癌相关成纤维细胞来源的外泌体在促骨肉瘤侵袭转移中作用的实验研究

目的 探讨癌相关成纤维细胞(CAFs)来源的外泌体对骨肉瘤侵袭及转移的影响。方法 利用人源骨肉瘤细胞株Saos-2采用差速贴壁法分离、培养CAFs,显微镜下观察CAFs的形态,免疫组织化学观察α-SMA蛋白表达对CAFs进行鉴定。培养CAFs,采用ExoQuick-TC外泌体提取试剂盒分离外泌体。通过透射电镜观察外泌体形态,Western blot检测外泌体特异性标记蛋白β-actin、CD63表达情况对外泌体进行鉴定。培养人源骨肉瘤细胞株Saos-2,分为外泌体组和对照组,采用细胞划痕及Transwell小室实验观察外泌体对Saos-2细胞迁移和侵袭能力的影响。选取一级5周龄BALB/c-nu雌性裸鼠12只,按编号随机分为外泌体组和对照组,每组6只。两组均采用皮下移植成瘤法在裸鼠右侧背部皮下接种人骨肉瘤Saos-2细胞与Matrigel基质胶混合悬液,建立裸鼠骨肉瘤肿瘤模型。造模结束后即刻进行尾静脉注射:外泌体组每只裸鼠通过尾静脉注射浓度为0.1 μg/μL的外泌体悬液30 μL,对照组裸鼠尾静脉注射等量生理盐水,两组均1次/周,共注射6次。第1次注射后每日观察裸鼠成瘤情况,从裸鼠右侧背部皮下可触及肿块开始,测量两组裸鼠肿块的最长径和最长径的最大垂直短径,计算肿瘤体积,此后每周测量1次,共测量6次。完成最后一次测量后腹腔麻醉断椎法处死裸鼠,完整取出肿块并称重。取裸鼠肺组织进行切片HE染色观察两组裸鼠肺转移情况。结果 显微镜下观察CAFs呈长梭形,排列杂乱,无方向性;细胞免疫组织化学染色结果显示:CAFs的α-SMA蛋白表达阳性,提示CAFs提取成功。电镜观察外泌体呈70～100 nm圆形或椭圆形膜性囊泡状结构;Western blot结果显示外泌体中CD63蛋白呈高表达,β-actin蛋白表达较弱,提示成功分离CAFs来源外泌体。细胞划痕实验、侵袭实验结果显示:外泌体组细胞迁移距离、迁移率、侵袭细胞数目分别为(0.19±0.02)mm、0.81%±0.11%、(53.67±5.69) 个,均高于对照组的(0.81±0.11)mm、0.32%±0.11%、(31.67±8.08) 个,差异均有统计学意义(t=6.209、6.209、3.856, P值均＜0.01)。外泌体组和对照组12只裸鼠采用皮下移植成瘤法接种人骨肉瘤Saos-2细胞与Matrigel基质胶混合悬液,均造模成功,实验过程中无一例动物死亡。两组裸鼠均于第1次注射肿瘤细胞后1周触及肿块,肿瘤体积均随着时间的延长明显增大,差异均有统计学意义(F=49.428、8.477, P值均＜0.05)。两组间比较,第1、2次测量肿瘤体积,差异均无统计学意义(P值均＞0.05);而第3～6次测量肿瘤体积,外泌体组均大于对照组,差异均有统计学意义(t=4.697、4.825、3.516、2.706, P值均＜0.05)。测量6次后处死裸鼠,剥除肿瘤,外泌体组肿瘤质量(1.62±0.29)g大于对照组(1.00±0.43)g,差异有统计学意义(t=2.929, P＜0.05)。肺组织切片HE染色结果显示,两组裸鼠均发生肺转移,外泌体组肺组织转移灶数量为6.63(3,17)个,多于对照组的1.17(0,3)个,差异有统计学意义(W=36.000, P＜0.01)。结论 CAFs来源的外泌体可增加骨肉瘤细胞株Saos-2的迁移及侵袭能力,同时促进骨肉瘤的生长和肺转移的形成。     

补肾活血方对去卵巢大鼠子宫ER及Cyclin B表达影响的实验研究

目的观察补肾活血方对去卵巢大鼠子宫的雌激素受体及周期蛋白(Cyclin)B表达的影响,探讨其治疗围绝经期综合征的作用机制。方法选择SD雌性大鼠54只,随机分为假手术组、模型组、雌二醇组、补肾活血方组、联合用药组、补肾活血方+假手术组,每组9只。以双侧卵巢切除法建立大鼠围绝经期模型。各组灌胃给药40 d后取血清和子宫称重;酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清中雌二醇(E2)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)浓度;HE染色观察子宫组织病理改变并测定子宫内膜厚度;免疫组化法观察雌激素受体(ER)α、ERβ在子宫组织中分布与表达情况;蛋白质印迹法(Western blot)法检测子宫组织中周期蛋白(Cyclin B)蛋白表达。结果补肾活血方治疗40 d后,与模型组比较,血清LH、FSH明显降低(P0.05或P0.01),血清E2水平升高(P0.05);同时,子宫脏器指数、子宫内膜厚度、子宫组织中ERα、ERβ和Cyclin B蛋白表达均明显升高(P0.05),与雌激素组呈现相似的作用,但作用强度均低于雌激素;补肾活血方+假手术组大鼠各项指标与假手术组比较无明显差异。结论补肾活血方具有雌激素样作用,但作用强度弱于雌激素,对正常大鼠子宫组织无显著影响。     

顺铂耐药对食管癌细胞增殖、凋亡、迁移和血管生成的影响

目的:探讨顺铂(cis-dichlorodiamine platinum,cDDP)耐药对人食管癌KYSE150细胞增殖、凋亡、迁移和血管生成的影响。方法:首先采用顺铂浓度递增的方法,历经10个月左右的时间成功建立了人食管癌顺铂耐药细胞系KYSE150/cDDP。采用MTT法测定其药物敏感性,并通过形态学观察、MTT实验、集落形成实验、DAPI染色、划痕愈合实验及小管形成实验比较顺铂耐药后食管癌细胞生物学行为的改变。结果:KYSE150细胞和KYSE150/cDDP细胞在形态上无明显差异;MTT实验结果显示,与KYSE150细胞相比,KYSE150/cDDP细胞对cDDP的耐药指数为6.35,细胞活力下降;集落形成实验结果显示,KYSE150/cDDP细胞的集落形成率为(15.00±3.05)%,而KYSE150细胞的集落形成率为(86.70±6.57)%;DAPI染色显示KYSE150/cDDP细胞的凋亡率为(0.63±0.09)%,而KYSE150细胞的凋亡率为(8.46±1.33)%;划痕愈合实验显示,与KYSE150细胞相比,KYSE150/cDDP细胞的划痕愈合能力更强,其迁移率较KYSE150细胞的迁移率高;小管形成实验显示,KYSE150/cDDP细胞的血管生成数为76.20±3.18,而KYSE150细胞的血管生成数为50.60±1.33;Western blot实验结果显示KYSE150/cDDP细胞中MMP-2和VEGFR2的表达均高于KYSE150细胞。结论:KYSE150/cDDP细胞具有耐药表型,耐药后生长缓慢,凋亡能力降低,迁移和血管生成能力增加,这可能是临床化疗失败的重要原因。     

脐带脱垂原因的临床分析及护理

<正>脐带脱垂是指胎膜已破或未破,脐带位于胎先露的前方,经宫颈进入阴道内,甚至经阴道脱出外阴部者。是分娩的紧急并发症之一,对胎儿生命威胁最大,如处理不当可导致胎儿迅速死亡。现对我院1999年1月~2008年12月共收治脐带脱垂54例,其中从外院急诊转入29例,院内发生25例。现将有关临床分析及护理过程介绍如下。1临床资料1.1脐带脱垂与各种因素的关系①产次。54例中经产妇33例(其中3产以上者8例),占61.11%;初产妇21例,占38.89%。②     

非嵌合型克氏综合征显微睾丸取精术后临床妊娠1例报告及文献复习

目的 探讨非嵌合型克氏综合征患者生育遗传学意义后代的可行性.方法 1例就诊于华中科技大学同济医学院附属同济医院的男性患者,年龄29岁,多次精液分析提示无精子,查体双侧睾丸体积小,质硬,约2 ml.性激素水平:卵泡刺激素37.34 IU/L,黄体生成素15.69 IU/L,明显升高;睾酮2.13 ng/ml,稍微偏低.查染色体核型为47,XXY,Y染色体微缺失正常,确诊为非嵌合型克氏综合征.行显微睾丸取精术,同时配合女方取卵后行卵细胞胞质内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection, ICSI),随访1个月,观察患者术后并发症及其配偶妊娠情况.结果 显微睾丸取精术中找到少量活动精子,次日女方取卵后行ICSI,3 d后移植2枚新鲜胚胎.术后患者未出现阴囊血肿、感染等并发症,术后随访1个月患者睾酮水平较术前偏低,但性功能未受到影响.女方移植后2周查血HCG,为801 mIU/ml;移植后4周超声提示宫内早孕,单胎,胚胎存活.结论 非嵌合型克氏综合征患者可通过显微睾丸取精术获取精子,同时配合ICSI技术,生育自己遗传学意义的后代.     

PCI术治疗冠心病患者围术期的护理

目的探讨经皮冠状动脉介入术治疗冠心病患者的围术期观察及护理要点。方法对172例手术患者术前进行有针对性的心理护理，术后严密监测生命体征，并加强拔管前后的护理。结果172例患者术后冠状动脉灌注均得到有效改善，其中5例拔管时出现迷走神经反射，4例出现皮下血肿，10例出现排尿困难，经积极的治疗和护理均痊愈。结论合理有效的围术期护理是经皮冠状动脉介入术治疗冠心病患者成功的一个重要环节。     

苦参历代应用刍议

结合历代有关文献,总结苦参在临床上的功效应用主要为主心腹结气、癥瘕积聚、痈肿,养肝胆气、安五藏、定志益精,治热毒风、皮肌烦燥生疮、赤癞眉脱,疗肠风下血、便血、热痢等4个方面,以期更好地发挥其效用。     

活性维生素D与普通维生素D干预骨质疏松患者骨折发生率比较:Meta分析

目的通过Meta分析探讨活性维生素D及普通维生素D降低骨质疏松患者骨折风险的差异。方法计算机系统检索PubMed、Web of Science、The Cochrane Library、Embase、中国知识资源总库(CNKI)、中国生物医学文献数据库(CBM)、万方数字化期刊全文数据库(Wan Fang Data),并通过谷歌进行补充检索。检索时间为建库至2018年4月。由2位研究者独立进行文献筛选、基本信息提取及偏倚风险评估,然后进行面对面核对,如遇分歧则通过讨论或咨询第三方解决。使用Cochrane系统评价手册推荐的质量评价工具ROB(Risk of Bias)对纳入文献进行质量评价,采用GRADE工具对结局指标的证据质量进行评价。采用Rev Man5. 3对纳入研究偏倚风险进行呈现,采用Stata12. 0软件进行Meta分析、敏感性分析及发表偏倚分析。结果最终纳入10篇研究文献,共837例患者。Meta分析结果显示活性维生素D组椎骨新发骨折人数比率低于普通维生素D组,但差异无统计学意义[风险比(relative risk,RR)=0. 674,95%CI (0. 452,1. 005),P=0. 053,I2=39. 3%];活性维生素D组非椎骨骨折发生率低于普通维生素D组,但差异无统计学意义[RR=0. 744,95%CI (0. 512,1. 081),P=0. 121,I2=24. 8%]。活性维生素D组腰椎骨密度改变百分率高于普通维生素D组,差异有统计学意义[均数差(standardized mean difference,SMD)=0. 349,95%CI (0. 007,0. 691),P=0. 046,I2=73. 8%];活性维生素D组股骨颈骨密度改变百分率高于普通维生素D组,但差异无统计学意义[SMD=0. 217,95%CI (-0. 112,0. 545),P=0. 196,I2=52. 9%];活性维生素D组全髋骨密度改变百分率高于普通维生素D组,但差异无统计学意义[SMD=0. 302,95%CI (-0. 215,0. 819),P=0. 252,I2=71. 7%]。两组各项不良反应发生率对比差异无统计学意义(均P 0. 05)。结论现有证据表明,活性维生素D与普通维生素D相比,预防骨质疏松患者骨折发生风险没有明显优势。     

氟化钠抗凝管离心前、后放置时间对血糖测定值的影响

目的探讨氟化钠抗凝管离心前、后放置时间对血浆葡萄糖(简称血糖)测定值的影响。方法将同一份血液标本置于5支肝素钠-氟化钠管和5支酸化氟化钠管中,血液标本随机分为两组,一组分别于即刻、0.5、1、2、4 h离心后再检测血糖浓度;另一组立即离心,分别于即刻及放置0.5、1、2、4 h后检测血糖浓度。结果肝素钠-氟化钠管和酸化氟化钠管离心前放置0.5、1、2、4 h的血糖测定值与即刻测定值比较差异均有统计学意义(P0.05),且2种抗凝管之间差异亦有统计学意义(P0.05);肝素钠-氟化钠管和酸化氟化钠管及时离心后放置0.5、1、2、4 h的血糖测定值与即刻测定值比较差异均无统计学意义(P0.05),且2种抗凝管之间差异亦无统计学意义(P0.05)。离心前、后肝素钠-氟化钠管和酸化氟化钠管血浆葡萄糖测定值的差值差异有统计学意义(P0.05)。结论氟化钠抗凝管如及时离心,血浆葡萄糖浓度可稳定4 h。若不能及时离心,肝素钠-氟化钠管血糖浓度将在4 h内降低,而酸化氟化钠管能稳定4 h。因此,为了立即抑制糖酵解,血液需要酸化。