反义bcl─2RNA促进HL─60细胞的凋亡

目的：分析反义ｂｃｌ－２对ＨＬ－６０细胞凋亡的作用，为进一步研究凋亡机制打基础．方法：我们用ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将插有反义ｂｃｌ－２基因片段的重组逆转病毒载体ｐＤＯＲ－ＡＢ转染ＨＬ－６０细胞，用核酸打点杂交方法检测转染效果和载体表达效果，用流式细胞仪检测ｂｃｌ－２的改变及细胞周期的变化，用光镜和电镜观察转染细胞的形态学改变，并用转染的细胞对足叶乙甙敏感性的变化间接证明反义ｂｃｌ－２的作用．结果：ｐＤＯＲ－ＡＢ转入ＨＬ－６０细胞并表达ｂｃｌ－２反义ＲＮＡ；细胞内Ｂｃｌ－２蛋白含量明显下降；细胞周期分析可见凋亡峰；电镜下可见凋亡细胞；ＤＮＡ凝胶电泳出现梯状电泳带．结论：反义ｂｃｌ－２瞬时表达可促进ＨＬ－６０细胞的凋亡，ｂｃｌ－２在ＨＬ－６０细胞凋亡的调节中起重要作用     

反义寡聚脱氧核苷酸抑制HL－60细胞中bcl－2基因表达的研究

目的：研究ＨＬ－６０细胞中ｂｃｌ－２基因的表达并探索ｂｃｌ－２基因ｍＲＮＡ特异的反义寡聚脱氧核苷酸（反义ＯＤＮ）对ＨＬ－６０细胞中ｂｃｌ－２基因表达的影响．方法：采用细胞原位杂交和免疫细胞化学染色技术检测ＨＬ－６０细胞中ｂｃｌ－２基因的表达，人工合成ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ特异性反义ＯＤＮ片段与ＨＬ－６０细胞共培养，在作用一定时间后分别测定细胞中ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ和Ｂｃｌ－２蛋白表达的变化．结果：ｂｃｌ－２基因在ＨＬ－６０细胞中既有转录水平的高表达，又有翻译水平的高表达，人工合成的反义ＯＤＮ片段在一定浓度范围内，作用一段时间后细胞内ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ表达无显著改变，而蛋白表达却呈现了显著下降，与浓度和作用时间呈正相关．结论：人工合成的反义ＯＤＮ片段可以抑制ＨＬ－６０细胞中ｂｃｌ－２的转录作用．在进行白血病基因治疗的实验研究中，ｂｃｌ－２基因可以作为基因治疗的一个有用的靶基因．     

脂质体转染bcl-2反义核酸对HL-60细胞凋亡的影响

目的人白血病细胞系ＨＬ－６０细胞高表达凋亡抑制基因ｂｃｌ－２蛋白，是研究细胞增殖、凋亡的良好模型。通过脂质体转染ｂｃｌ－２反义核酸，观察其对细胞增殖的抑制，对ｂｃｌ－２蛋白表达影响，及诱导细胞凋亡出现。方法ＨＬ－６０细胞在３７℃、５％ＣＯ２条件下，培养于含１５％小牛血清及含青、链霉素（每毫升各１００Ｕ）的ＲＰＭＩ１６４０完全培养基中，细胞接种密度为１０７／Ｌ，反义核酸终浓度为５μｍｏｌ／Ｌ，反义核酸与脂质体比例为１．０ＯＤ：５０μｌ。脱离小牛血清转染２４ｈ，同时设置空白组、无义组、反义组、脂质体组、脂质体＋无义组，再连续培养４天，做免疫组化，检测ｂｃｌ－２蛋白表达。提取总ＲＮＡ，行ＲＴ－ＰＣＲ分析ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ表达，以及透射电镜检查，观察细胞凋亡情况及脂质体转染情形。结果脂质体转染ｂｃｌ－２反义核酸的作用：（１）抑制ＨＬ－６０细胞增殖，在转染后第五天最明显，经统计学处理，反义组与空白及无义对照组有显著性差别，脂质体转染反义核酸组与其余组均有统计上显著性差别。（２）降低ｂｃｌ－２蛋白表达水平，处理前ｂｃｌ－２免疫组化阳性率为６２±１．４８％，经转染ｂｃｌ－２反义核酸处理后，ｂｃｌ－２表达率为３２．５±１．     

人乳腺癌MCF—7细胞凋亡过程中p53与bcl—2表达的时序性

目的：研究细胞凋亡过程中ｐ５３与ｂｃｌ－２基因表达变化的时序关系，以探索ｐ５３调控ｂｃｌ－２的可能性。方法：选择具有野生型ｐ５３的人乳腺癌ＭＣＦ－７细胞系，用５－Ｆｕ为诱导剂诱导细胞凋亡；用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检测细胞凋亡过程中ｐ５３与ｂｃｌ－２表达变化的时序性。结果：ｐ５３表达增高出现在ｂｃｌ－２表达降低之前。结论：ｐ５３在时序上具有作为ｂｃｌ－２基因负调控转录因子的可能性     

转染bcl—1基因抑制足叶乙甙诱导的K562细胞凋亡

观察ｂｃｌ－２对Ｋ５６２细胞凋亡的影响。方法：用真核表达质粒ｐ２９０－ｂｃｌ－２转染Ｋ５６２细胞，用ＲＴ－ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ和蛋白表达；用ＭＴＴ实验检测Ｋ５６２细胞对化疗药物足叶乙甙的敏感性变化；用ＤＮＡ“ｌａｄｄｅｒ”检测ｂｃｌ－２对凋亡的影响。     

足叶乙甙诱导HL—60细胞凋亡及其bcl—2基因表达

目的：研究ＨＬ－６０细胞在足叶乙甙诱导的细胞凋亡中ｂｃｌ－２基因表达，以说明药物致凋亡的分子机制。方法：采用细胞存活率，形态改变，ＤＮＡ梯形片段分析和原位缺口标记法，分析药物引起的细胞凋亡，以细胞原位杂交和免疫组化分析ｂｃｌ－２ ｍＲＮＡ及其蛋白的表达水平。     

柔红霉素体外对HL-60细胞的凋亡作用

目的：了解柔红霉素（ＤＮＲ）体外作用于ＨＬ－６０　细胞时产生凋亡的规律及一些相关蛋白表达的变化。方法：应用光镜、ＤＮＡ电泳及ＦＣＭ检测ＨＬ－６０细胞发生的凋亡模式；用ＩＣ、ＦＣＭ观察相关蛋白的变化。结果：当ＤＮＲ浓度为０．２μＭ～２μＭ时，ＨＬ－６０细胞发生的凋亡率随浓度的增加与作用时间的延长而升高，可见典型的凋亡细胞及明显的ＤＮＡ梯度条带。１μＭ　ＤＮＲ作用２ｈ时，ｂｃｌ－２与ｃ－ｍｙｃ的荧光强度指数（ＦＩ）降低，ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３　的　ＦＩ　升高；而作用５ｈ时，ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３的ＦＩ值反而降低。结论：一定浓度的ＤＮＲ在体外可诱导ＨＬ－６０细胞凋亡，它可抑制ｂｃｌ－２与ｃ－ｍｙｃ蛋白的表达，而激活ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白的表达。     

急性白血病Bcl-2反义寡核苷酸基因治疗的实验研究

目的选用２０ｎｔＢｃｌ－２反义硫代磷酸寡核苷酸（Ａｓ－Ｐｓ－ＯＤＮ，ＡＳＰＯ），并以其正义寡核苷酸（ＳＰＯ）为对照做如下问题探讨：（１）普通剂量（５～２０μｍｏｌ）ＡＳＰＯ对ＨＬ６０细胞、正常及缺铁性贫血患者骨髓细胞及急性白血病病人骨髓细胞或外周白血病细胞（幼稚细胞≥８５％）的作用；（２）大剂量（１６０μｍｏｌ）正义或反义寡核苷酸对ＨＬ６０细胞作用的特点，并通过ＡＳＰＯ引起ＨＬ６０细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达变化和ＳＰＯ对ＨＬ６０细胞毒性的变化，寻找可能的最佳效应剂量和最小毒性剂量；（３）ＡＳＰＯ联合化疗药物对ＨＬ６０细胞和原代急性白血病细胞的作用。方法台盼蓝拒染试验和克隆培养测定细胞的生长能力；免疫细胞化学染色和流式细胞仪检测Ｐ２６Ｂｃｌ－２蛋白表达，ＲＴ－ＰＣＲ法检测Ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ（Ｂｃｌ－２／β－ａｃｔｉｎ）相对水平；光、电镜下观察凋亡细胞形态，吖啶橙染色及流式细胞仪检测细胞凋亡率，ＤＮＡ提取及电泳观察凋亡细胞ＤＮＡ降解片段的形成；ＭＴＴ法检测ＰＳ－ＯＤＮ及化疗药物的细胞毒作用。结果（１）普通剂量的ＡＳＰＯ即能降低ＨＬ６０细胞及白血病细胞Ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ的表达，并抑制ＨＬ６０细胞及１８／２０例白血病细     

表达反义bcl-2的重组腺病毒诱导BT325细胞凋亡

目的 构建携带反义ｂｃｌ－２的重组腺病毒并观察其对ＢＴ３２５细胞生长和凋亡的影响。方法 利用细胞内同源重组的方法构建携带反义ｂｃｌ－２的重组腺病毒，利用反转录ＰＣＲ和免疫组化法检测反义ｂｃｌ－２在细胞内的表达及细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达的变化，用ＭＴＴ法和集落形成试验观察重组腺病毒对细胞生长和集落形成能力的影响，用电镜观察、ＤＮＡ片段化分析和流式细胞仪技术检测细胞的凋亡。结果 成功构建了携带反义ｂｃｌ     

脂质体介导c—myc反义核酸对HL—60细胞作用的研究

原癌基因ｃ－ｍｙｃ参与调控细胞的增殖、分化和凋亡过程,在白血病细胞株ＨＬ－６０ 中有很高的表达。ｃ－ｍｙｃ通过扩增活化或基因重排而异常激活,在白血病的发生和发展中可能起着重要的作用。　目的　通过脂质体介导ｃ－ｍｙｃ反义核酸转染ＨＬ－６０ 细胞,观察其抑制细胞生长增殖、促进分化、诱导凋亡,降低ｃ－ｍｙｃｍ ＲＮＡ 和蛋白表达水平,探讨反义核酸的抗肿瘤作用机制。　方法　ＨＬ－６０ 细胞在３７℃、５％ＣＯ２ 条件下,培养于１０％ 小牛血清１６４０ 培养液中,细胞接种密度为４×１０７／Ｌ,反义核酸终浓度为１μｍ ｏｌ／Ｌ,反义核酸与脂质体比例为１ μｍ ｏｌ（６．５ μｇ）∶１０ μｇ,无血清转染６ ｈ。实验同时设置空白组、无义组、反义组、脂质体组、脂质体无义组等对照组。连续培养４ 天。通过锥虫蓝拒染实验测定细胞的生长能力;ＮＢＴ还原实验和瑞特－姬姆萨染色测定细胞的分化能力;免疫细胞化学染色检测ｃ－ｍｙｃ蛋白表达;ＲＴ－ＰＣＲ法检测ｃ－ｍｙｃ ｍ ＲＮＡ 水平;吖啶橙／溴化乙锭染色观察凋亡细胞形态;流式细胞仪检测凋亡率;ＤＮＡ抽提及电泳观察凋亡细胞ＤＮＡ降解片段的形成。　结果　脂质体转染ｃ－ｍｙｃ反义核酸的作用：（１）抑制ＨＬ－６０     

转染bcl-2基因抑制足叶乙甙诱导的K562细胞凋亡

目的：观察ｂｃｌ２对Ｋ５６２细胞凋亡的影响。方法：用真核表达质粒ｐ２９０ｂｃｌ２转染Ｋ５６２细胞，用ＲＴＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测ｂｃｌ２ｍＲＮＡ和蛋白表达；用ＭＴＴ实验检测Ｋ５６２细胞对化疗药物足叶乙甙的敏感性变化；用ＤＮＡ“ｌａｄｄｅｒ”检测ｂｃｌ２对凋亡的影响。结果：转染ｂｃｌ２后Ｋ５６２的ｂｃｌ２蛋白表达增高，细胞存活率明显提高，在足叶乙甙低于１２５μｍｏｌ／Ｌ时检测不到凋亡梯形ＤＮＡ；而Ｋ５６２细胞在足叶乙甙为３２μｍｏｌ／Ｌ时就能检测到凋亡梯形ＤＮＡ。结论：若把ｂｃｌ２导入正常造血干细胞，从而增强干细胞对化疗药物的耐受性，这将对化疗具有重要意义。     

抗bcl-2核酶在HL-60细胞中的表达及促进其凋亡的研究

抗ｂｃｌ－２核酶在ＨＬ－６０细胞中的表达及促进其凋亡的研究［赵永同，王剑波，朱峰ｅｔａｌ．中华血液学杂志，１９９６；１７（１２）：６１９～６２２］为消除白血病细胞中ｂｃｌ－２基因对细胞凋亡的抑制作用，开辟白血病基因治疗的途径．将合成的针对ｂｃｌ－２ｍ...     

转促凋亡基因胃癌细胞的光动力学治疗实验研究

目的;评价转促凋亡基因胃癌细胞的光动力学治疗效果。方法：分析用携带野生型ｐ５３ｃＤｎＡ和我ｂｃｌ－１序列的逆转录志导胃腺癌细胞系ＭＧＣ８０３,稳定表达后加光敏剂并红光照射,检测细胞存活及凋亡。结果：在序列的逆转录病毒转导胃腺癌细胞系ＭＧＣ８０３,稳定表达后加光敏剂并红光照,检测细胞存活及凋亡。结果：在光敏剂及红光作用以生型Ｐ５３反义ｂｃｌ－２都能使转导细胞的存活率降低,凋亡增加。结论：野生型Ｐ５３     

bcl-xL基因介导白血病细胞多药耐药的形成

观察ｂｃｌ－ｘＬ基因可否介导白血病细胞的多药耐药,并探讨其机制。方法采用脂质体法将ｂｃｌ－ｘＬｃＤＮＡ转导入ＨＬ－６０细胞,免疫印迹法检测Ｂｃｌ－ｘＬ及抗凋亡蛋白Ｂａｘ的表达;ＭＴＴ法测定呈足乙甙、柔红霉素、阿霉素对转染细胞的细胞毒性;流式细胞仪定量检测凋亡细胞及细胞内药物浓度。     

大剂量Bcl-2反义硫代磷酸寡核苷酸对细胞系的毒性作用

目的 探讨大剂量Ｂｃｌ－２反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸（ＡＳ－ＰＳ－ＯＤＮ,ＡＳＰＯ）对ＨＬ６０细胞系的毒性作用,同时了解毒性与剂量的关系。方法 应用四氮唑蓝比色法、台盼蓝拒染试验,ＣＦＵ－ＨＬ６０克隆培养法观察大剂量Ｂｃｌ－２ ＡＳＰＯ对ＨＬ６０细胞的毒性作用,同时应用免疫细胞化学染色及流式细胞仪检测Ｐ２６ Ｂｃｌ－２蛋白表达,吖啶橙染色及ＤＮＡ片段电泳对细胞凋亡的观察。并以其正义ＰＳＯＤＮ（ＳＰＯ     

霍奇金淋巴瘤细胞STAT3的活化对bcl—2蛋白表达的调控作用

目的：探讨霍奇金淋巴瘤（ＨＬ）细胞信号转导物与转录激活剂３（ＳＴＡＴ３）的活化对ｂｃｌ－２蛋白表达的调控作用。方法：采用ＳＰ免疫组织化学方法检测了４０例不同亚型ＨＬ之ＲＳ／Ｈ细胞及１３例反应性增生淋巴结（ＲＨ）的ＳＴＡＴ３和抗凋亡基因蛋白ｂｃｌ－２的表达。结果：ＳＴＡＴ３及ｂｃｌ－２蛋白拓ＨＬ不同亚型的ＲＳ／Ｈ细胞中均呈过度表达＊阳性率分别为６５％和６７．５％）,且两者的阳性率呈明显的正相关（Ｐ〈     

维医成熟、清除剂诱导人Hela细胞凋亡时p53与bcl-2基因的表达

近年来,发现细胞凋亡对造血、免疫和肿瘤发生机制具有重要的作用,肿瘤抑制基因是当前肿瘤遗传学及分子生物学的研究热点。而其中ｐ５３基因与肿瘤关系最为密切,６０％以上的人类肿瘤细胞中存在ｐ５３基因的突变失活。野生型ｐ５３能抑制肿瘤发生,是抗癌基因．而突变型则反而促进肿瘤发生,成为癌基因。Ｐ５３与ｂｃｌ－２基因都是细胞凋亡的关键基因。ｐ５３基因可促进细胞凋亡,ｂｃｌ－２基因则可抑制凋亡。 ｂｃｌ－２基因下凋是细胞凋亡的重要环节,因而探讨其下调机制极为重要。ＦＡＳ和ｂｃｌ－２蛋白是确认的２个与淋巴Ｔ细胞凋…     

Bcl－2和反义bcl－2逆转录病毒表达载体的构建与鉴定

Ｂｃｌ－２和反义ｂｃｌ－２逆转录病毒表达载体的构建与鉴定朱峰，金明，惠宏襄，赵永同，王成济（生物化学及分子生物学教研室西安７１００３３）关键词细胞凋亡；ｂｃｌ－２基因；逆转录病毒载体中图号Ｒ７５３为了研究ｂｃｌ－２与肿瘤细胞的关系，我们构建了正义和反...     

Bcl—2和p53蛋白表达对肝硬变和肝细胞癌中细胞增殖和凋亡的 …

利用原位ＤＮＡ末端转移酶标记技术及Ｓ 疫组织化学方法检测了肝硬变和肝细胞癌（ＨＣＣ）组织中凋亡细胞,ｐ５３,ｂｃｌ－２蛋白和ＰＣＮＡ的表达。结果显示：ＨＣＣ与肝硬变组织比较,凋亡细胞密度低,ＰＣＮＡ阳性细胞密度高ｐ５３和ｂｃｌ－２蛋白阳性强度高,且均与ＨＣＣ分化程序有关。提示ｐ５３和ｂｃｌ－２蛋白可能是通过其过度表达影响细胞增殖和细胞凋亡失衡,并以“选择性细胞增殖”形式导致的发生和发展。     

人类bcl—2蛋白在CHOdhfr^—细胞中的表达

目的：建立表达人类ｂｃｌ－２蛋白的哺乳类细胞模型，为探讨ｂｃｌ－２的作用机制及其与其它基因间的关系奠定基础。方法：通过将９１０ｂｐ的含有完整开放阅读框的人类ｂｃｌ－２ ｃＤＮＡ以正向克隆逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ的ＥｃｏＲＩ位点而构建重组真核表达载体ｐＬＸＳＮ／ｓ－ｂｃｌ－２。利用电穿孔技术将ｐＬＸＳＮ／ｓ－ｂｃｌ２转染于ＣＨＯｄｈｆｒ＾－细胞，筛选＋出Ｇ４１８抗性克隆，经免疫印迹检测人类ｂｃｌ－２