PCR检测人巨细胞病毒感染的研究

目的：建立快速简便的聚合酶链反应(PCR)方法检测入巨细胞病毒(HCMV—DNA)。方法：根据国外文献报道的HCMV基因序列,利用计算机辅助设计并选出一对寡核苷酸引物,扩增片段为370hp。结果：在370bp处出现DNA扩增带者为HCMV—DNA阳性。结论：PCR技术检测HCMV—DNA敏感、特异,有望应用于临床作为HCMV感染的早期诊断方法。     

荧光定量PCR法和巢式PCR法检测新生儿脐血人巨细胞病毒DNA的比较

目的 比较荧光定量PCR法和巢式PCR法在检测新生儿人巨细胞病毒(HCMV)先天性感染中的灵敏度,为HCMV先天性感染的快速特异性检测提供实验依据.方法 随机收集36例脐血标本,分离单核细胞,提取总DNA,进行巢式PCR和荧光定量PCR检测.结果 巢式PCR法检测HCMV糖蛋白(gB) DNA的阳性率为22.2%(7/...     

人胚肺成纤维细胞感染人巨细胞病毒不同时间病毒载量的分析

目的:检测人巨细胞病毒(HCMV)感染人胚肺成纤维细胞(HELF)后不同时间点HCMV DNA载量,以明确HCMV感染HELF的时效性.方法:将HCMV接种HELF细胞,收集感染后3,5,8,10,15,20,30,60,120 min时间点细胞,提取病毒DNA,以即刻早期1基因(IE-1)为靶基因进行荧光定量PCR检...     

人巨细胞病毒的PCR检测

①目的 寻找早期快速检测人类巨细胞病毒（HCMV）感染的敏感方法。②方法 用HCMV即刻早期（IE）基因和晚期（LA）基因的7对待异性引物分别进行普通聚合酶链的反应（PCR），套式PCR（nPCR)和双重PCR，检测血清中的HCMV DNA，比较不同引物及不同PCR方法的灵敏度。③结果 同一基因的不同引物扩增HCMV DNA灵敏度差别无显著意义；LA基因的引物扩增灵敏度高于IE基因的引物；3种方法中以nPCR灵敏度最高，其次为双重PCR，普通PCR最低。④结论 用LA基因的特异性引物进行nPCR是早期快速检测HCMV感染的敏感方法。     

孕妇及新生儿巨细胞病毒感染的分子生物学诊断

目的 :建立套式聚合酶链反应 ( n PCR)检测人巨细胞病毒 ( HCMV)。方法 :建立套式 PCR检测 HCMV DNA,同时结合病毒分离检测临床标本。结果 :在 2 3例新生儿肝炎综合征患儿中 ,10例病毒分离及套式 PCR均阳性 ;1例病毒分离阴性 ,但套式 PCR阳性。对 58例妊娠早期孕妇血标本进行检测 ,套式 PCR阳性率为 9% ,病毒分离阳性率则为 7%。结论 :套式 PCR是一种临床检测HCMV的快速有效手段。     

HCMV体外感染小鼠胚胎成纤维细胞的研究

目的 观察人巨细胞病毒(HCMV)AD169株体外感染小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的生物学特征,为探讨HCMV AD169株能跨种属感染MEF提供依据.方法 将100 TCID50 HCMV AD169株病毒悬液接种至MEF和人胚胎成纤维细胞(HF)上,逐日观察HCMV特征性细胞病变效应(CPE);分别收集感染后1、3、5 d 的MEF和HF培养物,提取细胞DNA,采用实时荧光定量PCR检测HCMV立即早期基因(IE)拷贝数变化;分别采用HCMV立即早期基因(IE-1)、主要衣壳蛋白(MCP)和包膜糖蛋白(gB)单克隆抗体进行间接免疫荧光实验检测感染后的1、3、5 d MEF和HF中相应病毒蛋白的表达.结果 观察到HCMV AD169株接种MEF出现病毒所致CPE,与HF出现的CPE相似;实时荧光定量PCR检测HCMV IE基因拷贝数发现,MEF在HCMV AD169感染后的1、3、5 d,病毒基因拷贝数呈增长趋势,但均低于相同时间点的HF中病毒拷贝数;间接免疫荧光检测HCMV感染MEF和HF后1、3、5 d HCMV IE-1、MCP和gB蛋白表达情况时发现,在MEF上HCMV IE-1、MCP和gB蛋白表达随时间延长呈增强趋势.结论 HCMV AD169株可以体外感染MEF,并在其中复制增殖.     

子宫巨细胞病毒感染与妊娠结局的相关性研究

人巨细胞病毒(HCMV)宫内感染与出生缺陷的关系早已受到关注,但发病机理尚未完全阐明。为此,我们建立了豚鼠巨细胞病毒(GPCMV)胎仔感染模型,并应用敏感、特异的三相寡核苷酸探针原位杂交技术,定性、定量、定位探索GPCMV在亲代子宫中的转录水平与胎仔感染的关系,现报道如下。     

孕妇体内人巨细胞病毒定量阈值与胎儿宫内感染的关系

目的 探讨孕妇体内人巨细胞病毒定量阈值与胎儿宫内感染的关系.方法 应用荧光定量PCR(FQ-PCR)技术对53例HCMV感染的孕妇血液中HCMV DNA进行定量检测,并检测其胎儿血、新生儿血或胚胎绒毛中HCMV DNA含量.结果 胎儿发生宫内感染及妊娠不良结局与孕妇血中HCMV DNA含量有关,发生胎儿宫内感染的孕妇,其HCMV DNA含量达到105copies/mL以上,且随着血中HCMV DNA含量的增高,感染率呈显著增高趋势.结论 孕妇血中HCMV DNA含量升高是胎儿宫内HCMV感染及发生妊娠不良结局的重要因素之一,当孕妇血中病毒含量>105copies/mL时,其病毒含量可作为导致胎儿宫内感染的参考阈值.     

定量PCR监测骨髓移植患者人巨细胞病毒感染

目的用定量PCR方法监测骨髓移植患者中人巨细胞病毒(human cytomegalovirus, HCMV)活动性感染. 方法用双标记探针水解的荧光定量PCR方法,检测4例骨髓移植患者移植前、后随访的血标本140份(其中血浆与外周血多形核细胞各50%)中HCMV DNA拷贝数,并作动态分析.血浆标本中HCMV DVA的检出与HCMV IgG和IgM作平行比较. 结果 4例患者除病例4外,均在术后30～50d间HCMV DNA拷贝数增加,同一时间外周血多形核细胞中HCMV DNA的拷贝数高于血浆.当给予适量更昔洛韦,则能抑制其继续升高.4例患者血清中HCMV IgM始终呈阴性,IgG始终呈阳性. 结论荧光定量PCR方法是用以监测骨髓移植患者中HCMV活动情况、指导临床适时用药的一种快速有效的方法.     

PCR法与荧光定量PCR法在人巨细胞病毒检测中的作用比较

目的 比较常规PCR法与荧光定量RCR（RQ-PCR）法在人巨细胞病毒（HCMV）检测中的作用,寻找更适合于HCMV检测的方法。方法 构建携带CMV-DNA的标准质粒,利用常规PCR技术及FQ-PCR技术分别对不同稀释度的标准质粒进行检测。结果 FQ-PCR法对HCMV,标准质粒检测的灵敏度及线性范围均显著高于常规RCR法。结论 RCP法比常规PCR法更适合HCMV病毒的检测。     

聚合酶链反应检测人巨细胞病毒感染的研究近况

聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaclion,PCR)已广泛用于人巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus,HCMV)感染的诊断、预测HCMV病的发生、HCMV的免疫学研究,监测抗病毒治疗     

婴幼儿人巨细胞病毒感染154例PCR与ELISA检测比较

目的:探讨采用不同的定量方法及不同的标本检测婴幼儿人巨细胞病毒(HCMV)感染阳性率。方法:采用荧光定量PCR法和ELISA定量法分别对154例疑感染HCMV住院患儿进行HCMV DNA和HCMV IgM抗体的定量检测,其中对73例患儿的血及尿标本同时进行HCMV DNA的检测。结果:血和尿HCMV DNA同时检测,尿检出率明显高于血;血和尿HCMVDNA检出率明显高于血清HCMV IgM;两种方法的联合检测进一步提高阳性率。结论:两种方法同时检测可提高HCMV的检出率;尿标本HCMV DNA的检出率明显高于血标本,采用尿标本更方便,且阳性率高。     

胶质瘤组织中人类巨细胞病毒的感染研究

目的 探讨人类巨细胞病毒(HCMV)在胶质瘤组织中的表达,为阐述HCMV感染在胶质瘤发病中的作用提供依据.方法 以HCMV糖蛋白B(UL55)基因设计引物,对62例不同级别星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤组织和7例外伤脑组织DNA进行巢式PCR检测.结果 62例中58例检测出HCMV基因片段,7例正常脑组织未检测出HCMV基因片段.结论 星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤患者存在HCMV感染,HCMV感染可能在胶质瘤发生、发展中起作用.     

聚合酶链反应检测患儿尿标本中的巨细胞病毒DNA

本文建立了聚合酶链反应(PCR)检测人巨细胞病毒(HCMV)方法,探讨了该方法的某些实验条件。用PCR检测24例临床患儿尿标本。证明PCR方法特异、敏感、简便而快速。同科不同属病毒如HSV、EBV等以及人源正常细胞均无假阳性结果:最小检出量可达0.1fg DNA,相当于6个基因拷贝;用水浴箱手控时间即可进行PCR循环,30次循环仅需97min30s;PCR和DNA杂交检测尿标本中HCMV阳性例数分别为20和14例。该结果证明HCMV感染儿童的广泛性和严重性,初步表明儿童肾病综合症与HCMV有关。     

人类巨细胞病毒对人胚肺细胞HOX基因表达的影响

应用半定量RT PCR技术研究人胚肺 (HEL)细胞HOX基因的表达状态及人类巨细胞病毒 (HCMV)感染对HEL细胞HOX基因表达的影响。结果发现 :HEL细胞表达HOXB7基因 ;HCMV感染后 ,其表达上调 ;用全反式维甲酸 (ATRA)处理HEL细胞 ,HCMV对HOXB7基因表达的上调作用更强。提示HCMV可能通过影响HOXB7基因的表达导致胚胎发育畸形。 更多还原     

合肥地区人巨细胞病毒先天性感染的基因型分析

目的 了解合肥地区人巨细胞病毒(HCMV)先天性感染率,分析HCMV先天性感染病毒糖蛋白B(gB)基因型别.方法 采用巢式PCR检测160例新生儿脐血白细胞中的HCMV gB基因,利用限制性核酸内切酶 RsaⅠ和HinfⅠ分别对HCMV gB基因进行限制性片段长度多态性分析,进行DNA测序,构建进化树.结果 160例新...     

人巨细胞病毒感染与系统性红斑狼疮病情活动性的关联性研究

目的 探索人巨细胞病毒(HCMV)感染与系统性红斑狼疮(SLE)病情活动之间的关系.方法 采用病毒分离、聚合酶链式反应(PCR)检测HCMV UL54基因和间接免疫荧光试验(IFA)检测HCMV pp65抗原的方法,对49份SLE患者血白细胞标本进行HCMV分离鉴定,并结合临床资料分析HCMV感染与SLE病情活动的相关性.结果 49份SLE患者血白细胞标本中,HCMV病毒分离后出现典型细胞病变的有3份,经PCR和IFA联合检测鉴定阳性的有12份,阳性率为24.5%; Logistic回归分析显示,SLE活动期患者的HCMV感染率为38.5%,显著高于SLE非活动期患者8.7%的HCMV感染率(OR=8.7,95% CI:1.4～53.3,P=0.019).结论 HCMV感染与SLE病情活动呈现显著正相关.     

用多聚酶链反应方法检测IUD诱发出血的子宫内膜人巨细胞病毒感染的研究

用聚含酶链反应(PCR)技术检测73份置宫内节育器(IUD)诱发出血人群及50例置IUD后月经周期正常人群的子宫内膜病毒分离培养物中的HCMV—DNA,有9份为HCMV—DNA 阳性,其中8份是病毒分离阳性,用细胞学鉴定及单克隆抗体鉴定为HCMV,有1份为病毒分离阴性,而PCR检测为阳性.     

肝、肾移植术后受者人巨细胞病毒巢式PCR检测

目的 探讨巢式PCR（Nest PCR)检测器官移植术后受体人巨细胞病毒（HCMV）DNA，并与传统ELISA法作方法学对照。方法 巢式PCR针对HCMV AD169株IEA基因设计内外两对引物，对59例肝、肾移植术后受体（肝移植27例、肾移植32例）血、尿标本进行HCMV DNA检测。分离血清作ELISA检测IgG、IgM。结果 血液Nest PCR阳性率肝移植62.9%，肾移植46.8%；ELISA法阳性率：IgG35.5%,IgM27.1%,IgG IgM18.6%，IgM阳性标本（16例）DNA检测皆为阳性，6例IgG、IgM皆阴性标本DNA检测仍为阳性。结论 巢式PCR是一种敏感特异、简便快速诊断HCVM感染的方法，灵敏度及特异性高于传统ELISA，能弥补ELISA的假阴性，更适用于临床检测器官移植术后HCMV感染。     

人巨细胞病毒AD169株引起小鼠脑部畸形的初步探讨

目的：探讨人巨细胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)感染昆明小鼠的敏感性，建立HCMV致畸的动物模型。方法：昆明系小鼠40只，随机分为两组：对照组(8只)和接种病毒组(32只)，病毒感染途径为脑内注射。在接种病毒7，15，30，60d后不同时期分别以病理学方法观察动物脑部发育特点，以免疫组织化学方法检查病毒抗原，PCR方法检测动物脑组织中HCMV基因。结果：接种HCMV AD169株的小鼠脑组织在不同时期发生了病理改变和脑部发育畸形，用免疫组织化学方法和PCR方法在脑组织细胞内检获HCMV抗原和基因。结论：HCMV ADl69株可引起小鼠脑部发育畸形，这对研究HCMV感染致畸的机制提供了有价值的参考依据。