氯化两面针碱对前列腺癌细胞PC-3增殖与凋亡的影响

目的 探讨氯化两面针碱对前列腺癌细胞PC-3增殖及凋亡的影响作用。方法 采用MTT、细胞划痕和Transwell侵袭实验评估氯化两面针碱对人前列腺癌细胞PC-3增殖与侵袭的影响;流式细胞术检测氯化两面针碱对PC-3细胞凋亡的影响;免疫印迹检测AKT/mTOR及细胞凋亡蛋白B细胞淋巴瘤基因-2相关X蛋白(Bax)和B细胞淋巴瘤基因-2(Bcl-2)的表达,应用PI3K通路抑制剂LY294002探讨抑制AKT通路对前列腺癌细胞PC-3的影响。结果 氯化两面针碱能抑制PC-3细胞的增殖与侵袭,且具有剂量依赖性(P<0.01)。氯化两面针碱可下调Bcl-2、而上调Bax的蛋白表达,Bax/Bcl-2比例明显上升(P<0.01),抑制AKT和mTOR通路的磷酸化,诱导前列腺癌细胞PC-3凋亡。联合应用LY294002发现,抑制AKT通路可增强氯化两面针碱对前列腺癌细胞PC-3增殖和侵袭的抑制作用。结论 氯化两面针碱能够抑制前列腺癌细胞PC-3的增殖与侵袭,诱导其凋亡,并通过抑制AKT/mTOR磷酸化发挥其抗前列腺癌作用,可作为一种潜在治疗前列腺癌的药物。     

丙泊酚通过靶向调控PI3K/AKT/mTOR信号通路体外抑制乳腺癌细胞生长

探讨丙泊酚通过PI3K/AKT/mTOR信号通路对乳腺癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响。方法 在体外,丙泊酚10 mg/mL分别与乳腺癌MCF-7和BT474细胞系共孵育分为对照组和丙泊酚组。PI3K过表达质粒经丙泊酚处理后转染MCF-7细胞分为对照组、丙泊酚+PI3K组、PI3K组,分别检测细胞的生存、侵袭及凋亡情况。Western blot检测PI3K/AKT/ mTOR信号通路相关蛋白表达水平。在体内构建MCF-7小鼠模型,免疫组化和TUNEL实验用于检测乳腺癌细胞的生长和凋亡情况。结果 丙泊酚显著抑制乳腺癌细胞的生长和侵袭能力（P＜0.05）。Western blot和细胞凋亡实验结果显示,丙泊酚通过降低Bcl-2和Bcl-w在乳腺癌细胞中的表达水平来诱导细胞凋亡（P＜0.05）。丙泊酚降低了乳腺癌细胞中磷酸肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B (AKT)和mTOR蛋白表达水平（P＜0.05）。对P13K进行过表达处理后显示,PI3K过表达逆转了丙泊酚对MCF-7细胞的生长和侵袭的抑制作用（P＜0.05）。体内实验表明,丙泊酚治疗明显抑制MCF-7小鼠模型中的肿瘤生长,促进了细胞凋亡（P＜0.05）。结论 丙泊酚通过PI3K/AKT/mTOR信号通路体外抑制乳腺癌细胞的生长和侵袭,促进细胞凋亡     

氯化两面针碱对垂体腺瘤GH3细胞的抑制作用

目的 探讨氯化两面针碱对垂体腺瘤GH3细胞的抑制作用及其机制。方法 不同浓度的氯化两面针碱作用于GH3细胞,培养不同时间后分别检测其作用效果:CCK-8检测各组GH3细胞存活率;Annexin V/PI凋亡试剂盒染色后,采用流式细胞术检测各组GH3细胞凋亡率;PI染色后采用流式细胞术进行细胞周期分析;实时定量PCR检测凋亡相关基因Bax、 Bcl-2,以及细胞周期相关基因Cyclin B1、CDK1、p21和p27的mRNA表达水平;Western blotting法检测Bax、Bcl-2、Cyclin B1和CDK1蛋白,以及丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)和细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路蛋白的表达水平。结果 氯化两面针碱可抑制GH3细胞增殖,促进GH3细胞凋亡及细胞周期阻滞于G2/M期;氯化两面针碱能够抑制AKT及ERK信号通路的激活。结论 氯化两面针碱有效抑制垂体腺瘤GH3细胞的增殖和促进其凋亡,可作为有效治疗垂体腺瘤的潜在药物。     

基于PI3 K/AKT/mTOR信号通路研究补肾法对体外培养小鼠卵母细胞成熟的促进作用

目的 研究补肾法对体外培养小鼠卵母细胞成熟的促进作用及其与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(PI3K/AKT/mTOR)信号通路的关系.方法 给6～8周龄雌性大鼠灌服补肾调经Ⅲ号方制备含药血清.将3～4周龄雌性小鼠随机分为A、B组,A组灌胃蒸馏水,B组序贯灌胃补肾调经系列方(Ⅱ号方和Ⅲ号方),各灌胃12 d.第11天腹腔注射孕马血清促性腺激素(5 IU/只),48 h后剥离卵巢,取出卵丘-卵母细胞复合体(COCs)进行体外培养.将A组COCs分为空白对照组和抑制剂组(25μmol/L LY294002),B组分为补肾组(10％补肾调经Ⅲ号方含药血清)和补肾加抑制剂组(10％补肾调经Ⅲ号方含药血清+25μmol/L LY294002).体外培养18 h后,在显微镜下统计各组第一极体排出量并计算排出率.收集COCs,RT-PCR法检测各组COCs中Bcl-2、Bax、PI3 K、AKT、mTOR mRNA的表达,免疫荧光染色法检测各组COCs中Bcl-2、Bax、PI3 K、AKT、mTOR、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的蛋白表达.结果 第一极体排出率补肾组高于空白对照组(P<0.05),抑制剂组低于空白对照组(P<0.05),补肾加抑制剂组低于补肾组(P<0.05).RT-PCR结果显示,与空白对照组比较,补肾组COCs中Bcl-2、PI3 K、AKT、mTOR mRNA表达及Bcl-2/Bax值均升高(P<0.05),Bax mRNA表达降低(P<0.05);抑制剂组COCs中Bcl-2、PI3K、AKT、mTOR mRNA表达及Bcl-2/Bax值均下降(P<0.05),Bax mRNA表达升高(P<0.05).与补肾组比较,补肾加抑制剂组COCs中Bcl-2、PI3K、AKT、mTOR mRNA表达及Bcl-2/Bax值均降低(P<0.05),Bax mRNA表达升高(P<0.05).免疫荧光染色结果显示,各组间PI3 K、AKT、mTOR蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);与空白对照组比较,补肾组COCs中Bcl-2蛋白表达、p-PI3 K/PI3 K、p-AKT/AKT升高(P<0.05),Bax蛋白表达降低(P<0.05);抑制剂组COCs中Bcl-2蛋白表达、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR降低(P<0.05),Bax蛋白表达升高(P<0.05).与补肾组比较,补肾加抑制剂组COCs中Bcl-2蛋白表达、p-PI3 K/PI3 K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR降低(P<0.05),Bax蛋白表达升高(P<0.05).结论 补肾调经系列方可通过调控PI3 K/AKT/mTOR信号通路、上调Bcl-2和Bax mRNA及蛋白表达的比值、抑制COCs凋亡从而促进小鼠卵母细胞成熟.     

白桦脂酸对脑胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的影响

目的 观察白桦脂酸(BA)对人脑胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的影响,探讨其可能的作用机制。方法 对数期稳定生长的U251细胞中分别加入不同浓度(0、2.5、5、10、 20、40、80 μg/mL)的BA进行培养。CCK-8法、Annexin V-FITC/PI 双染色法检测培养24、48、72 h 时细胞的增殖、凋亡情况,Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2 、Bax及信号通路蛋白Akt及磷酸化Akt(p-Akt)表达变化情况。结果 在0～80 μg/mL范围内,BA可抑制U251细胞增殖并促进细胞凋亡(P＜0.05),且呈浓度及时间依赖性,随着BA浓度的增加、培养时间的延长,U251细胞的Akt表达水平无明显变化(P＞0.05),P-Akt、Bcl-2表达水平逐渐降低(P均＜0.05),Bax 表达水平逐渐升高(P＜0.05)。结论 BA可抑制脑胶质瘤U251细胞增殖并诱导其凋亡,这可能与其参与调控磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路有关。     

LncRNA GAS5通过AKT/mTOR通路对结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响

目的探究长链非编码核糖核酸生长组织特异性转录体5(LncRNA GAS5)通过AKT/mTOR通路对结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养人结肠癌细胞SW480,随机分为对照组、LncRNA GAS5过表达质粒组、LncRNA GAS5空载质粒组、LncRNA GAS5 siRNA组、LncRNA GAS5 siRNA阴性对照组,分别转染质粒及siRNA后,采用实时荧光定量(q RT-PCR)检测各组细胞LncRNA GAS5表达,采用CKK-8、细胞克隆形成实验检测细胞增殖情况,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,免疫印迹检测各组细胞凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-1(Bcl-2)、关联BCL-2的蛋白质X(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)]、AKT/mTOR通路蛋白[丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)、磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶点(mTOR)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶点(p-mTOR)]表达情况。结果与对照组相比,LncRNA GAS5 siRNA组SW480细胞LncRNA GAS5表达、凋亡率、Bax及caspase-3蛋白表达降低,细胞活力、相对细胞克隆形成、Bcl-2蛋白表达、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR升高,差异均有统计学意义(P0.05);LncRNA GAS5过表达质粒组SW480细胞LncRNA GAS5表达、凋亡率、Bax及caspase-3蛋白表达升高,细胞活力、相对细胞克隆形成、Bcl-2蛋白表达、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR降低,差异均有统计学意义(P0.05);LncRNA GAS5 siRNA阴性对照组、LncRNA GAS5空载质粒组SW480细胞各指标差异无统计学意义(P0.05)。结论上调LncRNA GAS5可抑制SW480细胞增殖,促进其凋亡,可能是通过抑制AKT/mTOR通路激活实现的。     

PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235体内外对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨PI3K/mTOR双重抑制剂NVP-BEZ235在体内外对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响?方法:MTT法检测NVP-BEZ235对细胞增殖的影响;Western blot检测NVP-BEZ235对PI3K/mTOR下游信号蛋白的影响;碘化丙啶染色检测细胞周期和细胞凋亡;DAPI染色从细胞形态上检测细胞凋亡;构建CNE1异种移植肿瘤模型,NVP-BEZ235口服给药,测量肿瘤体积大小和剥除的肿瘤重量计算抑制率,TUNEL法检测组织细胞凋亡?结果:① 与人鼻咽上皮细胞NP69比较,NVP-BEZ235选择性抑制鼻咽癌细胞增殖;② NVP-BEZ235在体外特异性抑制PI3K/mTOR下游信号通路;③ NVP-BEZ235通过阻滞G1期抑制细胞周期,在体外诱导细胞凋亡;④ NVP-BEZ235抑制裸鼠移植肿瘤的生长,在体内通过抑制PI3K/mTOR下游信号通路的磷酸化诱导细胞凋亡?结论:PI3K/mTOR双重抑制剂NVP-BEZ235在体内外选择性抑制鼻咽癌细胞增殖,抑制细胞周期进程,诱导鼻咽癌细胞凋亡?     

汉黄芩素经PTEN/PI3K/AKT信号通路对乳腺癌细胞增殖的影响

目的 探讨汉黄芩素对乳腺癌细胞mcf-7与裸鼠移植瘤的影响及其可能涉及的分子机制.方法 采用CCK-8检测不同浓度(0、20、50、100μmol/L)汉黄芩素对乳腺癌细胞增殖的影响;通过流式细胞术检测汉黄芩素对乳腺癌细胞周期分布和凋亡率的影响;运用转录组测序分析汉黄芩素可能影响的信号通路;运用Western blot检测汉黄芩素对相关蛋白的影响;此外,通过裸鼠移植瘤模型的体内实验探究汉黄芩素对裸鼠移植瘤的影响.结果 与对照组相比,汉黄芩素可以通过抑制乳腺癌细胞的增殖能力诱导乳腺癌细胞周期阻滞,并且诱导其凋亡,呈时间和浓度依赖性;同时,汉黄芩素处理mcf-7细胞48 h后,增殖标志性蛋白PCNA的表达水平降低,Cleaved-Caspase3蛋白表达水平逐渐升高,Caspase-3蛋白表达水平逐渐降低;此外,汉黄芩素还可以调节PTEN/PI3K/AKT信号通路,抑癌蛋白PTEN表达水平随着浓度升高逐渐增加,p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平随着浓度升高降低;同时,体内实验初步显示汉黄芩素可以抑制mcf-7裸鼠移植瘤的生长.结论 汉黄芩素对乳腺癌细胞系mcf-7的增殖具有抑制作用,并且诱导其凋亡,其机制可能与PTEN/PI3K/AKT信号轴的调节有关,为汉黄芩素的抗肿瘤活性提供新的基础.     

阿伐他汀通过PI3K/AKT/mTOR调节HL-60白血病细胞凋亡的实验研究

目的:研究阿伐他汀通过PI3K/AKT/mTOR对HL-60白血病细胞凋亡的调节作用。方法:培养HL-60白血病细胞,用不同剂量阿伐他汀处理后检测细胞凋亡情况以及PI3K、AKT、mTOR的表达量;用PI3K、AKT、mTOR的抑制剂Wortmannin、Perifosine、Rapamycin处理后,检测细胞的凋亡情况。结果:不同剂量阿伐他汀处理后,能够以剂量依赖性和时间依赖性的方式增加早期凋亡细胞、凋亡样坏死细胞的数目,减少PI3K、AKT、mTOR的mRNA含量;PI3K、AKT、mTOR的抑制剂Wortmannin、Perifosine、Rapamycin处理能够增加早期凋亡细胞、凋亡样坏死细胞的数目,上调凋亡基因FasL、Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达。结论:阿伐他汀能够通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路来诱导HL-60白血病细胞凋亡。     

CD98基因沉默对黑色素瘤B16-F10细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的影响

目的 探讨CD98基因沉默对黑色素瘤B16-F10细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的影响.方法 构建shRNA CD98载体转染至B16-F10细胞,将细胞随机分为3组:Con-trol 组、shRNA-NC组、CD98-shRNA3组进行后续实验.克隆形成实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Tran-swell 检测细胞侵袭;Western blot 检测 CD98、Ki67、PCNA、Bax、Bcl-2、Caspase-3、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT 蛋白表达水平.结果 与Control组比较,CD98-shRNA3组CD98蛋白表达水平降低(P＜0.05),克隆形成率降低(P＜0.05),Ki67、PCNA蛋白表达水平降低(P＜0.05),细胞凋亡率升高(P＜0.05),Bax/Bcl-2、cleaved Caspase-3/Caspase-3值升高(P＜0.05),侵袭细胞数降低(P＜0.05),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT值降低(P＜0.05).结论 沉默CD98可能通过抑制PI3K/ATK信号通路激活,抑制黑色素瘤B16-F10细胞增殖、侵袭,促进细胞凋亡.     

PI-103对人卵巢癌细胞株SKOV3／DDP顺铂化疗效果的影响

目的：探讨磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）双抑制剂PI-103对卵巢癌耐顺铂株SKOV3/DDP顺铂化疗效果的影响。方法：将PI-103、顺铂及两者联合分别作用于SKOV3/DDP细胞,采用CCK-8法检测细胞生长情况,流式细胞技术检测药物单独或联合作用对细胞凋亡的影响;应用Western blot检测蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、核糖体蛋白（rpS6）、磷酸化rpS6（p-rpS6）以及凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax蛋白表达变化。结果：PI-103能够抑制SKOV3/DDP细胞增殖,且呈浓度、时间依赖性;联合用药可以明显增加对细胞生长抑制和凋亡作用。 PI-103能下调Akt和rpS6的磷酸化水平,促DDP上调Bax和下调Bcl-2的表达。结论：PI-103抑制PI3 K/Akt/mTOR信号传导通路,促DDP上调促凋亡蛋白及下调抗凋亡蛋白的表达,从而抑制癌细胞生长,诱导其凋亡,增加卵巢癌耐顺铂株SKOV3/DDP细胞对DDP的化疗效果。     

DRD2启动子低甲基化通过ERK通路调控乳腺癌细胞增殖

目的 研究肿瘤干细胞标志物多巴胺受体D2（dopamine receptor D2,DRD2）对乳腺癌细胞增殖的影响。方法 采用850K芯片对乳腺癌组织进行检测,并分析DRD2甲基化状态。采用基因筛选、基因敲除和甲基化抑制等技术和方法,进行体外和体内实验,筛选和验证可能存在的分子信号通路。结果 DRD2启动子区在乳腺癌组织中相较于正常组织表现为低甲基化。上调DRD2的表达后,乳腺癌细胞增殖增强,而下调DRD2的表达,乳腺癌细胞增殖显著降低。裸鼠实验发现,过表达DRD2可促进肿瘤生长和Ki67、CD31表达,下调DRD2可抑制肿瘤生长。体内外实验表明,细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases,ERK）的表达受DRD2表达水平的影响,提示DRD2通过ERK信号通路发挥作用。甲基化抑制剂5-aza-2-脱氧胞苷（5-aza-2-deoxycytidine,5-AzadC）在小鼠体内部分逆转了DRD2表达的下调,失去了对肿瘤细胞增殖的抑制作用,提示抑制DRD2甲基化促进了肿瘤的发展。结论 乳腺癌中DRD2启动子区发生低甲基化。DRD2通过ERK通路在乳腺癌细胞的增殖和迁移中发挥作用。     

黄芩素对人前列腺癌 PC －3细胞增殖、侵袭的抑制作用及机制研究

目的：探讨黄芩素对人前列腺癌PC－3细胞增殖、侵袭的影响及其相关机制。方法培养人前列腺癌PC－3细胞,分别予20μL的培养液（对照组）、无水乙醇（溶媒组）、黄芩素溶液（100、200μmol／L黄芩素组）处理细胞48 h后,通过四甲基偶氮唑蓝（ MTT）法分析PC－3细胞的增殖情况,Transwell侵袭实验检测PC－3细胞的侵袭能力,荧光实时定量PCR检测PC－3细胞中Ezrin mRNA表达,Western blot测定PC－3细胞中Ezrin、Bcl－2、Bax蛋白表达,原位末端标记法（ TUNEL）检测PC－3细胞凋亡率。结果100、200μmol／L黄芩素作用PC－3细胞48 h后,细胞增殖抑制率、凋亡率以及Bax蛋白表达水平增加,平均穿膜细胞数以及Ezrin、Bcl－2蛋白表达水平降低,且具有剂量依赖性（ P＜0．01）,然而溶媒组上述指标与对照组比较,差异无统计学意义（ P＞0．05）。结论黄芩素能够降低人前列腺癌PC－3细胞的增殖、侵袭性,其机制可能与抑制Ezrin蛋白表达及促进肿瘤细胞凋亡有关。     

消癥抑癌方对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移的影响

目的 探讨消癥抑癌方对人卵巢癌细胞SKOV3增殖和迁移的影响及潜在作用机制。方法 利用网络药理学分析消癥抑癌方抗卵巢癌的关键活性成分和核心靶点,并通过基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析筛选其相关生物学过程和通路。制备消癥抑癌方含药血清,用含药血清处理卵巢癌SKOV3细胞。采用CCK-8法和EdU染色法检测消癥抑癌方含药血清对SKOV3细胞增殖的影响;采用划痕实验和Transwell迁移实验检测消癥抑癌方含药血清对SKOV3细胞迁移的影响;采用Western blotting法检测消癥抑癌方含药血清对SKOV3细胞自噬蛋白(P62)、自噬相关蛋白3(ATG3)、微管相关蛋白1轻链3 B(LC3B)及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关蛋白的影响。结果 网络药理学研究显示,消癥抑癌方抗卵巢癌的关键活性成分是槲皮素、山柰酚、木犀草素、汉黄芩素、柚皮素等,核心靶点是MAPK3、AKT1、SRC、MAPK1、TP53等。KEGG富集分析共得到171条通路(P<0.01),其中Degree值排名较靠前且与...     

丹酚酸A 对食管癌细胞增殖与凋亡的影响及其机制

目的： 探讨丹酚酸A(salvianolic acid A,SalA)对食管癌细胞KYSE-150 增殖、凋亡的影响及其相关的作 用机制。方法： 将细胞随机分为对照组、10 μmol/L SalA 组、25 μmol/L SalA 组、50 μmol/L SalA 组。采用细胞计数 试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡;采用蛋白质印迹 法检测细胞增殖标志物Ki-67,细胞周期素D1(cyclin D1),细胞周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase, CDK4),CDK6,B细胞淋巴瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2),Bcl-2 相关X(Bcl-2 associated X,Bax),活化半胱氨酸 天冬氨酸蛋白酶(cleaved-caspase-9,cl-caspase-9),cl-caspase-3,磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K),磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,P-Akt)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)的表达水平。结果： 与对照组相比,SalA 各浓度组细胞增殖活性均显著降低(均P<0.01);处于G1 期的细胞显著增加,S期细胞显著减少(均P<0.01);细胞凋亡率均显著升高(均P<0.01);SalA 各浓度组细胞中Ki-67, cyclin D1,CDK4,CDK6,Bcl-2,PI3K,p-Akt 和mTOR 的表达水平均显著降低;而p21,Bax,cl-caspase-9 和clcaspase- 3 的表达水平均显著上升,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论： SalA 能抑制食管癌细胞KYSE-150增殖, 诱导细胞G1期阻滞和细胞凋亡,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR通路的激活有关。     

乌苯美司对卵巢癌A2780细胞的生物学影响

目的 研究乌苯美司对卵巢癌A2780细胞增殖、细胞周期、凋亡和自噬以及迁移和侵袭能力的影响,探讨可能的作用机制。 方法 CCK-8实验检测乌苯美司对A2780细胞增殖的影响;Transwell实验检测乌苯美司对A2780细胞迁移及侵袭能力的影响;流式细胞术检测乌苯美司对A2780细胞凋亡和细胞周期的影响;Western blotting检测APN、AKT、p-AKT、LC3B、p62表达水平的变化。 结果 (1)乌苯美司能够抑制A2780细胞的增殖(F浓度=812.56,P<0.001;F时间=8.58,P=0.010;F交互=4.00,P=0.027)、迁移(t=56.9,P<0.001)和侵袭(t=11.8,P<0.001)、导致G₂/M期细胞比例增高(t=7.9,P=0.016),G₁期细胞比例减少(t=14.8,P=0.005),发生G₂/M细胞周期阻滞。(2)乌苯美司能够诱导A2780细胞凋亡(P=0.002),且联合应用AKT抑制剂后诱导细胞凋亡的作用增强(P=0.007)。(3)乌苯美司可以导致APN表达降低,p-AKT、LC3-B和p62表达增加。 结论 乌苯美司可能是卵巢癌的一种治疗方法或者辅助治疗方法,与AKT抑制剂联用能够增强其治疗效果。     

脱氧胆酸诱导正常人食管黏膜上皮细胞凋亡及其机制探讨

目的 观察脱氧胆酸(deoxycholate,DC)能否诱导体外培养的人正常食管黏膜上皮细胞凋亡,并探讨其机制。方法 采用无血清的角朊细胞培养基体外培养人正常食管黏膜上皮细胞;通过流式细胞仪(FCM)观察DC干预的细胞经碘化丙啶(PI)单染色后凋亡细胞百分比;AnnexinV-FITC结合PI双染色观察早期凋亡细胞比率;TUNEL试验凝胶DNA梯度电泳确定凋亡的发生。通过FCM分析干预细胞激活的Caspase3变化,免疫印迹法观察Fas蛋白、Bcl-2和Bax蛋白的表达情况。结果 4种凋亡检测方法确定DC可诱导体外培养的食管黏膜上皮细胞凋亡,并成浓度时间正相关性变化。500μmol/LDC干预30min,含激活状态Caspase-3的细胞达21.3%,明显高于对照组的1.5%(P<0.01)。免疫印记法示细胞经DC干预前后Fas受体蛋白均为阴性表达,但Bcl-2蛋白表达水平下降,而Bax蛋白则上升。结论 DC可诱导人正常食管黏膜上皮细胞凋亡;此过程与Fas-L/Fas凋亡信号系统无关;而存在Caspase-3激活、Bcl-2减少和Bax增加,即与线粒体凋亡调节途径密切相关。     

姜黄素对脑缺血再灌注损伤大鼠PI3K／AKT／mTOR的影响

目的：探讨姜黄素对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用及机制。方法通过线栓法构建大鼠脑缺血再灌注损伤模型。评估姜黄素对大鼠脑梗死范围、脑含水量、神经症状、脑组织病理形态,以及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶 B（AKT）、磷酸化蛋白激酶 B（p-AKT）、雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）、超氧化物歧化酶（SOD）、B 细胞淋巴因子2（Bcl-2）、Bcl-2相关 X 蛋白（Bax）、半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase-3）、活化性半胱胺酸天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleavage-Caspase-3）的表达影响。结果姜黄素对脑缺血再灌注损伤有保护作用,其可以减轻大鼠神经症状和脑组织病理形态的改变,以及脑梗死面积和脑含水量。此外,姜黄素还可以减轻 MDA、Bax、Cleavage-Caspase-3、促炎症细胞因子 IL-6、MCP-1和 TNF-α的表达,增加 PI3K、p-AKT、mTOR、Bcl-2、Caspase-3、CAT、GPX 与 SOD 表达。结论姜黄素预处理对脑缺血再灌注有明显保护作用,该作用可能与激活 PI3K／AKT／mTOR 信号通路激活而抑制炎症,凋亡和氧化应激相关。