切割bcl-2 mRNA核酶对人胆管癌细胞致瘤性的影响

目的 研究切割ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ核酶对人胆管癌细胞致瘤性的影响。方法 将合成的切割ｂｃｌ－ｍＲＮＡ核酶基因与真核细胞表达载体重组,并用重组后的载体转染人胆管癌细胞,再将经转染的胆管癌细胞接种于裸鼠皮下,观察该肿瘤细胞的致瘤情况。结果 转染切割ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ核酶基因的胆管癌细胞的ｂｃｌ－２表达水平及裸鼠体内致瘤性（０／５）较对照组（８／１０和５／５）明显下降。结论 该切割ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ核酶能     

切割bcl－2mRNA核酶诱导HL－60细胞凋亡的形态学研究

切割ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ核酶诱导ＨＬ－６０细胞凋亡的形态学研究赵永同，朱峰，金明，王刚，王成济（第四军医大学生物化学教研室西安７１００３３）关键词核糖核酸，凋亡，ｂｃｌ－２中图号Ｑ５２２；Ｑ７８１核酶（ｒｉｂｏｚｙｍｅ，ＲＺ）是一类具有酶活性的ＲＮＡ分...     

反义bcl—2RNA促进HL—60细胞的凋亡

目的：分析反义ｂｃｌ－２对ＨＬ－６０细胞凋亡的作用，为进一步研究凋亡机制打基础，方法：我们用ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将插有反义ｂｃｌ－２基因片段的重组逆转病毒载体ｐＤＯＲ－ＡＢ转染ＨＬ－６０细胞，用核酸打点杂交方法检测转染效果和载体表达效果，用流式细胞仪检测ｂｃｌ－２的改变及细胞周期的变化，用光镜和电镜观察转染细胞的形态学改变，并用转染的细胞对足叶乙甙敏感性的变化间接证明反义ｂｃｌ－２的作用，结果：ｐ     

反义bcl─2RNA促进HL─60细胞的凋亡

目的：分析反义ｂｃｌ－２对ＨＬ－６０细胞凋亡的作用，为进一步研究凋亡机制打基础．方法：我们用ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将插有反义ｂｃｌ－２基因片段的重组逆转病毒载体ｐＤＯＲ－ＡＢ转染ＨＬ－６０细胞，用核酸打点杂交方法检测转染效果和载体表达效果，用流式细胞仪检测ｂｃｌ－２的改变及细胞周期的变化，用光镜和电镜观察转染细胞的形态学改变，并用转染的细胞对足叶乙甙敏感性的变化间接证明反义ｂｃｌ－２的作用．结果：ｐＤＯＲ－ＡＢ转入ＨＬ－６０细胞并表达ｂｃｌ－２反义ＲＮＡ；细胞内Ｂｃｌ－２蛋白含量明显下降；细胞周期分析可见凋亡峰；电镜下可见凋亡细胞；ＤＮＡ凝胶电泳出现梯状电泳带．结论：反义ｂｃｌ－２瞬时表达可促进ＨＬ－６０细胞的凋亡，ｂｃｌ－２在ＨＬ－６０细胞凋亡的调节中起重要作用     

利用核酶技术下调人胆管癌细胞bcl-2表达水平

目的 研究切割bcl-2mRNA核酶降低人胆管癌细胞bcl-2表达水平的作用。方法 将合成的切割bcl-2 mR—NA核酶基因与真核细胞表达载体重组，并用重组后的载体转染人胆管癌细胞，通过免疫细胞化学、流式细胞仪等手段，观察转染后的胆管癌细胞bcl-2的表达水平。结果 转染切割bcl-2mRNA核酶基因的胆管癌细胞内bcl-2的表达水平较对照组明显下降；部分细胞出现自发性凋亡现象。结论 切割bcl—2mRNA核酶可明显降低胆管癌细胞内bcl-2的表达水平，并能够诱导其出现自发性凋亡。     

转染bcl-2基因对心肌细胞缺氧耐受性的影响

目的 探讨转染ｂｃｌ－２基因能否提高心肌细胞对缺氧的耐受性。方法 ①重组真核细胞表达载体。将含编码人ｂｃｌ－２ｃＤＮＡ寒带开放阅读框的ｂｃｌ－２ｃＤＮＡ重组至逆转录病毒载体－ｐＬＸＳＮ的ＥｃｏＲⅠ位点上,用脂质体包裹重度组质粒导入ＰＡ３１７细胞株,并经Ｇ４１８筛选阳性克隆;②用含高滴度重组病毒的上清感染心肌细胞,原位杂交鉴定其转染是否成功;③观察转染心肌细胞在缺氧环境下的生存率。结果 ①重组了含ｂ     

针对bcl—2RNA核酶体外切割反应的琼脂糖凝胶电泳

用琼脂糖凝胶电泳检测外ｂｃｌ－２ｃＤＮＡ和ＲＺＤＮＡ转录物与鉴定核酸的体外切割活性，方法：琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。结果：琼脂糖凝胶电泳可见核酶和ｂｃｌ－２ＲＮＡ转录物及其切割ｂｃｌ２ＲＮＡ后的产物，结论：琼脂糖凝胶电泳是一种可用于外转录物与初步鉴定核酸切割活性的简便方法。     

脂质体转染bcl-2反义核酸对HL-60细胞凋亡的影响

目的人白血病细胞系ＨＬ－６０细胞高表达凋亡抑制基因ｂｃｌ－２蛋白，是研究细胞增殖、凋亡的良好模型。通过脂质体转染ｂｃｌ－２反义核酸，观察其对细胞增殖的抑制，对ｂｃｌ－２蛋白表达影响，及诱导细胞凋亡出现。方法ＨＬ－６０细胞在３７℃、５％ＣＯ２条件下，培养于含１５％小牛血清及含青、链霉素（每毫升各１００Ｕ）的ＲＰＭＩ１６４０完全培养基中，细胞接种密度为１０７／Ｌ，反义核酸终浓度为５μｍｏｌ／Ｌ，反义核酸与脂质体比例为１．０ＯＤ：５０μｌ。脱离小牛血清转染２４ｈ，同时设置空白组、无义组、反义组、脂质体组、脂质体＋无义组，再连续培养４天，做免疫组化，检测ｂｃｌ－２蛋白表达。提取总ＲＮＡ，行ＲＴ－ＰＣＲ分析ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ表达，以及透射电镜检查，观察细胞凋亡情况及脂质体转染情形。结果脂质体转染ｂｃｌ－２反义核酸的作用：（１）抑制ＨＬ－６０细胞增殖，在转染后第五天最明显，经统计学处理，反义组与空白及无义对照组有显著性差别，脂质体转染反义核酸组与其余组均有统计上显著性差别。（２）降低ｂｃｌ－２蛋白表达水平，处理前ｂｃｌ－２免疫组化阳性率为６２±１．４８％，经转染ｂｃｌ－２反义核酸处理后，ｂｃｌ－２表达率为３２．５±１．     

针对bcl─2RNA核酶体外切割反应的琼脂糖凝胶电泳

目的：用琼脂糖凝胶电泳检测体外ｂｃｌ┐２ｃＤＮＡ和ＲＺＤＮＡ转录物与鉴定核酸的体外切割活性．方法：琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳．结果：琼脂糖凝胶电泳可见核酶和ｂｃｌ－２ＲＮＡ转录物及其切割ｂｃｌ－２ＲＮＡ后的产物．结论：琼脂糖凝胶电泳是一种可用于外转录物与初步鉴定核酸切割活性的简便方法     

显示切割bcl－2mRNA的核酶在HL－60细胞内表达的免疫组织化学和原位杂交双染色法

显示切割ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ的核酶在ＨＬ－６０细胞内表达的免疫组织化学和原位杂交双染色法王剑波，赵永同，王伯（第四军医大学病理学教研室西安７１００３３第四军医大学生物化学教研室）关键词凋亡；核酸；原位杂交；免疫组织化学中图号Ｒ４４６．６２核酶（ｒｉｂｏ...     

生长抑素类似物诱导人胆管癌SK-ChA-1细胞调亡及调亡相关基因表达的研究

目的：探讨生长抑素类似物SMS201－995（SMS）抑制人胆管癌生长时对SK－ChA-1细胞凋亡调控基因bcl-2和bax的作用。方法：用DNA凝胶电泳和流式细胞仪检测Annexin V标记凋亡细胞技术研究SMS诱导细胞凋亡的情况;用免疫组化和原位杂交分析SMS凋亡调控基因bcl-2和bax的影响。结果：SMS处理SK－ChA-1细胞后,Annexin V标记的凋亡细胞增多,DNA凝胶电泳显示典型的凋亡和梯状图谱,同时SMS可使细胞bcl-2蛋白表达下降,使bax蛋白和mRNA表达升高。结论：SMS能诱导SK－ChA-1细胞发生凋亡,bax和bcl-2凋亡基因介导了SMS对SK－ChA-1细胞凋亡的发生。     

PTEN基因诱导人脑胶质瘤SHG-44细胞凋亡及bcl-2表达下调

目的 探讨PTEN基因对人脑胶质瘤SHG－44细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2表达的影响，阐明PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机制。方法PTEN基因体外转染SHG－44细胞，筛选阳性细胞克隆，以原位杂、免疫组化方法检测PTEN基因的表达情况；采用透射电镜、流式细胞仪和核DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞的凋亡情况；以免疫荧光法检测bcl-2基因的表达。结果 PTEN基因转染的SHG－44细胞有PTEN蛋白的表达。透射电镜下可见转染PTEN基因后细胞核染色质浓缩边集、胞质浓缩、核破裂及凋亡小体形成等典型的凋亡表现；流式细胞仪显示细胞周期从G1期到S期发生抑制，并且在G1期峰前出现一明显的凋亡峰（15．9％）；细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳呈现凋亡细胞特有的梯状条带；bcl-2的表达也显著下调。结论 PTEN基因可诱导SHG－44细胞凋亡，并下调bcl-2蛋白的表达，这可能是PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的分子机制之一。     

人穿孔素基因的克隆及其在HepG-2细胞中的表达

目的：观察克隆的人穿孔素(perforin,PFN)基因在HepG-2细胞中的表达及其对转染的HepG-2细胞的作用．方法：用RT-PCR方法获取人PFN cDNA．将所获基因克隆入真核表达载体pcDNA3．1^- A,转染HepG-2细胞．间接免疫荧光法检测目的蛋白表达,电镜观察转染细胞的形态和结构变化,细胞计数检测转染目的基因后细胞的增殖情况．结果：成功获得人PFN全长cDNA,并构建了真核表达载体．转染HepG-2细胞后,检测出目的蛋白的表达．细胞计数发现细胞增殖被明显抑制．电镜观察显示,崩解的细胞呈现坏死的典型特征．结论：人PFN全长cDNA可以在转染的HepG-2细胞中表达,并且可使转染细胞的形态发生变化,出现大量细胞坏死．     

一氧化氮诱导肝癌细胞凋亡过程bcl-2和bax mRNA表达水平的变化

目的 探讨在一氧化氮(NO)诱导肝癌细胞凋亡过程bcl-2和bax mRNA表达水平的动态变化。方法 用NO供体硝普钠(SNP)诱导SMMC-7721和HepG2肝癌细胞株凋亡，RT-PCR的方法检测bcl-2、ba xmRNA表达水平，并采用凝胶分析系统进行半定量分析。结果 1．0mmol/L可降低SMMC-7721和HepG2细胞bcL2、bax mRNA的表达水平，提高bax/bc1-2 mRNA的比值并呈时间依赖性。HepG2细胞bcl-2和bax mRNA降低的幅度较SMMC-7721细胞小(P＜0．05)，开始变化的时间也较SMMC-7721细胞迟。结论 NO诱导肝癌细胞株的凋亡，可能与其bcl-2、bax mRNA表达水平变化导致bax/bc1-2 mRNA比值上升有关。     

外源性PTEN基因稳定转染对大肠癌LS1747细胞周期及凋亡的影响

目的 :研究外源性基因PTEN对人类大肠癌LS174 7细胞周期及凋亡的影响。方法 :以携带有PTEN基因的真核表达载体体外转染人类大肠腺癌细胞LS174 7,筛选阳性克隆的细胞并扩增培养 ,鉴定转染成功后采用流式细胞仪、透射电镜、DNA琼脂糖电泳 ,检测转染PTEN基因后LS174 7细胞的凋亡以及观察三种细胞生长曲线。结果 :流式细胞仪显示 ,细胞周期从G1期到S期发生抑制 ,并在G1期峰前出现 1个明显的凋亡峰。透射电镜下可见转染PTEN基因后细胞核染色质浓缩边集、胞浆浓缩、核碎裂及凋亡小体形成等典型的凋亡表现。细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞特有的“梯状”条带。转染空载体及未转染的LS174 7细胞未见凋亡表现。转染PTEN的LS174 7细胞与空白质粒载体转染的LS174 7细胞和LS174 7细胞的生长速度相比 ,后两者生长速度较快。结论 :将外源性PTEN基因导入LS174 7细胞后 ,可以抑制细胞周期 ,并可诱导细胞凋亡 ,这可能是PTEN基因抑制大肠癌细胞增殖的重要机制之一。