大鼠癫癎持续状态后前凋亡分子GADD153在海马中的表达

癫癎持续状态(status epilepticus,SE)可造成海马等结构的神经元选择性凋亡[1]。生长停滞、DNA损害可诱导蛋白153(growth arrest and DNAdamage-inducible protein153,GADD153),是介导内质网应激相关性凋亡的重要分子之一[2],它是否参与了SE致细胞凋亡过程,笔者未见相关报道。本研究应用氯化锂-匹罗卡品大鼠SE模型动态观察了海马GADD153mRNA的表达变化。一、材料与方法1·材料:SD大鼠由湘雅医学院动物学部提供。Trizol试剂为美国MBI公司产品,逆转录试剂盒、Taq酶、dNTP为美国Fermentas公司产品,琼脂糖为美国Promega公司产品。…     

莲房原花青素对乙醇诱导肝细胞凋亡的拮抗机制

目的研究莲房原花青素（LSPC）对乙醇诱导的人胚肝细胞株L－02凋亡的拮抗作用机制。方法观察5、10、25mg／L的LSPC与200mmol／L乙醇共同作用于肝细胞L-0224h后，对细胞生存率、凋亡率的影响，对细胞凋亡通路的相关基因MAPK38、Caspase3、p53以及生长抑制DNA损伤诱导基因（growth arrest and DNA damage-inducible gene，GADD）GADD34、GADD45β、GADD153表达的影响。结果与乙醇组相比，5mg／L和10mg／L LSPC使细胞的生存率由73．14％上升到84．79％和90．52％。通过抑制细胞p53和Caspase3通路，并通过降低DNA损伤而降低GADD34、GADD45β、GADDl53的表达（P〈0．01），从而有效降低细胞的凋亡率。从11．54％分别降至8．21％和9．10％（P〈0．05）；抑制凋亡率的效果以LSPC5mg／L组最佳，10mg／L组效果次之，但高剂量组（25mg／L）对乙醇所致凋亡的拮抗作用不明显，对细胞生存率也无影响。乙醇和LSPC处理均不影响L～02细胞的MAPK38表达。结论适当浓度的莲房原花青素对乙醇诱导的肝细胞L-02的凋亡有拮抗作用。其抑制凋亡的作用主要是通过p53、Caspase3和GADD途径，而与MAPK途径无关。     

尼莫地平对惊厥持续状态幼年大鼠海马GRP78、CHOP表达及细胞凋亡的影响

目的观察尼莫地平对惊厥持续状态（statusconvulsion,SC）幼年大鼠海马葡萄糖调节蛋白78／免疫球蛋白重链结合蛋白Bip（GRP78／Bip）、前凋亡因子（CHOP／GADD153）表达及神经元凋亡的影响。方法雄性幼年SD大鼠117只,随机分为正常对照组（NC组）、惊厥持续状态组（SC组）、尼莫地平预处理组（NM组）三大组;分别予生理盐水、氯化锂-匹罗卡品、尼莫地平和氯化锂-匹罗卡品进行处理,各组又均随机分为3个亚组,分别于4、24、48h处死。采用氯化锂-匹罗卡品法制作SC模型;RT—PCR技术检测海马GRP78／Bip和CHOP／GADD153mRNA表达的动态变化。原位末端标记（TUNEL）检测海马CA1区中神经细胞的凋亡。结果SC组各时间点海马CA1区TUNEL阳性细胞表达均明显高于NC组（均P〈005或001oNM组各时间点TUNEL阳性细胞较SC组低,但高于NC组（P〈0．05或0．01）。与NC组相比,SC组各时间点海马GRP78／BipmRNA和CHoP／GADD153mRNA表达均升高。NM组GRP78／BipmRNA、CHOP／GADD153mRNA表达情况与SC组表达规律类似,但表达水平有差别。结论NM预处理可以影响CHOP／GADD153和GRP78／Bip的表达,缓解内质网应激,减轻惊厥后海马神经元细胞凋亡程度。     

马桑内酯致大鼠癫痫持续状态后海马神经细胞凋亡的观察

为观察马桑内酯诱导鼠癫痫持续状态（SE）时海马细胞中DNA损伤及凋亡现象，用流式细胞术检测雄性SD大鼠海马细胞中DNA状态，用免疫组织化学法显示海马谷氨酸阳性细胞，并用流式细胞术免疫荧光法测定海马细胞中BCI－2样蛋白含量。结果发现，致痫大鼠SE后海马神经细胞存在DNA断裂和凋亡现象；海马CA3区谷氨酸阳性细胞较对照组着色变淡，细胞之间界限模糊，细胞内部结构也不清晰；细胞内BCI－2样蛋白增加。由此可见，SE可诱导海马细胞DNA损伤甚至凋亡；SE时谷氨酸过量释放可造成突触后靶细胞损伤。BCI－2样蛋白增加可能是BCI－2…     

在胎儿生长受限患者胎盘组织中的表达及意义简

目的 探讨内质网应激相关蛋白CHOP/GADD153在胎儿生长受限（FGR）患者胎盘组织中的表达及意义.方法 选择2012年7月～2013年5月深圳市宝安区妇幼保健院FGR孕妇46例为FGR组,另选择孕龄正常孕妇34名为对照组.采用免疫组化法检测CHOP/GADD153在各组胎盘组织中的表达,并采用Tunnel法检测各组胎盘组织细胞凋亡率.结果 FGR组胎盘组织CHOP/GADD153免疫组化阳性表达率67.8％,明显高于对照组的14.7％,差异有高度统计学意义（x2=7.57,P＜0.01）;FGR组胎盘组织细胞凋亡率为（37.6±5.3）％,明显高于对照组的（12.3±1.5）％,差异有统计学意义（t=2.342,P＜0.05）.结论 内质网应激相关蛋白CHOP/GADD153介导的细胞凋亡与FGR的发生机制有关.     

脑出血大鼠血肿周围脑组织GRP78及GADD153动态表达及神经功能缺损

目的：研究脑出血大鼠血肿周围脑组织GRP78及GADD153动态表达及神经功能缺损情况。方法50只 SD 大鼠被随机分为2组，A 组右侧苍白球注入自体非肝素抗凝动脉血制成脑出血模型，B 组进行同样的手术，但是定位进针后不注射自体不凝血，造模成功后，两组在术后24h、48h、72h、5d、7d 通过 Garcia 评分法评估大鼠神经功能缺损，然后处死大鼠，用 Western blot 测定各时间点血肿周围 GRP78和 GADD153表达情况。结果①脑出血后出现神经功能缺损，48h 症状达高峰，随后逐渐恢复，第7天基本恢复正常，与假手术组相比无统计学差异（P ﹥0.05）。②脑出血后GRP78和GADD153表达增加，呈现先升高后降低的趋势，72小时达高峰，组间各时间点比较具有统计学差异（P ﹤0.05）。结论GRP78与GADD153在血肿周围脑组织中表达活跃，推测内质网应激可能通过介导细胞凋亡参与并加重了脑出血后神经损伤的病理生理过程。     

缺氧预处理对颅脑外伤大鼠海马GADD34表达及神经元细胞凋亡的影响

目的 探讨缺氧预处理对颅脑外伤大鼠海马生长停滞与DNA损害可诱导基因34(GADD34)表达及神经元细胞凋亡的影响.方法 208只SD雄性大鼠,随机分为假手术(Con,n=8)组、缺氧预处理(HPC,n=8)组、颅脑外伤(TBI,n=96)组、缺氧预处理颅脑外伤(HPCT,n=96)组;TBI和HPCT组再根据不同处死时间分为1 h、3 h、6 h、12 h、24 h、3 d、7 d、14 d八个亚组.大鼠颅脑外伤模型采用改良的自由落体装置制作,预先将大鼠在低压氧仓(-50.47 kPa)内处理3 h/d,连续3 d制作缺氧预处理模型.采用改良Sugrwara法对大鼠伤后行为学评估;RT-PCR和Western blot法检测海马组织中GADD34的表达变化,TUNEL染色法检测凋亡神经元细胞.结果 海马中GADD34 mRNA和蛋白伤后1 h即有表达,3~12 h呈上升趋势,伤后24 h达高峰,3~14 d呈下降趋势,TBI与Con组,HPCT与HPC组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);伤后24 h各指标进行比较,Con和HPC组比较,差异无统计学意义,其中HPCT组中伤后行为学评估得分及GADD34的表达较TBI组显著增高,细胞凋亡率显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 缺氧预处理可降低颅脑外伤大鼠海马行为学损伤,其机制可能是通过上调海马GADD34的表达,降低海马神经元细胞凋亡,从而发挥脑保护作用.     

海风藤酮对老龄大鼠局灶性脑缺血DNA损伤修复相关基因GADD45表达的影响

目的：观察老龄大鼠局灶性脑缺血后DNA损伤修复相关基因GADD45表达的规律，探讨海风藤酮对神经细胞凋亡及GADD45表达的影响。方法：采用26月龄Wistar大鼠，经光化学诱导局灶性脑缺血后应用海风藤酮进行干预，观察不同时间和空间状态下GADD45蛋白表达的改变．同时运用TUNEL染色观察神经细胞的凋亡现象。结果：缺血4h组，在缺血中心区可见少许GADD45反应阳性细胞，而缺血周边区GADD45反应阳性细胞大量表达，较对照组差异有统计学意义（P〈0．05）。缺血24h组，周边区GADD45表达较缺血4h有所降低，但仍高于假手术组（P〈0．05）。至缺血5d时，周边区GADD45表达较假手术组无明显差异。海风藤酮治疗组。缺血周边区TUNEL阳性细胞数较假手术组增多（P〈0．05）。但较对照组减少（P〈0．05），而GADD45表达阳性细胞数较对照组增多（P〈0．05），与假手术组比较增多伊〈0．011。结论：海风藤酮可有效保护缺血神经细胞，同时可以上调DNA修复基因GADD45的表达，减小DNA损伤的程度。     

阿托伐他汀干预对大鼠心肌缺血再灌注后GRP78和GADD153表达的影响

目的观察阿托伐他汀干预对大鼠心肌缺血再灌注损伤后内质网分子伴侣GRP78(endoplasmic reticulummolecular chaperon)和GADD153(growth arrest and DNA damage-inducible gene 153)表达变化的影响,探讨阿托伐他汀在心肌缺血再灌注损伤后抗凋亡的内质网应激机制。方法将54只SD大鼠随机分为阿托伐他汀干预组24只、模型对照组24只和假手术组6只,制作大鼠心肌再灌注损伤模型。阿托伐他汀干预组和模型对照组再灌注2 h6、h、24 h、48 h分别分为4个亚组,每个亚组动物6只。通过TUNEL检测心肌细胞凋亡,免疫组织化学检测GRP78和GADD153表达变化。结果假手术组大鼠偶可见凋亡细胞,对照组和干预组大鼠缺血再灌注2 h缺血周围区可见少量凋亡细胞,再灌注6 h凋亡细胞有所增多,再灌注24 h凋亡细胞数量达高峰,再灌注48 h凋亡细胞有所减少(P<0.05或0.01)。相同各时间点比较,干预组大鼠心肌细胞凋亡显著少于对照组(P<0.05或0.01)。假手术组大鼠心尖部相应区域心肌细胞未见明显GRP78及GADD153阳性表达。对照组和干预组大鼠再灌注2 h后心尖部GRP78表达开始增加,6 h达高峰,24 h时表达水平明显下降(P<0.01)。在相应时间点,干预组的GRP78蛋白表达水平显著高于对照组(P<0.01)。对照组和干预组大鼠缺血周围区GADD153从再灌注6 h开始在神经细胞内明显表达,并逐渐增强,于再灌注24~48 h达高峰(P<0.01)。在相应时间点,干预组的GADD153蛋白表达水平显著低于对照组(P<0.01)。结论干预心肌缺血再灌注后心肌细胞内质网伴侣GRP78和GADD153的表达可能是阿托伐他汀抑制心肌缺血再灌注损伤后抗凋亡的内质网应激机制之一。     

电针预处理抑制癫痫持续状态诱发的海马区神经元凋亡研究

目的：观察电针预处理对癫痫持续状态（status epilepticus,SE）诱发的海马区神经元凋亡的影响。方法：20只SD大鼠被随意分为4组：对照组、癫痫组、电针组、电针对照组,电针组和电针对照组给予电针预处理3周后,按经典方法建立锂-匹罗卡品大鼠癫痫模型,用TUNEL法及免疫荧光法观察海马区神经元的凋亡。结果：（1）与对照组比较,癫痫组和电针对照组海马CA1/CA3区TUNEL及Caspase-3阳性的神经元明显增多（P〈0.01,n=5）;（2）与癫痫组和电针对照组相比,电针预处理减少了海马CA1/CA3区TUNEL及Caspase-3阳性神经元的数量（P〈0.05,n=5）。结论：电针百会及大椎穴预处理,可以减低SE诱发的海马区神经元的凋亡。     

促红细胞生成素预处理对锂-匹罗卡品诱导的癫痫持续状态大鼠海马神经元凋亡的影响

目的:探讨重组人促红细胞生成素(rhEpo)预处理对癫痫持续状态(SE)大鼠海马神经元凋亡的影响。方法:应用免疫组化法观察Epo预处理后SE大鼠海马caspase-3的表达情况。结果:rhEpo处理组大鼠CA1/CA3区、齿状回(DG)的caspase-3免疫阳性细胞的表达分别比癫痫组减少18%和26%,二者有显著性差异(P<0.05)。结论:腹腔注射Epo可减少SE大鼠海马神经元caspase-3表达,表明Epo对SE大鼠海马可经抗凋亡通路发挥神经保护作用。     

细胞周期素依赖性激酶抑制剂olomoucine对大鼠癫痫持续状态后神经元凋亡的影响

目的探讨选择性细胞周期素依赖性激酶抑制剂olomoucine对癫痫持续状态（SE）后神经元凋亡的影响。方法建立氯化锂-匹罗卡品SE模型,随机分为生理盐水组、SE组和olomoucine干预组。应用免疫荧光化学法检测神经元核心抗原（NeuN）和周期素蛋白B1表达,通过TUNEL方法检测神经元凋亡情况;应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测皮质及海马白介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA表达情况。统计方法采用方差分析与t检验。结果（1）生理盐水组TUNEL示阳性神经元稀少,SE后显著增加（P〈0．05）,olomoucine干预组明显少于SE组（P〈0．05）,尤其齿状回门区与生理盐水组相比差异没有统计学意义（P〉0．05）;（2）与SE组比较,olomoucine干预组细胞周期素B1阳性神经元数目减少,差异具有统计学意义（P〈0．05）;（3）生理盐水组IL-1β、TNF-α mRNA表达量稀少,SE后显著增加（P〈0．05）,除皮质TNF-α mRNA外,olomoucine干预组较SE组均明显降低（P〈0．05）。结论olomoucine可通过调控细胞周期,抑制癫痫持续状态后神经元重新进入细胞周期,以及抑制活化的胶质细胞分泌炎性细胞因子,抑制癫痫持续状态后神经元凋亡而减轻脑损伤。     

小白菊内酯对人胃肠道间质瘤细胞增殖和凋亡的影响

[目的]探讨小白菊内酯(PTL)对人胃肠道间质瘤(GIST)细胞增殖和凋亡的影响.[方法]取细胞株进行体外培养,给予不同浓度(1,3,5μmol/L)PTL作用后利用MTT法测定GIST细胞增殖抑制率,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl2/Bax和内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、生长阻滞和DNA损伤诱导基因153(GADD153)的表达情况.[结果]PTL对GIST细胞具有增殖抑制作用,且随着药物浓度的增加抑制率明显升高(P<0.01).Western blot检测结果显示,PTL作用于GIST细胞48 h后随着药物浓度的增加,内质网应激相关蛋白GRP78和GADD153的表达水平逐渐升高,凋亡相关蛋白Bcl2/Bax比例逐渐降低,差异均具有统计学意义(P<0.01).[结论]PTL可抑制GIST细胞增殖并引起凋亡,机制认为可能与内质网应激途径介导有关系.     

益气除痰方调控内质网应激反应抑制H1650肺癌生长的研究

【目的】探讨益气除痰方对肺腺癌H1650细胞的抑瘤作用及机制。【方法】细胞实验采用流式细胞术测定益气除痰方含药血清对H1650细胞凋亡的影响,Western blot法检测益气除痰方含药血清对H1650细胞生长阻滞和DNA损害诱导基因153(CHOP/GADD153)、生长阻滞和DNA损害诱导基因34(GADD34)表达的影响。动物实验通过复制BALB/C裸鼠H1650肺癌种植瘤模型,随机分为模型组、中药低剂量组(剂量为9.1 g·kg-1·d-1)、中药高剂量组(剂量为27.3 g·kg-1·d-1),测定各组瘤体体积与质量,Western blot法检测各组肺癌组织CHOP/GADD153、GADD34蛋白的表达。【结果】体积分数15%、30%含药血清组H1650细胞的凋亡率分别为(8.14±1.10)%、(18.21±3.07)%(P0.05),30%含药血清组CHOP/GADD153、GADD34蛋白表达依次为空白对照组的1.46倍、1.53倍。中药低、高剂量组均可显著抑制BALB/C裸鼠H1650肺癌种植瘤瘤体生长(P0.05),抑瘤率分别为19.54%、47.03%。中药高、低剂量组CHOP/GADD153蛋白表达分别为模型组的1.59倍、1.44倍(P0.05),GADD34蛋白表达量分别为模型组的1.98倍、1.49倍(P0.05)。【结论】益气除痰方可抑制肺腺癌H1650种植瘤瘤体增长,促进H1650肺腺癌细胞凋亡,其机制可能与其能调控CHOP/GADD153、GADD34在内的内质网应激反应相关。     

匹罗卡品致大鼠癫痫持续状态后海马神经元凋亡的动态观察

目的 探讨癫痫持续状态(status epilepticus,SE)后海马细胞凋亡的发生及其与caspase-3表达的关系.方法 采用匹罗卡品诱发大鼠SE模型,用TUNEL染色和免疫组化技术检测海马神经元凋亡和caspase-3表达的动态变化.结果正常对照组大鼠海马未见TUNEL阳性细胞;SE后6 h,开始出现少量TUNEL阳性细胞;SE后72 h,达到高峰;SE后7 d,TUNEL阳性细胞开始减少.正常对照组大鼠海马可见少量caspase-3阳性表达;SE后6 h,大鼠海马caspase-3阳性表达增多,主要集中于CA1和CA3区;SE后48 h,caspase-3表达达到高峰;SE后72 h～7 d,caspase-3阳性染色细胞数开始减少;但仍显著多于对照组,差异有极显著意义(P＜0.01).结果 显示caspase-3表达分布与TUNEL染色基本一致,caspase-3表达高峰早于TUNEL所示凋亡细胞出现的高峰.结论 神经元凋亡参与了SE后海马神经元迟发性死亡过程并与caspase-3的激活有密切的关系.     

癫痫持续状态幼鼠海马神经元凋亡及NGF的干预作用研究

目的观察癫痫持续状态(SE)SD大鼠幼鼠的海马区神经细胞的凋亡与Caspase3和Caspase9的表达关系,研究鼠神经生长因子(NGF)对其干预作用。方法采用氯化锂-匹罗卡品方法制备幼鼠SE模型,用TUNNEL染色观察海马区神经细胞凋亡情况,用免疫组化法分别检测Caspase3和Caspase9的表达。结果正常组TUNNEL阳性细胞在各观察点仅少量表达,SE组在8 h明显增加,72 h达到高峰,NGF组表达基本同SE组,但对应时间点显著减少(除4 h外,P<0.05);Caspase3和Caspase9在正常组仅有少量表达,SE组在4 h仅少量增加,24 h达到高峰,NGF组Caspase3、Caspase9在SE后24 h及72 h较SE组显著减少(P<0.01)。结论 SE可致幼鼠海马区神经元凋亡,随时间增加神经元凋亡加重,Caspase3和Caspase9的激活加重神经细胞的凋亡;NGF可减轻神经细胞的凋亡。     

腹腔注射利血平对大鼠海马神经元凋亡的影响

目的：研究利血平导致的行为性抑郁大鼠海马神经细胞凋亡与神经元数量的改变。方法：腹腔注射利血平（4mg／kg）复制大鼠的行为性抑郁模型,用自发活动检测大鼠的行为性抑郁,以TUNEL法检测海马神经元凋亡,用尼氏染色观察海马神经元数量。结果：腹腔注射利血平48h后大鼠出现行为性抑郁。利血平可导致大鼠海马CA1区（P〈0．01）、CA3区（P〈0．05）和齿状回神经元（P〈0．001）数量减少,同时检测到此三个区域神经元凋亡的增加（CA1区P〈0．01,CA3区P〈0．001,齿状回区P〈0．001）。结论：利血平诱导的行为性抑郁大鼠可出现海马神经元数量减少,海马神经元凋亡增加是其原因之一。     

高温对体外培养大鼠海马锥体细胞凋亡的影响

目的：探讨高温下新生大鼠海马锥体神经元凋亡形态学及生物化学变化。方法：建立体外海马神经细胞培养模型，以37，40，42℃3种温度作为环境刺激因素，应用流式细胞仪，荧光染色，琼脂糖凝胶电泳和原位细胞凋亡检测试剂盒对其观察。结果：随作用温度升高细胞凋亡率及凋亡小体数增加，电泳呈现DNA Ladder表面，荧光显微镜观察能够看到凋亡体及其出芽现象，结论：高温能够诱导体外培养的大鼠海马锥体细胞发生凋亡，且不同温度诱导其凋亡的程度时程表现亦不同。     

杨梅素诱导卵巢癌SKOV3细胞内质网应激途径及DNA断裂介导的凋亡

目的:杨梅素具有抗肿瘤效果的具体机制还未被阐明。目前有研究表明,杨梅素通过线粒体凋亡途径诱导肿瘤细胞死亡。凋亡是一种细胞的程序性死亡过程,其经典诱导途径主要为:线粒体途径介导凋亡、内质网(ER)应激所介导的凋亡、以及由DNA双链断裂损引起的细胞凋亡。为此,我们想探究杨梅素在诱导SKOV3细胞凋亡中,是否也存在内质网(ER)应激和DNA双链断裂损伤途径所介导的凋亡。方法:采用人卵巢癌SKOV3细胞,给予杨梅素进行体外实验。MTT法检测细胞生存率。结果:杨梅素作用于SKOV3细胞后,能够抑制其增殖,且呈剂量依赖性。免疫荧光结合免疫印迹技术检测内质网应激标志蛋白GRP78和促凋亡转录因子CHOP(C/EBP同源蛋白,GADD153)的表达,发现杨梅素上调了GRP78和CHOP的表达。免疫荧光技术检测细胞内DNA断裂的标记性物γ-H2AX,发现γ-H2AX也明显上调。结论:杨梅素能诱导SKOV3内质网应激途径和DNA损伤所介导的凋亡。     

铅暴露对小鼠海马凋亡细胞、乙酰胆碱酯酶活性的影响

目的 研究铅暴露对小鼠学习记忆、海马凋亡细胞及乙酰胆碱酯酶（AchE）活性的影响。方法 健康昆明小鼠30只，随机分为对照组（7mg/kg，生理盐水）、醋酸铅暴露组（7mg/kg，醋酸铅），每组15只，连续腹腔注射8天。采用Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆功能，羟胺比色法测定AChE 活性、TUNEL染色检测海马凋亡细胞。结果 Morris水迷宫实验显示，醋酸铅暴露组小鼠第4/5天的逃避潜伏期时间（22.2?4.096s/19.73?2.88s）、穿越平台时间（15.54?3.72s）较对照组（13.64?2.925s/11.79?2.24s、3.24?2.24s）明显延长（P＜0.05）。且醋酸铅暴露组小鼠AChE表达（0.229?0.042 U/ug）、海马凋亡细胞数量较对照组（0.498?0.131 U/ug）显著增高（P＜0.05）。结论 铅暴露可明显损伤小鼠的学习记忆能力，而小鼠海马凋亡细胞的增加、中枢神经系统的Ach含量的降低可能是其学习记忆功能障碍的一个可能机制。