α—地中海贫血种植前基因诊断妊娠成功

目的 探讨种植前基因诊断的临床应用。方法 对1例夫妇均为东南亚缺失型α－地中海贫血携带者，经超排取卵、卵母细胞单精子显微注射受精及胚胎细胞活检，吸取的单个卵裂球采有针对α－SEA基因的gap－PCR引物和荧光探针用荧光定量PCR技术进行诊断，将诊断不致病的3个胚胎进行宫腔内移植。结果 胚胎移植后7击B超诊断单胎妊娠，18周羊膜腔穿刺产前诊断证实为不致病胎儿。结论 应用成熟的显微操作技术进行胚胎细胞活检，活检的单个儿裂球用荧光定量PCR技术进行诊断，获得国内首例α－地中海贫血胚胎种植前基因诊断后妊娠成功。     

我国免疫治疗胶质瘤实验研究获得阶段性成果

近日.院生殖中心李晓红等医务人员采用荧光定量PCR技术,选择跨越断裂点的PCR(gap-PCR)引物扩增单个胚胎卯裂球16号染色体上的SEA基因,首次对曾经两次妊娠Bart’s水肿胎儿的α地中海贫血(简称地贫)携带夫妇成功地进行了种植前基因诊断(Preimplantation GeDetic     

携带α-地中海贫血基因人胚胎干细胞系的建立

【目的】 建立携带α-地中海贫血纯合子基因人胚胎干细胞系.【方法】 收集经胚胎种植前遗传学诊断技术诊断为携带α-地中海贫血纯合子基因的囊胚,机械法分离内细胞团,用无血清培养基进行人胚胎干细胞培养,建立携带α-地中海贫血纯合子基因的人胚胎干细胞系?对所得人胚胎干细胞进行α-地中海贫血基因的DNA序列分析与全能性鉴定. 【结果】 本研究共收集44枚PGD筛查后囊胚,分离12个囊胚内细胞团,建立两株人胚胎干细胞系.两株人胚胎干细胞系均携带α-地中海贫血纯合子基因.两株胚胎干细胞系均有正常的染色体核型.OCT-4基因与细胞表面抗原SSEA-3?SSEA-4?TRA-1-60与TRA-1-80的表达,能够向三胚层细胞分化.【结论】 携带α-地中海贫血纯合子基因的人胚胎干细胞具有向三胚层细胞分化的全能性,携带致病基因的胚胎可用于建立携带遗传疾病基因的人胚胎干细胞系.     

应用荧光聚合酶链反应对α地中海贫血进行植入前遗传学诊断

目的探讨应用跨越断裂点荧光聚合酶链反应（PCR）技术在α地中海贫血（简称α地贫）植入前遗传学诊断（PGD）中的应用。方法获取Ot地贫东南亚缺失型携带者单个淋巴细胞,建立了稳定的单细胞跨越断裂点荧光PCR检测技术,并对4对夫妇双方均为α地贫——SEA缺失型杂合子应用荧光PCR进行了α地贫的PGD。结果单个淋巴细胞平均扩增效率为90．0％（72／80）,平均等位基因脱扣（ADO）率为8．3％（6／72）。对4对夫妇进行4个周期PGO,共检测38个胚胎,获得38个卵裂球,其中34个卵裂球扩增成功,扩增效率为89．5％（34／38）,ADO率为5．9％（2／34）。经PCR分析,共获得11个正常胚胎,8个杂合子胚胎,15个重型地贫胚胎。移植了11个胚胎,获得2例临床妊娠。孕17周时经脐带血穿刺,分别证实为完全正常胚胎和杂合子胚胎,现已出生两名健康男婴。结论应用单细胞荧光PCR技术可对α地贫进行植入前遗传学诊断,达到优生的目的。     

染色体和遗传

一地中海贫血病人或携带者的289个淋巴细胞和人体外受精一胚胎移植志愿者剩余的胚胎分离137个单细胞用荧光定量PCR方法进行分析。结果:用单个淋巴细胞诊断p一地中海贫血扩增效率达%%,准确率达99%一100%,等位基因丢失(ALK))率仅0一5%。单个胚胎细胞扩增效率86%。结论:荧光定量PCR技术是一种敏感、快速、可靠和准确的技术,适合包括日一地中海贫血在内的单基因疾病的种植前诊断。表1参6(原文摘要)040080第一极体形态学与人类卵细胞非整倍体相关关系的研究/陈雯…//现代妇产科进展一2003,12(5)一321一323 探讨第一极体的形态学和卵细胞染色…     

罗式易位携带者胚胎植入前遗传学诊断的研究

【目的】应用荧光原位杂交(FISH)技术对罗式易位携带者进行胚胎植入前遗传学诊断。【方法】分别用化学打洞法及机械打洞法对3例罗式易位t（13q14q）患者的体外受精的胚胎活检,用VysisLSI13q14,TelVysion14q探针对卵裂球进行FISH分析,选取正常或平衡的胚胎移植入子宫腔。【结果】3个周期共获卵23个,受精率79%。活检14个胚胎,其中化学打洞法活检9个胚胎,活检后胚胎继续分裂率67%;机械打洞法活检5个胚胎,活检后胚胎继续分裂率为40%。2个周期分别有1个胚胎显示正常或平衡,进行移植,其中1例获得妊娠,妊娠20周时经羊水细胞核型分析证实为正常。【结论】对罗式易位携带者进行胚胎植入前遗传学诊断,可以解决患者的生育障碍。     

TaqMan-MGB探针实时荧光PCR在β地中海贫血植入前诊断中的应用研究

目的建立单细胞MGB探针荧光PCR检测β地贫的方法以及在β地贫PGD中的应用研究。方法获取β地贫基因携带者单个淋巴细胞,建立稳定的单细胞MGB探针荧光PCR检测技术,并对2例双方均为β地贫基因携带者的夫妇应用MGB探针荧光PCR进行了β地贫的PGD。结果利用单细胞MGB探针荧光PCR检测了β地贫基因携带者的200个单个淋巴细胞的基因型,平均扩增效率为94%,平均等位基因脱扣(ADO)率为2.5%。对两对夫妇进行4个周期PGD,共活检16个胚胎,获得16个卵裂球,其中15个卵裂球扩增成功,扩增效率为93.8%,ADO率为6.2%。14个胚胎经PCR分析后获得明确诊断,移植了4个胚胎,获得1例临床妊娠。孕11周时经腹吸取绒毛,证实为完全正常胚胎,最终分娩了一正常女婴。结论应用单细胞MGB探针荧光PCR技术可对β地贫以及其它单基因遗传病进行植入前遗传学诊断,达到优生目的。     

地中海贫血胚胎着床前行遗传学诊断2例报告

目的 探讨胚胎着床前遗传学诊断技术( PGD)阻断地中海贫血向下一代遗传的有效性. 方法 采用常规黄体期长方案促排卵,用卵胞浆内单精子显微注射法授精,第5天或第6天对囊胚活检3~5 个细胞后进行冷冻保存,活检细胞采用PCR及反向斑点杂交技术进行β-地中海贫血的遗传学检测. 结果 根据PGD结果及胚胎质量,对2例患者的可移植囊胚进行解冻并进行移植,均获得了临床妊娠;孕期抽取绒毛或羊水进行产前诊断,其结果与 PGD 的结果一致.结论 PGD是阻断地中海贫血向下一代遗传的有效手段.     

杜氏肌营养不良症(DMD)的植入前遗传学诊断

目的 对杜氏肌营养不良症(ducherule muscular dystrophy,DMD)进行植入前遗传学诊断(preim-plantafton genetic diagnosis,PGD),阻断DMD患儿的出生.方法 针对患者的DMD基因的48号外显子缺失位点采用巢式PCR分别对患者和携带者的单个淋巴细胞、行体外授精一胚胎移植治疗的健康志愿捐献者的单个卵裂球细胞进行扩增,建立稳定的经单细胞基因诊断DMD的方法 .再对在该中心进行超排和体外授精一胚胎移植治疗的DMD携带者的胚胎活检后完成PGD,根据诊断结果 选择健康的优质的胚胎移植入子宫.结果 携带者的单个淋巴细胞的PCR扩增成功率为90.5%(95/105),健康志愿捐献者的单个卵裂球细胞PCR扩增成功率为85.7%(54/63),假阳性率为0(0/28).分别对3例DMD携带者施行了植入前遗传学诊断,病例1移植了2枚未受累的优质胚胎,且成功妊娠单胎并已于2005年4月分娩了1个健康的女婴;病例2移植了2枚优良胚胎,不幸的是未能妊娠.病例3诊断为未受累的仅有的2枚胚胎因胚胎质量差而未能移植.结论 该组采用的方案可对DMD基因的48号外显子缺失突变的DMD家庭进行PGD,达到了阻断DMD惠儿出生的目的 .     

植入前遗传学诊断中的胚胎活检技术应用进展

植入前遗传学诊断(PGD)主要是对体外受精(IVF)后发育到6～8细胞的胚胎，在显微操作系统下活检其中的1～2个卵裂球或对囊胚期胚胎活检其滋养外胚层细胞，应用聚合酶链反应(PCR)或荧光原位杂交(FISH)技术进行快速的遗传学诊断后．选择正常健康的胚胎植入子宫内，从而获得健康的胎儿。PGD是辅助生育技术与分子生物学相结合     

植入前胚胎遗传学筛查中两轮荧光原位杂交技术的建立

目的 建立两轮荧光原位杂交技术(FISH)对单个胚胎细胞进行植入前遗传学筛查(PGS)的实验方法以增加高龄妇女、反复种植失败、习惯性流产等不孕不育夫妇的妊娠率,降低流产的风险.方法 对常规行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)及卵母细胞浆单精子注射(ICSI)的卵母细胞于受精后第3天行胚胎活检,取1～2枚卵裂球,裂解、核...     

先天性异常与优生学

042 1 75　植入前遗传学诊断 /王仁礼∥生殖与避孕 — 2 0 0 4 ,2 4 ( 3) —Ⅰ～Ⅴ植入前遗传学诊断 (PGD)主要是指在显微操作下从体外受精 (IVF)发育至 6～ 8个细胞期的胚胎中 ,活检 1～ 2个卵裂球细胞或直接获取受精前后的极体 ,通过聚合酶链式反应 (PCR)或荧光原位杂交 (FISH) ,进行快速遗传学诊断 ,选择正常胚胎植入宫内 ,从而获得健康胎儿。该文在PGD取材方面介绍了 :( 1 )极体活检 ;( 2 )卵裂球活检 ;( 3)囊胚活检。在PGD诊断方面介绍了 :( 1 )染色体异常 ;( 2 )单基因病 ;( 3)诊断技术 ;( 4 )存在问题与解决办法。还介绍了…     

多重巢式聚合酶链反应在β地中海贫血植入前遗传学诊断中的应用

目的探讨应用多重巢式聚合酶链反应(PCR)技术在β地中海贫血(简称β地贫)植入前遗传学诊断(PGD)中的应用。方法获取β地贫基因携带者单个淋巴细胞,建立了稳定的单细胞多重巢式PCR检测技术,可同时检测β珠蛋白基因及与β珠蛋白基因紧密连锁的HumTH01基因,并对4例已出生的重型β地贫患儿及双方均为β地贫基因携带者的夫妇应用多重巢式PCR进行了β地贫的PGD。结果利用单细胞多重巢式PCR,可以同时检测中国人常见的16种β地贫突变类型,单个淋巴细胞平均扩增效率为91．3％,平均等位基因脱扣(ADO)率为17．0％。对4对夫妇进行4个周期PGD,共活检33个胚胎,获得33个卵裂球,其中30个卵裂球扩增成功,扩增效率为90．9％,ADO率为13．3％。26个胚胎经PCR分析后获得明确诊断,移植了8个胚胎,获得1例临床妊娠。孕17周时经脐带血穿刺,证实为完全正常胚胎,现已出生1名正常女婴。结论应用单细胞多重巢式PCR技术可对β地贫进行植入前遗传学诊断,达到优生目的。     

荧光原位杂交技术在Y染色体微缺失患者中的应用

目的探讨荧光原位杂交技术在Y染色体微缺失患者中的应用价值。方法辅助生育中借助显微操作系统,在卵裂期6～8细胞中活检1～2个细胞行荧光原位杂交,选择核型为46,XX的胚胎移植。结果在活检的11个胚胎中,染色体核型异常的2枚,46,XX的胚胎8枚,46,XY的胚胎1枚。移植核型46,XX的2枚胚胎获单胎妊娠出生正常女婴。结论对Y染色体微缺失的患者,通过胚胎植入前遗传学诊断选择女性胚胎移植,可有效阻断遗传性疾病传递给下一代。     

传统的荧光原位杂交与单核苷酸多态性微阵列技术在植入前遗传学诊断中的比较

【目的】对染色体易位携带者的植入前遗传学诊断(PGD),随机的采用传统荧光原位杂交技术结合卵裂球活检并新鲜周期移植的策略,或单核苷酸多态性微阵列技术结合滋养外胚层活检并冷冻周期移植的策略,对两种策略的诊断结果及妊娠结局进行比较,以选择最佳的诊断策略。【方法】回顾性的分析了2012年4月至2014年6月,染色体易位携带者行PGD的183个周期资料,其中91个FISH-PGD周期采用D3卵裂球活检并新鲜周期移植的策略,记为FISH组、92个SNPPGD周期采用滋养外胚层活检并冷冻周期移植的策略,记为SNP组。将两组方法的诊断结果及妊娠结局进行比较。【结果】SNP组的无胚胎移植周期低于FISH组,差异有统计学意义;诊断正常率SNP组为33.8%,高于FISH组,两者间差异有统计学意义;移植周期临床妊娠率方面,SNP组高于FISH组而早期流产/胎停率则低于FISH组。【结论】SNP-PGD的滋养外胚层活检结合冷冻周期移植的策略有助于获得更好的临床妊娠结局。     

卵裂球细胞乙型肝炎病毒FISH检测法的建立

目的:建立一种灵敏、特异的卵裂球细胞乙型肝炎病毒(HBV)感染的检测方法。方法:根据HBV基因上的保守序列设计并合成引物,应用PCR技术制备探针并进行生物素标记。废弃的胚胎卵裂球经激光打孔,活检2~4个卵裂球细胞,利用生物素标记的探针,应用荧光原位杂交技术(FISH)检测HBV感染情况。结果:在HBV的感染者的38例子代胚胎卵裂球细胞,11例呈现阳性信号,健康对照组未检测到阳性信号。结论:荧光原位杂交技术(FISH)可用于卵裂球细胞HBV感染的检测,在体外受精-胚胎移植(IVF-ET)实践中对降低HBV垂直传播有重要意义。     

α-地中海贫血胚胎植入前遗传学诊断获临床妊娠1例报告

目的 探讨有效避免妊娠遗传病患儿的方法 .方法 采用常规黄体期长方案促排,用卵胞浆内单精子显微注射法授精,72 h后采用机械打孔法从每个优质胚胎中取一个卵裂球进行活检,采用gap-PCR检测α-地贫东南亚缺失型(α-SEA).结果 获宫内单胎妊娠.结论 PGD技术的临床应用为重型地贫的预防提供了一个可供选择的方法 .     

多重置换扩增在植入前胚胎性别诊断中的应用

目的 用多重置换扩增(MDA)方法,对植入前胚胎的单个卵裂球全基因组扩增后进行植入前胚胎性别的遗传学诊断.方法 用单细胞多重置换扩增方法对20个胚胎共20个单卵裂球进行全基因组扩增,用荧光PCR检测SRY、AMEL、XHPRT及X22 4个性别相关的基因座,检测胚胎性别,同时用同一胚胎另一卵裂球FISH结果作为对照.结果 20个卵裂球MDA均扩增成功,扩增成功率100％.20个胚胎均得到诊断,性别诊断成功率100％,其中12例为男性胚胎,8例为女性胚胎,与FISH结果一致率100％,诊断准确率100％.结论 可以用单卵裂球MDA后荧光PCR检测多个基因座的方法对胚胎性别进行快速、准确的植入前诊断.     

Preimplantation gender diagnosis by fluorescence in situ hybridization

目的：应用荧光原位杂交技术进行人类胚胎植入前性别诊断。方法：对2例甲型血友病基因携带、1例男性葡萄糖6磷酸脱氢酶（G-6-PD）缺乏患和2例Y染色体异常的患进行了6个周期的超排卵治疗。胚胎活检后取单个细胞进行固定,然后用荧光原位杂交技术检测胚胎的性别,根据遗传学规律选择胚胎性别后将胚胎移植入子宫。结果：5例患经6个治疗周期共取卵123个。可供活检的胚胎共61个,活检成功率为86.9％,活检后继续分裂率为62.3％,活检细胞固定率为98.1％。我们共移植了16个女性胚胎和3个男性胚胎,获得1例生化妊娠和3例临床妊娠,分别在羊水细胞和减胎组织中证实诊断的准确性。结论：荧光原位杂交技术用于遗传病的种植前诊断准确有效。对血友病等进行植入前性别诊断能避免选择性流产和重型患儿的出生,有利于优生。     

地中海贫血产前基因诊断的研究进展

地中海贫血,简称"地贫",好发于地中海沿岸、美国黑人人群和印度次大陆等地区,我国南方发病率也很高,尤其是广西,地贫基因的携带率高达20%,故产前基因诊断地贫就显得尤为重要.产前基因诊断包括胎儿DNA的取样和胎儿DNA的基因分析.胎儿DNA的取样技术主要有创伤性和无创伤性取样技术.创伤性取样技术包括羊膜腔穿刺术、绒毛活检术和脐静脉穿刺术,目前这类方法较为常用.无创伤性取样技术主要为从孕妇外周血中分离胎儿细胞和游离胎儿DNA的取样技术,及胚胎植入前诊断.对以上方法提取的胎儿DNA,再应用各种分子生物学方法进行地贫基因诊断,依据结果对胎儿做出继续妊娠或终止妊娠的决定.本文重点综述基因诊断和地贫高风险胎儿产前基因诊断的研究进展.