应用荧光PCR技术检测单细胞β地中海贫血基因

[目的]应用荧光PCR技术检测单细胞β地中海贫血(β地贫)基因,并与巢式PCR相比较,探讨荧光PCR应用于β地贫植入前诊断中的可行性.[方法]获取β地贫41-42突变杂合子单个淋巴细胞,用巢式PCR及荧光PCR技术检测β珠蛋白基因.[结果]160个淋巴细胞进行荧光PCR扩增,β地贫基因的平均扩增效率为92.5%,等位基因脱扣(ADO)率为8.8%;240个淋巴细胞进行巢式PCR扩增,β地贫基因的扩增效率为91.7%,ADO率为15.8%.两种方法的扩增效率没有统计学差异,但荧光PCR的ADO发生率显著低于巢式PCR的ADO发生率(P＜0.05).[结论]本研究建立的单细胞荧光PCR技术具有较高的扩增效率,可显著降低ADO发生率,可望用于β地贫的临床植入前诊断.     

人卵母细胞和胚胎线粒体DNA缺失的研究

目的:检测人类卵子和胚胎线粒体DNA(mtDNA)4977bp缺失,并探讨这种缺失存在的病理生理学意义。方法:收集不受精的成熟卵母细胞和不适合移植及冷冻保存的胚胎;碱裂解法制备单个细胞DNA;单细胞巢式PCR检测人卵母细胞和胚胎mtDNA4977bp缺失情况。结果:122个卵母细胞中,56个(45.9%)发现有4977bp缺失;90个胚胎中,21个(23.3%)发现有缺失,二者间差异有显著性意义。将卵母细胞和胚胎分别按患者的年龄分为<30岁组、30-34岁组和>34岁组,卵母细胞缺失率分别为:43.6%、44.4%和51.7%,各组间差异无显著性意义;各组胚胎的缺失率分别为21.4%、20.0%和29.6%,差异亦无显著性意义。将卵母细胞和胚胎分别按患者是否妊娠分组,结果发现妊娠组与非妊娠组间mtDNA缺失率的差异也无显著性意义。结论:mtDNA4977bp缺失与受精失败有关,其是否参与卵子老化及其机制有待进一步研究。     

紧密连锁的多态性位点在β地中海贫血植入前遗传学诊断中的应用

目的 探讨与β珠蛋白基因紧密连锁的多态性位点HumTH01在β地中海贫血（β地贫）植入前遗传学诊断（preimplantation genetic diagnosis，PGD）中的作用。方法 对4例已出生重型β地贫患儿的、双方均为β地贫基因携带者的夫妇进行了6个周期的PGD治疗，应用多重巢式PCR同时检测β珠蛋白基因及HumTH01基因，选择健康的胚胎移植入子宫。结果 6个周期共活检44个胚胎，获得44个卵裂球，其中41个卵裂球扩增成功，35个胚胎经PCR分析后获得明确诊断，移植了14个胚胎，获得1例临床妊娠。孕17周时经脐带血穿刺，证实为完全正常胚胎，现已出生一正常女婴。单个卵裂球平均扩增效率为89．7％，等位基因脱扣（allele drop-out，ADO）率为14．4％。HumTH01基因可以帮助检测出ADO及污染的发生。结论 本研究为国内首次报道应用多重巢式PCR同时检测β珠蛋白基因及HumTH01基因对β地贫进行植入前遗传学诊断并成功获得临床妊娠。在PGD中同时检测与β珠蛋白基因紧密连锁的多态性位点可以降低PGD中由于ADO及污染造成的误诊的风险。     

移植人类早期卵裂胚胎对IVF-ET结局的影响

【目的】分析移植人类早期卵裂胚胎对IVF-ET结局的影响。【方法】对79例IVF-ET周期中的胚胎进行早期卵裂观察，按移植胚胎中有无早期卵裂胚胎分为两组，分析两组妊娠率、种植率。【结果】移植胚胎中有早期卵裂组26例，妊娠15例(57．7％)，种植率38．5％；无早期卵裂组53例，妊娠13例(24．5％)，种植率12．3％，前者显著高于后者。【结论】早期卵裂可以作为选择胚胎的一个指标，以提胚胎种植率。     

反复附睾或睾丸取精的无精子症病人妊娠结局

目的 :分析反复附睾或睾丸取精进行卵胞质内单精子注射治疗的妊娠结局。　方法 :收集 2 0 0 1年 1月～2 0 0 2年 12月进行 2周期以上附睾或睾丸取精进行卵胞质内单精子注射治疗的无精子症病人 31例 (共 4 3个周期 ) ,对取精情况及受精、种植和妊娠结局进行总结。　结果 :2 4例病人顺利从附睾取精 ,7例病人从睾丸取精 ,无 1例出现感染、血肿或局部的功能障碍。与第 1周期附睾或睾丸取精 15 4例 (共 15 4个周期 )的受精率、种植率和临床妊娠率比较 ,结果分别是 78.39%与 73.6 4 % ,19.6 8%与 18.38%和 34.88%与 37.91% ,差异无显著性 (P >0 .0 5 )。　结论 :无精子症病人进行反复附睾或睾丸取精 ,是安全和可耐受的 ,其妊娠结局与第 1周期比较无统计学差异。     

37例高原性肺水肿的临床分析

目的:对37例高原性肺水肿的临床治疗进行分析。方法:随机抽取我队2011年12月至2013年2月期间患高原性肺水肿的患者74例,在患者知情并且同意的基础上将其随机分为两组,对照组和观察组,每组各有37例高原性肺水肿患者。其中对对照组中的高原性肺水肿患者采取常规治疗,而对观察组中的患者在常规治疗的基础上加用硝苯地平,对两组患者的临床治疗效果进行比较分析。结果:对照组中治疗有效的患者有26例,而观察组中有35例患者治疗有效,即相对于对照组,观察组中患者的临床治疗效果更为良好,p0.05。结论:在对高原性肺水肿患者进行疾病治疗时,在常规治疗的基础上加用硝苯地平能够有效的改善患者的疾病情况。     

人类植入前胚胎形态与染色体异常关系初探

[目的]探讨人类植入前胚胎发育及形态与染色体异常之间的关系.[方法]对6例染色体异常患者的67个胚胎进行植入前遗传学诊断,对其进行形态评定,并用荧光原位杂交方法对胚胎进行染色体分析,分为染色体正常胚胎组及异常组.[结果]分析的67个胚胎中,染色体正常16个,异常51个.染色体正常及异常的胚胎在取卵后72 h发育至6细胞以上的比率分别为68.75%,62.75%;正常与异常的胚胎中碎片均＜20%的胚胎分别占100%、94.12%;胚胎活检后继续发育率分别为73.33%,79.54%;差异均不具显著性.[结论]用荧光原位杂交方法可对植入前胚胎进行染色体分析并研究早期胚胎形态与染色体异常之间的关系.     

无精子症病人100例取精方法及妊娠结局

目的 :回顾性分析 2 0 0 1年 1月～ 2 0 0 2年 1月在生殖中心行卵胞质内单精子注射 (ICSI)治疗的 10 0例无精子症男性的治疗结果。　方法 :经皮附睾精子抽吸术 (PESA)或睾丸精子抽提术 (TESE)获得精子 ,女方进行常规超排卵。分析激素水平 ,行睾丸组织学检查 ,评估取精的成功率、受精率、种植率和临床妊娠率。　结果 :76例(76 % )经PESA获得精子 ,2 3例 (2 3% )通过TESE获得精子。PESA和TESE组的受精率、种植率和临床妊娠率分别为 71.3%和 75 .18% ,2 0 .35 %和 2 2 .0 5 % ,4 2 .11%和 4 1.6 0 %。PESA组有 32例临床妊娠 ,其中 15例继续妊娠 ,15例已分娩 ,2例流产。TESE组有 10例临床妊娠 ,其中 6例继续妊娠 ,2例已分娩 ,2例流产。两组的受精率、种植率和临床妊娠率差异无显著性。在TESE组有 1例取精失败而放弃治疗。　结论 :激素水平和睾丸组织学检查不能预测附睾或睾丸取精的成功 ,PESA和TESE获得精子进行单精子注射是治疗男性无精子症的有效方法 ,两组的受精率 ,种植率和临床妊娠率差异无显著性 (P >0 .0 5 )。     

观察早期卵裂在行卵母细胞质内单精子注射周期中的应用

近年来，早期卵裂在人类体外受精一胚胎移植（IVF-ET）的研究中，已受到关注，认为早期卵裂可以预测胚胎的质量，因而可作为选择胚胎的指标之一。我们从2004年1月至12月，对卵母细胞质内单精子注射（ICSI）周期中的早期卵裂进行了观察，分析了移植早期卵裂胚胎对IVF—ET结局的影响。现将结果报道如下。