成人骨髓成骨细胞体外培养

目的 研究成人骨髓基质干细胞在体外培养条件下的成骨能力及生物学特性，探讨简便易行的成人成骨细胞体外培养方法，为骨组织工程选择理想的种子细胞来源。方法 因诊断需要抽取健康成人骨髓组织，在含体积分数为10％胎牛血清的DMEM培养基中，置于37℃、含体积分数为5％的CO2湿化空气孵箱中培养，传代后改用含地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C的条件培养基培养，用倒置相差显微镜观察、HE染色、扫描与透射电镜观察增殖和分化情况，并测定培养细胞的生长曲线(MTT法)、碱性磷酸酶活性和钙结节形成能力。结果 采用本法在体外培养的成人成骨细胞生长良好，生化指标稳定，表现出与典型的成骨细胞相似的形态特征和生物学特性。结论 本实验方法取材方便，所培养的细胞具有成骨细胞的特性，可作为骨组织工程种子细胞培养的常规方法。     

人骨髓源性成骨细胞体外培养和生物学特性的研究

目的研究人骨髓源性成骨细胞的生物学特性,为骨组织工程选择理想的种子细胞提供依据。方法采用全骨髓培养法培养骨髓基质干细胞,传代扩增后采用诱导培养基进行诱导,对骨髓基质干细胞诱导成的成骨细胞进行细胞形态学观察,检测碱性磷酸酶活性及分泌钙结节和Ⅰ型胶原的能力。结果骨髓基质干细胞可以进行传代和大量扩增,经诱导培养后能够诱导出成骨细胞,诱导出的成骨细胞具有典型成骨细胞的形态学和生物学特性。结论骨髓源性成骨细胞具有良好的成骨细胞特性,可以作为骨组织工程的种子细胞。     

成人间充质干细胞体外诱导分化为成骨细胞的研究

目的 研究成人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)体外培养定向诱导分化为成骨细胞,探讨其作为骨组织工程种子细胞的可行性和应用价值.方法 抽取健康成年骨髓,Ficoll密度梯度离心结合贴壁培养法经连续传代后改用含10 nmol/L地塞米松、10 mmol/Lβ-甘油磷酸钠、50 μmol/L维生素C的条件培养基培养,在相差显微镜下观察细胞形态变化,流式细胞仪细胞表面分子标志鉴定,免疫组化和RT-PCR检测Ⅰ型胶原蛋门的表达,同时测定细胞内碱件磷酸酶的含量.结果 BMSCs原代和传代培养的细胞具有活跃的增殖能力,诱导培养后细胞形态向成骨细胞转化,经RT-PCR、流式细胞仪、细胞碱性磷酸酶活性、糖原染色鉴定为成骨细胞.结论 BMSCs经合理的体外诱导培养后符合成骨细胞的形态特征和生物学特性,有望成为理想的骨组织工程种子细胞来源.     

兔成骨细胞与纳米氧化锆强韧化高孔隙率磷酸钙人工骨细胞支架生物相容性研究

目的 研究成骨细胞与纳米氧化锆强韧化高孔隙率磷酸钙人工骨细胞支架在体外培养条件下的生物相容性。方法 将成骨细胞株置于含体积分数为10％胎牛血清的DMEM培养基中培养，传代后改用含地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C的条件培养基培养，分为纳米支架复合细胞组和单纯细胞组，不同时间用倒置相差显微镜、HE染色光镜及扫描电镜观察。MTT法进行细胞增殖测定，并进行细胞微量蛋白含量检测和碱性磷酸酶的定量检测。结果 成骨细胞体外培养时复合或不复合纳米支架均生长良好，表现出典型的细胞形态特征和生物学特性，纳米支架利于细胞的贴附、生长与增殖，并对细胞的功能无不良影响。结论 纳米支架是较理想的骨组织工程支架材料，成骨细胞复合纳米支架用于骨缺损的修复，具有广阔的临床应用前景。     

兔骨髓基质细胞的分离培养

目的 为骨组织工程寻找一种理想的种子细胞。方法 采取兔骨髓组织，应用梯度离心获取骨髓基质细胞，体外培养传代，通过光镜、透射电镜及成骨特性的鉴定，观察细胞的形态、生长特点及成骨特性。结果 培养的骨髓基质细胞形态多为三角形或梭形，生长增殖迅速，具有成骨能力，易于定向分化为成骨细胞。结论 自骨髓获得的骨髓基质细胞具有明显的增殖能力和成骨活性，可以做为骨组织工程中比较理想的种子细胞。     

成人骨髓间充质干细胞的体外分离培养与鉴定

目的 对成人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)进行体外分离培养与鉴定,研究其生物学特性.方法 将密度梯度离心法获得的单个核细胞,用贴壁培养法分离纯化、扩增获得大量hBMSCs,观察细胞形态,分析细胞生长特性,并经流式细胞仪检测细胞表面抗原、细胞周期,和进行成骨诱导鉴定.结果 经密度梯度离心和贴壁培养法可成功分离纯化、扩增得到大量hBMSCs,其细胞形态、分化特性和表型均符合干细胞特点,在特定培养条件下能向成骨细胞分化.结论 骨髓间充质干细胞分离扩增容易,细胞增殖能力和成骨性能好,是骨组织工程理想的种子细胞.     

成年恒河猴骨髓基质干细胞的体外培养

目的温对猴骨髓基质干细胞(BMSCs)进行体外培养及扩增，观察其原代及传代细胞的生长特点及生物学特点。方法 抽取4只成年猴髂骨骨髓，用全骨髓培养法进行体外培养获得BMSCs，胰酶消化传代，用条件培养基培养传代细胞。逐日倒置显微镜观察细胞生长情况，对传代细胞进行HE染色及碱性磷酸酶(ALP)染色。结果 成年雄性恒河猴BMSCs体外培养生长良好，原代细胞10-13d汇成单层，传代后4～7d长满瓶底。HE染色光镜下观察见BMSCs为单核细胞，细胞呈梭形、多角形，传代细胞碱性磷酸酶染色呈强阳性。结论 猴BMSc的体外培养增殖能力强，可诱导为成骨细胞，可作为灵长类动物骨组织工程的种子细胞。     

大鼠骨髓基质细胞体外培养诱导成骨能力的研究

目的：观察大鼠骨髓基质细胞在体外培养生长时的生物学特性，及诱导分化为成骨细胞的能力。方法：取成年大鼠2只，处死后分离、培养骨髓基质细胞，第8天时添加矿化液诱导培养，细胞经传代后绘制生长曲线。应用倒置相差显微镜、透射电镜观察其生长特性，并进行甲苯胺蓝染色，Won Kossa染色，碱性磷酸酶染色。结果：培养的大鼠骨髓基质细胞呈成纤维细胞样生长，增殖活跃。经诱导后，细胞碱性磷酸酶活性高，连续培养30天，Von-KaSSR染色显示有局灶状钙盐沉积。结论：MSCs易于分离培养，体外扩增速度快，在矿化条件下，骨髓基质细胞在体外即具有很强的成骨能力，为研究其作为骨组织工程种子细胞植入体内成骨奠定基础。     

骨膜源性成骨细胞的分离培养及鉴定

目的：寻找理想的骨组织工程种子细胞。方法：取兔骨膜组织，采用酶消化法和组织块培养法获取成骨细胞，体外培养传代，观察细胞的形态、生长特点及成骨特性。结果：培养的骨膜成骨细胞形态多为三角形或梭形，生长增殖迅速，具有成骨能力。结论：白骨膜获得的细胞是成熟的成骨细胞，可以做为骨组织工程中比较理想的种子细胞。     

锶磷灰石多孔陶瓷不同孔隙率对成骨细胞生物学行为的影响

目的 比较不同孔隙率的锶磷灰石(含5at%锶的羟磷灰石,Sr-HA)陶瓷在体外培养条件下对兔骨髓成骨细胞生物学行为的影响.方法 抽取健康兔的骨髓组织,体外培养,诱导分化为成骨细胞,分别与孔径约为300μm-600μm、孔隙率分别为50%、60%、70%的Sr-HA以及孔隙率为70%的纯羟磷灰石陶瓷体复合,在不同时间点利用相差显微镜及扫描电镜观察,并进行碱性磷酸酶的定量检测.结果 兔骨髓成骨细胞与不同孔隙率的Sr-HA陶瓷体外培养后,表现出典型成骨细胞的形态特征和生物学特性,Sr-HA多孔陶瓷有利于细胞的贴附、生长与增殖,并对细胞的功能无不良影响.其中,孔隙率为70%的Sr-HA陶瓷更有利于细胞向材料内部爬行.结论 Sr-HA多孔陶瓷是较理想的骨组织工程支架材料,成骨细胞复合Sr-HA陶瓷用于骨缺损的修复,具有广阔的临床应用前景.孔隙率为70%的Sr-HA陶瓷由于具有良好的孔隙连通性,在促进成骨细胞生长方面表现出更佳的效果,较其他孔隙率的Sr-HA陶瓷更适用于骨组织工程支架材料.     

Are Bone Turnover Markers Capable of Predicting Callus Consolidation During Bone Healing?

The aim of this study was to determine the ability of the following bone turnover markers to monitor the course of callus consolidation during bone healing: Carboxy-terminal propeptide of procollagen type I (PICP), skeletal alkaline phosphatase (sALP), and amino-terminal propeptide of type III procollagen (PIlINP). Since interfragmentary movements have been proven to possess the ability to document the progression of bone healing in experimental studies, correlations between bone turnover markers and interfragmentary movements in vivo were investigated. Therefore, two different types of osteosyntheses representing different mechanical situations at the fracture site were compared in an ovine osteotomy model. Blood samples were taken preoperatively and postoperatively in weekly intervals over a nine-week healing period. At the same intervals, interfragmentary movements were measured in all sheep. After nine weeks, animals were sacrificed and the tibiae were evaluated both mechanically and histologically. Wide interindividual ranges were observed for all bone turnover markers. The systemic PICP level did not increase with callus consolidation. The bone-healing model seemed to influence the systemic level of PIIINP and sALP but no general correlation between bone turnover markers and interfragmentary movements could be detected. No differences between the different types of osteosyntheses and thus the different mechanical situations were observed. All analyzed markers failed as general predictors for the course of callus consolidation during bone healing.     

骨重建中的骨代谢指标

骨重建是破骨细胞和成骨细胞共同完成的旧骨退化,等量新骨取代的骨组织更新过程,在骨重建过程中,许多激素和细胞、体液因子以及细胞代谢产物影响骨的重建.目前国内外通过生物化学检测技术获得的骨代谢指标分为骨代谢调节激素、细胞与体液因子、骨吸收、骨形成标志物.笔者将影响骨重建生物化学指标的生理作用、临床意义进行综述.骨代谢指标虽不能作为骨质疏松诊断的金标准,但已广泛应用于临床,评价骨代谢状态、骨质疏松诊断分型、预测骨折风险、观察药物治疗的疗效,以及代谢性骨病的鉴别诊断.并且在抗骨质疏松药物的研究及流行病学研究方面具有重要应用价值.     

在下肢大段骨缺损治疗中Ilizarov技术的选择

[目的]总结应用Ilizarov技术治疗下肢大段骨缺损的临床体会，探讨不同病例的术式选择。[方法]14例下肢大段骨缺损，平均8．5cm，其中股骨2例；胫骨12例；创伤11例，均伴有不同程度的骨感染和（或）软组织缺损，骨肿瘤切除3例？分别采用肢体短缩加骨段截骨延长，或加骨段输送延长，或单纯骨段截骨输送治疗。[结果]全部病例均获得1a以上随访，骨缺损治愈，骨感染消失，皮肤创面消灭，肿瘤无复发，无附加神经血管损伤症状：[结论]Ilizarov技术是治疗骨大段缺损的简单而有效方法，根据不同病例，选择不同术式可简化治疗过程．缩短治愈时间。     

活骨移植治疗四肢骨肿瘤切除后长段骨与关节缺损

目的:探讨四肢骨肿瘤的广泛或边缘切除后,长段骨关节缺损的修复方法及其疗效。方法:四肢骨肿瘤切除术后骨缺损14例,男10例,女4例;年龄4~37岁。骨巨细胞瘤4例,骨化性纤维瘤1例,非骨化性纤维瘤2例,韧带样纤维瘤1例,骨纤维结构不良3例,侵袭性骨母细胞瘤1例,软骨母细胞瘤1例,瘤样病损致骨溶解1例。14例四肢侵袭性良性骨肿瘤行肿瘤广泛或边缘切除,应用吻合血管的腓骨、带腓骨头腓骨近端和带旋髂深血管的髂骨瓣移植修复骨缺损、重建桡腕关节和重建肩关节。移植体行简单内固定加外固定。术后定期复查X线片、多普勒血管超声,其中3例行ECT核素骨扫描,并作关节功能评定。结果:随访3个月~5年,13例均于手术后3个月后达Ⅰ期愈合,其中1例因内固定松动再次手术而愈合。1例肿瘤局部复发,再次行肿瘤切刮与植骨术后愈合;2例畸形愈合行截骨矫形后愈合。关节功能评定:优9例,良3例,差2例。结论:骨肿瘤切除后行骨移植修复骨缺损、重建关节,手术切除彻底,复发率低,植骨愈合可靠,重建后的关节功能良好。     

异体松质骨移植治疗骨肿瘤切除后骨缺损

目的：探讨应用异体松质骨移植治疗肿瘤切除后骨缺损的生物材料填充方法。方法：总结应用深低温冷冻保存异体松质骨移植治疗骨肿瘤切除后骨缺损57例。年龄6－56岁,平均年龄17．4岁。结果：除1例因感染异体骨取出外,其余56例均取得满意的骨愈合,愈合时间平均为4．5个月。依骨腔大小或植骨量的不同愈合时间 亦有所不同。单纯异体松质骨移植与异体松质骨加自体松质骨混合移植相比,愈合时间没有明显不同。植骨量越大,骨愈合时间越长。此组患者中未见明显排异反应及并发感染者。肿瘤复发率为7％。结论：同其他骨缺损填充方法和大块异体骨的使用相比,此种方法可行性较好,安全性较高。在骨愈合率,骨愈合时间上及复发以外并发症的发生上同自体松质骨植骨无明显差异。     

Bone substitutes

Summary Biocompatible calcium phosphate ceramics has been used for several years in orthopeadic surgery. We have been using two new synthetic biphasic calcium phosphate ceramics (BCP) since September 1996 for bone defect filling in any orthopaedic or trauma operation where autograft use was not possible or even wanted. The first, Eurocer 400® has 300 to 500 micron wide macropores with a totally interconnected porosity. This salt seed like product can be used in bone defect filling, when solidity is not a major concern. The second, Eurocer 200® has not totally interconnected 200 micron large pores. Its main characteristic is a mechanical resistance up to 30 Mpa. We use it in any case of weight-bearing surgery. Different sizes and presentation forms are available and will be chosen according to the recipient site shape. We report one hundred and fifty cases with a six to thirty month follow-up. In one third of the patients hip revision surgery was addressed. Another third concerned recent trauma or sequelae cases,.whereas the last third involved cold orthopaedic procedures. General principles are the need of a living and non-infected site after thorough debridement if necessary. Osteocompatibility of calcium phosphate ceramic is confirmed by our results. We report no mechanical failure. In all cases X-rays show a progressive integration, with new bone formation. Our substitutes have been histologically studied in nine cases, four to fifteen months after implantation. New bone formation around and in the substitute is impressive. Indeed, their good mechanical properties without loss of biological quality is the most relevant feature of these BCPs, leading to a wider indication field; therefore we have now abandoned the use of any bony auto, allo or xenograft.Paper presented at the 1998 meeting of GECO (Arc 1800, Bourg-Saint-Maurice, France)     

表面脱钙骨基质明胶修复长骨骨缺损9例报告

采用表面脱钙骨基质明胶（ＳＤＢＭＧ）移植治疗长骨大块骨缺损９例，结果，除１例因适应证选择不当而失败外，其它８例均得到治愈，患健肢等长。说明ＳＤＢＭＧ具有良好的成骨作用和可靠的生物力学性能，是修复长骨大块骨缺损的理想移植材料，可作为自体骨合适的替代材料推广使用，但对急性感染性骨缺损应慎用     

骨基质明胶复合自体红骨髓及同种异体骨修复骨缺损

目的:评价骨基质明胶复合自体红骨髓及同种异体骨联合移植修复骨缺损的疗效。方法:76例良性骨肿瘤和瘤样病损患者,彻底刮除病灶或作肿瘤骨段切除,并对瘤壁作灭活处理,以同种异体骨作支架,周围填充骨基质明胶和自体红骨髓复合物,术后观察机体反应及骨缺损修复情况。结果:术后机体无明显免疫排斥反应,无1例发生感染,所有病例随访时间为5～16个月,X线显示新骨形成时间为术后1.5～4月,完全骨化的时间为术后5～9月,骨缺损骨性愈合74例,并获得较好的关节功能,肿瘤复发2例。结论:骨基质明胶、自体红骨髓、同种异体骨复合物能有效修复骨缺损,有广泛的临床应用前景。     

深度冷冻大段同种骨的制备及应用

目的：建立现代骨组织库，观察深度冷冻大段同种骨移植的临床效果。方法：采用深度冷冻、物理脱脂、真空包装和辐照灭菌等现代技术处理人类大段骨组织，临床应用24例，包括创伤性肢体骨重建、半侧骨盆重建、半侧骶骨移植、四肢大段骨或骨关节移植等，观察近期临床结果。结果：骨移植材料的无菌检测合格，生物力学强度无明显下降，可远程运输和短期保存．全部病例无明显的免疫排斥反应，成功率为100％.结论：深度冷冻大段同种骨临床使用安全可靠，保存和运输方便.     

The comparative effects of dichloromethylene diphosphonate (Cl2MDP) and ethane-1-hydroxy-1,1-diphosphonate (EHDP) on growth and modeling of the rat tibia

Summary Male rats weighing 100 g were assigned to groups and injected daily for 10 days with vehicle (control), 0.4, 2.0, 4.0, 10.0, or 20.0 mg/kg/day of ethane-1-hydroxy-1,1-diphosphonate (EHDP) or dichloromethylene diphosphonate (Cl₂MDP). The proximal tibial metaphysis and epiphysis were assayed for changes in percentage of hard tissue and bone formation parameters. From the data, information about hard tissue resorption was deduced.All doses of Cl₂MDP and doses of 2.0 mg EHDP/kg/day and greater caused significant increases in percentage of hard tissues with Cl₂MDP being more effective than similar doses of EHDP in decreasing bone resorption.Osteoclast population parameters were increased with all doses of both Cl₂MDP and EHDP with Cl₂MDP having a greater effect than similar doses of EHDP. Decreases in the proliferation of the osteoprogenitor pool parallel the decreases in osteoblasts and bone formation parameters. These decreases in osteoprogenitor pool proliferation do not account for the increases with diphosphonates in osteoclast population parameters.