长链非编码RNA-UFC1通过GSK-3β/β-catenin信号轴促进肝癌细胞的侵袭和转移

目的探讨长链非编码RNA-UFC1在肝癌侵袭和转移中的作用及机制。方法应用lincRNA-UFC1慢病毒载体转染人肝 癌细胞株Huh7 构建lincRNA-UFC1 过表达组和对照组;应用lincRNA-UFC1 干扰载体转染人肝癌细胞株BEL-7402 构建 lincRNA-UFC1 干扰组和干扰对照组（scramble）,通过实时定量PCR实验分析两种肝癌细胞中lincRNA-UFC1 的表达水平。 Transwell 及划痕实验检测lincRNA-UFC1 过表达组及干扰组相比对照组侵袭迁移能力的变化。Western blot 检测lincRNAUFC1 过表达组及干扰组相比对照组中GSK-3β/β-catenin蛋白的表达变化。利用GSK-3β/β-Catenin信号通路抑制剂XAV939阻 断后,观察Transwell 及划痕实验中lincRNA-UFC1 过表达对肝癌细胞侵袭迁移能力的影响。结果在肝细胞癌中,过表达 lincRNA-UFC1 相较于对照组,肝癌细胞的侵袭转移能力明显增加（P<0.001）,而沉默lincRNA-UFC1 的表达相较于scramble 组,肝癌细胞侵袭转移能力明显减弱（P<0.001）。Western blot结果显示,过表达lincRNA-UFC1与对照组相比较,侵袭转移相关 蛋白β-catenin和p-GSK-3β表达明显上调（P<0.001）,而lincRNA-UFC1沉默表达后,结果相反。利用GSK-3β/β-Catenin信号通 路抑制剂XAV939 处理肝癌细胞可以逆转lincRNA-UFC1 促进肝癌细胞侵袭转移的功能（P<0.001）。结论在肝细胞癌中 lincRNA-UFC1通过上调磷酸化GSK-3β及β-catenin促进肝癌细胞侵袭转移。     

鳖甲煎丸对肝癌细胞中Wnt信号分子β-catenin、GSK-3β及靶基因CD44v6、VEGF的影响

目的通过研究鳖甲煎丸对肝癌细胞HepG2中Wnt信号通路的信号分子及靶基因的影响,探讨鳖甲煎丸抗肝细胞癌转移
侵袭的分子机制。方法使用含鳖甲煎丸药物血清培养肝癌细胞HepG2,48 h后采用Western blotting技术检测Wnt/β-catenin通
路信号分子β-catenin、GSK-3β和磷酸化GSK-3β表达水平,免疫组化技术检测靶基因CD44v6、VEGF的表达情况。结果含鳖甲
煎丸药物血清可以降低肝癌细胞HepG2 中β-catenin 表达水平,下调磷酸化GSK-3β表达水平,明显抑制CD44v6、VEGF的表
达。结论鳖甲煎丸抗肝细胞癌转移侵袭的药理作用可能与其下调肝癌细胞HepG2 中Wnt/β-catenin 信号通路的信号分子
β-catenin及磷酸化GSK-3β的表达水平并有效降低靶基因CD44v6、VEGF的表达水平具有相关性,这可能是鳖甲煎丸抑制肝癌
细胞HepG2的生长、黏附及转移的重要分子机制之一。
     

大黄酸通过Wnt/β-catenin信号通路抑制喉癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨大黄酸对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭和迁移的作用及其与Wnt/β-catenin信号通路的关系。方法 利用低、中、高浓度（6、12、24μmol/L）大黄酸处理喉癌Hep-2细胞,通过MTT法、划痕实验、Transwell法分别检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力,应用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测β-catenin、Dvl2、GSK-3β和p-GSK-3β在Hep-2细胞中的表达水平。结果 随着大黄酸浓度的增大,喉癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著减弱（P <0.05）。大黄酸可降低喉癌细胞Dvl2、p-GSK-3β和β-catenin蛋白的表达水平（P <0.05）,增加GSK-3β蛋白的表达（P <0.05）。使用SKL2001激活Wnt/β-catenin信号通路,能够逆转大黄酸对Hep-2细胞迁移和侵袭的抑制作用（P <0.05）;使用XAV939抑制Wnt/β-catenin信号通路,能够降低Dvl2、p-GSK-3β和β-catenin的蛋白表达水平（P <0.05）,进一步加强大黄酸对Hep-2细胞迁移的抑制作用（P <0.05...     

双氢青蒿素通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞的增殖和侵袭

目的 探讨双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其可能的分子机制.方法 用不同浓度(10、20、40 μmol/L)的DHA分别作用于人胃癌BGC-823和SGC-7901细胞,采用MTT法、划痕实验、Transwell法和流式细胞术分别检测细胞的增殖能力、迁移能力、侵袭能力和细胞周期与凋亡情况.Western blot检测细胞中DVL2、GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin和Cyclin D1等蛋白的表达量.结果 不同浓度的DHA可以抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭,且呈浓度依赖性增长(P＜0.05).DHA作用48 h后,细胞S期比例显著增加,诱导细胞凋亡(P＜0.05).DHA 可以降低胃癌细胞Dvl2、p-GSK-3β、β-catenin和Cyclin D1的蛋白表达水平(P＜0.05),增加GSK-3β蛋白的表达(P＜0.05).同时,SKL2001激活Wnt/β-catenin信号通路,逆转DHA对胃癌细胞迁移和侵袭的抑制作用(P＜0.05);XAV939抑制Wnt/β-catenin信号通路,进一步加强DHA对胃癌细胞迁移和侵袭的抑制作用(P＜0.05).结论 DHA能有效抑制胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移,阻滞细胞周期停留在S期,诱导胃癌细胞凋亡,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关.     

MiR-3200-3p调控Wnt/β-catenin通路影响肝癌细胞的迁移和侵袭

目的 探讨miR-3200-3p对肝癌细胞迁移和侵袭的影响及其可能的分子机制。方法 采用RT-qPCR方法检测miR-3200-3p在正常肝细胞系HL-7702与肝癌细胞系Bel-7402中的表达;构建miR-3200-3p的慢病毒低表达载体,转染Bel-7402细胞,倒置荧光显微镜及RT-qPCR检测敲低效果;根据转染病毒质粒的不同将Bel-7402细胞分为2组：LV-control组及LV-inhibitor组。Transwell迁移和侵袭实验检测2组细胞的迁移和侵袭能力;Western blot法检测2组细胞中β-catenin、MMP2、E-cadherin蛋白的表达水平。结果 与HL-7702细胞比较,Bel-7402细胞中miR-3200-3p的相对表达量显著升高(P<0.001);成功建立miR-3200-3p低表达的Bel-7402稳转细胞系;与LV-control组比较,LV-inhibitor组肝癌细胞迁移和侵袭能力均明显受到抑制(均P<0.001),β-catenin(总、胞核和胞质)和MMP2蛋白表达均显著下调,E-cadherin的表达明显上调(均P<0.05)。结论 miR-3200-3p在肝癌细胞中发挥促癌作用,敲低其表达可抑制肝癌细胞的迁移和侵袭,其机制可能是通过影响Wnt/β-catenin通路的活化而下调MMP2表达,上调E-cadherin而实现的。     

苦参碱通过调控β-catenin信号通路抑制肝癌细胞干性

目的探讨苦参碱对人肝癌HepG2和Huh7细胞增殖活性、细胞干性、β-catenin转录活性以及AKT/GSK3β/β-catenin信号 通路的影响。方法应用MTT法检测细胞增殖活性,平板克隆形成实验检测0 g/mL、200 g/mL、400 μg/mL、800 μg/mL苦参碱对 人肝癌HepG2 和Huh7 细胞的克隆形成能力,荧光定量PCR分析0 g/mL、200 g/mL、400 μg/mL、800 μg/mL 苦参碱对人肝癌 HepG2 和Huh7 细胞干性基因CD90、EpCAM（上皮细胞粘附分子）和CD133 mRNA的表达水平,双荧光素酶报告基因检测 0 g/mL、200 g/mL、400 μg/mL、800 μg/mL 苦参碱对人肝癌HepG2 和Huh7 细胞内β-catenin 转录活性,Western blotting 检测 0 g/mL、400 μg/mL、800 μg/mL苦参碱对人肝癌HepG2和Huh7细胞内AKT（蛋白激酶B）、GSK-3β和β-catenin及其相应磷酸化 蛋白的表达水平。结果MTT实验结果显示,苦参碱呈时间-浓度依赖性地抑制肝癌HepG2 和Huh7 细胞的增殖,处理24、 48、72 h 对HepG2 细胞的半数抑制浓度依次为2369、1565、909.1 μg/mL,对Huh7 细胞的半数抑制浓度依次为1355、781.8、 612.8 μg/mL。苦参碱浓度依赖性地抑制肝癌细胞的克隆形成能力,400 μg/mL、800 μg/mL苦参碱能够显著抑制HepG2细胞的 克隆形成能力（P<0.01,P<0.001）,200 g/mL、400 μg/mL、800 μg/mL苦参碱能够显著抑制Huh7细胞的克隆形成能力（P<0.05,P<0.01, P<0.001）。苦参碱能够显著肝癌细胞内CD90、EpCAM和CD133 等干细胞标志物mRNA的表达,其中400 μg/mL、800 μg/mL 苦参碱能够显著抑制HepG2细胞中CD90（P<0.01,P<0.001）、EpCAM（P<0.05,P<0.01）和CD133（P<0.01,P<0.01）mRNA的表 达,400 μg/mL、800 μg/mL苦参碱能够显著抑制Huh7细胞中CD90（P<0.01,P<0.01）、EpCAM（P<0.05,P<0.01）和CD133（P<0.01, P<0.01）mRNA的表达。同时400 μg/mL、800 μg/mL苦参碱显著抑制HepG2细胞（P<0.001,P<0.001）和Huh7细胞（P<0.01,P<0.001） 内β-catenin的转录活性。研究结果显示400 μg/mL、800 μg/mL苦参碱能够显著降低HepG2和Huh7细胞内β-catenin和磷酸化 的AKT和GSK-3β蛋白水平,增加β-catenin的磷酸化水平。结论苦参碱可抑制肝癌HepG2和Huh7细胞的增殖、克隆形成以及 肝癌干性基因CD90、EpCAM和CD133的表达,其机制可能与抑制AKT/GSK3β/β-catenin信号通路,从而降低β-catenin的转录 活性有关。     

六味消癥方通过调节TRIM65表达抑制肝癌细胞侵袭和迁移机制研究

目的:研究六味消癥方含药血清对肝癌细胞侵袭和迁移能力的影响及其作用机制。方法:采用Transwell侵袭实验和划痕迁移实验,考察不同剂量六味消癥方和TRIM65表达对肝癌细胞侵袭和迁移能力的影响;采用RT-PCR实验和Western blot实验,考察不同剂量六味消癥方对肝癌细胞中TRIM65表达的影响,以及六味消癥方和TRIM65表达对Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白表达的影响。结果:六味消癥方含药血清显著抑制肝癌细胞通过基质胶的数量(P0.01)、伤痕愈合率(P0.01)、TRIM65的表达(P0.01),以及β-catenin、c-myc和MMP9的表达(P0.01)。TRIM65基因干扰加强了含药血清对肝癌细胞侵袭迁移能力的抑制,TRIM65过表达则减弱了含药血清对肝癌细胞侵袭迁移能力的抑制,同时减弱了含药血清对β-catenin、c-myc和MMP9的表达的抑制。结论:六味消癥方含药血清能够抑制肝癌细胞的侵袭和迁移能力,其作用机制可能是通过调控TRIM65的表达水平,进而抑制Wnt/β-catenin信号通路异常激活。     

下调ARPC2通过抑制Wnt/β-catenin通路激活水平降低卵巢癌OVCA429细胞恶性转移潜能

目的 探讨下调肌动蛋白相关蛋白复合体2(ARPC2)对卵巢癌OVCA429细胞恶性转移潜能的影响和机制。方法 qRT-PCR和Western blot检测卵巢癌Skov3、A2780、OVCA429细胞和正常卵巢IOSE386细胞中ARPC2表达变化。在卵巢癌OVCA429细胞中转染ARPC2 siRNA,MTT测定细胞增殖,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭,用Western blot方法检测细胞中ARPC2、β-catenin、c-myc、MMP-9、MMP-2蛋白表达变化。用Wnt/β-catenin激活剂LiCl处理转染ARPC2 siRNA后的卵巢癌OVCA429细胞,同样利用上述方法测定细胞增殖、迁移、侵袭变化。结果 卵巢癌Skov3、A2780、OVCA429细胞中ARPC2表达水平明显高于正常卵巢IOSE386细胞。卵巢癌OVCA429细胞中ARPC2表达水平最高。转染ARPC2 siRNA后的卵巢癌OVCA429细胞增殖能力下降,细胞迁移和侵袭能力也下降,细胞中ARPC2、β-catenin、c-myc、MMP-9、MMP-2蛋白表达水平均降低。Wnt/β-catenin激活剂LiCl可以逆转ARPC2 siRNA对卵巢癌OVCA429细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 下调ARPC2通过抑制Wnt/β-catenin通路激活水平降低卵巢癌OVCA429细胞恶性转移潜能。     

Tip30基因表达对肝癌细胞侵袭转移能力的影响

目的：分析Tip30表达对肝癌细胞侵袭转移能力的影响。方法：聚乳酸-羟乙酸(polylactic-co-glycolic acid, PLGA)纳米粒介导腺相关病毒质粒pAAV-Tip30真核表达质粒转染HepG2细胞。RT-PCR检测基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)-2,MMP-9和表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)mRNA水平;Western印迹 检测MMP-2和MMP-9蛋白表达水平;Transwell法检测肝癌细胞迁移能力;四氮唑盐(MTS)法和细胞集落形成实验检测细 胞增殖能力;细胞-细胞黏附试验、细胞-基质黏附实验检测Tip30表达对肝癌细胞黏附能力的影响。结果：过表达Tip30 基因的HepG2肝癌细胞明显降低了MMP-2,MMP-9的mRNA表达和蛋白的翻译;肝癌细胞的增殖、锚定非依赖性生长及 肝癌细胞迁移能力均明显受到抑制。结论：体外实验研究证明Tip30基因可抑制肝癌细胞侵袭转移的能力。     

经典Wnt/β-catenin信号通路介导子痫前期滋养细胞氧化应激损伤的机制研究

目的：研究经典Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路参与人滋养细胞氧化应激损伤的机制,探讨其在子痫前期（preeclampsia,PE）发病中的作用。方法：（1）采用免疫组化SP法和蛋白免疫印迹法（Western blot,WB）检测胎盘组织中β-catenin信号分子的表达。（2）将HTR8/SVneo分为正常培养对照组、缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation,H/R）处理组、氯化锂（LiCl）+H/R处理组、LiCl+正常培养组。利用WB法和间接免疫荧光法检测β-catenin在各组细胞中的表达。（3）利用流式细胞仪检测各组细胞凋亡指数及细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平。（4）利用Transwell小室模型和明胶酶谱法分析检测各组HTR8/SVneo的侵袭率及基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）-2、9的活性。结果：（1）与正常晚孕比较,子痫前期胎盘组织中β-catenin蛋白表达降低（P<0.05）。（2）与正常培养组相比较,H/R处理组的β-catenin蛋白水平显著下降,经LiCl预处理后H/R细胞中的β-catenin蛋白表达增加（P<0.01）。（3）与正常对照组相比,H/R处理可导致HTR8/SVneo凋亡率及ROS水平增加（P<0.01）;予以LiCl预处理可有效抑制H/R导致的细胞凋亡及ROS聚集（P<0.05,P<0.01）。（4）H/R组细胞的体外侵袭能力及MMP-2、9的活性均低于正常培养组;经LiCl预处理后,H/R组细胞的体外侵袭能力及清液中MMP-2、9的活性显著上升（P<0.01）。结论：LiCl通过特异性激活Wnt/β-catenin信号通路,对滋养细胞氧化应激损伤有保护性作用。     

氯化锂通过AKT/GSK-3β阻滞近端肾小管上皮细胞周期在G2期

目的探讨氯化锂（LiCl）是否影响近端肾小管上皮细胞（HK-2 细胞）的细胞周期及其信号通路。方法将不同浓度（5、 12.5、20、25 mmol/L）的LiCl作用于HK-2细胞不同时间（12、24、48、72 h）,采用流式细胞术检测细胞周期变化,CCK-8测定HK-2 细胞的活力,Western blotting 检测细胞周期G2 期的关键蛋白Cyclin B1、CDK1 以及AKT/GSK-3β信号通路相关蛋白的表达 量。结果流式细胞术结果提示LiCl以时间-浓度依赖的方式使HK-2细胞的G2细胞周期比例逐渐增加（P<0.05）,CCK-8结果 提示HK-2 细胞的活力随LiCl 作用的时间-浓度的增加而降低（P<0.05）,Western blotting 显示Cyclin B1、CDK1、p-GSK-3β、β- catenin蛋白含量随着时间以及浓度的增加而增加,而AKT磷酸化水平随着时间及浓度的增加而减少（P<0.05）。结论LiCl可 能通过激活AKT/GSK-3β信号通路使HK-2细胞阻滞在G2期。     

鳖甲煎丸对Wnt信号通路中β-catenin/TCF4复合物活性及信号分子cyclin D1、MMP-2的影响

目的探讨鳖甲煎丸抗肝细胞癌转移侵袭的分子机制。方法使用含鳖甲煎丸药物血清培养肝癌细胞HepG2,48 h后采用
免疫荧光技术检测Wnt/β-catenin通路信号分子β-catenin蛋白表达水平,双荧光素酶检测法检测β-catenin/TCF4复合物的活性,
采用RT-PCR技术检测cyclin D1 与MMP-2 基因转录水平,Western blot 技术检测cyclin D1 与MMP-2 的蛋白表达水平。结果
含鳖甲煎丸药物血清可降低肝癌细胞HepG2细胞核中β-catenin蛋白的表达水平,抑制β-catenin/TCF4复合物的活性,明显下调
cyclin D1、MMP-2的基因转录及其蛋白的表达水平。结论鳖甲煎丸可抑制Wnt/β-catenin信号通路,从而抑制肝癌细胞HepG2
的生长、粘附和转移。
     

重组人内皮抑素对人肝癌细胞SMMC-7721增殖及凋亡的影响

目的 初步研究Wnt通路在重组人血管内皮抑素(rh-Endostatin,ES)诱导人肝癌细胞SMMC-7721增殖、凋亡过程中的作用及可能机制.方法 分别以50、100、200、400 μg/ml ES体外处理人肝癌细胞株SMMC-7721,利用MTT比色法检测不同浓度、时间ES作用下的细胞增殖状态;利用流式细胞仪检...     

糖原合酶激酶-3β在肝癌细胞迁移过程中的作用

目的通过调节糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)来观察其对肝癌细胞迁移能力的影响,研究GSK-3β在肝癌细胞迁移过程中发挥的作用。方法分别应用GSK-3特异性抑制剂LiCl和SB216763抑制GSK-3β的活性,或转染GSK-3βWT、GSK-3βS9A、GID5-6质粒影响GSK-3β的活性,通过划痕实验、小室迁移实验、微管组织中心体(MTOC)实验等观察处理前后肝癌细胞系SMMC-7721和Hep3B迁移能力的改变,并用免疫细胞化学法观察肝癌细胞迁移后磷酸化GSK-3β(pGSK-3β)的分布。结果划痕实验发现,用LiCl和SB216763处理后,SMMC-7721细胞的相对迁移率分别下降36.44%和41.78%,Hep3B细胞的相对迁移率都下降26.66%。转染GSK-3βWT后,GSK-3β和pGSK-3β表达上调,SMMC-7721细胞相对迁移率降为61.27%;转染GSK-3βS9A后,GSK-3β表达上调,pGSK-3β变化不明显,SMMC-7721细胞相对迁移率降为38.61%;转染GID5-6后,GSK-3β变化不明显,pGSK-3β表达增多,SMMC-7721细胞相对迁移率降为36.49...     

Wnt/β-catenin信号通路在成人睾丸支持细胞增殖中的作用及其机制

目的探讨Wnt/β-catenin信号通路在成人睾丸支持细胞增殖中的作用及其作用机制。方法取成人睾丸组织采用两步酶法消化,分离纯化支持细胞,后行传代培养,并经波形蛋白免疫荧光染色鉴定其纯度。将支持细胞分为3组:正常对照组(Con组)、添加Gsk-3β特异性抑制剂SB216763组(SB组)和添加氯化锂组(LiCl组)。通过BrdU标记和流式细胞仪检测细胞增殖和细胞周期;采用免疫荧光染色、实时荧光定量PCR和Western blot-ting检测细胞中β-catenin和c-myc的表达状况;采用RNA干扰技术,下调支持细胞中c-myc基因表达。结果BrdU标记和流式细胞仪检测结果显示,SB和LiCl组支持细胞增殖明显高于Con组;加入SB216763和LiCl可明显促进细胞β-catenin和c-myc入核,c-myc mRNA和蛋白水平明显高于Con组;转染c-myc siRNA后,可明显降低SB216763引起的支持细胞增殖。结论激活Wnt/β-catenin信号通路可促进成人睾丸支持细胞的增殖,其作用机制可能是通过上调c-myc基因表达来实现的。     

TIM-3 基因在上皮性卵巢癌中高表达并促进癌细胞的增殖和迁移

目的 通过挖掘GEPIA数据库中的基因信息,分析T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3（TIM-3）基因在上皮性卵巢癌（EOC）中的表达及作用机制。方法 采用GEPIA数据库在线分析TIM-3基因在EOC组织和正常卵巢组织中的表达水平。收集2018年6月~2019年12月在我院实施卵巢手术治疗的82例EOC癌变组织标本和18例正常卵巢组织标本,免疫组织化学法检测标本组织中TIM-3的表达水平,分析TIM-3表达与EOC临床病理参数的相关性;采用Kaplan-Meier Plotter分析TIM-3表达水平与EOC患者生存之间的关系。qRT-PCR法检测卵巢癌组织和正常组织标本TIM-3和Wnt1 mRNA表达水平及相关性。采用pMAGic 4.0质粒转染构建TIM-3沉默卵巢癌SKOV3细胞系,将细胞分为SKOV3组（未转染的SKOV3细胞系）、沉默阴性对照组（SKOV3+NC siRNA组：转染pMAGic 4.0 NC siRNA质粒的SKOV3细胞系）和沉默TIM-3组（SKOV3+TIM-3 siRNA组：转染pMAGic 4.0 TIM-3 siRNA质粒的SKOV3细胞系）;采用pcDNA3.1质粒转染构建TIM-3过表达卵巢癌SKOV3细胞系,将细胞分为SKOV3组、过表达阴性对照组（pcDNA NC组：转染pcDNA3.1质粒的SKOV3细胞系）和过表达TIM-3组（pcDNA TIM-3组：转染pcDNA3.1 TIM-3质粒的SKOV3细胞系）。MTT法检测细胞增殖能力,Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡能力,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,TOPflash/FOPflash双荧光素酶报告基因实验检测Wnt/β-catenin通路活性,qPCR检测Wnt/β-catenin信号通路中转录因子TCF-7、TCFL-2及靶基因CD44的mRNA水平,Western blot检测SKOV3细胞中MMP-9,CD44、Wnt1、β-catenin及E-cad蛋白表达。结果 TIM-3在正常卵巢组织中呈阴性表达,在EOC组织中呈阳性表达,EOC组织中TIM-3阳性表达率（84.14%）显著高于正常卵巢组织（16.67%,P<0.05）。TIM-3表达与FIGO分期、组织分化程度及淋巴结是否转移有关（P<0.05）,与年龄、病理类型无关（P>0.05）。且TIM-3与Wnt1水平呈正相关（P<0.05）。沉默TIM-3基因后,Wnt/β-catenin通路活性受到抑制,SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力显著降低（P<0.05）,凋亡能力显著升高（P<0.05）,转录因子TCF-7、TCFL-2及靶基因CD44的mRNA水平显著下调,细胞MMP-9,CD44、Wnt1、β-catenin蛋白水平均显著下调,EMT相关蛋白E-cad水平显著上调（P<0.05）。过表达TIM-3基因后,Wnt/β-catenin通路活性被激活,SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力显著升高（P<0.05）,凋亡能力显著降低（P<0.05）,转录因子TCF-7、TCFL-2及靶基因CD44的mRNA水平显著上调,细胞MMP-9,CD44、Wnt1、β-catenin蛋白水平均显著上调,EMT相关蛋白E-cad水平显著下调（P<0.05）。结论 TIM-3在EOC组织中高表达,可促进卵巢癌细胞的恶性生物学行为,其机制可能与Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。     

用RNA干扰腺病毒载体研究Wnt/β-连环蛋白信号途径对人甲状腺细胞增殖的影响

目的 以糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)特异的RNA干扰(RNAi)腺病毒表达载体作为研究工具,从转录后水平抑制GSK-3β基因表达,探讨Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路对人甲状腺细胞增殖的影响.方法 利用体外同源重组技术构建短发夹RNA(shRNA)腺病毒表达载体,在HEK293A细胞中包装并扩增病毒、空斑实验法测定病毒滴度;RNAi腺病毒感染原代培养人甲状腺细胞,Western印迹法检测其对GSK-3β蛋白表达的抑制效应;利用构建的RNAi腺病毒抑制GSK-3β表达,BrdU法检测原代培养人甲状腺细胞增殖活性.结果 成功构建了GSK-3β特异的RNAi腺病毒表达载体,获得高滴度的腺病毒液;RNAi腺病毒感染原代培养人甲状腺细胞后,GSK-3β蛋白的表达受到明显抑制,β-catenin蛋白表达显著增加(1.324±0.057 vs 0.935±0.029,P<0.05);腺病毒感染原代培养人甲状腺细胞1、3、5、7 d后,RNAi腺病毒组比空病毒组细胞增殖率明显增加(1.473±0.035 vs 1.312±0.043、1.226±0.045 vs 0.959±0.066、0.776±0.041 vs 0.605±0.054、0.337±0.018 vs 0.259±0.021,P<0.05).结论 构建的目的RNAi腺病毒表达载体能有效抑制GSK-3β基因的表达;Wnt/β-catenin信号通路在人甲状腺细胞的增殖中有重要影响.