siRNA沉默Pim-3对T24细胞增殖和细胞周期的影响

目的:研究小干扰RNA(siRNA)沉默Pim-3对膀胱癌细胞增殖和周期的影响。方法:膀胱癌T24细胞分为3组:未处理组(不作任何处理)、对照siRNA组(采用50nmol/L对照siRNA转染)和Pim-3siRNA组(采用50nmol/LPim-3siRNA转染)。采用Westernblot检测转染48hPim-3、CyclinD1、Cdk2、P21蛋白表达的变化,CCK-8试剂检测转染24、48、72、96h细胞的增殖速率,流式细胞术检测转染48h细胞周期的变化。结果:3组膀胱癌T24细胞Pim-3、CyclinD1、Cdk2、P21蛋白表达比较,差异有统计学意义(F=32.506、49.573、23.079、44.758,P<0.05),与未处理组和对照siRNA组相比,Pim-3siRNA组Pim-3、CyclinD1和Cdk-2蛋白的表达下降,P21蛋白表达升高(P<0.05)。转染Pim-3siRNA48、72和96h后,膀胱癌T24细胞的增殖速率均明显受到抑制(F=50.067、132.504、277.389,P<0.001)。3组G0/G1、S和G2/M期膀胱癌T24细胞比例比较,差异有统计学意义(F=107.970、20.039和66.872,P<0.05),Pim-3siRNA组G0/G1期膀胱癌T24细胞比例高于未处理组和对照siRNA组(P<0.05),而S和G2/M期膀胱癌T24细胞比例低于未处理组和对照siRNA组(P<0.05)。结论:Pim-3有望成为治疗膀胱癌潜在的分子靶点。     

BIIB021对MDS细胞株Skm-1增殖的多靶点抑制作用研究

目的探讨热休克蛋白90（HSP-90）抑制剂BIIB021对骨髓增生异常综合征（MDS）细胞株Skm-1增殖的多靶点抑制作用。方法分别将0、100、200、400nmol/LBIIB021作用于4组Skm-1细胞（对照组、100nmol/L组、200nmol/L组、400nmol/L组）,培养24h后采用Westernblot法检测各组细胞雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、mTOR复合物1（mTORC1）、低氧诱导因子-1α（HIF-1α)蛋白表达水平。结果各组Skm-1细胞mTOR蛋白表达水平比较差异无统计学意义（P＞0.05）。各组Skm-1细胞mTORC1、HIF-1α蛋白表达水平比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）;组间两两比较差异亦均有统计学意义（均P＜0.05）,即100nmol/L组、200nmol/L组、400nmol/L组Skm-1细胞mTORC1、HIF-1α蛋白表达水平均低于对照组,且400nmol/L组表达水平最低。结论BIIB021通过抑制mTORC1和HIF-1α蛋白的表达抑制Skm-1细胞增殖。     

细胞外信号调节蛋白激酶对哮喘大鼠气道平滑肌细胞周期的影响

目的探讨细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)通道调控支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)增殖中的细胞周期机制。方法30只Wistar大鼠随机分为正常组和哮喘组,哮喘组采用卵清蛋白致敏和激发建立哮喘模型。取两组大鼠叶支气管ASMC进行原代培养,采用ERK激动剂表皮生长因子(EGF)和抑制剂PD98059干预哮喘组ASMC。用免疫组织化学法检测ASMC细胞周期蛋白CyclinD1和CDK2的表达;Western免疫印迹检测ERK1/2和磷酸化ERK1/2蛋白的表达,计算ERK活化率。结果哮喘组大鼠ASMC中CyclinD1、CDK2的表达和ERK活化率[76.15±4.88、92.30±7.95和(82.37±5.78)%]均较正常组[54.17±6.11、61.04±4.09和(49.91±3.26)%]显著升高(P均0.05)。经EGF处理后上述指标进一步升高[119.28±8.14、134.77±9.26和(91.57±5.32)%,P均0.05],经PD98059处理后显著降低[58.78±4.60、69.15±5.83和(54.01±4.12)%,P均0.05]。结论哮喘大鼠ASMC增殖活性增强。ERK1/2可通过诱导ASMC中CyclinD1和CDK2蛋白高表达,使细胞从G1期向S期发展,促进细胞增殖。     

紫杉醇对人胆管癌QBC939细胞wnt/β-catenin信号通路基因和蛋白表达的影响

目的 探讨紫杉醇对人胆管癌QBC939细胞wnt/β-catenin信号通路中基因和蛋白表达的影响.方法常规培养QBC939细胞,Westernblot检测0.1、1、10 nmol/L紫杉醇组和对照组细胞中β-catenin蛋白的表达量,Q-PCR检测10 nmol/L紫杉醇组和对照组细胞中P53和C-jun基因表达,干预时间均为24 h.结果 与对照组比较,紫杉醇各组β-catenin蛋白含量均有下降,当紫杉醇浓度达到10 nmol/L时,β-catenin蛋白表达明显降低(P<0.05).与对照组比较,经10 nmol/L的紫杉醇干预24 h后,P53基因表达上升(P<0.05),而C-jun基因表达下降(P<0.05).结论 紫杉醇通过抑制QBC939细胞内β-catenin蛋白表达,阻断Wnt信号通路,诱导抑癌基因P53的表达,降低癌基因C-jun的表达.     

间歇性缺氧通过内质网途径诱导滋养层细胞凋亡

目的 分析间歇性缺氧对人绒毛膜滋养层细胞(HTR8/SVneo)内质网应激及凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法 选用人绒毛膜滋养层细胞(HTR8/SVneo),间歇性缺氧-24 h组和间歇性缺氧-48 h组分别进行24 h和48 h的间歇性缺氧处理,空白对照组始终置于常氧中培养。观察间歇性缺氧对细胞凋亡与增殖,以及内质网应激相关分子、细胞凋亡相关蛋白、细胞周期相关蛋白和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响。结果 与空白对照组比较,间歇性缺氧组CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、激活转录因子6(ATF6)、X-盒结合蛋白1(XBP-1)mRNA和蛋白表达水平显著增加,早期凋亡率显著增加,Caspase-3蛋白、多聚ADP-核糖聚合酶(PARP)mRNA和蛋白表达水平显著增加,HIF-1αmRNA和蛋白表达水平显著增加,并随缺氧时间延长而增加(P<0.05);与空白对照组比较,间歇性缺氧可显著抑制HTR8/SVneo细胞增殖,并随缺氧时间延长而细胞活力降低(P<0.05);与空白对照组比较,间歇性缺氧组细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、CyclinD3 mRNA和蛋白表达水平显著降低,并随缺氧时间延长而降低(P<0.05)。结论 间歇性缺氧可能通过调控HIF-1α,激活内质网应激途径,进而抑制滋养层细胞增殖,诱导其凋亡。     

淫羊藿通过miR-19a-3p对高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤的影响及机制研究

目的探讨淫羊藿（Epimedium herb,EH）对高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤的影响及其分子机制。方法以胰岛β细胞RINm5F为研究对象,建立高糖高脂损伤模型,分为对照组（5 mmol/L葡萄糖）、高糖高脂组[25 mmol/L葡萄糖+0.25 mmol/L棕榈树酸（PA）]、低剂量EH组（25 mmol/L葡萄糖+0.25 mmol/L PA+10 μmol/L EH）和高剂量EH组（25 mmol/L葡萄糖+0.25 mmol/L PA+100 μmol/L EH）,EH处理48 h后,分别采用噻唑蓝（MTT）比色法和流式细胞术检测细胞增殖与凋亡,蛋白质印迹法（Western blotting）检测细胞中细胞周期蛋白D1（CyclinD1）、P21、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达水平,实时定量PCR（qPCR）检测RINm5F细胞中miR-19a-3p表达。在高糖高脂损伤的RINm5F细胞转染anti-miR-19a-3p或在高剂量EH组细胞转染miR-19a-3p,观察细胞的增殖和凋亡情况。结果与对照组比较,高糖高脂组第48 h、72 h细胞增殖活性和CyclinD1、Bcl-2蛋白水平明显下降（P < 0.05）,细胞凋亡率、miR-19a-3p表达量、P21和Bax蛋白表达量提高（P < 0.05）。不同剂量的EH干预可以明显提高高糖高脂环境下的细胞增殖能力和CyclinD1、Bcl-2蛋白水平（P < 0.01）,减少细胞凋亡率和P21、Bax蛋白表达量（P < 0.01）,与抑制miR-19a-3p表达作用结果差异无统计学意义（P>0.05）。此外,过表达miR-19a-3p能逆转EH对高糖高脂刺激的RINm5F细胞增殖的促进作用和对细胞凋亡的抑制作用（P < 0.01）。结论EH通过miR-19a-3p保护高糖高脂诱导的胰岛β细胞损伤,提高细胞增殖活性,抑制细胞凋亡。     

Leptin对缺氧状态下大鼠视网膜祖细胞体外增殖和分化的影响

目的 探讨Leptin对体外培养的缺氧状态下视网膜祖细胞（RPCs）增殖、分化的影响及细胞中PTEN蛋白表达的变化。方法 原代培养大鼠RPCs,不同浓度Leptin作用RPCs细胞,分为：常氧培养组（Control组）、缺氧培养（Hypoxia）+0、0.3、1.0、3.0、10、30 nmol/L Leptin组,分别培养至12、24、48 h,CCK-8法检测细胞增殖活性。将原代培养的RPCs细胞分为：Control组、Hypoxia组、Hypoxia+Leptin组,培养48 h后,转换为分化培养基继续培养6 d,采用免疫荧光染色法对GFAP阳性细胞比例和β-tubulin III阳性细胞比例进行统计分析。Control组、Hypoxia组、Hypoxia+Leptin组细胞培养48 h后,采用Western blot法检测各组RPCs中PTEN蛋白表达水平。结果 原代培养的P0代RPCs为圆形悬浮生长,培养2 d后细胞可聚集成神经球。低浓度Leptin（0.3、1.0、3.0 nmol/L）作用RPCs 48 h,细胞增殖活性较Control组及Hypoxia组增强,RPCs细胞增殖活性随Leptin浓度增高呈递增趋势,其中,3.0 nmol/L Leptin作用48 h细胞增殖活性最强（P<0.05）;高浓度Leptin（10 nmol/L,30 nmol/L）组细胞增殖活性较对照组减弱（P<0.05）。细胞培养48 h,与Control组及Hypoxia组相比,Hypoxia+Leptin组β-tubulin III阳性细胞比例和GFAP阳性细胞比例均无显著性差异（P>0.05）,而PTEN蛋白表达量较对照组显著下调（P<0.05）。结论 低浓度Leptin可促进缺氧状态下大鼠RPCs细胞增殖,抑制细胞中PTEN蛋白表达,对细胞分化无明显影响。     

雌二醇对EOMA细胞增殖、ERα、ERβ及VEGF表达的影响

目的 探讨17β-雌二醇(E2)对鼠源性血管瘤血管内皮细胞(EOMA细胞)生长,雌激素α、β受体亚型(ERα、β)及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 用1、10、100 nmol/L 浓度的E2分别作用于EOMA细胞,同时设对照组(不加E2).四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同时间点其对EOMA细胞生长的影响;Western blot检测EOMA细胞的ERα、β表达强度;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中VEGF的分泌水平.结果 1 nmol/L E2组在36 h时高于对照组(P<0.05);10 nmol/L E2组、100 nmol/L E2组各个时间点OD值均明显高于对照组(P<0.05),36 h时OD值最高(P<0.01).E2作用下10 nmol/L E2组ERα和ERβ水平及100.0 nmol/L E2组ERα水平较对照组均明显增高(P<0.05).24、48 h时,各浓度E2组与对照组的VEGF水平比较均差异有统计学意义(P<0.05),48 h时100 nmol/L E2组和10 nmol/L E2组VEGF水平均高于1 nmol/L E2组(P<0.05).结论 E2可促进EOMA细胞增殖,可能主要通过ERα、VEGF表达水平上调来实现.     

雷公藤甲素通过调控糖酵解途径抑制人肝癌SMMC-7721细胞的研究

目的 观察中药雷公藤甲素（TPL)对肝癌细胞增殖、调亡、代谢的影响,探讨其可能的作用机制。 方法 对细胞进行培养与转染,药物处理细胞24 h、48 h、72 h后,CCK-8法检测细胞存活率,确定药物对细胞的 半抑制浓度（IC50)。野生型细胞分为对照组、给药组。转染细胞分为si - NC组、si - NC + TPL组、si - HIF + TPL组。流式细胞术检测细胞调亡率,氟代脱氧葡萄糖（18F -FDG)摄取实验检测TPL对肝癌细胞糖代谢水平的影响。 实时荧光定量PCR检测细胞糖酵解途径关键酶乏氧诱导因子_ lα ( HIF-lα)、己糖激酶2( HK2)、葡萄糖转运蛋 白1 (GLUT1)、丙酮酸激酶(PKM2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)的mRNA水平。蛋白免疫印迹法检测HIF- lα、HK2、 PKM2、LDHA蛋白的表达水平。结果 （1 )当TPL浓度达到40 nmol/L以上时,细胞的存活率显著降低（P 0.05) 。 (2)与对照组相比,给药组（40 nmol/L）细胞凋亡率明显增加（P0.05)。（3)给药组（40 nmol/L)细胞 对18F - FDG的相对摄取率,与对照组比较,明显降低（P 0. 05 )。(4)相较于对照组,给药组HIF - 1 α、HK2、 GLUT1、PKM2、LDHA等糖酵解途径关键基因mRNA表达水平降低（P 0. 01 )。(5)TPL干预细胞后,HIF-lα, HK2、PKM2、LDHA等蛋白表达水平降低（P0.05)。敲减HIF - lα基因后,影响其下游蛋白的表达。结论 中药TPL可抑制肝癌细胞增殖、侵袭,影响其代谢,诱导其凋亡,其机制可能与HIF-lα介导的糖酵解途径有关。     

姜黄素对大鼠肾间质成纤维细胞中小分子RNA-21及纤维化相关因子表达的影响

目的探讨姜黄素对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠肾间质成纤维细胞(NRK49F)中小分子RNA-21(miR-21)及纤维化相关因子表达的影响。方法将NRK49F细胞分为正常组、模型组、姜黄素组。模型组以TGF-β1(10μg/L)诱导NRK49F细胞活化,姜黄素组以高、中、低浓度(20、10、5μmol/L)干预24 h和72 h。免疫荧光方法及高内涵成像分析设备检测并分析NRK49F细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的变化;RT-PCR方法检测NRK49F细胞中miR-21及纤维化相关因子COL1A1、COL3A1、α-SMA、Smad3 mRNA表达的变化。结果 TGF-β1作用于NRK49F细胞72 h后,能明显上调细胞中α-SMA蛋白的表达(P0.01);与模型组相比,姜黄素各组的α-SMA蛋白表达明显下调(P0.01、P0.01、P0.05)。TGF-β1作用于NRK49F细胞24 h后,能明显上调细胞中miR-21、COL1A1、COL3A1、α-SMA、Smad3 mRNA的表达(P0.01);与模型组相比,姜黄素高、中浓度组可明显抑制miR-21、COL1A1、COL3A1、α-SMA、Smad3 mRNA的表达(P0.01或P0.05);姜黄素低浓度组可明显抑制COL1A1、COL3A1、α-SMA mRNA的表达(P0.01),对miR-21、smad3 mRNA的表达有下调的趋势。结论姜黄素能够有效抑制TGF-β1诱导的NRK49F细胞中纤维化相关因子的基因及蛋白表达,其作用与下调miR-21的表达相关。     

骨膜素通过p38 MAPK信号通路抑制缺氧诱导的人牙周膜成纤 维细胞的氧化应激和细胞凋亡

目的 探讨骨膜素对缺氧诱导的人牙周膜成纤维细胞氧化应激与细胞凋亡的影响及其分子机制。方法 体外培养人牙周膜成纤维细胞,厌氧产气袋内缺氧处理48 h。采用不同浓度（25、50、100 ng/mL）的骨膜素处理细胞,随机分为空白组、缺氧组、骨膜素低浓度组、骨膜素中浓度组、骨膜素高浓度组。甲基噻唑基四唑（MTT）检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）测定炎症因子白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量;应用荧光酶标仪检测细胞活性氧（ROS）水平;ELISA检测细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活性;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测HIF-1α、P21、CyclinD1、Bax、Cleaved caspase-3、Bcl-2、P38MAPK、p-p38 MAPK蛋白表达量。结果 缺氧处理后可明显降低细胞存活率（P<0.05）,提高P21、Bax、Cleaved caspase-3蛋白水平（P<0.05）,促进细胞凋亡（P<0.05）,降低CyclinD1、Bcl-2蛋白水平（P<0.05）;与缺氧组相比,骨膜素不同浓度组细胞存活率升高（P<0.05）,细胞凋亡率降低（P<0.05）,P21、Bax、Cleaved caspase-3蛋白水平降低（P<0.05）,CyclinD1、Bcl-2蛋白水平升高（P<0.05）。与空白组相比,缺氧组HIF-1α、p-p38 MAPK蛋白表达水平升高（P<0.05）,IL-1β、IL-6、TNF-α、ROS水平升高（P<0.05）,SOD活性降低（P<0.05）;与缺氧组相比,骨膜素不同浓度组HIF-1α、p-p38 MAPK蛋白水平降低（P<0.05）,IL-1β、IL-6、TNF-α、ROS水平降低（P<0.05）,SOD活性升高（P<0.05）。结论 骨膜素可促进缺氧诱导的人牙周膜成纤维细胞增殖,抑制细胞凋亡,增强细胞抗氧化能力,减轻炎症损伤,其可能通过抑制p38 MAPK信号通路的活化而发挥作用。     

天麻素调节cAMP/PKA/GRK2信号通路对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响

摘要:目的 探讨天麻素(Gastrodin)对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法 不同浓度的天麻素(2.5 ~80.0μmol/L)分别处理 U87细胞24、48、72h,检测细胞增殖确定最佳给药浓度;U87细胞分为对照组(Control组)、天 麻素低、中、高浓度组(Gastrodin-L、Gastrodin-M、Gastrodin-H 组,天麻素工作浓度分别为5、10、20μmol/L)、天麻素+ cAMP/PKA 信号通路抑制剂组(Gastrodin+H-89组,20μmol/L 的天麻素与10μmol/L 的 H-89共同处理细胞),分别 检测 U87细胞增殖、凋亡及cAMP及 CyclinD1、p21、Bax、Bcl-2、Caspase-3、p-PKA、PKA、p-GRK2、GRK2的蛋白表达水 平。结果 2.5~80.0μmol/L的天麻素均可抑制 U87细胞增殖,选择浓度为5、10、20μmol/L的天麻素进行后续实验。 与 Control组比较,Gastrodin-L、Gastrodin-M、Gastrodin-H 组 G0/G1期细胞比例、细胞凋亡率、cAMP、p21、Bax、Caspase3、p-PKA、p-GRK2蛋白表达水平均显著升高(均P<0.05),S期与 G2/M 期细胞比例、集落形成数、CyclinD1、Bcl-2蛋 白表达水平显著降低(均P<0.05),且呈药物浓度依赖性;与 Gastrodin-H 组比较,Gastrodin+H-89组 G0/G1期细胞比 例、细胞凋亡率、cAMP、p21、Bax、Caspase-3、p-PKA、p-GRK2蛋白表达水平显著降低(均 P<0.05),S期与 G2/M 期细 胞比例、集落形成数、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达水平显著升高(均P<0.05)。结论 天麻素可能通过激活cAMP/PKA/ GRK2通路抑制脑胶质瘤细胞增殖,并诱导其凋亡。     

miR-1247-3p激活TGF-β1信号介导肝星状细胞与肝纤维化的关系

目的 探讨miR-1247-3p对肝纤维化的影响,分析其对肝星状细胞增殖与活化的作用及分子机制。方法 四氯化碳（CCl₄）制备肝纤维化大鼠模型,并分离大鼠原代肝星状细胞。慢病毒转染处理细胞,分为空白对照组、miR-1247-3p mimic组和miR-1247-3p inhibitor组。检测miR-1247-3p、转化生长因子-β1（TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）水平及细胞增殖能力,并采用荧光素酶报告实验验证miR-1247-3p靶基因。结果 与对照组比较,CCl₄腹腔注射后大鼠肝组织出现纤维化增生,结构破坏,炎症细胞浸润,且随时间延长肝纤维化程度加重（P<0.05）;与对照组比较,模型组大鼠肝组织miR-1247-3p和TGF-β1表达水平均显著增加（P<0.05）;与空白对照组比较,miR-1247-3p mimic组肝星状细胞增殖能力和肝星状细胞α-SMA蛋白表达水平显著增加,miR-1247-3p inhibitor组显著降低（P<0.05）;与空白对照组比较,miR-1247-3p mimic组...     

黄连素抑制人喉癌 Hep-2细胞增殖及机制研究

目的：探讨黄连素对人喉癌 Hep-2细胞增殖的抑制作用及其可能机制。方法体外培养 Hep-2细胞,使用不同浓度黄连素诱导不同时间,应用 MTT 法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术测定细胞周期及凋亡;实时荧光定量 PCR 和蛋白质免疫印迹（Western blot）法分别检测细胞周期蛋白 D（CyclinD）、B 细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关 X 蛋白（Bax）基因和蛋白表达水平。结果与0μmol/ L 黄连素对照组比较,2.5、5.0、10.0、20.0μmol/ L 黄连素作用 Hep-2细胞24、48 h,可明显抑制细胞增殖,且呈浓度时间依赖性（P ＜0.05）;2.5、5.0、10.0μmol/ L 黄连素作用 Hep-2细胞48 h,细胞早期凋亡率明显升高,呈浓度依赖性（P ＜0.05）;G0/ G1期细胞增多（P ＜0.05）,诱导细胞阻滞于 G0/ G1期;10μmol/ L 黄连素作用 Hep-2细胞48 h,Bax 基因和蛋白表达水平明显升高（P ＜0.05）,CyclinD、Bcl-2基因和蛋白表达水平明显下降（P ＜0.05）。结论黄连素能抑制喉癌细胞增殖,引起 G0/ G1期阻滞,并诱导其凋亡,其作用机制可能与 Bax 基因表达上调及 CyclinD、Bcl-2基因表达下调有关。     

siRNA 抑制 HM GA1基因表达对 LX-2细胞生物学功能的影响

目的：探讨高迁移率蛋白 A1（HMGA1）siRNA 对人肝星状细胞 HMGA1、α-SMA 、E-钙黏素（E-cadherin）基因的表达调控作用及增殖活性的影响,并探讨其可能的机制。方法将有效的人工合成的 HMGA1 siRNA 转染人肝星状细胞 LX-2（LX-2）后沉默 HMGA1基因的表达。通过实时荧光定量 PCR（RT-PCR）及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测 LX-2细胞中HMGA1、α-SMA 和 E-cadherin 的 mRNA 及蛋白表达水平。采用四甲基偶氮唑盐（M TT ）法检测 LX-2细胞增殖水平。结果以HMGA1-siRNA 序列1组沉默效果最好。 TGF-β1刺激组与 TGF-β1＋ NC-siRNA 组之间细胞增殖水平、HMGA1、α-SMA 、E-cad-herin 的基因及蛋白表达水平差异无统计学意义（P ＞0．05）,细胞增殖水平、HMGA1、α-SMA 表达均明显高于正常对照组（P ＜0．05）,E-cadherin 表达显著低于正常对照组（P＜0．05）;TGF-β1＋ HMGA1 siRNA 组细胞增殖水平及 HMGA1、α-SMA 的 mR-NA 及蛋白表达水平较另外3组均显著下降（P＜0．05）,E-cadherin 表达水平显著增高（P＜0．05）。结论靶向 HMGA1的 siRNA能够沉默 LX-2中 HMGA1的表达;抑制 TGF-β1诱导的 LX-2增殖水平,提示 HMGA1参与了 TGF-β1诱导的肝星状细胞活化。     

芹菜素通过AMPK/mTOR通路调控肺癌A549细胞自噬

目的 探讨芹菜素（APG）对肺癌A549细胞增殖及自噬的影响及其与AMPK/mTOR通路的关系。方法 体外培养肺癌A549细胞,采用CCK-8法检测不同浓度芹菜素处理A549细胞不同时间后对细胞增殖的影响。后续实验分为空白对照组(0 μmol/L APG),低、中、高浓度实验组和抑制剂组5组,采用MDC染色法检测各组对细胞自噬的影响,免疫印迹法检测自噬相关蛋白以及AMPK/mTOR通路相关蛋白表达情况。结果 芹菜素可显著抑制A549细胞增殖,且呈浓度依赖性（P<0.05）;20、40、80 μmol/L芹菜素组随作用时间延长,对A549细胞的增殖抑制率逐渐增加,呈时间依赖关系（P<0.05）。与空白对照组比较,实验组A549细胞中含高亮点状荧光的自噬小泡数量及IOD值逐渐增加（P<0.05）,芹菜素可浓度依赖性上调LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p-AMPKα蛋白表达水平及p-AMPKα/AMPKα比值（P<0.05）,下调p-mTOR、p62蛋白表达水平及p-mTOR/mTOR比值（P<0.05）。与高浓度实验组比较,抑制剂组细胞中含高亮点状荧光的自噬小泡减少,IOD值下降,LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p-AMPKα蛋白表达水平及p-AMPKα/AMPKα比值降低,而P62、p-mTOR蛋白表达水平及p-mTOR/mTOR比值升高（P<0.05）。结论 芹菜素能抑制肺癌A549细胞增殖,诱导其自噬,作用机制可能与AMPK/mTOR通路有关     

皮质醇对激素依赖型乳腺癌细胞MCF-7增殖迁移影响及机制

目的:研究皮质醇对激素依赖型乳腺癌细胞MCF-7增殖、迁移的影响及其可能的作用机制。方法:不同浓度皮质醇处理激素依赖型人乳腺癌细胞株MCF-7。采用MTS法检测不同浓度皮质醇对细胞增殖的影响;细胞划痕试验检测不同浓度皮质醇对细胞迁移的影响;蛋白质印迹法检测细胞增殖相关蛋白磷酸化 mTOR (p-mTOR)以及迁移相关蛋白MMP-9、MMP-2蛋白表达变化情况。结果:MCF-7细胞在皮质醇剂量为10 nmol/L时增殖显著（P<0.05）、迁移增加（P<0.01）。并且在皮质醇剂量10 nmol/L时,MCF-7细胞表达细胞增殖相关蛋白p-mTOR（P<0.05）,及细胞迁移相关蛋白MMP-9（P<0.05）、MMP-2（P<0.01）明显升高,差异具有统计学意义。结论:小剂量（10 nmol/L）皮质醇可以导致激素依赖型乳腺癌细胞增殖、迁移增加,其机制可能是通过激活经典mTOR通路诱导细胞增殖及上调MMP-9、MMP-9蛋白表达实现。     

消痔灵体外诱导肝癌细胞HepG_2凋亡及其对P_(53)、nm_(23)-H_1表达影响的研究

目的:观察消痔灵注射液(XZL)体外诱导肝癌细胞HepG2凋亡情况,并初步探讨作用机制。方法:用不同浓度(0.5、1、2、4、8、16g/L)XZL体外培养HepG2细胞。采用MTT法检测HepG2细胞抑制率,Western blotting检测相关凋亡蛋白P53和nm23-H1表达变化。结果:(1)XZL能明显抑制HepG2细胞生长,且呈时间和浓度依赖性,(2)XZL组与空白对照组相比,P53蛋白表达增强,差异性显著(P<0.05);XZL组与5-Fu组相比,P53蛋白表达无显著性差异(P>0.05);与共同作用组相比,P53蛋白表达减弱,差异性显著(P<0.05);但nm23-H1蛋白表达均无显著性差异(P>0.05)。结论:XZL可抑制HepG2细胞增殖,并通过增强P53蛋白表达诱导HepG2细胞凋亡。     

LncRNA MEG3表达量与脂多糖诱导支气管上皮细胞增殖及凋亡和炎症因子分泌的关系

【摘要】 目的 探讨长链非编码RNA母系表达基因3（LncRNA MEG3）对脂多糖（LPS）诱导的支气管上皮细胞增殖、凋亡及炎症因子分泌的影响。 方法 体外培养支气管上皮细胞16HBE,LPS处理16HBE细胞建立炎症损伤模型。采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测白细胞介素-8（IL-8）与白细胞介素-1β（IL-1β）的含量;甲基噻唑基四唑（MTT）检测细胞增殖率;流式细胞术检测细胞凋亡率;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测LPS诱导的16HBE细胞中MEG3的表达水平。取对数生长期支气管上皮细胞,用50 μg/mL的LPS处理细胞24 h作为LPS组,正常培养的细胞作为NC组,将Si-MEG3、Si-con、pcDNA-MEG3、pcDNA转染主支气管上皮细胞48 h,随后使用50 μg/mL的LPS处理细胞24 h,分别命名为LPS+si-MEG3组、LPS+si-con组、LPS+pcDNA-MEG3组、LPS+pcDNA组。通过MTT与流式细胞术检测细胞增殖能力及凋亡能力的改变;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved caspase-3）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9（Cleaved caspase-9）、细胞周期蛋白1（CyclinD1）的蛋白表达量。 结果 与NC组相比,LPS组IL-8、IL-1β水平、细胞凋亡率及Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9蛋白的表达水平均显著升高（P＜0.05）,细胞增殖率及CyclinD1蛋白、MEG3的表达水平均显著降低（P＜0.05）;干扰MEG3表达可促进LPS诱导的支气管上皮细胞凋亡及抑制细胞增殖,与LPS+si-con组相比,LPS+si-MEG3组支气管上皮细胞中MEG3的表达水平、细胞增殖率、CyclinD1蛋白相对表达量显著降低（P＜0.05）,IL-8、IL-1β水平、细胞凋亡率、Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9蛋白相对表达量显著升高（P＜0.05）;与LPS+pcDNA组相比,LPS+pcDNA-MEG3组支气管上皮细胞中IL-8、IL-1β水平、细胞凋亡率及Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9蛋白的相对表达水平均显著降低（P＜0.05）,MEG3的表达水平、细胞增殖率及CyclinD1的表达水平均显著升高（均P＜0.05）。 结论 LncRNA MEG3过表达能够促进LPS诱导的支气管上皮细胞增殖,抑制细胞凋亡,减少炎症因子分泌。     

ERK活化对哮喘大鼠气道重塑及CyclinD1表达的影响

目的探讨细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)对哮喘大鼠气道重塑及CyclinD1表达的作用。方法原代培养大鼠的平滑肌细胞(ASMCs),给予ERK激动剂表皮生长因子EGF和抑制剂PD98059干预ASMCs生长,依处理方式不同分为5组:(1)正常对照组(2)哮喘对照组;(3)E组:EGF20 ng/mL;(4)P+E组,PD98059 10μmol/L1 h后添加EGF 20 ng/mL;(5)PD组,PD98059 10μmol/L。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖能力,流式细胞术(FCM)测定细胞周期和cyclinD1的蛋白含量,RT-PCR方法检测cyclinD1mRNA表达水平。结果(1)与哮喘对照组比较,E组ASMCs S+G2/M期比例、吸光度A值、cyclinD1蛋白阳性表达率和cyclinD1 mRNA的A值均显著升高,PD组均显著降低(P0.05)。P+E组与哮喘对照在此4项指标上比较无明显差异。(2)哮喘(对照组、E组、PD组和P+E组)组与正常对照组,其S+G2/M期比例、吸光度A值、cyclinD1蛋白和cyclinD1 mRNA的表达均显著增高(P0.05)。结论ERK活性促进哮喘大鼠ASMCs的增殖,增加cyclinD1在哮喘平滑肌细胞中的表达,导致气道重塑的形成,提示ERK可能对CyclinD1的表达具有调节作用。