自制离体实验脑片切片装置(摘要)

应用离体脑片标本进行电生理学实验研究,在国内已日益引起人们的重视。开展这一实验技术所需离体脑片切片仪,进口不易,而国内又缺乏正式生产厂家。为此,我们根据欲切脑片的厚度和切面平整的要求,利用易得的材料,制成简易的脑片切片装置。经1年使用,证明其性能良好,能切制出符合要求的大鼠海马脑片和脑干脑片标本,供进行离体脑片实验研究之用。     

成年大鼠伏隔核脑片神经元的细胞电生理特性

目的:观察成年大鼠伏隔核(nucleus accumbens,NAc)脑片神经元的细胞电生理特性,为研究药物成瘾和神经精神性疾病提供一种离体伏隔核细胞模型.方法:对取自成年大鼠的伏隔核脑片神经元进行细胞内记录,并检测膜电学特性和局部电刺激诱发的突触反应.结果:测定记录稳定的10个NAc神经元的静息电位、膜斜率电阻和动作...     

PKA信号通路调控体外培养大鼠脑片的CRH mRNA表达的研究

目的探讨大鼠下丘脑神经元表达促肾上腺皮质激素释放激素(CRH) mRNA的蛋白激酶A (PKA)信号调控机制.方法通过大鼠下丘脑脑片实验模型,运用Western blot及逆转录多聚合酶链反应(RT-PCR)技术,观察CRH激活下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素Ⅰ型受体(CRH1R)后PKA信号通路的活性变化,及其与CRH mRNA表达的关系.结果 CRH可引起下丘脑脑片磷酸化PKA、磷酸化环腺苷一磷酸反应元件结合蛋白(CREB)及CRH mRNA含量明显增加,而CP-154526、H89可显著抑制磷酸化PKA、磷酸化CREB及CRH mRNA含量的增加.结论在下丘脑离体脑片培养条件下,CRH可通过PKA途径实现对下丘脑神经元CRH mRNA的表达的超短正反馈调节.     

反义寡聚核苷酸抑制大鼠听源性惊厥和脑片放电

探讨Ｎ－甲基－Ｄ－天门冬氨酸受体（ＮＲ）及其Ⅰ型亚基（ＮＲ１）在癫痫发生、发展中的作用。方法以遗传性癫痫易感大鼠Ｐ７７ＰＭＣ及其离体颞叶脑片为研究对象，观察反义ＮＲ１亚基寡聚核苷酸在整体及离体脑片电生理模型中的抗惊厥作用。结果将反义ＮＲ１寡聚核苷酸注射大鼠侧脑室，Ｐ７７ＰＭＣ大鼠经铃声刺激不表现任何强直－阵挛性惊厥反应，惊厥评分明显低于其他各对照组（Ｐ＜０．０１）。同样经反义ＮＲ１寡聚核苷酸处理的大鼠颞叶脑片，在低Ｍｇ２＋人工脑脊液孵育下，内嗅皮层诱发不出典型的惊厥样放电（ＳＬＥｓ）或晚期反复性放电（ＬＲＤｓ），且放电频率和幅度较对照组分别下降５０％和６０％。结论ＮＲ受体，尤其ＮＲ１亚基参与了Ｐ７７ＰＭＣ大鼠听源性惊厥的产生与发展     

吗啡成瘾对视皮层突触可塑性的影响

采用离体脑片灌流的电生理技术，观察吗啡成瘾大鼠的视皮层诱发场电位及其特点。结果显示：吗啡成瘾可以明显易化视皮层诱发场电位，使出现长时程增强（ｌｏｎｇｔｅｒｍｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ，ＬＴＰ）样变化，而且强直刺激对其增长的影响不大。结果提示：成瘾性ＬＴＰ与强直性ＬＴＰ现象可能具有相同的机制，并对其可能机制进行了探讨     

应用体外受精-胚胎移植技术培育试管婴儿

本报通讯员刘冬云报道 汕头大学精神卫生中心郑晖等医生关于“慢性应激对大鼠海马长时程增强和氨基酸神经递质的影响”的研究表明,应激对海马功能的影响可能与氨基酸神经递质的平衡失调有关。该研究采用离体海马脑片结合电生理的方法观测海马CA1区长时程增强的变化。以群体峰电位     

CRH刺激大鼠下丘脑脑片CRH及CRH1R的表达研究

目的　通过CRH刺激大鼠下丘脑脑片 ,探讨下丘脑CRH和CRH1R在下丘脑中的分布和表达规律。方法　采用大鼠下丘脑脑片实验模型 ,运用免疫组织化学技术 ,观察CRH刺激大鼠下丘脑脑片后CRH和CRH1R在下丘脑中的分布和表达规律。结果　CRH刺激下丘脑脑片后下丘脑CRH和CRHlR含量明显增多 ,而CP 15 45 2 6、H89可显著抑制CRH和CRHlR的增加。结论　CRH刺激下丘脑脑片后增多的CRH与CRHlR结合后进一步引起下丘脑神经元CRH和CRHlR表达增加。提示在严重创伤应激反应中 ,CRH通过PKA途径实现对下丘脑神经元CRH的表达的超短正反馈调节。     

脑片膜片钳法———改进的盲法和离子孔道法

脑片技术和脑片钳技术的结合是目前离体神经系统神经元网络研究的前沿技术。作者对其中的盲法和离子孔道法进行了改进，用剖解是微镜代替倒置显微镜，对记录电极的拉制进行改良，使之不必进行抛光处理，在离子孔道记录时，去极化电压钳位可稳定记录达０．４０ｍＶ。作者并于实验中筛选出典型的电反应波形便于判断获得良好的电极膜封闭。上述改进降低了仪器费用，同时也利用获得稳定的记录，因而使此技术更易于推广应用。     

小脑中的LTD在学习记忆中的作用及产生机制

学习和记忆是脑的高级功能，二者是相互联系的复杂的神经过程。大量的实验研究表明：神经系统结构和功能的可塑性是其基本的神经机制。1973年Bliss等在离体海马脑片的电生理研究中发现，某种神经元受到一定刺激后其兴奋性突触后电位（EPSP）明显增强，这种现象会长时程延迟，某些动物会延长数日、数月或更久，称之为长时程增强效应（Long—term potentiation，LTP）；     

异氟醚预处理对大鼠海马脑片缺氧无糖损伤的保护作用及PKCγ机制

目的利用离体海马脑片缺氧无糖（oxygen and glucose deprivation，OGD）损伤模型，探讨异氟醚预处理对神经细胞的保护作用及与蛋白激酶Cγ（protein kinase Cgamma，PKC7）的关系。方法将脑片随机分为分4组（n=8）：空白对照组（CON组）、PKCγ抑制剂Bisindolylmaleimide Ⅰ组（BIS组）、异氟醚预处理组（ISO组）、异氟醚加抑制剂组（ISO＋BIS组）。采用脑片灌流及电生理技术，记录海马CA1区的顺向群锋电位（orthodromic populationpike，OPS）作为评价脑片不同阶段的活性指标；采用2，3，5-三苯基氯化四氮唑（2，3，5-triphenyltetrazolium chloride，TYC）染色定量比色方法分析脑片损伤程度。采用Western bolt方法，观察PKCγ在不同组别中的表达。结果异氟醚预处理能明显提高脑片的抗缺氧能力，增加OPS恢复率，组织损伤百分率明显低于其他各组，促进PKC向胞膜转位；而抑制PKC7后脑片活性降低，OPS恢复率下降。结论PKCγ的激活参与异氟醚预处理对大鼠海马脑片缺氧无糖损伤的保护作用。     

离体培养海马脑片与在体发育海马结构形态学比较研究

目的 观察离体培养海马脑片与在体发育海马结构中锥体细胞和颗粒细胞的形态变化。比较两者间的差异。为海马脑片的应用提供形态学资料。方法 海马脑片培养技术。常规组织H-E染色及光镜下观察。体视学原理定量分析。结果 随着培养时间的延长，海马脑片阿蒙角锥体层数逐渐减少，CA1区和CA3区细胞的面数密度也逐渐减少，培养2周（C2w)时CA1区锥体细胞的面数密度高于在体发育3周（P3w)时锥体细胞的面数密度；密度也逐渐减少，培养2周（C2w)时CA1区锥体细胞的面数密度高于在体发育3周（P3w)时锥体细胞的面数密度；齿状回颗粒细胞的面数密度渐增加，且齿状回颗粒细胞有从背侧支向腹侧支迁移的趋势，结论 离体培养海马脑片的发育与在体海马结构的发育模式相似。但离体培养海马脑片的发育滞后于生后发育早期大鼠海马的发育。     

NMDA受体对纹状体长时程增强和强直刺激后c-fos表达的影响

目的:观察NMDA受体对强直刺激后纹状体长时程增强和c-fos表达的影响.方法:采用纹状体离体脑片细胞外记录电生理技术和免疫组化技术.结果:NMDA受体的拮抗剂MK-801(20 μmol/L)完全抑制了长时程增强的产生以及强直刺激后c-fos的表达.结论:NMDA受体参与了纹状体长时程增强的过程和强直刺激后c-fos的表达.     

DHPG和BMI诱导的癫痫样放电模型的建立及比较

目的 在离体大鼠海马脑片上,通过激活Ⅰ型代谢型谷氨酸受体(mGluR)或阻断γ-氨基丁酸(GABA)受体,诱导癫痫样放电.方法 将离体大鼠海马脑片暴露于Ⅰ型mGluR特异性激动剂对羟基苯甘氨酸(DHPG)或GABAA受体阻断剂荷包牡丹碱(BMI),利用全细胞记录模式记录海马CA3区域单个锥体细胞的电活动.结果 暴露于DHPG或BMI中的海马脑片CA3区域的锥体细胞均产生癫痫样放电,且两者的放电频率比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 在离体情况下,破坏神经兴奋性和抑制性系统的平衡可以诱导产生癫痫样放电活动.     

二甲亚砜对大鼠海马脑片谷氨酸毒性损伤的保护作用

目的：研究二甲亚砜（ｄｉｍｅｔｈｙｌ ｓｕｌｆｏｘｉｄｅ,ＤＭＳＯ）对海马脑片谷氨酸（ｇｌｕｔａｍｉｃ ａｃｉｄ,Ｇｌｕ）兴奋毒性损伤的保护作用。方法：在离体海马脑片灌流液中加入Ｇｌｕ造成兴奋性毒性损伤,用电生理记录技术观察ＤＭＳＯ对海马脑片顺向群峰电位（ｏｒｔｈｏｄｒｏｍｉｃ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｓｐｉｋｅ,ＯＰＳ０的影响。结果：去除Ｇｌｕ １ｈ后,ＤＭＳＯ（５ｍｌ／Ｌ）组ＯＰＳ恢复幅度和恢复     

地塞米松对酒精致纹状体突触可塑性变化影响的研究

目的:观察致醉剂量酒精对纹状体长时程增强(LTP)的影响,并通过可以抑制蛋白合成的药物-地塞米松来分析其作用机制,初步探讨酒精对学习记忆影响的作用机制.方法:采用纹状体离体脑片细胞外记录电生理技术和免疫组化技术.结果:研究致醉剂量酒精显著增强纹状体LTP的幅度.地塞米松可以部分翻转酒精对纹状体LTP的增强.结论:致醉剂量酒精极有可能通过激活及早基因从而实现对纹状体LTP的增强作用.     

藏药合剂抗脑缺血损伤作用的研究

目的 :观察藏药合剂对大鼠海马脑片缺血性损伤的保护作用。方法 :通过电刺激离体海马脑片 CA3区的 Schaffer侧支 ,记录 CA1区锥体细胞层的顺向群峰电位 (orthodromic population spikes,OPS) ,观察藏药合剂对缺血状态下 OPS的影响。结果 :藏药合剂组用药后 OPS恢复程度为 (6 4 .0± 19.5 ) % ,明显高于对照组 (P<0 .0 1)。结论 :在离体海马脑片模拟缺血损伤的研究中 ,藏药合剂对缺氧缺血性脑损伤有保护作用 ,而且效果较好。     

几种哺乳动物离体心肌细胞动作电位的观察

运用微电极技术观察动物离体心肌细胞的动作电位,在生理和药理学的研究方面是颇为重要的实验手段之一。我们用微电极技术观察了豚鼠、兔、大白鼠、猪、狗等几种哺乳动物离体心肌细胞的动作电位,为研究药物在心肌电生理方面的作用,打下基础。材料与方法一、     

DHPG和BMI诱导的癫痫样放电模型的建立及比较

目的在离体大鼠海马脑片上,通过激活Ⅰ型代谢型谷氨酸受体（mGluR）或阻断γ-氨基丁酸（GABA）受体,诱导癫痫样放电。方法将离体大鼠海马脑片暴露于Ⅰ型mGluR特异性激动剂对羟基苯甘氨酸（DHPG）或GABA．受体阻断剂荷包牡丹碱（BMI）,利用全细胞记录模式记录海马CA3区域单个锥体细胞的电活动。结果暴露于DHPG或BMI中的海马脑片CA3区域的锥体细胞均产生癫痫样放电,且两者的放电频率比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论在离体情况下,破坏神经兴奋性和抑制性系统的平衡可以诱导产生癫痫样放电活动。     

一种小鼠离体海马脑片细胞外记录技术

离体脑片是用特制的组织切片机切制而成的脑组织切片。利用脑片进行功能研究最基本的指标是突触传递引起的电活动。细胞外记录技术是进行这种记录最常用的方法之一。我室20世纪60年代发现并报道了脑低氧预适应现象^[1],并建立了小鼠低氧预适应动物模型。在这一独特的低氧预适应模型上,建立海马脑片诱发电位的记录方法,对于进一步深入研究低氧预适应机制是十分必要的。     

离体培养大鼠海马脑片的形态学与细胞反应性研究

目的:探索离体大鼠海马脑片培养方法,观察培养脑片的形态变化和细胞反应性.方法:选择生后6～9d的Wistar鼠,分离海马,切成400ìm厚的脑片,转移至带有微孔膜插件的6孔培养板内,人37%的CO2培养箱中进行培养.通过肉眼、倒置相差显微镜观察培养海马脑片的形态学变化;用免疫组化染色检测脑片神经细胞内Fos蛋白表达变化,以判断培养脑片有无对外界伤害性刺激的应激反应能力;用膜片钳技术检测神经细胞的电生理活动,以判断培养海马脑片的活性和生理功能.结果:(1)随着体外培养时间延长,培养脑片内神经细胞数目增多,而脑片明显变薄,至培养4周时厚度约150ìm厚.(2)致癫痫样发作药物匹罗卡品作用于脑片后,导致培养海马脑片CA1区细胞内Fos蛋白表达增高.(3)利用膜片钳技术,在培养1、2、3、4周的4个时点对海马脑片CA1区锥体细胞作全细胞记录,皆记录到细胞电流变化图形.结论:本方法在体外培养的海马脑片至少可存活4周,且具备良好的活性和一定的生理功能.