疗老年桡骨远端骨折患者对骨折愈合、功能恢复及骨代谢指标的影响。观察治疗前后血清中Ⅰ型前胶原羧基端肽(PICP)、骨钙素(BGP)、骨保护素(OPG)、碱性磷酸酶(ALP)、腕关节功能恢复情况。术后2周,骨康胶囊能够增加血清中PICP、BGP、OPG、ALP水平;骨康胶囊显著缩短骨折愈合时间,增强手术后关节功能。康胶囊辅助手术治疗老年桡骨远端骨折可以促进骨折愈合、促进功能恢复、减少术后发生严重肿胀及疼痛。     

金刚石涂膜材料对成骨细胞骨钙素表达的影响

目的:探讨不同种植材料表面成骨细胞的功能状态.方法:用Wistar大鼠颅顶骨建立体外培养成骨细胞模型,将第三代成骨细胞接种到金刚石涂膜(CVD)、羟基磷灰石(HA)、纯钛(Ti)3种种植材料表面,通过反转录聚合酶链式扩增方法测定成骨细胞骨钙素mRNA.结果:CVD表面的成骨细胞骨钙素mRNA表达比HA出现早,Ti表面未见骨钙素mRNA表达.结论:CVD表面骨钙素的早期表达,推测其有成骨功能,适合成骨细胞生长.     

等离子喷涂硅灰石涂层对体外培养成骨细胞的影响

目的 研究硅灰石涂层的细胞相容性和成骨诱导能力。方法 将硅灰石等离子喷涂于Ti-6Al-4V表面，成骨细胞于其表面培养，测定培养液的碱性磷酸酶活性、Ⅰ型前胶原羧基末端前肽和骨钙素的含量，并观察硅灰石涂层表面成骨细胞的形态和数量。结果 培养7～12d，Ⅰ型前胶原羧基末端前肽含量和碱性磷酸酶活性最高；13～21d，骨钙素内含量最高，涂层表面细胞增殖明显。结论 硅灰石涂层具有良好的细胞相容性和成骨诱导能力。     

降脂药辛伐他汀对大鼠成骨细胞代谢的影响

目的探讨降脂药辛伐他汀对大鼠成骨细胞代谢的影响。方法分离培养2周龄乳鼠成骨细胞,传代后以辛伐他汀作干预,观察成骨细胞的成骨代谢中碱性磷酸酶(ALP)及骨形态发生蛋白(BMP-2)表达的改变。结果成骨细胞传代后辛伐他汀可明显增强干预组的ALP及BMP表达水平,使其与对照组呈现明显差异(P<0.01)。结论辛伐他汀能够明显提高大鼠成骨细胞的成骨代谢指标的表达,表明其具有成骨促进作用。     

间断流体力学对骨髓基质来源的成骨细胞分化及功能的影响

目的 观察间断流体力学刺激对骨髓基质来源的成骨细胞分化及功能的影响。方法 多孔钙磷陶瓷载体中种植骨髓基质来源的成骨细胞,采用间断旋转细胞培养方法产生流体力学刺激。体外共同培养4、7和14d。利用定量逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）技术和生物化学方法检测成骨细胞显型蛋白（碱性磷酸酶,I型胶原,骨钙素,骨桥素,骨连接素,骨涎蛋白）的表达情况。静止细胞培养作为对照。结果 旋转细胞培养条件下,碱性磷酸酶活性和I型胶原mRNA表达水平明显增加,7d达到高峰。其他显型蛋白mRNA在4d时开始表达,7d达到高峰,14d开始下调。静止细胞培养条件下,碱性磷酸酶活性和I型胶原mRNA表达逐渐增加,14d达到最高。其他显型蛋白mRNA在7d时开始表达,14d达到最高。结论 间断旋转细胞培养方法产生流体力学刺激促进体外培养的骨髓基质来源的成骨细胞分化和功能发挥。     

表面纳米化钛合金对成骨细胞的增殖、分化和矿化的促进作用研究

Background  Previous studies have demonstrated increased functions of osteoblasts on nanophase materials compared to conventional ceramics or composites. Nanophase materials are unique materials that simulate dimensions of constituent components of bone as they possess particle or grain sizes less than 100 nm. However, to date, interactions of osteoblasts on nanophase materials compared to conventional metals remain to be elucidated. The objective of the present in vitro study was to synthesize nanophase metals (Ti6Al4V), characterize, and evaluate osteoblast functions on Ti6Al4V. Such metals in conventional form are widely used in orthopedic applications.

Methods  In this work, nanophase Ti6Al4V surfaces were processed by the severe plastic deformation (SPD) principle and used to investigate osteoblast long-term functions. Primary cultured osteoblasts from neonatal rat calvaria were cultured on both nanophase and conventional Ti6Al4V substrates. Cell proliferation, total protein content, and alkaline phosphatase (ALP) activity were evaluated after 1, 3, 7, 10 and 14 days. Calcium deposition, gene expression of type I collagen (Col-I), osteocalcin (OC), osteopontin (OP) and the production of insulin-like growth factor-I (IGF-I) and transforming growth factor-beta 1 (TGF-β1) were also investigated after 14 days of culture.

Results  Functions of osteoblasts including proliferation, synthesis of protein, and ALP activity were improved on the nanophase compared to the conventional Ti6Al4V. The expression of Col-I, OC and OP mRNA was also increased on nanophase Ti6Al4V after 14 days of culture. Calcium deposition was the same; the average number of the calcified nodules on the two Ti6Al4V surfaces was similar after 14 days of culture; however, highly significant size calcified nodules on the nanophase Ti6Al4V was observed. Of the growth factors examined, only TGF-β1 showed a difference in production on the nanophase surface.

Conclusion  Nanophase Ti6Al4V surfaces improve proliferation, differentiation and mineralization of osteoblast cells and should be further considered for orthopedic implant applications.

     

非胰岛素依赖型糖尿病患者血清PICP、ICTP测定及其与骨代谢的关系

目的　探讨非胰岛素依赖型糖尿病 (2型糖尿病 )对骨代谢的影响。　方法　对 30例 2型糖尿病患者及 40例正常人 (对照组 )血清 I型前胶原羧基末端前肽 (PICP)、I型胶原羧基吡啶并啉交联肽 (ICTP)、骨钙素(BGP)、钙 (Ca)、磷 (P)等骨代谢相关指标进行测定。　结果　 2型糖尿病患者血清 ICTP较对照组明显增高 (P<0 .0 1) ,PICP/ ICTP则较对照组明显降低 (P<0 .0 1) ,血清 PICP、BGP较对照组降低 ,但差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ,血清 Ca、P与对照组无显著性差异。血清 ICTP与病程呈正相关 (r=0 .474,P<0 .0 1) ,血清 PICP与 BGP呈正相关(r=0 .5 89,P<0 .0 1)。　结论　 2型糖尿病患者骨吸收过程增加较为明显 ,造成骨量丢失。     

RUNX2/LAPTM5在小鼠颅骨前成骨细胞矿化诱导中的表达

目的 探讨RUNX2/LAPTM5在矿化诱导过程中的表达与成骨及溶酶体的相关性。方法 矿化诱导MC3T3-E1,对照组不做处理,茜素红染色检测矿化情况,碱性磷酸酶染色检测成骨分化情况。RT-qPCR及Western blot检测分化0-5 d RUNX2及LAPTM5的基因及蛋白表达。过表达与干扰RUNX2/LAPTM5的表达后,Western blot检测RUNX2、LAPTM5的表达。过表达与干扰LAPTM5的表达后,Western blot检测成骨相关基因碱性磷酸酶、骨钙素 的表达。结果 倒置显微镜下观察,茜素红染色矿化结节计数随时间变化逐渐增多,矿化结节的大小也逐渐变大;碱性磷酸酶染色蓝紫色颗粒计数随时间逐渐增加。RT-qPCR及Western blot结果显示RUNX2及LAPTM5的表达,其在成骨矿化过程中呈上升趋势（P<0.001）。过表达与干扰RUNX2影响LAPTM5表达（P<0.05）;过表达与干扰LAPTM5对RUNX2的影响不显著。过表达与干扰LAPTM5影响了成骨的表达（P< 0.01）。结论 RUNX2/LAPTM5可能参与了成骨细胞分化调节,RUNX2可能参与LAPTM5的表达调控。RUNX2/LAPTM5可能在溶酶体参与成骨矿化的过程中起到桥梁作用。     

表面修饰对纳米晶胶原基骨细胞相容性的影响

目的:探索纤维蛋白(fibrin,FB)修饰的纳米晶胶原基骨(nanoHydroxyapatite/collagen,nHAC)支架材料上成骨诱导的骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells,MSCs)黏附、增殖及分化的情况。方法:实验分为两组:实验组,纤维蛋白修饰的纳米晶胶原基骨(FB-nHAC);对照组,单纯的纳米晶胶原基骨(nHAC)。将SD大鼠骨髓间充质干细胞定向诱导为成骨细胞,种植于支架材料上,体外复合培养。通过检测支架材料的细胞黏附率、不同时间点(3,7,10,14 d)支架材料中细胞数、碱性磷酸酶表达量以及扫描电镜观察细胞在支架材料上的生长状况,比较分析不同支架材料与细胞生物相容性差异。结果:大鼠MSCs经诱导培养14 d后,I型胶原免疫荧光染色为阳性;实验组支架材料的细胞黏附率显著高于对照组(P<0.05);且相同时间点实验组支架材料中的细胞数及碱性磷酸酶表达量也明显高于对照组(P<0.05);电镜观察发现两组材料上均有细胞生长,但实验组的细胞生长状况明显好于对照组。结论:表面修饰纤维蛋白后的nHAC支架材料具有更好的细胞黏附、增殖及促成骨分化能力。     

外源性Ⅰ型胶原对人胚骨膜成骨细胞生物学特性的影响

OBJECTIVE: To study the influence of type I collagen (COL I) on the cell behavior of human periosteous osteoblasts (OB) and the application of type I collagen in constructing bioactive artifical bone. METHODS: OB were cultured on dishes coated with bovine type I collagen in different final concentrations. The cell adhesion was examined by the methods of cell count, the proliferation of OB was studied by 3H-TdR, and the osteoblastic ability was assessed by the synthesis of collagen, osteocalcin and alkaline phosphatase (ALP). RESULTS: OB cultured on type I collagen layer had the following characteristics: 1. The amounts of adhesive cells were maximal top in 25 micrograms/ml final concentration; 2. The proliferation of OB was decreased above 12.5 micrograms/ml final concentration (P < 0.05); 3. The synthesis of type I collagen was reduced slightly (above 25 micrograms/ml, P < 0.05); 4. The secretion of osteocalcin was increased markedly (above 6.25 micrograms/ml, P < 0.05, which reached maximally in 25 micrograms/ml); 5. The ALP activity was also increased (above 12.5 micrograms/ml, P < 0.05). CONCLUSION: Type I collagen promotes the expression of osteoblastic phenotype and cell adhesion. When the scaffold materials for bone tissue engineering are coated with type I collagen, the osteogenesis of OB is enhanced to accelerate the transformation course from artificial bone to biological bone, the best final concentration is 25 micrograms/ml.