ERK反义寡核苷酸对支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

许多研究提示，气道平滑肌细胞（AMSC）增殖与凋亡的异常在支气管哮喘（以下简称哮喘）气道高反应性、气道重建、不可逆气流阻塞等方面起重要作用，但有关其细胞内信号调控机制目前尚未阐明。细胞外信号调节激酶（extracellular-signal regulated kinase, ERK）通道是一种重要的细胞内信号转导通道，在AMSC中，     

支气管哮喘患者血浆热应激蛋白60、70抗体表达及与发病的关系

当机体接触高温或其他应激因素如感染、缺氧、生理紧张等时可大量合成热应激蛋白（Hsps），而其中的一些应激因素常见于支气管哮喘（简称哮喘）的发生中。哮喘的发生与外界环境刺激和遗传因素有关，外界环境的刺激可诱导支气管上皮细胞Hsps（主要是Hsp60和Hsp70）的表达，而当机体由于病毒或支原体等感染导致免疫异常时，机体可产生针对Hsps的抗体。但Hsps抗体在哮喘患中是否存在，以及它们与哮喘发病的关系，目前国内、外尚少见报道。我们的研究拟探讨Hsp60、70抗体在哮喘发病中的作用。     

蛋白激酶Cα对哮喘患者白细胞介素-2、-4、-5mRNA表达的调节及银杏叶提取物对其的影响

早在1000多年前，我国民间就使用银杏治疗支气管哮喘（以下简称哮喘）和支气管炎。本研究通过观察银杏叶提取物的有效成分之一——BN52021作用于体外培养的哮喘患者外周血T淋巴细胞后，蛋白激酶Cα（PKCα）及IL-2mRNA、IL-4mRNA、IL-5mRNA的变化，探讨银杏叶制剂治疗哮喘的部分作用机制。     

白细胞介素-13在慢性阻塞性肺疾病患者肺组织中的表达

IL-13是一种具有多种生物学活性的Th2型细胞因子，在调节炎症和免疫反应中发挥重要作用。目前研究发现，IL-13转基因大鼠肺组织可出现慢性阻塞性肺疾病（COPD）样病理改变”由此说明，IL-13可能参与了COPD的发生、发展。本研究旨在探讨COPD患者肺组织中IL-13表达及其与COPD的关系。     

体外转染JWA核酶反转录病毒载体对人肺动脉平滑肌细胞表型及迁移的影响

目的：探讨JWA核酶基因转染对肺动脉平滑肌细胞表型及迁移的影响。 方法：实验于2004-08／2005—04在华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸病研究室完成。质粒pLXSN为第三军医大学附属新桥医院呼吸研究所惠赠。人肺动脉平滑肌细胞（C-12521）及平滑肌细胞生长培养基2（C-22162）购自德国Promo Cell公司。设计合成JWA核酶基因并构建于反转录病毒载体pLXSN上，转染体外培养的人肺动脉平滑肌细胞，经鉴定证实转染成功后，应用半定量反转录聚合酶链反应法测定细胞内JWA mRNA的表达，改良Boyden小室法测定细胞迁移情况，半定量反转录聚合酶链反应法及免疫细胞化学法检测α—SM actin表达量反映细胞表型变化。 结果：转染JWA核酶基因的细胞（P—JWARZ）JWA mRNA表达量较空载体转染细胞（P-pLXSN）及未转染细胞（肺动脉平滑肌细胞）显著降低，细胞迁移率显著增加，α—SM actin表达量显著减少（JWA mRNA：0.5812&;#177;0．0455，0．7823&;#177;0．0292，0．8169&;#177;0．0289；细胞迁移：29．6&;#177;4．72，7．2&;#177;1．44，6．6&;#177;1．92：α—SM actin mRNA：0．4418&;#177;0．0202，0．4767&;#177;0．0209，0．2661&;#177;0．0119；α—SM actin蛋白：0．2211&;#177;0．0093，0．3251&;#177;0．0085，0．3200&;#177;0．0095，P〈0．01）。 结论：JWA核酶基因转染可抑制人肺动脉平滑肌细胞内JWA基因的表达，使细胞分化为合成表型，促进细胞迁移。     

COPD患者PBMC中IL-8 mRNA表达及内源性NO的作用和机制

【目的】探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者外周血单个核细胞(PBMC)白细胞介素8(IL8)mRNA表达的变化以及内源性一氧化氮(NO)对其影响及机制。【方法】采集20例COPD急性发作期患者(A组)和15例正常对照者(B组)的静脉血分离PBMC,并各分组培养:A1组和B1组为空白对照,A2组和B2组加入左旋精氨酸(LArg),A3组和B3组加入N6(1亚氨乙基)赖氨酸(LNIL),A4组和B4组加入LArg+核因子κB(NFκB)抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC),应用原位杂交法检测IL8mRNA,用免疫组织化学方法检测NFκB的表达。【结果】①A1组的PBMC中IL8mRNA阳性细胞率及NFκB活化细胞百分率分别为22.58±2.86%和15.87±2.55%,均显著高于B1组(P<0.01)。②A2组的PBMC中IL8mRNA阳性细胞率升高,与A1组比较差异有显著性(P<0.05);A3组的PBMC中IL8mRNA阳性细胞率及NFκB活化细胞百分率下降,与A1组比较差异也有显著性(P<0.01)。A4组的PBMC中IL8mRNA阳性细胞率及NFκB活化细胞百分率下降,与A1组比较差异有显著性(P<0.01)。③COPD患者PBMCIL8mRNA表达阳性率、NFκB活化细胞百分率与FEV1/FVC%呈显著负相关(P<0.01)。COPD患者PBMCIL8mRNA表达阳性率与NFκB活化细胞百分率呈显著正相关(P<0.01)。【结论】COPD患者PBMC中IL8mRNA表达较正常增高,提示IL8可能参与了COPD的发病过程;内源性NO可调控IL8mRNA的表达,可能是通过NFκB来传导。     

活性氧和ERK1/2信号通路在缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡中的作用

目的：研究缺氧状态下大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）内活性氧（ROS）水平的变化,ROS对细胞外信号调节激酶（ERK）1/2蛋白表达的影响以及ROS和ERK1/2在PASMCs增殖和凋亡关系失衡中的作用。方法: 原代培养正常大鼠PASMCs,选用第2-3代用于实验。分别在常氧及缺氧条件下用ROS清除剂tiron、ERK1/2抑制剂PD98059进行分组干预。通过NBT还原法和DCFH-DA荧光探针检测细胞内ROS,免疫荧光法检测磷酸化- ERK1/2（p-ERK1/2）蛋白表达,MTT比色法和增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白的免疫细胞化学法检测细胞增殖,原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡。结果: (1)缺氧组细胞内ROS水平明显高于对照组（P<0.01）;(2)缺氧组的增殖活性与对照组相比显著增高（P<0.01）,而凋亡率显著降低（P<0.01）,使用tiron后能明显抑制缺氧诱导的细胞增殖（P<0.05）,而凋亡率却明显升高（P<0.01）;(3)缺氧组p-ERK1/2蛋白表达显著高于对照组（P<0.01）,使用tiron后缺氧诱导的p-ERK1/2表达被显著抑制（P<0.01）;(4)使用PD98059也能明显抑制缺氧诱导的细胞增殖（P<0.05）,而凋亡率也明显升高（P<0.01）,缺氧下同时使用PD98059和tiron与单用tiron相比,对细胞增殖和凋亡的影响均无明显差异（P>0.05）。结论: 缺氧时PASMCs中生成增多的ROS通过活化下游ERK1/2信号通路,促进PASMCs增殖并抑制凋亡,从而在缺氧性肺动脉重建过程中发挥重要作用。     

蛋白激酶C-核因子κB信号转导通道对人肺动脉平滑肌细胞增殖和血管内皮生长因子表达的影响

目的　探讨蛋白激酶C(PKC) 核因子κB(NF κB)信号转导通道对人肺动脉平滑肌细胞 (HPASMCs)增殖和血管内皮生长因子 (VEGF)表达的影响。方法　体外培养HPASMCs ,用工具药PKC激活剂 12 肉豆蔻酰 13 乙酸佛波酯 (PMA)和NF κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷 (PDTC) ,将HPASMCs分为对照组、PMA组和PMA PDTC组在常氧和缺氧条件下培养。逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测VEGFmRNA表达 ,Westernblot法检测VEGF和NF κB的抑制蛋白IκBα蛋白表达 ,免疫细胞化学法检测NF κBp6 5的表达和定位 ,流式细胞术检测细胞周期时相分布。结果　( 1)NF κBp6 5胞核染色阳性率、IκBα蛋白相对表达量及细胞周期G2 /M % :常氧或缺氧PMA组与相应对照组、PMA PDTC组比较差异均有显著性 (P均 <0 0 5 ) ;缺氧PMA组与常氧PMA组比较差异有显著性 (P <0 0 5 )。 ( 2 )VEGFmRNA和蛋白表达 :常氧对照组、PMA组、PMA PDTC组组间差异均无显著性 (P均 >0 0 5 ) ;缺氧PMA组均高于缺氧对照组、缺氧PMA PDTC组、常氧PMA组 ,差异均有显著性 (P均 <0 0 5 )。 ( 3)缺氧PMA组NF κB胞核染色阳性率、VEGF蛋白相对表达量、G2 /M %之间均呈正相关 (r =0 5 87～ 0 710 ,P均 <0 0 5 )。结论　常氧培养HPASMCs存在PKC NF κB信号转导通道 ;     

白细胞介素-18和腺苷脱氨酶联合检测鉴别结核性与恶性胸腔积液的价值

结核性胸腔积液和恶性胸腔积液的细胞学检查一般都以淋巴细胞占优势，有时两者难以鉴别，因此，寻找敏感性和特异性更高的辅助诊断方法鉴别结核性和恶性胸腔积液有着重要意义。白细胞介素-18（IL-18）是一种Th1细胞因子，可以促进Th1免疫应答，在分枝杆菌感染宿主时起着保护宿主的作用。我们收集了2005年11月至2006年10月在华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸内科住院的结核性和恶性胸腔积液患者共86例，检测其胸腔积液中IL-18的浓度和腺苷脱氨酶活性，并比较IL-18和腺苷脱氨酶在鉴别诊断结核性和恶性胸腔积液中的价值。     

Primary Culture of Alveolar Epithelial Type Ⅱ Cells and Its Bionomic Study

To establish a better method of primary culture for alveolar epithelial type Ⅱ cells (AEC Ⅱ) and to study its bionomics, alveolar epithelial type Ⅱ cells were isolated by digestion with tryp- sin and collagenase, which were then purified by plated into culture flask coated with rat immu- noglobulin G. The purified AEC Ⅱ were identified by alkaline phosphatase staining, electron mi- croscopy, immunocytochemical staining of pulmonary surfactant protein A (SPA). The SPA expres- sion and transfection characteristics were compared with those of A549 cell line. The results showed that AEC Ⅱ could be isolated by digestion with trysin and collagenase and purified by adhesive pu- rification by using IgG, with a yield of about 2–3×107, and a purity of about 75%–84 %. Cells could be quickly identified with AKP staining. AECⅡ were different from A549 cell line in terms of SPA expression and transfection characteristics. It is concluded that adhesive purification with IgG can improve the purity of AECⅡ, and AKP staining is simple in cell identification. AECⅡ can not be completely replaced by A549 cells in some studies because the differences between them, such as SPA expression.