橄榄苦苷对胰岛素抵抗HepG2肝细胞胰岛素信号传导的影响

目的:观察橄榄苦苷(oleuropein,OL)对胰岛素抵抗HepG2肝细胞的胰岛素信号传导的影响。方法:常规复苏细胞,于10%FBS+1%青-链霉素的DMEM(1 g·L~(-1)葡萄糖)培养基中,37℃5%CO_2细胞培养箱中培养,常规细胞培养传至第3代待用;利用1×10~(-6)mol·L~(-1)胰岛素溶液刺激HepG2肝细胞36 h后建立肝细胞胰岛素抵抗模型,分为模型组,OL组(50μmol·L~(-1)),另设正常HepG2肝细胞为正常组,每组设6个复孔;对数生长期细胞,饥饿培养24 h后,诱导建立胰岛素抵抗模型,进行药物干预36 h后,以细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测OL对细胞活性的影响;OL对胰岛素抵抗HepG2肝细胞干预后,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测肝细胞胰岛素受体(InsR),胰岛素受体底物-1(IRS-1),葡萄糖转运蛋白-2(GLUT-2)mRNA和蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组胰岛素抵抗的HepG2肝细胞活性明显降低(P0.05),胰岛素信号分子InsR,IRS-1,GLUT-2 mRNA和蛋白表达明显降低(P0.05,P0.01)。与模型组比较,OL干预后胰岛素抵抗的HepG2肝细胞活性显著升高(P0.01);胰岛素信号分子InsR,IRS-1,GLUT-2 mRNA和蛋白表达明显升高(P0.05,P0.01)。结论:OL能够增加胰岛素抵抗肝细胞活性,上调肝细胞胰岛素信号通路中InsR,IRS-1,GLUT-2 mRNA和蛋白的表达,这可能是其改善胰岛素抵抗的机制之一。     

白子菜对HepG2细胞胰岛素抵抗作用的分子机制

目的:观察白子菜对胰岛素抵抗人肝癌Hep G2细胞的胰岛素受体(insulin receptor,InsR),葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter4,GLUT4)mRNA表达和蛋白激酶B(protein kinase B,PKB),糖原合成激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)蛋白表达的影响,探讨其干预胰岛素抵抗的分子机制。方法:用胰岛素诱导Hep G2细胞使其产生胰岛素抵抗,实验分为空白组,模型组,白子菜水提物(Gynura divaricata hot water extracts,GDE)高、低质量浓度(1.0,0.5 g·L-1)组,白子菜总黄酮(G.divaricata flavonoids,GDF)高、低质量浓度(0.2,0.1 g·L-1)组,白子菜总生物碱(G.divaricata alkaloid,GDA)高、低质量浓度(0.1,0.05 g·L-1)组,二甲双胍(1×10-3mol·L-1)组,葡萄糖氧化酶法检测Hep G2细胞培养液上清液中葡萄糖的含量,实时荧光定量聚合酶反应(Real-time PCR)检测Hep G2细胞InsR,GLUT4 mRNA表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Hep G2细胞PKB,GSK-3β的蛋白表达。结果:与模型组比较,1.0,0.5 g·L-1GDE组上清液葡萄糖含量极显著降低(P0.01),0.2 g·L-1GDF组上清液葡萄糖含量显著降低(P0.05);GDE,GDF组InsR,GLUT4的mRNA表达显著增加(P0.05);GDE组PKB的蛋白表达显著增加(P0.05),GSK-3β的蛋白表达显著降低(P0.05),GDF组PKB的蛋白表达极显著增加(P0.01),GSK-3β的蛋白表达极显著降低(P0.01)。结论:白子菜可改善胰岛素抵抗Hep G2细胞对葡萄糖的摄取,其机制可能与上调胰岛素抵抗Hep G2细胞InsR,GLUT4 mRNA表达和PKB的蛋白表达及降低GSK-3β的蛋白表达相关。     

降糖消脂片对KK-Ay转基因小鼠胰岛素抵抗的影响

目的观察降糖消脂片对KK-A~y转基因小鼠稳态模型评估胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment for insulin resistance index,HOMA-IR)、胰岛素敏感指数(insulin sensitivity index,ISI)、胰腺组织胰岛素(insulin,INS)及胰岛素受体(insulin receptor,InsR)蛋白表达的影响。方法采用高脂饲料喂养KKAy转基因小鼠,制备糖尿病肥胖小鼠模型。同时选取11只同龄C57小鼠作为正常对照。将成模的55只KK-A~y小鼠采用随机数字表法分为模型组、吡格列酮组(8 mg/kg)、降糖消脂片高、中、低剂量组(分别给予降糖消脂片10、5、2.5 g生药/kg),每组11只。以上各组均灌胃给药,正常对照组及模型组灌胃等体积灭菌水,每日1次,连续8周。给药8周后,称体重并测随机血糖(random blood glucose,RBG);眼静脉丛取血,测定INS、TC及TG水平,计算HOMA-IR及ISI;取胰腺进行形态学观察;采用免疫组化方法检测胰腺组织INS及InsR表达;采用免疫印迹(Western blot)法检测胰腺胰岛素受体β(insulin receptorβ,InsRβ)及胰岛素受体底物1(insulin receptor substrate 1,IRS-1)蛋白表达水平。结果与正常对照组比较,造模后各组小鼠出现肥胖,血糖及血脂明显升高(P0.01)。给药8周后模型组小鼠体重增加(P0.01),血糖及血脂稳定在高位水平;与模型组比较,降糖消脂片各剂量组小鼠体重、TG、INS及HOMA-IR水平明显降低(P0.05,P0.01);且高剂量组RBG降低更明显(P0.01);降糖消脂片高、低剂量组小鼠ISI明显升高(P0.05,P0.01)。胰腺病理HE染色结果显示,模型组胰岛萎缩,胰岛数目明显减少,分布稀疏,胰岛密度减低,胰岛细胞代偿性肥大,空泡变性,并可见凋亡细胞,表现为胞浆肿胀,核固缩。降糖消脂片高、中剂量组胰岛细胞数目明显增多,变性及凋亡细胞减少。免疫组化结果显示,与正常对照组比较,模型组INS及InsR累积光密度(IOD)值明显降低(P0.01);与模型组比较,降糖消脂片各剂量组胰腺INS及InsR IOD值明显增加(P0.05,P0.01)。Western blot结果显示,与正常对照组比较,模型组InsRβ及IRS-1蛋白表达明显降低(P0.01);与模型组比较,降糖消脂片各剂量组InsRβ及IRS-1蛋白表达水平升高(P0.01),与吡格列酮组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论降糖消脂片对KK-A~y糖尿病肥胖小鼠有明显的降糖、降脂及改善胰岛素抵抗的作用,其机理可能是通过增加胰岛细胞InsRβ及IRS-1表达,促进INS与受体的结合,从而改善糖、脂代谢和IR状态。     

小檗碱对体外HepG2细胞IR模型抗IR的效应及机制

目的:探讨小檗碱对HepG2细胞胰岛素抵抗(IR)模型的改善作用及机制。方法:HepG2细胞采用高糖(25 mmol·L~(-1))和高胰岛素(1×10~(-6)mol·L~(-1))联合诱导24 h,建立体外IR模型。模型培养液中分别加入1×10~(-5),1×10~(-6)mol·L~(-1)小檗碱,设1×10-3mol·L~(-1)二甲双胍作为阳性药,孵育24 h。葡萄糖氧化酶法检测培养液葡萄糖含量,计算细胞葡萄糖消耗量,细胞增殖活性检测(CCK-8)测定细胞增殖活性;生化法检测细胞丙酮酸激酶(PK)活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞葡萄糖激酶(GCK)和葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)的活性;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞胰岛素受体(InsR),磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K),丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(Akt)和GLUT2 mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞胰岛素受体底物-1(IRS-1),磷酸化的磷脂酰肌醇-3激酶(p-PI3K)和磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(p-Akt)的表达水平。结果:与正常组比较,模型组细胞葡萄糖消耗量显著降低(P0.01),PK,GCK,GLUT2蛋白活性显著降低(P0.01),InsR,PI3K,Akt,GLUT2 mRNA表达水平显著降低(P0.01),IRS-1,p-PI3K,p-Akt蛋白表达水平显著降低(P0.01)。与模型组比较,小檗碱组和二甲双胍组的细胞葡萄糖消耗量明显增加(P0.01),PK,GCK,GLUT2蛋白活性显著升高(P0.01),InsR,PI3K,Akt,GLUT2 mRNA和IRS-1,p-PI3K,p-Akt1蛋白表达水平均明显升高(P0.05,P0.01)。结论:小檗碱体外对HepG2细胞IR模型有显著的改善作用,其机制可能通过调节IRS-1/PI3K/Akt信号通路促进肝脏葡萄糖转运和改善葡萄糖代谢。     

壮药金花茶叶的降血糖活性筛选

目的考察金花茶叶不同极性提取物对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗量的影响及对Ⅱ型糖尿病小鼠的降血糖作用。方法利用胰岛素诱导HepG2细胞建立胰岛素抵抗模型,根据细胞对葡萄糖消耗情况,评价金花茶降糖活性。利用高脂高糖饲料联合链脲佐菌素建立小鼠Ⅱ型糖尿病模型,连续灌胃28 d观察血糖变化及糖耐量水平,同时检测血清总胆固醇、甘油三酯及低密度脂蛋白含量。结果金花茶叶正丁醇和乙酸乙酯提取物均能显著增加胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗量(P0.05)。并且在给药28 d后均能显著降低糖尿病小鼠血糖值和餐后血糖(P0.01),同时显著降低糖尿病小鼠的总胆固醇含量、甘油三酯含量及低密度脂蛋白含量(P0.05)。结论金花茶叶正丁醇和乙酸乙酯提取物能改善HepG2细胞的胰岛素抵抗现象,且能改善Ⅱ型糖尿病小鼠的高血糖高血脂症状。     

齐墩果酸对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响

目的：采用高浓度胰岛素体外诱导培养HepG2细胞,建立胰岛素抵抗的细胞模型,观察齐墩果酸对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响。方法：用CCK-8法筛选齐墩果酸作用于HepG2细胞的实验浓度,然后用高浓度胰岛素诱导HepG2细胞胰岛素抵抗,给予不同浓度的齐墩果酸（0.1、1、10、100μmol·L-1）、吡格列酮（10μmol·L-1）干预,以葡萄糖氧化酶法检测葡萄糖消耗量。结果：1不同浓度齐墩果酸对HepG2细胞增殖无明显影响。2与对照组比较,高浓度胰岛素作用24 h后,模型组葡萄糖消耗量明显降低（P〈0.01）;与模型组比较,齐墩果酸组HepG2细胞葡萄糖消耗量随浓度增加而增加,成一定的量效关系,浓度为10μmol·L-1和100μmol·L-1时葡萄糖消耗量显著增加（P〈0.01或P〈0.05）。结论：齐墩果酸能改善高浓度胰岛素诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗。     

基于药效团和分子对接的黄芪甲苷改善HepG2细胞胰岛素抵抗作用及机制研究

目的观察黄芪甲苷(astragalosideIV,ASTIV)改善人肝癌HepG2细胞胰岛素抵抗作用,基于药效团模型相互匹配和分子对接预测和验证AST IV可能作用靶点,探讨AST IV改善胰岛素抵抗机制。方法采用高浓度胰岛素诱导HepG2细胞制备胰岛素抵抗模型,ASTIV干预后,检测细胞葡萄糖消耗量,基于药效团模型相互匹配和分子对接预测ASTIV可能作用靶点,Western blotting法检测通路相关蛋白表达。结果 AST IV干预能显著增加胰岛素抵抗的HepG2细胞葡萄糖消耗量,且效应与盐酸吡格列酮相当;基于药效团模型相互匹配和分子对接预测AST IV作用靶点与酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)相关;Western blotting结果显示,胰岛素抵抗的HepG2细胞PTP1B蛋白表达水平显著升高,而胰岛素信号通路关键蛋白磷酸化的胰岛素受体(p-IR)和磷酸化的胰岛素受体底物1(p-IRS-1)表达水平显著降低;ASTIV的干预能显著降低PTP1B蛋白表达水平,升高p-IR和p-IRS-1蛋白表达水平。结论 ASTIV能显著改善高浓度胰岛素诱导的HepG2细胞的胰岛素抵抗,其作用机制与抑制PTP1B激活胰岛素信号通路有关。     

南苜蓿总皂苷对HepG2细胞及糖尿病大鼠外周组织胰岛素抵抗的作用及机制研究

目的考察南苜蓿总皂苷提取物对体内外降糖作用的特点。方法采用胰岛素持续作用于HepG2细胞复制细胞胰岛素抵抗模型。测定单位细胞葡萄糖的消耗量,检测细胞内丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)含量,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。将10只SD大鼠设为对照组、其余60只大鼠采用高糖高脂饮食和链脲佐菌素复制糖尿病大鼠模型,成模后进行分组,随机分为模型组、二甲双胍组、南苜蓿总皂苷高、低剂量组(以提取物计分别为1.4、0.7 g/kg),每组10只。各给药组灌胃相应药物,连续给药30 d。末次给药后,取肝脏和骨骼肌组织检测MDA、SOD、GSH-Px、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;采用Western blot法检测骨骼肌组织磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、蛋白激酶B(AKT)、葡萄糖转运体4(GLUT4)蛋白的表达。结果与模型组比较,200、100μg/mL浓度组能增加胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗量和SOD、GSH-Px含量,降低MDA含量(P0.05或P0.01);与模型组比较,高剂量组能使模型大鼠的肝脏和骨骼肌中IL-1β、TNF-α、MDA水平降低;升高SOD、GSH-Px水平(P0.05);骨骼肌组织中p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT、GLUT4的蛋白表达量升高(P0.05)。结论南苜蓿总皂苷体外促进胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗;体内通过减少对肝脏和骨骼肌细胞的氧化损伤和炎症反应,增强骨骼肌中胰岛素介导的信号传导,达到减轻胰岛素抵抗的作用,可能是其体内降糖机制。     

芒果苷对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响

目的探讨芒果苷在体外的降糖效果及对胰岛素传导关键信号蛋白磷酸化蛋白激酶B[p-AKT(Thr308)]、磷酸化糖原合成激酶3β[p-GSK-3β(Ser9)]、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPKα)、葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)表达的影响。方法培养HepG2细胞,用CCK-8法检测芒果苷对HepG2细胞增殖的影响;采用浓度为1×10^-6 mol/L的胰岛素刺激细胞36 h建立胰岛素抵抗模型;用葡萄糖检测试剂盒检测芒果苷对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗的影响,用western blot法探讨其可能的作用机制。结果芒果苷浓度在>125μg/mL浓度后对HepG2细胞生长有抑制作用,故采用浓度为60、30、15μg/mL的芒果苷进行葡萄糖消耗实验,发现实验组与模型组比较,葡萄糖消耗量明显增加且具有显著性差异(P<0.01,P<0.05)。western blot结果表明,与正常组比较,模型组p-AKT(Thr308)、p-GSK-3β(Ser9)、AMPKα、GLUT2蛋白表达明显降低且存在显著性差异(P<0.05);与模型组比较,实验组蛋白表达均明显增加,且高剂量组均存在显著性差异(P<0.01,P<0.05),低剂量组除GLUT2蛋白表达具有显著性差异(P<0.05),其他蛋白虽有增加但无统计学意义。结论芒果苷对HepG2细胞胰岛素抵抗有改善作用,其作用机制可能是通过调控p-AKT(Thr308)、p-GSK-3β(Ser9)、AMPKα及GLUT2等蛋白的表达来改善2型糖尿病的胰岛素抵抗。     

降脂平肝汤含药血清对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响

目的:探讨降脂平肝汤含药血清对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响.方法:以浓度分别为5×10-5,5×10-6,5×10-7,5×10-8,5×10-9mol·L-1的胰岛素孵育HepG2细胞24 h,建立并筛选最佳HepG2胰岛素抵抗模型,分别以20％大鼠空白血清及5 μmol· L-罗格列酮为对照,采用细胞培养、糖原染色、葡萄糖摄取分析等方法检测20％降脂平肝汤含药血清对HepG2细胞胰岛素抵抗相应指标的变化.结果:以5×10-7 mol· L-1的胰岛素成功建立HepG2胰岛素抵抗模型.与胰岛素抵抗模型组相比,降脂平肝汤含药血清组及罗格列酮组在基础状态下和胰岛素刺激状态下细胞的葡萄糖摄取以及糖原含量均明显增加,细胞糖原颗粒显著增多,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:降脂平肝汤含药血清能减轻HepG2细胞的胰岛素抵抗.     

HepG2细胞胰岛素抵抗模型的建立与鉴定

目的:采用胰岛素体外诱导法建立HepG2细胞胰岛素抵抗模型,为研究胰岛素抵抗及2型糖尿病提供一种可靠的体外胰岛素抵抗模型。方法:采用含不同胰岛素浓度的RPMI 1640培养基作用于HepG2细胞,葡萄糖-己糖激酶法检测作用不同时间点培养基中葡萄糖含量,MTT法检测各胰岛素浓度对HepG2细胞存活率的影响,确定胰岛素抵抗最佳作用浓度及时间;并以油红O染色观察细胞形态的变化;Real-time PCR法检测IRS-2 mRNA的表达,酶联免疫法检测葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)的表达。结果:细胞产生胰岛素抵抗的最佳作用时间为36 h,最佳胰岛素浓度为1×10-8mol.L-1。建立模型后鉴定,模型细胞与正常细胞相比脂滴明显增多;IRS-2 mRNA的表达较正常细胞明显降低(P<0.05),G-6-Pase的表达较正常细胞明显升高(P<0.05)。结论:采用胰岛素体外诱导的方法,在胰岛素浓度为1×10-8mol.L-1,作用36 h后,可建立稳定的HepG2细胞胰岛素抵抗模型。     

小檗碱对HepG2胰岛素抵抗细胞PI3K/AKT1/GLUT1信号通路的调控作用

目的 :探讨小檗碱对Hep G2胰岛素抵抗细胞PI3K/AKT1/GLUT1信号通路的调控作用。方法 :MTT法检测小檗碱不同浓度对细胞生长的抑制率;建立胰岛素抵抗细胞模型,实验分为5组,分别为空白组、模型组、二甲双胍组、小檗碱高剂量组、小檗碱低剂量组,给予相应的药物后,Western Blot检测葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、磷脂酰肌醇激酶(PI3K)、蛋白激酶B1(AKT1)的表达。结果:与空白组比较,模型组细胞培养基中的葡萄糖含量显著升高,差异有统计学意义(P0.05),说明胰岛素抵抗细胞模型建立成功。与空白组比较,模型组PI3K蛋白、GLUT1蛋白表达显著降低,AKT1蛋白表达显著升高,差异均有统计学意义(P0.05)。与模型组比较,二甲双胍组、小檗碱高剂量组、小檗碱低剂量组PI3K蛋白、GLUT1蛋白表达显著升高,AKT1蛋白表达显著降低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:小檗碱具有改善细胞胰岛素抵抗的作用,其分子机制可能通过调控PI3K/AKT1/GLUT1信号通路中转录因子蛋白的表达,从而改善细胞胰岛素抵抗状态。     

和于泰辅助降糖片联合二甲双胍对糖尿病大鼠骨骼肌胰岛素抵抗的影响

目的观察和于泰辅助降糖片联合二甲双胍对糖尿病大鼠骨骼肌胰岛素抵抗的影响,探讨其作用机制。方法 6~7周龄雄性ZDF(fa/fa)大鼠随机分为模型组、二甲双胍组、和于泰辅助降糖片组(降糖片组)、和于泰辅助降糖片联合二甲双胍组(联合组),另选ZDF(fa/+)大鼠为正常组,各给药组给予相应药物灌胃,连续6周。检测体质量、空腹血糖(FBG)、三酰甘油、总胆固醇(TC)、游离脂肪酸(FFA)、血清胰岛素水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),并进行口服葡萄糖耐量实验(OGTT);HE染色观察骨骼肌病理变化;RT-PCR和Western blot分别检测骨骼肌相应基因和蛋白表达。结果与二甲双胍组、降糖片组比较,联合组大鼠TC、FFA、FBG水平及HOMA-IR显著降低(P0.05,P0.01);OGTT各时间点血糖水平及曲线下面积显著降低(P0.05,P0.01);HE染色肌纤维排列整齐,细胞核无增多及内移,未见明显炎细胞浸润;骨骼肌胰岛素受体(Ins R)、蛋白激酶B(Akt)、葡萄糖转运蛋白4(Glut4)m RNA表达显著升高(P0.05,P0.01);骨骼肌磷酸化Ins R、磷酸化Akt、Glut4蛋白表达显著升高(P0.05,P0.01)。结论和于泰辅助降糖片联合二甲双胍能够改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗,效果优于单独应用。     

白子菜对HepG2细胞胰岛素抵抗改善作用的实验研究

目的 探讨白子菜对HepG2细胞胰岛素抵抗的改善作用.方法 用葡萄糖临床检测试剂盒检测白子菜对正常HepG2细胞葡萄糖消耗的影响,并于葡萄糖消耗实验结束后用MTT法检测白子菜对细胞增殖的影响;将HepG2细胞置于10-8 mol·L-1胰岛素培养液中36h复制胰岛素抵抗模型;用葡萄糖临床检测试剂盒检测白子菜对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗的影响.结果 白子菜对HepG2细胞增殖无影响,并可促进正常HepG2细胞和胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗.结论 白子菜可明显改善HepG2细胞胰岛素抵抗.     

双益方、组方中药及有效成分对骨骼肌及HepG2细胞胰岛素抵抗的影响

目的:研究双益方、组方中药及有效成分对骨骼肌细胞胰岛素抵抗模型葡萄糖消耗量及人肝癌HepG2细胞糖原合成,己糖激酶(hexokinase,HK),丙酮酸激酶(pyruvate kinase,PK)活性的影响,初步探讨其作用机制,为其临床应用奠定基础。方法:采用高胰岛素方法建立骨骼肌细胞的胰岛素抵抗(IR)模型,观察双益方低、中、高剂量组、组方中药(黄芪、山茱萸、黄连、桑白皮、葛根、佩兰),有效成分(黄芪甲苷,毛蕊异黄酮葡萄糖苷,熊果酸,马钱苷,小檗碱,1-脱氧野尻霉素,葛根素)组(30,120,480μg·L-1)对骨骼肌细胞胰岛素抵抗模型的葡萄糖消耗量的影响,蛋白质免疫印迹法(Western blot)测定骨骼肌细胞蛋白酪氨酸磷酸酶-1B(protein tyrosine phosphatase-1B,PTP-1B),葡萄糖转运蛋白4(glucosetransporters 4,GLUT4)表达;建立HepG2细胞的胰岛素抵抗模型,研究双益方、组方中药及其有效成分对HepG2细胞糖原合成及己糖激酶、丙酮酸激酶活性的影响。结果:双益方,黄芪,山茱萸,黄芪甲苷,1-脱氧野尻霉素,葛根素可降低骨骼肌细胞细胞上清液葡萄糖浓度(P0.05),以480μg·L-1双益方,黄芪甲苷组及葛根素组效果较好;与模型组比较,双益方、黄芪及有效成分组方可降低PTP-1B,提高GLUT-4的表达(P0.05,P0.01)。与正常组比较,模型组糖原合成量及HK,PK活性显著降低(P0.01);与模型组比较,各浓度组单味中药及有效成分均能一定程度的增加糖原合成量及HK,PK活性(P0.05,P0.01),其中黄芪甲苷、黄芪提取液增加糖原合成及提高HK活性作用较好;双益方提取液及葛根素增加PK活性作用较好。结论:双益方、组方中药及有效成分对骨骼肌,HepG2细胞胰岛素抵抗具有一定缓解作用,降低PTP-1B表达、提高GLUT4表达、增加糖原合成、提高HK,PK活性可能是其作用机制。     

藤茶主要成分对胰岛素抵抗HepG2细胞内氧化应激水平的影响

目的:探讨藤茶主要成分,二氢杨梅素、没食子酸、二氢槲皮素、杨梅素及杨梅苷对胰岛素抵抗HepG2细胞糖消耗及细胞内活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、乳酸(LD)、三磷酸腺苷(ATP)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性的影响。方法:将HepG2细胞分为正常对照组、胰岛素抵抗模型组和样品干预组。用高糖(55 mmol·L-1)诱导HepG2细胞,建立胰岛素抵抗模型,用MTT法检测样品对HepG2细胞增殖的影响;用葡萄糖氧化酶法检测上清中葡萄糖的含量;用分光光度法检测细胞内MDA、LD含量及SOD、CAT活性;用荧光酶标仪检测细胞内ROS和ATP水平。结果:五个化合物在有效浓度范围内对HepG2细胞增殖无显著影响;样品干预组葡萄糖消耗量较模型组显著升高;与模型组相比,五个化合物某个或某几个浓度组显著降低细胞内MDA含量,提高SOD、CAT活性及ATP水平;没食子酸、二氢槲皮素和杨梅苷显著降低细胞内ROS水平;除二氢杨梅素外,其余四个化合物均能降低细胞内LD含量。结论:胰岛素抵抗HepG2细胞与对照组细胞相比有较高的氧化应激水平,抗氧化能力减弱。藤茶主要成分能通过降低细胞的氧化应激水平,增加细胞的抗氧化能力,从而预防胰岛素抵抗。     

尖叶假龙胆乙酸乙酯部位对胰岛素抵抗HepG2细胞IRS-1、Akt的影响

目的：研究尖叶假龙胆乙酸乙酯部位对胰岛素抵抗HepG2细胞胰岛素关键信号IRS-1、Akt的基因、蛋白的影响。方法：以CCK-8法检测HepG2细胞活性;采用人肝癌HepG2细胞,并用高浓度胰岛素（10 -6 mol·L -1 ）培养HepG2细胞36 h,建立胰岛素抵抗细胞模型。根据CCK-8法结果分为正常组（Control组）、模型组（IR组）、尖叶假龙胆乙酸乙酯部位IR+50 μg·mL -1 组、IR+500 μg·mL -1 组及二甲双胍组,以葡萄糖试剂盒检测葡萄糖消耗量。尖叶假龙胆乙酸乙酯部位给药6 h后RT-PCR检测胰岛素抵抗HepG2细胞IRS-1、Akt基因表达;尖叶假龙胆乙酸乙酯部位给药6 h后,利用Western blot法检测IRS-1、Akt的蛋白表达。结果：尖叶假龙胆乙酸乙酯部位浓度为500 μg·mL -1 时,存活率达到95%。浓度高于500 μg·mL -1 时,存活率下降;与IR组比较,IR+50 μg·mL -1组与IR+500 μg·mL -1 组促进胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖的消耗量,但其作用不及盐酸二甲双胍组。给药6 h后与IR组比较,IR+50 μg·mL -1 组与IR+500 μg·mL -1 组的RT-PCR检测胰岛素抵抗HepG2细胞IRS-1、Akt的基因表达显著升高,P<0.01。给药6 h后与IR组比较,IR+50 μg·mL -1 组与IR+500 μg·mL -1 组的Western blot法检测IRS-1、Akt的蛋白表达显著升高,P<0.01。结论：尖叶假龙胆乙酸乙酯部位上调HepG2细胞胰岛素信号通路关键靶点IRS-1、Akt基因表达,以及IRS-1、Akt蛋白表达从而可能是其改善胰岛素抵抗作用的机制。     

葛根上调肝胰岛素抵抗HepG2细胞OB-R,IRS2,GLUT1和GLUT2蛋白调节糖代谢的研究

研究中药葛根对人肝癌Hep G2细胞胰岛素抵抗(IR)模型糖代谢的改善作用并初步探讨葛根降糖的分子作用机制。该实验采用课题组优化方法,1×10~(-9)mol·L~(-1)胰岛素加3.75×10~(-6)mol·L~(-1)地塞米松联合给药Hep G2细胞48 h建立稳定的IR模型;CCK-8法检测葛根含药血清对细胞活性的影响;葡萄糖氧化酶法检测多个时间点(12,15,18,21,24,30,36 h)IRHep G2细胞葡萄糖消耗量;蒽酮法检测细胞内糖原含量;Western blot法检测胰岛素受体底物2(IRS2)、瘦素受体(Ob-R)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)和GLUT2蛋白表达水平。研究结果显示葛根含药血清(5%,10%,15%)对IR-Hep G2细胞的活力没有明显的影响;5%和10%葛根含药血清在给药18,21,24 h均显著上调IR-HepG2细胞葡萄糖消耗量(P0.01),15%葛根含药血清除给药15 h上调葡萄糖消耗量较弱(P0.05),18,21,24,30 h都显著上调葡萄糖消耗量(P0.01),呈现一定程度剂量依赖性。葡萄糖消耗时效实验确认24 h是最佳时间点,进一步研究发现葛根含药血清作用24 h增加胞内糖原含量(P0.01);上调IRS2,Ob-R,GLUT1和GLUT2蛋白表达量。葛根含药血清降糖作用可能部分通过上调Ob-R和IRS2蛋白表达来调节以PI3K/PDK为中心的胰岛素信号通路;上调IR-HepG2细胞GLUT1和GLUT2表达量,加速葡萄糖转运进入肝细胞中并增加糖原合成来增强IR-HepG2细胞的胰岛素敏感性来实现的。     

降糖补肾方对糖尿病大鼠肌肉组织胰岛素受体及胰岛素受体底物-1表达的作用研究

目的:探讨降糖补肾方改善胰岛素抵抗,治疗糖尿病的作用机制。方法:制备糖尿病大鼠模型,葡萄糖氧化酶法检测空腹血糖;免疫印迹检测InsR磷酸化、IRS-1酪氨酸磷酸化蛋白活性的变化。结果:空腹血糖≥11.1mmol/L为糖尿病大鼠成模标准,成模大鼠随机纳入研究。降糖补肾方能降低糖尿病大鼠的空腹血糖,降糖补肾方高剂量组降糖效果与阿司匹林组相当(P>0.05);免疫印迹法检测结果显示:模型组糖尿病大鼠肌肉组织InsR的磷酸化水平下降,与空白对照组比较有明显差异(P<0.01),降糖补肾低剂量组与阿司匹林组相比P>0.05,说明在改善糖尿病大鼠肌肉组织InsR磷酸化水平方面这两组效果相当。模型组糖尿病大鼠肌肉组织IRS-1的酪氨酸磷酸化下降,与空白对照组比较有明显差异(P<0.01),阿司匹林组、降糖补肾高剂量组与空白对照组相比(P>0.05),说明阿司匹林组、降糖补肾高剂量组能显著改善IRS-1酪氨酸磷酸化水平,两组效果相当(P>0.05)。结论:降糖补肾方一定程度上能增加糖尿病大鼠肌肉组织InsR磷酸化、IRS-1酪氨酸磷酸化蛋白表达,这可能是降糖补肾方抑制炎症信号通路的传导而发挥其改善胰岛素抵抗,治疗糖尿病的机制之一。     

白背三七总黄酮对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的影响

目的观察白背三七总黄酮对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的影响。方法采用高糖高脂饲料喂养加腹腔注射链脲佐菌素(STZ)的方法建立2型糖尿病胰岛素抵抗模型。设空白组、模型组、阳性药二甲双胍组、白背三七总黄酮高剂量组、中剂量组及低剂量组,给药6周后测各组大鼠糖耐量(GTT),空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(GHb)和血清胰岛素(FINS)水平,计算胰岛素敏感指数(ISI)及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),RT-PCR法检测肝细胞膜胰岛素受体(InsR)mRNA表达。结果高剂量及中剂量白背三七总黄酮组大鼠的糖耐量得到显著改善(P0.01),FPG、GHb、FINS及HOMA-IR水平显著减少(P0.01),ISI水平显著上升(P0.01),肝细胞膜InsR mRNA的表达显著增强(P0.05或P0.01)。结论白背三七总黄酮能够改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗,其作用机制可能与上调InsR mRNA的表达有关。