Hsp701A的RNA干涉诱导K562细胞凋亡

目的：研究RNA干涉（RNAi）Hsp701A基因的表达及其诱导慢性粒细胞白血病（慢粒）细胞株K562的凋亡。方法：构建Hsp701A基因小干涉RNA（siRNA）的真核表达载体，转染K562细胞并证实RNAi的有效性。用MTF比色法、AnnexinV-FITC／PI染色和流式细胞术，分别检测K562细胞的增殖、凋亡和细胞周期。结果：构建了Hsp701A siRNA的真核表达载体。将其稳定转染K562细胞后，RNAi组细胞中Hsp701 ARNA和蛋白的表达水平明显下降。Hsp701A siRNA能抑制K562细胞增殖并诱导其细胞凋亡，将其阻滞于G1期。结论：RNAi Hsp701A基因诱导的表达有望成为一种新的慢粒的治疗策略。     

合成语音感知学习模型的建立和效应验证

目的: 建立合成语音的感知学习模型并验证该模型的学习效应. 方法: 编写合成语音感知学习模型的计算机程序,并在29名大学本科生中应用该程序模型. 将被试学员随机分为4组: 组1(n=6),组2(n=6),组3(n=7),组4(n=10). 采用配对t检验和方差分析验证该模型的学习效应. 结果: 依照4种不同的实验模式实施该模型,各组平均得分由学习前的(11.76±0.87)%提高到学习后的(20.69±1.59)%,且具有显著性差异(P<0.01). 其中程序模型改良组的学习效果最为显著,成绩平均提高了(14.10±2.52)%(P<0.001). 结论: 本研究所建立的英语合成语音感知学习模型有良好的学习效应,学习的过程体现出了人的概括和泛化能力. 该模型为深入研究比较复杂的认知活动奠定了基础.     

Pax 1和LMX 1A在宫颈人乳头瘤病毒持续感染患者脱落细胞中的表达关系及意义

目的研究配对盒基因家族成员1(Pax 1)和LIM同源盒转录因子1α(LMX 1A)在宫颈人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)持续感染患者脱落细胞中的表达关系及其临床意义。方法收集2015年5月至2019年1月上海市闵行区中心医院收治的高危亚型HPV持续感染者150例为研究对象,根据阴道镜活检后病理学诊断分4组:慢性宫颈炎症组(对照组)35例,宫颈低级别上皮内瘤变(LG-CIN组)40例,宫颈高级别上皮内瘤变(HG-CIN组)42例,宫颈鳞癌(SCC组)33例,收集患者宫颈脱落细胞,采用实时定量PCR(RT-q PCR)检测Pax 1、LMX 1A mRNA表达水平,采用免疫印迹检测Pax 1和LMX 1A蛋白表达水平;采用二代杂交捕获法检测HPV DNA负荷量,采用Pearson法分析其相关性;采用Logistic回归分析影响宫颈癌发生的危险因素。结果与对照组比较,LG-CIN组、HG-CIN组、SCC组患者宫颈脱落细胞中Pax 1、LMX 1A mRNA及蛋白水平降低,HPV-DNA负荷量升高(P均<0.05);与LG-CIN组比较,HG-CIN组、SCC组患者宫颈脱落细胞中Pax 1、LMX 1A mRNA及蛋白水平降低,HPV-DNA负荷量升高(P均<0.05);与HG-CIN组比较,SCC组患者宫颈脱落细胞中Pax 1、LMX 1A mRNA及蛋白水平降低,HPV-DNA负荷量升高(P均<0.05)。Pearson分析结果显示,宫颈癌患者宫颈脱落细胞中Pax 1、LMX 1A蛋白表达水平呈负相关(P<0.05),Pax 1、LMX 1A蛋白表达水平分别与高危HPV-DNA负荷量呈负相关(P<0.05)。Pax 1、LMX 1A蛋白水平高是影响宫颈癌发生的独立保护因素(P均<0.05),高危HPV-DNA负荷量高是影响宫颈癌发生的独立危险因素(P<0.05)。结论宫颈脱落细胞中Pax 1、LMX 1A蛋白表达下调,与高危HPV-DNA负荷量呈负相关,二者高表达是影响宫颈癌发生的独立保护因素,可能成为宫颈病变进展监测的新标志分子。     

医学分子生物学教学中培养批判性思维的探讨

在八年制医学分子生物学教学中,第四军医大学生物化学与分子生物学教研室尝试并探索批判性思维的培养,通过启发思考,鼓励提问,有"破"有 "立"和探讨趋势,从多个角度促进学生更为全面的发展.     

Hsp701A基因的RNA干涉对HepG2细胞化疗敏感性的影响

目的：研究Hsp701A基因靶向siRNA表达载体对肿瘤细胞化疗药物敏感性的影响。方法：构建Hsp701A靶向小干涉RNA（siRNA）的真核表达载体，并转染HepG2细胞，以证实siRNA真核表达载体RNAi的有效性。用四唑蓝（MTT）比色法检测HepG2细胞对白藜芦醇、顺铂的敏感性。结果：以构建的Hsp701A基因靶向siRNA的真核表达载体稳定转染HepG2细胞后，两种RNAi组细胞中Hsp701ARNA和蛋白的表达水平均明显下降。Hsp701A基因靶向siRNA真核表达载体转染后，HepG2细胞对不同化疗药物的敏感性有不同程度的增加（P〈0．05）。结论：Hsp701A基因的RNA干涉可增强HepG2细胞对化疗药物的敏感性。     

抗ADAR1锤头状核酶的计算机设计及其可控真核表达载体的构建

目的：选择针对ADAR1 mRNA的5’非编码区(NCR)和翻译起始区的锤头状核酶(ribozyrme，Rz)切割位点，构建针对ADAR1的Rz可诱导真核表达载体，旨在knock down ADAR1基因，开展ADAR1基因功能的研究．方法：应用计算机辅助设计，根据能量最低化原理，以ADAR1 mRNA的5’NCR和翻译起始区为靶序列，预测其二级结构，选择理想的Rz切割位点，设计并合成锤头状核酶．采用亚克隆法首先将人工合成的Rz DNA序列插入原核载体p1.5的XbaI和KpnI位点获得Rz原核表达质粒pRz-613；再将pRz-613中ADAR1Rz基因连同其两端的自剪切Rz序列一起克隆入可诱导真核表达载体pTRE的SacⅡ和EcoRI位点得到真核表达质粒pRz—ADAR1；通过酶切电泳和测序检查质粒重组后序列情况．结果：选出ADAR1 mRNA的第208位为Rz切点，设计并合成了RzDNA序列.所构建的pRz—ADAR1经酶切电泳鉴定显示，插入Rz序列大小约为180kb，和预期结果相同；经测序证实Rz序列正确．结论：利用计算机辅助设计，成功构建了针对ADAR1锤头状Rz可诱导真核表达载体pRz—ADAR1．     

小睡对合成语音感知学习的巩固效应研究

目的探讨小睡对合成语音感知学习的影响.方法采用合成语音感知学习模型的计算机程序,并在30名大学本科生中应用该程序模型.对测试结果进行配对f检验和方差分析.结果练习能够显著提高被试的百分比得分(12.40±2.19)分,12h的间隔后不小睡组语音测试的百分比得分只提高了(4.60±1.21)分,而小睡组则提高了(10.00±1.66)分.结论合成语音的学习过程体现出了人的概括和泛化能力,小睡有助于语音感知学习效果的巩固.     

人重构型caspase-6基因在Hep-2细胞中的表达

目的：观察人重构型caspase-6基因在Hep-2细胞中的表达及其对转染的Hep-2细胞的作用。方法：用RT-PCR方法获取人caspase-6全长cDNA，经重组PCR构建大小亚基次序颠倒的重构型caspase-6(re-caspase-6，简称rcasp6)。将所获重组基因克隆入真核表达载体pCMV，转染Hep-2细胞。用间接免疫荧光法及免疫细胞化学染色检测目的蛋白表达，HE染色和电镜观察转染细胞的形态和结构的变化，细胞计数检测转染目的基因后细胞生长状况的变化。结果：成功地获得了人重构型caspase-6基因(rcasp6)，并构建了真核表达载体，转染Hep-2细胞后，检测到目的蛋白的表达，倒置显微镜观察转染细胞有明显变化，培养情况下出现大量细胞固缩变小，伴随有细胞死亡。HE染色和电镜观察显示，固缩的细胞呈现凋亡的典型特征。结论：人重构型caspase-6基因在Hep-2细胞中表达，可使转染细胞的形态发生变化，出现大量的凋亡细胞。     

人穿孔素基因的克隆及其在HepG-2细胞中的表达

目的：观察克隆的人穿孔素(perforin,PFN)基因在HepG-2细胞中的表达及其对转染的HepG-2细胞的作用．方法：用RT-PCR方法获取人PFN cDNA．将所获基因克隆入真核表达载体pcDNA3．1^- A,转染HepG-2细胞．间接免疫荧光法检测目的蛋白表达,电镜观察转染细胞的形态和结构变化,细胞计数检测转染目的基因后细胞的增殖情况．结果：成功获得人PFN全长cDNA,并构建了真核表达载体．转染HepG-2细胞后,检测出目的蛋白的表达．细胞计数发现细胞增殖被明显抑制．电镜观察显示,崩解的细胞呈现坏死的典型特征．结论：人PFN全长cDNA可以在转染的HepG-2细胞中表达,并且可使转染细胞的形态发生变化,出现大量细胞坏死．