vWF、Fg基因多念性与冠心病血瘀证的相关性研究

目的:探讨vWF19内含子MspI、FgBβ基因启动区-148C/T多态性与冠心病血瘀证的关系.方法:将150例确诊为冠心病的患者分为血瘀证组100例、非血瘀证组50例,另抽取体检健康者50例作为健康对照组.采用聚合酶链-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对vWFMspI、FgBβ基因启动区-148C/T进行基因多态性分析.结果:与健康对照组相比,vWF内含子MspI基因型与等位基因分布频率在冠心病血瘀证组差异有统计学意义(P＜0.01),而在非血瘀证组的分布差异则无统计学意义(P＞0.05);在冠心病血瘀证与非血瘀证组间的分布差异亦无统计学意义(P＞0.05).M M基因型患冠心病血瘀证的OR值为2.970(1.470 ～6.000,P＜0.01),而患冠心病非血瘀证的OR值为2.077(0.934 ～4.615,P＞0.05);M-等位基因患冠心病血瘀证的相对危险度为1.888(1.082～3.296,P＜0.05).与健康对照组相比,FgBβ-148C/TT基因型与等位基因分布频率在冠心病血瘀证组差异有统计学意义(P＜0.05),而在非血瘀证组的分布差异则无统计学意义(P＞0.05);在冠心病血瘀证组与非血瘀证组间的分布差异亦无统计学意义(P＞0.05).TT基因型罹患冠心病血瘀证与冠心病非血瘀证的相对危险度分别为3.244、2.524,p值分别为0.033、0.137;而T等位基因罹患冠心病血瘀证组与非血瘀证的相对危险度分别为12.317、2.244,p值分别为0.000、0.015.结论:vWF基因MspI多态性中,M M基因型与M-等位基因与冠心病血瘀证发生相关,且可能为其独立危险因素;Fg基因-148多态性中,TT基因型与冠心病血瘀证发生相关,T等位基因可能与冠心病发生相关.     

MEF2A基因单核苷酸多态性与早发冠心病血瘀证的相关性研究

目的:探讨肌细胞增强因子2A(Myocyte Enhancer Factor 2a,MEF2A)基因单核苷酸多态性(SNP)与早发冠心病血瘀证的相关性。方法:从MEF2A基因选取2个SNP位点rs2033547和rs34851361,建立基于飞行时间质谱分析技术(TOF-MS)的方法,对收集的早发CHD血瘀证组21例,早发CHD非血瘀组30例,非"早发冠心病"血瘀组25例与健康对照组20例,检测各SNP位点的等位基因和基因分型,对比各组等位基因和各基因型频率,并比较各临床资料。结果:rs2033547、rs34851361都有A和T两种等位基因,包括AA、TT、AT 3种基因型;MEF2A基因多态性位点rs2033547的A等位基因在早发CHD血瘀证组,早发CHD非血瘀证组和非"早发CHD"血瘀证组均高于健康对照组,但差异尚无统计学意义(P>0.05),这可能与样本量不足有关。而MEF2A基因多态性位点rs34851361基因型和等位基因在4组间相似,无统计学意义(P>0.05),两两比较亦无统计学意义(P>0.05)。结论:MEF2A基因多态性位点rs2033547和rs34851361非早发冠心病的易感基因位点。     

冠心病血瘀证遗传相关的差异基因筛选及其功能路径分析

目的 探讨冠心病(coronary heart disease,CHD)血瘀证遗传相关的差异基因功能及目标通路。方法 以家系CHD血瘀证者(A组)及家系CHD非血瘀证者(B组)、家系非CHD血瘀证者(C组)、家系健康人(D组)、非家系CHD血瘀证者(E组)、非家系健康人(F组)为研究对象,应用基因芯片技术比较A组与B、C、D、E组,以及D组与F组的差异基因表达谱;通过基因本体论(gene ontology,GO)分析阐释差异基因的分子功能;通过BioCarta及KEGG网站寻找差异基因所在通路,应用超几何分布统计学方法分析筛选出有意义的目标通路,并用实时荧光定量RT PCR对差异基因进行验证。结果 (1)通过对基因芯片数据的筛选(差异倍数≥3),发现家系CHD血瘀证差异基因表达主要涉及趋化因子、白介素细胞因子、补体系统、基质金属蛋白酶系、成纤维细胞生长因子、内皮细胞黏附因子等。(2)通过相关差异基因(P<0.05)GO分析,找到与CHD血瘀证相关的差异基因的分子功能。(3)经过BioCarta及KEGG通路分析,发现家系CHD血瘀证与遗传相关的差异基因中差异有统计学意义(P<0.05)的目标通路主要涉及到炎症、斑块形成、内皮损伤等方面。经实时荧光定量RT-PCR反应验证了基因芯片准确可靠。结论 CHD血瘀证遗传相关的差异基因与炎症、斑块形成及血管内皮损伤密切相关。     

冠心病血瘀证基因表达谱的遗传异质性研究

目的探讨遗传因素在冠心病血瘀证基因表达谱的影响。方法通过Affymetrix human U133 Plus 2.0芯片检测冠心病血瘀证的基因表达谱,以FC筛选家系冠心病血瘀证和非家系冠心病血瘀证患者的差异基因表达谱,比较二者的差别,并进行GO和pathway的分析。结果若以FC2或FC0.5筛选,家系冠心病血瘀证的差异基因探针占95.88%(1815/1893),非家系冠心病血瘀证为96.31%(2035/2113);以FC3或FC1/3筛选,家系冠心病血瘀证为94.89%(650/685),非家系冠心病血瘀证为95.38%(723/758)。两组人群的异质性表达基因探针中有173个差异探针是相同的,只是表达的方向存在差异,即up或down的相反性。这些差异表达基因在GO和pathway中的分布近似,更说明了二者的差异所在。结论家系冠心病血瘀证的基因表达谱与非家系冠心病血瘀证的基因表达谱存在着明显差异。     

冠心病血瘀证的遗传流行病学研究

目的 探讨冠心病血瘀证的遗传特征.方法 运用病例对照的遗传流行病学家系调查方法,对冠心病血瘀证家系(观察组)1565例和冠心病非血瘀证家系(对照组)1553例进行分离比、遗传度、遗传模式及多基因遗传方式等遗传参数的计算分析.结果 观察组亲属冠心病血瘀证的患病率(5.24％)显著高于对照组(1.29％),差异有统计学意义(P＜0.05).观察组一级亲属分离比为0.1296,符合多基因遗传病的特点.观察组一级亲属遗传度为58.04％,二级亲属遗传度为54.80％,属中度遗传.观察组一级亲属遗传度为0.5804时,其理论发病率为8.00％,与实际发病率5.89％呈接近趋势;二级亲属的遗传度为0.5480时,其理论发病率为6.20％,与实际发病率4.13％呈接近趋势. 结论 冠心病血瘀证具有一定的家族聚集的倾向,其在家系中的分布符合多基因遗传特征.     

不同体质类型CHD心血瘀阻证患者ApoE基因多态性对血管内皮细胞功能的影响

目的：研究不同体质类型冠心病（CHD）心血瘀阻证患者的载脂蛋白E（ApoE）基因多态性分布及对血管内皮细胞功能的影响。方法：运用全序列基因测序法对556例冠心病心血瘀阻证患者进行ApoE基因分型,分析ApoE基因多态性与血管内皮细胞功能水平的关系。结果：各体质组的E3/3基因型频率明显低于健康组,E3/4频率明显高于健康组。另外气虚质E3/3高于血瘀质和阳虚质,而血瘀质和阳虚质的E3/4高于气虚质;血瘀、阳虚和气虚体质CHD心血瘀阻证患者各基因型组ET和ET/NO水平均高于健康组（P<0.05）,血瘀体质心血瘀阻证患者基因型组内,E3/4+E4/4基因型ET高于其它基因型（P<0.01）,阳虚和气虚体质CHD心血瘀阻证患者各基因型组内ET、NO、ET/NO水平无明显差异。结论：E3/4、E3/3ApoE基因型可能为CHD心血瘀阻证的易感基因型,在不同体质之间有一定差异;血瘀质冠心病心血瘀阻证患者携带E4等位基因的ApoE基因多态性可能具有“升高ET水平”的作用。     

早发冠心病血瘀证与血管紧张素转化酶基因单核苷酸多态性的相关性研究

目的探讨早发冠心病(coronary heart disease,CHD)血瘀证与血管紧张素转化酶(angiotensin converting enzyme,ACE)基因单核苷酸多态性的相关性。方法从ACE基因选取3个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)位点rs4343、rs4293和rs4267385,建立基于飞行时间质谱分析技术的方法,检测各SNP位点的等位基因和基因分型,对比各组等位基因和各基因型频率。结果ACE基因多态性位点rs4293、rs4267385的基因型相似,而ACE基因多态性位点rs4343基因型和等位基因的分布与健康对照组比较,Ⅰ、Ⅱ组差异有统计学意义(P0.05,P0.01),G等位基因频率高于与健康对照组(P0.05,P0.01);基因型频率的相对患病风险分析显示,ACE基因SNP位点rs4343基因型的G等位基因携带者(GG+AG)患早发CHD的风险是非G等位基因携带者的3.6倍(95%CI:1.224-1 0.585,P=0.02),经Logistic回归分析校正性别、年龄、TC、TG等风险因素之后,差异仍有统计学意义(OR=3.994,95%CI:1.230-12.974,P=0.021)。结论 ACE基因位点rs4343(G2350A)多态性可能是早发CHD发病的危险因素之一,但可能不是早发CHD血瘀证的易感因素。     

螺旋环螺旋结构域扩散激酶(CHUK)基因多态性影响缺血性中风痰瘀阻证血脂代谢

目的分析CHUK基因多态性与缺血性中风风痰瘀阻证及气虚血瘀证血脂水平的关联。方法共纳入341例风痰瘀阻证及284例气虚血瘀证缺血性中风病例。采用Sequenom Mass ARRAY i PLEX进行CHUK 3个位点(rs3808917,rs2230804,rs3808916)基因分型,运用HITACHI日立7600全自动生化分析仪测定血脂水平。结果在风痰瘀阻证患者中,TG(TG:F=3.125,P=0.045)、LDL-C(LDL-C:F=3.58,P=0.029)水平在不同rs3808917基因型携带者之间的分布差异均具有统计学意义。在气虚血瘀证患者中,TC、Tg,HDL-C、LDL-C水平在不同CHUK基因多态性基因型携带者之间、或在不同等位基因携带者之间的分布差异均无统计学意义(P0.050)。结论 CHUK基因遗传多态性可能影响缺血性中风痰瘀阻证的血脂代谢,但不影响气虚血瘀证的血脂水平。     

冠心病血瘀证差异表达基因及其启动子甲基化状态的初步研究

目的 探讨冠心病血瘀证差异表达基因及其启动子甲基化的情况.方法 以家系冠心病血瘀证患者14例为观察对象,家系健康人7例为对照,采用表达谱芯片检测冠心病血瘀证差异表达基因.再收集冠心病血瘀证患者16例和健康人7例,选择其中2个差异基因进行启动子区甲基化特异性PCR(MS-PCR)研究,初步分析冠心病血瘀证差异表达基因及其启动子甲基化状态.结果 表达谱芯片结果通过倍数变化值(FC)＞3或FC＜1/3、Call=P筛选,共获取差异表达基因26个,选择KLF5和LRP12基因进行MS-PCR,冠心病血瘀证与健康人各启动子甲基化率比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 冠心病血瘀证差异基因KLF5和LRP12的启动子甲基化状态和健康人比较无明显区别.     

黏附分子-1血清水平及基因多态性与冠心病痰瘀证候关系研究

目的：探讨冠心痛（CHD）痰瘀证候与黏附分子-1（ICAM-1）血清水平及其基因多态性的关系。方法：选择符合条件的CHD中医痰证、瘀证、痰瘀互结证患者共97例，另选35例健康者作对照组常规检测所有样本的ICAM-1血清水平，提取全血DNA，用聚合酶链式反应一限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）技术检测ICAM-1K469E基因型。结果：ICAM-1血清水平CHD组与对照组比较，差异有非常显著性意义（P〈0．01）．CHD组内痰证、痰瘀证组均较瘀证组高，差异有非常显著性意义（P〈0．01）。ICAM-1E等位基因患CHD风险是K等位基因的4．65倍。结论：ICAM-1可能是CHD独立预测因子之一，其血清水平升高与CHD痰瘀互结证、痰证关系密切；ICAM-1基因K469E多态性与广东地区汉族人CHD的危险性相关，其中E等位基因可能是CHD的一个遗传危险因素。     

冠心病血瘀证载脂蛋白E基因多态性与吸烟的交互作用关系探讨

冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)是严重危害人民健康的常见病和多发病,血瘀证是CHD最常见的证型之一。研究显示,CHD是遗传因素与环境因素共同作用的复杂性疾病,国内外已经开始研究CHD基因-环境的交互作用对CHD发生的影响。本文对国内外相关文献进行分析和总结,探讨载脂蛋白E基因多态性、吸烟的交互作用与CHD的关系,为CHD血瘀证基因-环境交互作用的深入研究提供参考。     

冠心病伴抑郁发作血瘀证/痰浊证的相关基因多态性研究

目的:探讨冠心病伴抑郁发作血瘀证和痰浊证与5-HTTLPR、GNβ3C825T、α-ADDUCINGly460Trp基因多态性的关系。方法:选择冠心病伴抑郁发作患者血瘀证115例,痰浊证120例,健康对照者148例,运用多聚酶链式反应技术(PCR)以及限制性内切酶方法检测5-HTT启动子区(5-HTTLPR),GNβ3C825T及ADDUCING460W3种基因多态性,并分析各基因型和等位基因在不同组中的分布频率,并与健康人对照组比较。结果:痰浊证组GNβ3825T等位基因频率与健康人对照组比较分布差异有显著性(χ2=4.568,P=0.033);血瘀证组ADDUCIN460WW基因型和W等位基因分布频率均明显高于健康人对照组,差异有显著性(χ2=12.29,P=0.002;χ2=13.159,P=0.001)。结论:GNβ3C825T可能与冠心病伴抑郁发作痰浊证的遗传机制相关,ADDUCING460W可能是冠心病伴抑郁发作血瘀证的易感基因。     

家系冠心病血瘀证差异基因的研究分析

目的探讨冠心病血瘀证家系差异基因的功能及目标通路。方法应用Affymetrix公司的Human Genome U133 Plus2.0芯片检测家系冠心病血瘀证组(A组)、家系冠心病非血瘀证组(B组)、家系非冠心病血瘀证组(C组)、家系健康人组(D组)的基因表达谱,通过基因本体论(Gene Ontology,GO)分析基因功能;通过Biocarta及KEGG通路找到每一个差异基因所在通路。结果家系冠心病血瘀证差异基因主要以炎症因子为主。当P0.05时研究发现,家系冠心病血瘀证的差异基因表达主要涉及到如下几类基因系的表达改变;1趋化因子;2白介素细胞因子;3基质金属蛋白酶MMPs系;4成纤维细胞生长因子。结论家系冠心病血瘀证相关差异基因,主要涉及到炎症、斑块形成、内皮损伤方面。     

冠心病血瘀证患者血管紧张素转换酶基因多态性的检测分析

目的探讨血管紧张素转换酶（ACE）基因多态性与冠心病（CHD）心血瘀阻证候及血管紧张素Ⅱ（AgⅡ）的相关关系。方法检测CHD心血瘀阻证组、CHD非心血瘀阻证组、非CHD心血瘀阻证组和健康人对照组ACE基因型（DD、ID、II和等位基因（D、I）及AgⅡ活性。结果CHD心血瘀阻证组DD基因型和D等位基因的频率显著高于其他3组；4组中ACE基因DD型的AgⅡ活性比ACE基因Ⅱ型显著增高（P＜0．05或P＜0．01）；CHD心血瘀阻证组ACE基因DD型亦较ID基因型患者的AgⅡ活性显著增高（均P＜0．01）。两个心血瘀阻证组3个基因型的AgⅡ活性均明显高于健康人对照组（P＜0．01）。结论提示ACE—DD基因型和D等位基因的频率增高可能与CHD心血瘀阻证有一定内在联系，可能与D等位基因导致AgⅡ异常增多有关。     

冠心病中医证型与GNB3基因C825T多态性的关联性分析

目的:探讨冠心病(CHD)中医证型中的血瘀证、痰浊证、非痰非瘀证与G蛋白β3亚单位基因多态性发病和病情程度的相关性。方法:用PCR方法检测22例血瘀证、23例痰浊证、22例非血瘀证冠心病患者及20名正常人的GNB3基因型,同时检测血压、血脂、体重指数等指标。结果:冠心病痰浊证、血瘀证与GNB3基因825TT基因型相关,与其它证型及健康人对照组比较差异显著(P<0.05);痰浊证与血瘀证比较,痰浊证TT基因型携带率高于血瘀型,但是两者比较无统计学差异(P>0.05)。结论:GNB3基因825TT基因型可能是冠心病血瘀证、痰浊证的易感基因。     

ApoE血清水平及基因多态性与冠心病痰瘀证候关系的研究

目的：从基因多态性角度探讨冠心病（CHD）痰瘀证的实质。方法：将97例冠心病患者分为痰证组、瘀证组、痰瘀讧组；另设体检健康人群对照组35例。应用聚合酶连反应-限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）核苷酸分型技术检测冠心痛痰瘀证ApoE的基因型。结果：CHD组与对照组ApoE血清水平比较，差异有非常显著性意义（P〈0．01）；CHD组各证型ApoE血清水平均明显高于对照组，差异有非常显著性意义（P〈0．01）：各证型比较，痰瘀证组较其他2证型高，差异有非常显著性意义（P〈0．01），瘀证亦高于痰证，差异有显著性意义（P〈0．05）。E3／4基因型和E4等位基因频率在痰证患者中明显高于痰瘀证及瘀证患者（P〈0．05），而E3／3基因型及E3等位基因在痰瘀证及瘀证患者中的频率则明显高于痰证患者（P〈0．05）。结论：ApoE第4外显子的基因型及等位基因频率在冠心病不同中医证候中的分布有明显差异，变异等位基因E4携带者更倾向于发生疾证，表明E4等位基因，特别是E3／4基因型可能是CHD及中医痰证的主要易感基因之一。     

激素性股骨头坏死中医证候与载脂蛋白B基因多态性的关联

目的:探讨载脂蛋白B(apolipoprotein B,Apo B)基因的单核苷酸多态性(single-nucleotide polymorphism,SNP)与激素性股骨头坏死中医证候的关联。方法:运用聚合酶链反应-连接酶检测技术,检测63例激素性股骨头坏死患者ApoB基因C7623T和G12619A位点的多态性,分析其基因型和等位基因频率的分布以及这两个位点SNPs与激素性股骨头坏死中医证候之间的关联。结果:ApoBC7623T的TT基因型和T等位基因在筋脉瘀滞证出现的频率高于肝肾亏损证(P0.05);ApoBG12619A位点的SNPs与激素性股骨头坏死中医证型之间无显著性的关联(P0.05);ApoBC7623T与G12619A位点等位基因与激素性股骨头坏死之间的连锁不平衡有显著性的关联(P0.01)。结论:ApoBC7623T位点TT基因型和T等位基因可能与激素性股骨头坏死患者形成筋脉瘀滞证相关。     

3个家系的血瘀证背景探讨

目的通过以3个家系图为中心调查,并用血瘀证量表评分结果探讨有家系背景的血瘀证先天或遗传倾向。方法采用王阶等编制的血瘀证量表对家系中的成员进行评分,并重点探讨在3个家系6个成员(2对双生子和异父同母2个子女)中的血瘀证症状因子出现频率。结果分别来自3个家系(冠心病家系、糖尿病家系和异父同母家系)中的2对双生子和异父同母2个子女血瘀证评分分别为49,65,21,50,28和29分,均达到血瘀证的诊断标准。出现频率较大的血瘀证症状因子是舌质紫暗(83.33%)、有固定性疼痛(83.33%)、手足麻木(83.33%)、舌下静脉曲张(66.67%)。结论3个家系中的血瘀证亲属关系密切,而且透露某种先天遗传倾向。家系研究是研究中医证候的一种高度集约化材料,因此有着较好的发展前景。     

核心蛋白聚糖基因rs7441多态性与缺血性脑卒中痰瘀证、冠心病痰瘀证的遗传关联分析

目的旨在探讨核心蛋白聚糖(decorin,DCN)基因rs7441多态性与缺血性脑卒中(ischemic stroke,IS)痰瘀证、冠心病(coronary atherosclerotic heart disease,CHD)痰瘀证的遗传关联。方法纳入IS痰瘀证患者、CHD痰瘀证患者、对照组各550例,运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测DCN基因mRNA外周血表达水平,采用Sequenom MassARRAY技术进行基因分型,通过PLINK、SPSS软件进行统计分析。结果①DCN基因在IS痰瘀证患者、CHD痰瘀证患者外周血中的mRNA表达水平均显著低于对照组(均P<0.001)。②DCN基因外周血mRNA表达水平与IS痰瘀证患者的空腹血糖(FPG)、活化部分凝血酶原时间(APTT)、国际标准化比值(INR)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶原时间活动度(PTA)的相关性均具有统计学意义(均P<0.05),与CHD患者收缩压(SBP)、舒张压(DBP)也显著相关(均P<0.050)。③DCN基因rs7441多态性与IS痰瘀证、CHD痰淤证的发生风险的关联无统计学意义(均P>0.050)。④DCN基因rs7441多态性与IS痰瘀证患者的血清载脂蛋白B(APO-B)(加性模型:Padj=0.006)、低密度脂蛋白(LDL)(加性模型:Padj=0.029)水平显著相关,rs7441多态性与CHD痰瘀证患者的国际标准化比值(INR)显著关联(加性模型:Padj=0.018)。结论DCN基因mRNA表达水平可能参与IS痰瘀证、CHD痰瘀证的发生,rs7441多态性可能影响IS痰瘀证患者的血脂代谢、CHD痰瘀证患者的凝血功能。     

冠心病血瘀证血浆代谢组学研究

目的 采用气相色谱(GC)-质谱(MS)联用技术,寻找冠心病(CHD)血瘀证患者内源性代谢分子标记物.方法 收集CHD血瘀证患者48例、CHD非血瘀证患者52例及健康对照组40例,运用GC-MS联用技术检测各组受试者血浆代谢产物,对代谢物定性分析后,分别采用单变量t检验和多变量蒙特卡罗树法(MCTree)对各组代谢物含量进行比较.结果 各组受试者血浆内源性代谢物种类无差别,总计46种.定量单变量t检验结果显示,CHD患者与健康对照组比较,有32种代谢物含量差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);CHD血瘀证组与CHD非血瘀证组比较,胆固醇含量升高,木糖醇含量降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).MCTree结果显示,健康对照组与CHD患者血浆代谢物完全分离,对二者分离贡献最大是L-缬氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-丝氨酸,且含量较健康对照组明显降低;血瘀证与非血瘀证之间有明显分离趋势,44种物质对分类有显著影响.结论 血浆GS-MS代谢图谱能有效的从健康人中区分出冠心病患者、从冠心病患者中区分出血瘀证患者,这些含量存在差异和对分类有贡献的物质可能是CHD血瘀证诊断和辨证的潜在代谢标记物和客观指标.