化湿利水泄浊法对培养SHR血管平滑肌细胞游离钙的影响

目的：研究化湿利水泄浊法治疗高血压血管重构的机理.方法：组织贴块法行自发性高血压大鼠（SHR）主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）的分离培养,并以倒置显微镜、α-SM actin免疫组化法鉴定;采用MTT法观察各含药血清对VSMC增殖的抑制作用,荧光染料FURA-2/AM标记法观察含药血清对VSMC游离钙浓度（[Ca2＋]i）的影响,并与平肝潜阳法、西药依那普利比较.结果：与模型组比较各含药血清对VSMC增殖（除平肝潜阳组）、[Ca2＋]i均有明显的抑制作用（P＜0.05）,其中化湿组作用更为显著（P＜0.01）.结论：化湿利水泄浊法对培养SHR的VSMC的增殖及[Ca2＋]i有明显抑制作用,可能是该药改善高血压血管重构的作用环节之一.     

化湿利水泄浊法对培养血管平滑肌细胞游离钙及PKC活性的影响

目的:从分子水平研究化湿利水泄浊法治疗高血压血管重构的机理。方法:以组织贴块法行自发性高血压大鼠(SHR)主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)的分离培养,并以倒置显微镜、-αSM actin免疫组化法鉴定;分别采用MTT法、荧光染料FURA-2/AM标记法、酶底物反应法观察各含药血清对VSMC增殖、游离钙浓度([Ca2 ]i)、PKC酶活性的影响,并与平肝潜阳法、西药依那普利比较。结果:与模型组比较,各含药血清对VSMC增殖(除平肝组)、[Ca2 ]i、PKC酶活性均有明显的抑制作用,其中化湿组作用更为显著(P<0.01)。结论:化湿利水泄浊法对培养SHR的VSMC的增殖[、Ca2 ]i水平及PKC酶活性有明显抑制作用,其可能是该药改善高血压血管重构的作用环节之一。     

炙甘草汤含药血清对正常家兔离体主动脉环作用的研究

目的:观察炙甘草汤合药血清对正常家兔离体主动脉平滑肌环运动的影响,并初步探讨其作用机制.方法:运用Powerlab生物信号系统记录家兔离体主动脉环标本的活动,观察不同浓度组炙甘草汤含药血清对主动脉平滑肌收缩力的影响.结果:炙甘草汤含药血清对正常家兔离体主动脉平滑肌环有明显地兴奋作用,可增强其收缩力,且收缩强度与含药血清的浓度有相关性.炙甘草含药血清的这一作用可被异搏定(L型电压依从性Ca2+抖通道阻断剂)和酚妥拉明(非选择性α受体阻滞剂)阻断(异搏定组P<0.05;酚妥拉明组P<0.01).结论:炙甘草汤含药血清在体外可增强正常家兔主动脉平滑肌的收缩,该作用可能是通过L型钙通道和α受体发挥作用.     

用血清药理学方法观察糖足方对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:用血清药理学与现代分子生物学相结合的方法,观察糖足方对糖尿病大鼠模型血管平滑肌细胞增殖的影响。方法:选择纯种新西兰家兔,灌服不同剂量的糖足方中药制剂,制备含有不同药物浓度的兔血清;用组织块种植法体外培养糖尿病大鼠模型的髂动脉平滑肌细胞并用不同浓度含药血清进行干预;用同位素液闪测定氚标记胸腺嘧啶脱氧核糖核苷(3H-TDR)掺入量,检测含药血清对平滑肌细胞增殖的影响,并用透射电镜观察细胞超微结构的改变。结果:糖足方含药血清诸组呈浓度依赖性地表现为3H-TDR掺入量显著减少,3个含药血清组3H-TDR掺入量均明显低于正常血清对照组(P<0.01);糖足方可以改善糖尿病大鼠模型的血管平滑肌细胞超微结构改变,使VSMC仍保持收缩型的特征。结论:糖足方含药血清抑制体外培养糖尿病大鼠VSMC增殖和结构改变。     

针刺足阳明经穴对家兔胃窦平滑肌细胞内钙离子浓度的影响

目的:探讨针刺足阳明经穴对胃平滑肌细胞内第二信使Ca2 的影响.方法:将45只家兔随机分为生理盐水组、阿托品模型组、针刺足阳明经穴组、针刺足少阳经穴组、针刺足太阳经穴组,每组9只.分组处理后,取胃窦平滑肌,制成活的单个平滑肌细胞悬液,以荧光分光光度计测定细胞内钙离子浓度([Ca2 ]i).结果:针刺足阳明经穴组胃窦平滑肌细胞内[Ca2 ]i明显高于阿托品模型组(P＜0.01),而其他各组间细胞内[Ca2 ]i差异均无显著性意义(P＞0.05).结论:针刺足阳明经穴对胃运动的影响与胃平滑肌细胞内Ca2 释放有关.     

减味五生饮合二陈汤对谷氨酸损伤PC12细胞保护作用的研究

目的 探索减味五生饮合二陈汤的抗痫机理.方法 通过高脂饲料及大黄生地黄煎液预饲养,建立阴痫大鼠模型,减味五生饮合二陈汤灌胃治疗,使用含药血清（即阴痫中药血清组）处理谷氨酸（Glu）损伤后的PC12细胞,同时设立正常培养组、Glu模型组、普通大鼠血清组、阴痫血清组、阴痫中药反治血清组作为对照.MTT法检测细胞活力,流式细胞技术检测细胞内游离Ca2＋（[Ca2＋]i）浓度.结果 除阴痫中药血清组外,各组细胞活力均较正常培养组下降（P＜0.01）；除Glu模型组外,各组[Ca2＋]i浓度均较正常培养组下降,其中以阴痫中药血清组降幅最大（P＜0.01）.结论 减味五生饮合二陈汤含药血清能提高Glu损伤PC12细胞活力及降低[Ca2＋]i浓度,可能对损伤细胞具有保护作用.     

不同预处理的沥水调脂胶囊含药血清对弱氧化型低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞增殖的影响

目的:探讨用不同方法处理的含沥水调脂胶囊药物血清对弱氧化型低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞增殖的影响.方法:用3H-TdR掺入法观察不同浓度3种含药血清对2种浓度mox-LDL诱导VSMC DNA合成率变化的影响.结果:除蛋白含药血清可抑制mox-LDL诱导的VSMC DNA合成率增加,而未经处理和灭活含药血清无明显影响.结论:在血管平滑肌增殖研究中,使用除蛋白含药血清可能有利于排除对实验的干扰.     

五苓散含药血清对家兔离体输尿管平滑肌作用的实验研究

[目的]观察五苓散含药血清对正常家兔离体输尿管平滑肌活动的影响,并初步探讨其作用机制。[方法]应用Powerlab生物机能信号采集处理系统,观察不同浓度五苓散含药血清及不同受体阻滞剂对离体输尿管平滑肌的影响。[结果]空白血清组和不同浓度五苓散含药血清组均可增强正常家兔离体输尿管平滑肌的张力和活动力,与空白对照组相比,均有显著性差异(P<0.01)。阿托品组和酚妥拉明组可阻断中浓度血清对输尿管平滑肌的收缩作用(P<0.05)。[结论]五苓散含药血清在离体情况下对正常家兔输尿管平滑肌具有收缩作用,有利于尿液的输送。     

天钩降压胶囊对家兔主动脉血管条收缩反应的影响

目的:观察天钩降压胶囊对家兔主动脉条收缩反应的影响,探讨其降压作用机制.方法:将家兔离体主动脉条置于灌流肌槽中,记录天钩降压胶囊提取物对去甲肾上腺素(NE)、氯化钾(KCl)、氯化钙(CaCl2)诱导的主动脉条收缩作用的影响,以及对NE诱导的主动脉条细胞内钙及细胞外钙依赖性收缩反应的影响.结果:天钩降压胶囊1,3,5g·L-1剂量组均能使NE,CaCl2引起的主动脉条最大收缩反应降低(P＜0.01);对NE诱发主动脉条细胞内钙及细胞外钙依赖性收缩均有明显抑制(P＜0.01),对细胞外钙依赖性收缩的抑制作用更显著;对KCl引起的动脉条收缩反应无明显影响.结论:天钩降压胶囊可通过影响细胞内钙离子浓度促进血管平滑肌舒张从而发挥降压作用.其机制可能主要通过影响受体操纵的Ca2+通道(ROC),对电压依赖性Ca2+通道(PDC)作用不显著.对NE诱发主动脉条细胞外钙依赖性收缩的抑制作用优于对细胞内钙依赖性收缩的作用.     

补肾方含药血清对谷氨酸诱导凋亡的 PC12细胞胞浆内游离钙浓度及钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ磷酸化的影响

目的:运用中药血清药理学方法,研究补肾复方含药血清(BS)对谷氨酸(Glu)诱导凋亡的PC12细胞胞浆内游离钙离子浓度([Ca2 ]i)及钙信号转导通路下游的关键信号分子钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)磷酸化的影响.方法:采用谷氨酸诱导PC12细胞造成凋亡模型,以荧光探针Fluo-3/AM对活细胞染色,结合流式细胞技术观察BS对谷氨酸诱导凋亡的PC12细胞胞浆内[Ca2 ]i的影响;采用Western-blotting技术观察BS对谷氨酸诱导凋亡的PC12细胞CaMKⅡ磷酸化的影响.结果:20%浓度BS含药血清能够拮抗谷氨酸诱导凋亡的PC12细胞胞浆内钙离子浓度的升高,抑制CaMKⅡ的磷酸化水平增高.结论:补肾中药神经保护作用的机制可能与减轻钙超载,调控钙信号通路关键信号分子的磷酸化有关.     

滋补肝肾,益气活血方药对血管平滑肌细胞增殖及相关基因表 …

目的：采用血清药理学方法研究滋补肝肾、益气活血方药对内皮素（ＥＴ）诱导的自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）和ＷＫＹ大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖及相关基因表达的影响。方法：采用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入实验检测ＶＳＭＣ增殖状态,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交,反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测中药血甭中ＶＳＭＣ诱导一氧化氮合酶基因和ＥＴ－诱导和ｃ－ｊｕｎ、增殖细胞怕（ＰＣＮＡ）基因表达活性的影响。结果：中导型一氧     

雷公藤内酯醇对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　探讨雷公藤内酯醇对血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的影响及作用机制。方法　体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞 ,通过3 H -TdR掺入试验 ,观察雷公藤内酯醇对血清诱导的细胞增殖的影响 ;采用流式细胞技术 ,观察该药对细胞增殖周期的影响。结果　雷公藤内酯醇在 (0 .5～ 4 )× 10 -5g/L的浓度范围内 ,以一种剂量依赖性的方式抑制了血清诱导的VSMC增殖 ;雷公藤内酯醇可显著增加细胞周期中G0 /G1期细胞百分含量 ,减少S期细胞的百分含量 ,阻断细胞由G0 /G1期向DNA合成的S期转化 ,作用呈剂量依赖性。结论　雷公藤内酯醇可能通过影响细胞周期的转化而抑制VSMC的增殖。     

滋补肝肾、益气活血方药对血管平滑肌细胞增殖及相关基因表达的影响

目的:采用血清药理学方法研究滋补肝肾、益气活血方药对内皮素(ET)诱导的自发性高血压大鼠(SHR)和WKY大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及相关基因表达的影响。方法:采用3HTdR掺入实验检测VSMC增殖状态,应用Northern杂交、反转录聚合酶链反应(RTPCR)检测中药血清对VSMC诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因和ET诱导的cjun、增殖细胞核抗原(PCNA)基因表达活性的影响。结果:中药血清可明显抑制ET对VSMC的促丝裂作用(P<005);抑制原癌基因cjun和PCNA基因表达,促进iNOS转录。结论:滋补肝肾、益气活血方药通过调节iNOS和细胞增殖相关基因的表达活性进而阻止VSMC增殖。     

益气活血化瘀方药对血管胶原转换及相关基因表达的影响

目的：观察益气活血化瘀中药对大鼠血管细胞外基质(ECM)重塑的影响并探讨其分子机制。方法：采用^3H—TdR和^^3H—Pro掺入实验和血管壁羟脯氨酸含量测定检查血管平滑肌细胞(VSMC)增殖活性及胶原合成与降解程度;应用Northern印迹和Ⅳ型胶原酶(MMP-2)酶图分析检测MMP-2和骨桥蛋白表达的变化。结果：益气活血化瘀中药可显著抑制bFGF对VSMC的促胶原合成作用,降低血管内皮剥脱大鼠血管壁胶原转换速率,下调MMP-2和骨桥蛋白在体外培养的VSMC及血管壁中的表达水平,抑制VSMC增殖。中药血清去蛋白后对VSMC的影响不发生明显变化。结论：益气活血化瘀中药通过调节MMP-2和骨桥蛋白基因表达及降低胶原转换速率可抑制和(或)减缓ECM重塑。     

心脑宁诱导增生VSMC凋亡及对相关基因表达的影响

目的 :探讨活血化瘀中药血清体外诱导增生血管平滑肌细胞凋亡的作用及其分子机制。方法 :采用流式细胞仪分析 ,DNA电泳分析检测细胞凋亡 ;应用Northen印迹检测bcl- 2、c-myc基因表达活性。结果 :经中药血清处理的血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmuclecell,VSMC) ,可出现典型的凋亡特征 ,DNA电泳呈梯状图谱 ;流式细胞仪分析显示G0 /G1期细胞阻滞现象 ,亚二倍体凋亡细胞增多 ,出现典型的凋亡峰 ,细胞凋亡率与中药血清浓度具有量效关系。杂交结果提示 ,2 0 %中药血清可抑制抗凋亡基因bcl- 2的表达 ,上调促凋亡基因c -myc的mR NA水平。结论 :活血化瘀中药可通过影响凋亡相关基因bcl- 2、c -myc的表达活性而诱导VSMC凋亡。     

螺旋藻多糖和鼠尾藻多糖对四氧嘧啶致糖尿病大鼠血管的保护作用

目的研究螺旋藻粗提多糖和鼠尾藻粗提多糖联合使用对四氧嘧啶糖尿病大鼠血管的保护作用。方法2种多糖以1∶1混合,分别以123,368,1103mg·kg^-1灌胃给予四氧嘧啶致高血糖大鼠高、中、低各组。连续给药6周后,分别测定各组大鼠的血糖、TC,HDLC,TG,NO,ET。并取各鼠胸主动脉测定其对去甲肾上腺素(NE)和乙酰胆碱(ACh)舒缩反应的变化。结果混合多糖能降低ALX性糖尿病大鼠的血糖与血清TC,TG,NO,ET,升高血清HDLC。ALX模型大鼠主动脉对NE的收缩反应显著增强,对ACh舒张反应显著减弱。混合多糖能显著降低NE的收缩反应,改善糖尿病大鼠血管内皮依赖的舒缩反应功能。结论2种多糖联合使用能降低血糖并对血管有一定的保护作用。     

三七对高脂血清刺激的大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:考察三七对高脂血清刺激的大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖的影响,为评价三七的降血脂作用及其机制研究提供依据。方法:大鼠高脂血症模型给予不同剂量三七处理,2周后分离血清,分别以未处理组血清、各处理组血清刺激VSMC增殖,并采用MTT的测定A值,研究三七对高脂血清刺激的大鼠VSMC增殖的抑制作用。结果:与正常血清相比,高脂血清能显著促进VSMC的增殖(P<0.05),而含三七的高脂血清对VSMC增殖的促进作用与高脂血清相比其作用明显减弱(P<0.05)。结论:三七对高脂血清刺激的大鼠血管平滑肌细胞增殖有明显的抑制作用,该法可为降脂药物体外研究提供借鉴。     

益气健脾中药对血管平滑肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的：探讨益气健脾中药血清体外诱导血管平滑肌细胞凋亡的作用及其分子机制。方法：采用缺口末端标记（terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nicked labeling,TUNEL)分析、透射电镜、流式细胞仪分析、DNA电泳分析检测细胞凋亡；应用Northern印迹检测bcl-2、c-myc和p53基因表达活性。结果：经中药血清处理的血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMC)，可出现典型的凋亡特征，DNA电泳呈梯状图谱；流式细胞仪分析显示G0／G1期细胞阻滞现象，亚二倍体凋亡细胞增多，出现典型的凋亡峰，细胞凋亡率与中药血清浓度具有量效关系。杂交结果提示，30％中药血清可抑制抗凋亡基因bcl-2的表达，上调促凋亡基因c-myc和p3 mRNA水平。结论：益气健脾中药通过影响凋亡相关基因bcl-2、c-myc和p53的表达活性而诱导VSMC凋亡。     

三七总皂苷含药血清对溶血磷脂酸诱导血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制研究

目的:观察三七总皂苷含药血清对溶血磷脂酸(LPA)诱导的血管平滑肌细胞增殖效应的影响,分析该作用与细胞外信号调节激酶ERK信号通路的关系。方法:采用贴块法培养大鼠主动脉平滑肌细胞;以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察不同分组对细胞增殖的影响;采用流式细胞仪分析细胞周期和DNA含量。结果:空白血清+LPA组较空白血清组OD值升高(P<0.05),S期指数升高(P<0.01);三七总皂苷含药血清+LPA组与卡托普利含药血清+LPA组比较OD值降低(P<0.05),S期指数无差异;三七总皂苷含药血清+LPA+PD98059组较空白血清组OD值降低(P<0.05),S期指数无差异。结论:三七总皂苷对LPA诱导的VSMC增殖有拮抗作用,且作用强于卡托普利,其作用机制可能与抑制LPA对ERK信号通路的激活,从而抑制DNA合成,阻止细胞进入S期有关。     

丹参注射液抑制H2 O2诱导的平滑肌细胞增殖的作用机制

目的 :观察丹参对H2 O2 诱导的离体大鼠主动脉平滑肌细胞 (VSMC)、增殖细胞核抗原 (PCNA)、核转录因子 (NF κB)蛋白表达和细胞增殖周期时相的影响 ,以探讨其可能的作用机制。方法 :以H2 O2 作为外源性活性氧(ROS)刺激VSMC增殖 ,用免疫细胞化学法检测培养的VSMC中PCNA和NF κB的表达 ,同时用流式细胞术测定细胞周期。结果 :H2 O2 可使VSMC胞核内PCNA和NF κB蛋白表达呈强阳性 ,并明显增加S期细胞百分比 (与对照组相比 ,P <0 0 5或P <0 0 1) ,加入丹参干预后 ,PCNA和NF κB蛋白表达明显受抑制 ,G0 /G1期细胞百分比升高 ,S期细胞百分比下降。结论 :抑制PCNA和NF κB蛋白表达 ,阻止细胞进入有丝分裂期可能是丹参抑制H2 O2 诱导的VSMC增殖的重要机制之一。