脊髓性肌萎缩症的分子遗传学研究新进展

脊髓性肌萎缩症是一种常染色体隐性遗传病,以脊髓运动神经元退化为特征,是由运动神经元存活基因突变引起功能性的运动神经元存活蛋白水平降低所致.该基因及其蛋白功能的阐明为临床基因诊断提供了依据.     

SSCP突变分析技术新进展

单链构象多态性是突变分析中的一项重要技术。近年来 ,在分辨率、自动化、高通量等方面有了较大改进 ,是现代分子遗传学研究中用于已知基因突变检测和未知基因突变筛查的一种非常有用的工具。     

四例染色体异常核型报告

例１　男,３１岁,妻子妊娠２次均无明显诱因于妊娠４０至５０天自然流产,妻子妇科检查及染色体检查均正常。其表型正常,智力发育及第二性征、外生殖器发育正常。精液检查：数目为４０００万／ｍｌ,畸形率为３８％。外周血染色体核型为：４６,ＸＹ,ｔ（３;１８）（ｑ１２;ｑ２１）。例２　男,３２岁,妻子妊娠４次。第１次孕２个月左右人流;第２、３次均为孕２个月左右时Ｂ超检查发现胚胎宫内发育迟滞,行人流术;第４次孕３个月左右时Ｂ超检查发现胚胎宫内死亡。夫妇双方均在有射线的环境中工作,无辐射直接接触史,每年体检血常…     

联合运用St14(DXS52)位点VNTR和 FⅧ基因内的(CA)n重复多态性诊断甲型血友病

目的　提高甲型血友病 (hemophilia A,HA)家系成员基因诊断及产前基因诊断的准确性和可诊断率。方法　采用 St14 (DXS5 2 )位点的可变串联重复序列和 F 基因第 13内含子的 (CA) n重复多态性连锁分析对 HA家系进行间接基因诊断。结果　单用上述 2个多态位点中的 1个对 9个 HA家系进行连锁分析 ,可诊断率均为 6 6 .7% ,联合 2个多态位点 ,可诊断率则提高到 88.9% ,完成了 4个家系的产前基因诊断 ,并监测到 1例单用 St14位点的可变串联重复序列多态连锁分析可能发生的产前诊断的误诊。结论联合采用上述 2个多态位点可以对近 90 %的 HA家系作出快速、准确的基因诊断和产前基因诊断。     

应用连锁分析对杜氏/贝氏肌营养不良症家系进行快速携带者检测和产前基因诊断

杜氏 贝氏肌营养不良症 (Ｄｕｃｈｅｎｎｅ Ｂｅｃｋｅｒｍｕｓｃｕｌａｒｄｙｓ ｔｒｏｐｈｙ ,ＤＭＤ ＢＭＤ)是Ｘ连锁隐性遗传病。近年来 ,在ＤＭＤ基因 3′ ,5′端及基因内发现了多个 (ＣＡ)ｎ短串联重复序列 (ｓｈｏｒｔｔａｎｄｅｍｒｅｐｅａｔ,ＳＴＲ)具有多态性 ,且信息量高。用ＳＴＲ进行连锁分析 ,适用于缺失型及非缺失型ＤＭＤ ＢＭＤ患者的基因诊断 ,大大提高了ＤＭＤ ＢＭＤ的可诊断率和产前诊断的准确率 ,成为ＤＭＤ ＢＭＤ快速基因诊断、产前诊断及携带者检测的最重要的方法 ,本室应用该法对 2个ＤＭＤ家系进行了快速的产前基因诊断和携带者检测。1　对象与方法1.1　对象　 2个家系的     

一例46，XX，t（2;10）（q23;q22），t（4;12）（q35;q2103）

一例４６，ＸＸ，ｔ（２；１０）（ｑ２３；ｑ２２），ｔ（４；１２）（ｑ３５；ｑ２１０３）龙志高李麓芸夏家辉患者女，３５岁。智力正常，结婚５年，自然流产１次。体查：生长发育正常，表型正常。细胞遗传学检查：外周血淋巴细胞培养，Ｇ显带，核型为４６，ＸＸ，ｔ（...     

人类睾丸生精细胞凋亡相关基因TSARG3的克隆

目的：克隆人类睾丸生精细胞凋亡相关基因TSARG3。方法：从已获得的小鼠稳睾和正常睾丸对照中表达量有明显差异的表达序列标签片段（BE644537）入手，构建人同源表达序列标签重叠群，应用基因特异性引物和载体特异性引物，在睾丸cDNA文库的DN或进行巢式PCR扩增、测序，对测序结果进行生物信息学分析。结果：从睾丸cDNA文库中分离出人类睾丸凋亡相关基因的5’末端而获得全长cDNA,命名为TSARG3，GenBank登录号为AF419291（保密期为1年），同时应用相同方法克隆了该基因在小鼠中的同源基因，GenBank登录号为AF419292。结论：获得人类睾丸生精细胞凋亡相关基因TSARG3，该基因可能与人类睾丸生精细胞凋亡有关。     

进行性骨干发育不全患者TGFβ1基因R218H突变的检测

目的Camurati-Engelmann病（Camurati-Engelmann disease, CED） ，又称进行性骨干发育不全（progressive diaphyseal dysplasia, PDD） ，是一种罕见的常染色体显性遗传病。该病临床表现以四肢肌肉萎缩、步态摇摆、四肢酸痛、第二性征发育不良为特征，影像学表现为四肢长管状骨对称性皮质增厚、骨干增粗呈梭形和髓腔狭窄，但不侵犯骨端或骨骺。该病由TGFβ1基因突变导致，迄今国际上已发现10种突变。作者对1例中国进行性骨干发育不全患者进行TGFβ1基因的突变位点检测。方法应用变性高效液相色谱技术对TGFβ1基因全部7个外显子及其外显子-内含子边界进行分析，对变性高效液相色谱技术显示可能存在突变的外显子进行DNA直接测序。结果在TGFβ1基因第4外显子发现错义突变R218H。此突变在2000年由日本学者首次报道。结论该突变的发现为下一步的治疗和遗传咨询提供依据。     

三例眼皮肤白化病患者TYR和P基因的突变分析

目的 分析眼皮肤白化病(oculocutaneom albinism,OCA)患者酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)基因和P基因的基因突变.方法 应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction ,PCR)和变性高效液相色谱(de-naturing high-perfomanee liquia chromatography,DHPLC)技术对3例患者的眼皮肤白化病Ⅰ、Ⅱ型相关基因(TYR和P基因)的外显子进行突变检测,并对DHPLC检出的突变样本进行测序和限制性内切酶分析以验证该突变.针对未见报道的新突变,筛查100名表型正常的无关个体,排除多态的可能.结果 在3例患者中检测出两种P基因突变,未检测到TYR基因突变.其中,患者1的P基因第13外显子发生杂合突变T450M;患者2的P基因发生两个杂合突变,分别是第13外显子T450M和第23外显子G775R;患者3的P基因第23外显子发生杂合突变G775R.P基因第13外显子限制性内切酶分析显示,患者1、2均出现杂合突变T450M导致的Oli I酶切位点部分消失,100名表型正常的无关个体未检出该突变;经检索,T450M为一未见报道的新突变.结论 联合应用PCR、DHPLC、DNA测序和限制性内切酶分析的方法可有效的对白化病进行基因诊断.     

46,XY女性性反转患者SRY基因的一个新突变类型

目的 研究46，XY女性性反转患者发病的分子机理。方法 应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)扩增1例性反转患者和其父亲的．SRY基因片段；PCR产物连接到pUCm-T载体上，在ABI 377-3自动测序仪上完成测序以查明突变；应用PCR-限制性酶切对DNA测序的结果进行检测。结果 发现该患者的SRY基因存在点突变(T387A)，导致SRY蛋白发生氨基酸翻译终止(酪氨酸129终止密码)，患者父亲的序列正常。由于患者SRY序列中增加一个Mae Ⅱ酶切位点，PCR-限制性内切酶酶切电泳检测，结果显示患者出现3条带(131bp、231bp和247bp)，而正常人出现2条带(131bp和478bp)，进一步验证了序列分析的结果。经查证数据库，该突变是一个未见报道的新型．SRY基因突变。结论 这一新型突变的发现，有助于进一步阐明46，XY女性性反转发病的分子机理。