纤维黏连蛋白碎片增加整合素α5 β1在髓核细胞表达的研究

目的 探讨纤维黏连蛋白碎片对整合素α5和β1亚基在兔间盘髓核细胞上表达的影响.方法 体外分离和培养兔间盘髓核细胞,在培养液中加入纤维黏连蛋白碎片,通过免疫印迹技术、免疫荧光技术及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,检测整合素α5和β1亚基的表达情况,同时比较Ⅱ型胶原蛋白、基质金属蛋白酶9和13(MMP9,13)的表达.结果 加入纤维黏连蛋白碎片后,髓核细胞的整合素α5和β1亚基表达明显增加,而Ⅱ型胶原蛋白表达下降,MMP9和MMP13的表达增加.结论 纤维黏连蛋白碎片可以诱导髓核细胞退变,同时可以增加整合素α5和β1亚基的表达.     

种植于硅橡胶膜上的大鼠纤维环细胞的表型特征研究

目的:比较种植于硅橡胶膜或塑料培养板的大鼠纤维环细胞的表型特征. 方法:利用倒置相差显微镜及透射电镜观察种植于不同基质的大鼠纤维环细胞形态的变化;利用甲苯胺蓝染色观检测蛋白多糖的表达情况;通过RT-PCR法检测Ⅰ,Ⅱ型胶原及聚集蛋白聚糖mRNA的表达情况;采用流式细胞术观察细胞表面整合素β1的表达情况;同时检测了纤维环细胞在硅橡胶膜上的黏附情况. 结果:种植于不同基质的纤维环细胞形态学观察无明显差别;在两种基质上的纤维环细胞甲苯胺蓝染色无差异;Ⅰ,Ⅱ型胶原及聚集蛋白聚糖mRNA及细胞膜整合素β1的表达亦无明显差异;纤维环细胞可以黏附于硅橡胶膜上生长. 结论:种植于硅橡胶膜上的纤维环细胞表型特征无改变,为进一步研究力学刺激对纤维环细胞的影响提供实验基础.     

硬皮病皮损成纤维细胞整合素表达的免疫电镜观察*

目的：研究硬皮病皮损成纤维细胞整合素表达及细胞超微结构特征。方法：将培养的硬皮病皮损成纤维细胞置包被纤维粘连蛋白的培养瓶中作粘附培养,运用间接免疫胶体金技术在电镜下观察成纤维细胞表面整合素α5,β1亚基表达、分布特征及细胞超微结构变化。结果：硬皮病皮损成纤维细胞整合素α5,β1亚基表达均较正常成纤维细胞显著增加（P<0.01）,并呈簇集分布的特征;细胞内骨架成分微丝密集成束。结论：整合素α5,β1介导的纤维粘连蛋白与成纤维细胞相互作用在硬皮病时增强。     

整合素β3亚基真核表达载体的构建及αvβ3的表达

目的：构建人整合素β3亚基真核表达载体，并探讨如何使人整合素αvβ3在CHO细胞表面有效表达．方法：构建编码人整合素β3真核表达载体pcDNA3．1-β3；将其与编码人整合素αv亚基真核表达载体分别及共转染至中国仓鼠卵巢(China hamster ovary，CHO)细胞中进行表达；采用间接免疫荧光法(IFA)检测外源基因的表达．结果：共转染组目的蛋白呈高效的细胞膜表达；pcDNA3．1-β3单独转染组β3亚基细胞膜表达较共转染组弱；而pcDNA3-αv单独转染组则未见有效的细胞膜表达．结论：人整合素αvβ3在CH0细胞表面的有效表达需要2个亚基共同参与。     

整合素α5β1在苯妥英钠促进大鼠PDLSCs和BMMSCs黏附于牙骨质中的作用

目的 探讨在苯妥英钠(Phenytoin,PHT)促进大鼠牙周膜干细胞(Rat periodontal ligament stem cells,rPDLSCs)、大鼠骨髓间充质干细胞(Rat Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,rBMMSCs)黏附于牙骨质过程中,整合素α5β1(Integrin α5β1)起到的作用。方法 提取大鼠BMMSCs和PDLSCs,培养并纯化。通过细胞鉴定后,将获得的两种细胞各分为4组:40 mg/L PHT处理组、40 mg/L PHT+整合素α5抗体处理组、40 mg/L PHT+整合素β1抗体处理组、PBS处理组,每组细胞放入置有牙骨质片的96孔板处理4 h后,检测黏附于牙骨质片上的细胞量并做以比较。最后,利用qRT-PCR和Western blot检测40 mg/L PHT组与对照组细胞的整合素α5、β1亚基的mRNA与蛋白表达量。结果 40 mg/L PHT可促进rBMMSCs及rPDLSCs黏附于牙骨质片,加入整合素α5、β1抗体后,均明显抑制了40 mg/L PHT对rBMMSCs、rPDLSCs黏附于牙骨质的促进作用(P＜0.01)。qRT-PCR、Western-blot结果显示PHT处理组的整合素α5、β1亚基表达量高于空白对照组(P＜0.05)。结论 40 mg/L PHT能促进rBMMSCs、rPDLSCs黏附于牙骨质,该作用与整合素α5β1的表达上调密切相关。     

整合素α5亚基及纤维粘连蛋白与肺腺癌细胞凋亡关系的实验研究

目的探讨整合素α5亚基及纤维粘连蛋白与人肺腺癌A549细胞凋亡之间的关系.方法无血清培养,以抗整合素α5亚基单克隆抗体(SAM-1)封闭A549细胞表面的整合素α5亚基,阻断其与纤维粘连蛋白的粘附作用.结果SAM-1封闭整合素α5亚基后细胞凋亡明显增强.各实验组AI值与对照组相比差异有显著性意义(P＜0.01),在一定范围内,呈剂量、时间依赖关系.结论整合素α5亚基与纤维粘连蛋白可能抑制体外无血清培养诱导的A549细胞的凋亡.     

电针对颈椎病模型大鼠椎间盘细胞Wnt1、GSK-3β蛋白的影响

目的 观察电针“大椎穴”对颈椎病模型大鼠椎间盘纤维环细胞Wnt1蛋白、糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)的影响,并初步探讨电针对颈椎间盘退变调控及抑制纤维环细胞凋亡的机制.方法 选用SPF级SD大鼠40只,随机分成空白组、模型组、电针组、美洛昔康组,采用Western blot法检测颈椎间盘的纤维环细胞Wnt1、GSK-3β蛋白的表达水平的改变.结果 模型组与空白组比较差异有统计学意义(P＜0.05);电针组、美洛昔康组与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05).电针可增加颈椎间盘纤维环细胞的阳性表达,显著上调Wnt1、GSK-3β蛋白表达的水平.结论 电针“大椎穴”可能是通过调节经典的Wnt/β-catenin信号通路中关键因子Wnt1蛋白、GSK-3β蛋白的表达来抑制颈椎病模型大鼠的椎间盘纤维环细胞凋亡.     

炎性细胞因子对大鼠小胶质细胞整合素表达的影响

目的 探讨炎性细胞因子对大鼠小胶质细胞整合素表达的影响.方法 体外分离培养和纯化大鼠小胶质细胞,在无血清培养基培养加入不同的炎性细胞因子,应用流式细胞术检测炎性细胞因子对大鼠小胶质细胞MHC I类分子和整合素表达的影响.结果 在培养基中加入TNF、IFN-α和IFN-γ后,大鼠小胶质细胞MHC I类分子的表达较对照组均显著增加(P＜0.001);小胶质细胞α4亚基的表达较对照组分别增加(37.0%±4.1%)(P＜0.01)、(56.3%±5.3%)(P＜0.005)和(54.0%±6.1%)(P＜0.01);Mac-1(即αMβ 2)表达较对照组分别增加(34.3%±3.4%)(P＜0.01).(43.3%±5.9%)(P＜0.05)和(46.0%±3.1%)(P＜0.05).在培养基中加入TGF-β1后,MHC I类分子的表达相对于对照组显著下降(P＜0.001);小胶质细胞α4亚基的表达较对照组下降显著(P＜0.005);Mac-1较对照组下降(28.0%+5.0%)(P＜0.05).在培养基中加入TGF-β1、TNF、IFN-α和IFN-γ后,LFA-1(即αLβ2)表达均显著增加(P＜0.01).在培养基中联合加入TNF+TGF-β1、IFN-α+TGF-β1、IFN-γ+TGF-β1后,LFA-1(即αLβ2)表达均增加(P＜0.001).结论 炎性细胞因子TNF、IFN-α和IFN-γ可以促进小胺质细胞的活化,促进小肢质细胞表达α4αβ1,和Mac-1.而TGF-β1抑制小胺质细胞活化,抑制小胶质细胞表达α4β1和Mac-1.并且TGF-β1的抑制作用强于TNF、IFN-α的促进作用.炎性细胞因子(TGF-β1、TNF、IFN-α和IFN-γ)均可上调LFA-1的表达.     

整合素α5β1与大鼠肝纤维化发生的实验研究

[目的]肝星状细胞（HSC）活化是肝纤维化的病理基础，本研究旨在探讨整合素受体在HSC活化及肝纤维化过程中的作用。[方法]制作大鼠肝硬化模型，同时进行体外细胞株HSC—T6实验。用免疫组化法观察仅平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、整合素α5β1及纤维连接蛋白（FN）的表达。HSC细胞株在FN包被的皿上培养，测定细胞活化、α-SMA、整合素α5β1蛋白表达。[结果]（1）模型组肝组织FN、α-SMA和α5β1蛋白表达增多。（2）FN包被明星促进HSC—T6的活化、α—SMA及α5β1的表达。[结论]FN促进整合素α5β1表达是活化HSC、促进肝纤维化的重要途径。     

高糖对大鼠GMC表面β1整合素表达和ECM分泌的影响

目的观察高糖对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)表面β1整合素表达和细胞外基质(ECM)分泌的影响.方法应用不同浓度的葡萄糖刺激培养GMC,采用MTT法检测细胞增殖,RT PCR法检测GMC表面β1整合素的表达,ELISA法检测纤维连接蛋白(FN)、层粘蛋白(LM)的分泌情况.结果高糖抑制GMC的增殖,促进β1整合素的表达,且与FN和LM的分泌呈显著正相关,并具有浓度依赖性.结论高血糖作为糖尿病肾病的启动因素可能是通过上调β1整合素mRNA的表达,从而促进ECM成分FN和LM的合成分泌.     

整合素αv、β1亚基在人脑星形细胞瘤的表达特征

目的探索整合素αv、β1亚基在人脑星形细胞瘤中的表达情况。方法采用免疫组织化学方法SP检测42例人脑星形细胞瘤标本中整合素αv、β1亚基的表达情况。结果在人脑星形细胞瘤标本中,整合素各亚基阳性染色主要定位于肿瘤细胞和部分血管内皮细胞,整合素αv、β1亚基的阳性染色强度随着肿瘤级别的增高而显著增高,高级别组与低级别组之间的阳性表达差异有统计学意义（P〈0．05）,二者的表达水平呈正相关（P〈0．01）。结论整合素αv、β1亚基的表达强度参与人脑星形细胞瘤恶性行为的调控,同时二者在表达上存在相关性作用。     

静脉移植物中整合素α5β1的表达及其与再狭窄的关系

目的 检测人静脉移植物中整合素α5β1的表达.方法 应用免疫荧光组织化学技术对30个静脉移植物再狭窄标本中整合素α5β1和α-smooth muscle actin(α-SMA)的表达进行了检测,用激光共聚焦显微镜拍片,图片用SiliconGraphics Octane进行处理.结果 在正常静脉血管中,整合素α5β1在中膜平滑肌细胞和内皮细胞呈微弱表达;α-SMA在中膜平滑肌细胞表达;在病变静脉血管,整合素α5β1在中膜平滑肌细胞、内膜内皮细胞中的表达呈强阳性,在内膜平滑肌细胞中也有弱表达.α-SMA除在中膜平滑肌细胞表达外,在内膜平滑肌细胞也有表达.结论 静脉移植物整合素α5β1在中膜平滑肌细胞、内膜内皮细胞表达显著上调,提示整合素α5β1参与静脉移植物再狭窄的形成.     

整合素-β1在转化生长因子-β2诱导晶状体上皮细胞转化中的作用

目的探讨整合素-β1(integrinβ1)在转化生长因子-β2(TGF-β2)体外诱导晶状体上皮细胞(HLECs)向肌成纤维细胞转化中的作用。方法体外培养的HLECs,选择传3代的细胞进行实验,以TGF-β2作为诱导剂。免疫荧光方法检测HLECs integrinβ1、E-cadherin、α-SMA和F-actin的表达,RT-PCR方法检测E-cadherin和α-SMAmRNA的表达。其中部分细胞预先加入去整合素kistrin孵育1h,再加入TGF-β2刺激细胞48h。结果 TGF-β2处理晶状体上皮细胞后,integrinβ1、α-SMA和F-actin的表达明显增强,细胞E-cadherin表达明显减弱。加入去整合素kistrin后,细胞α-SMA和F-actin的表达明显减弱,细胞E-cadherin表达明显增强。结论 TGF-β2诱导了HLECs转分化,整合素-β1参与了TGF-β2诱导的HLECs向肌成纤维细胞的转化过程。     

整合素αvβ3对大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖影响的实验研究

目的 研究整合素αvβ3对大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖的影响,为以整合素αvβ3为靶点治疗脑胶质瘤提供实验依据.方法 采用MTT比色法和SABC免疫组化检测法,观察不同浓度的整合素αvβ3抗体对体外培养的大鼠C6脑胶质瘤细胞增殖的抑制作用和对增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响.结果 整合素αvβ3抗体对体外培养的大鼠C6脑胶质瘤细胞的增殖和PCNA表达有明显的抑制作用,其作用表现出明显的量效关系(P＜0.05).结论 整合素αvβ3对脑胶质瘤细胞的恶性增殖具有促进作用,而整合素αvβ3抗体对其有明显抑制作用,为抗整合素αvβ3治疗脑胶质瘤提供了实验依据和理论依据.     

Gi蛋白真核表达载体的构建及表达检测

目的:克隆抑制腺苷酸环化酶G蛋白(Gi蛋白)3个亚基α、β和γ基因,构建pEYFP-N-Giα1和pECFP-C-Giβ1-γ2真核表达载体,完成其在真核细胞中的表达检测.方法:培养肝癌细胞HepG2,提取总RNA后反转录成cDNA,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增α、β和γ的编码基因,在α亚基两端添加酶切位点,在β和γ亚基两端分别添加酶切位点和连接肽,经酶切和连接得到Giα1和Giβ1-γ2,再将Giα1和Giβ1-γ2基因分别构建到荧光蛋白报告载体pEYFP-N1和pECFP-C1中,利用脂质体法将真核表达载体转染到肝癌细胞中,激光共聚焦显微镜观察分析其表达活性.结果:PCR扩增获得Gi蛋白α、β和γ亚基的编码基因,在两端添加酶切位点和连接肽后获得的Giα1和Giβ1-γ2基因,成功构建了pEYFP-N-Giα1和pECFP-C-Giβ1-γ2真核表达载体,并在肝癌细胞中实现其真核细胞表达.结论:成功构建Gi蛋白的真核表达载体,并鉴定其在活细胞中具有表达活性.     

维拉帕米对瘢痕成纤维细胞β1、α1-4整合素表达的影响

目的：了解维拉帕米对瘢痕成纤维细胞表达β1、α1-4整合素的影响，并从整合素功能角度探讨其抗瘢痕增生挛缩作用机制。方法：瘢痕成纤维细胞体外培养，利用原位ELISA技术检测瘢痕成纤维细胞在维拉帕米作用下后表达整合素的水平。结果：不同浓度的维拉帕米对瘢痕成纤维细胞膜上的β1、α1-4整合素粘附分子表达均有着不同程度的抑制作用，其中对β1、α1、α2、α3和α4整合素的最大抑制作用浓度分别达21.01%、27.47%、11.44%、30.77%和29.60%；另外，瘢痕成纤维细胞在低浓度维拉帕米作用时对其细胞形态无明显影响，而当维拉帕米浓度超过50ug/ml时，可造成细胞体积缩小、间隙增大。结论：维拉帕米对瘢痕成纤维细胞β1、α2、α3和α4整合素表达有较为显著的抑制作用；通过抑制细胞整合素粘附分子表达不但对细胞的生物学活性有一定影响，而且对细胞与细胞外间质之间的收缩动力传导起阻滞作用。由此提示，维拉帕米具有良好的抗瘢痕增生挛缩作用。值得进一步研究探讨。     

瘢痕成纤细胞整合素表达实验研究

目的：了解在体外培养的瘢痛及正常皮肤来源的成纤维细胞整合素表达情况。方法：应用β１及α１￣α４整合素单克隆抗体对成纤维细胞进行整合素原侠ＥＬＩＳＡ检测，观察不同培养时期瘢痛成纤维细胞的β１及α１￣α４整合素表达水平，辅以正常皮肤成纤维对细胞做对照。结果：培养的瘢痛成纤维细胞整合素各亚型表达均明显高于同期培养的正常皮肤成纤维细胞表达水平（Ｐ〈０．０１）；细胞经较长时间培养后，整合素的表达均有所下降，     

多西紫杉醇对人非小细胞肺癌细胞株A549生长的影响及机制的体外研究

目的:探讨多西紫杉醇诱导肺癌细胞株A549细胞的生长抑制作用及其对凋亡相关基因表达的影响.方法:采用MTT法测定细胞增殖抑制率,在显微镜下观察细胞凋亡的形态特点,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)法测定整合素α5β1,bcl-2,bax等凋亡相关基因mRNA的表达.结果:(1)多西紫杉醇在1.33～108μ/ml浓度范围内可抑制A549细胞增殖,且此作用与药物浓度、作用时间呈明显相关关系(r=0.947、0.979,P=0.014、0.004).(2)4～36μg/ml多西紫杉醇作用12～48 h,A549细胞可见典型的凋亡形态学改变,且A549细胞凋亡率随药物浓度增加而升高,呈浓度依赖性(r=0.999,P=0.034).(3)RT-PCR结果显示,多西紫杉醇可明显抑制A549细胞中表达α5,整合素亚基基因,使其bcl2/bax比值明显降低,差异均有统计意义(t=10.147、4.583,P=0.01、0.044).但多西紫杉醇对A549细胞表达VEGF、bFGF、β1整合素亚基基因无明显影响(P＞0.05).结论:多西紫杉醇可抑制A549细胞增殖,诱导A549细胞凋亡,其机制是通过抑制Bcl-2/Bax表达比例诱导其凋亡,并可能抑制整合素α5β1表达而影响A549细胞的增殖、黏附,以及转移能力.     

整合素α5β1和纤维连接蛋白在大肠癌中的表达及其意义

目的　研究纤维连接蛋白、整合素α5β1 在大肠癌及癌旁组织中的表达与肿瘤细胞分化、转移等生物学行为的关系。方法　用免疫组化EV二步法检测 81例大肠癌及相应癌旁组织石蜡标本纤维连接蛋白和整合素α5β1 的表达情况。结果　在 81例大肠癌组织中纤维连接蛋白及整合素α5β1 表达量与相应的癌旁组织相比差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,大肠癌细胞中纤维连接蛋白及整合素α5β1 的表达量明显升高。低分化大肠癌组织中整合素α5β1 的表达量高于高分化大肠癌 ,其差异有显著性 (P <0 0 5 )。整合素α5β1 在大肠癌的表达与淋巴结转移无相关性 (P >0 0 5 )。纤维连接蛋白在大肠癌癌细胞中的表达与大肠癌癌细胞的分化程度及淋巴结转移无相关性 (P >0 0 5 )。结论　整合素α5β1 的表达与大肠癌癌变及癌细胞的分化关系较密切 ,与癌组织发生淋巴结转移的关系不明显。纤维连接蛋白的表达与大肠癌癌变关系较密切 ,而与癌细胞分化及是否发生淋巴结转移的关系不明显。提示纤维连接蛋白与其受体整合素α5β1 在大肠癌癌变中的作用值得进一步的研究。     

糖尿病大鼠肾组织足细胞数和整合素αvβ3表达的变化

目的 观察糖尿病大鼠肾小球足细胞数和整合素αvβ3表达的变化,探讨肾小球足细胞数及整合素αvβ3与糖尿病肾病(DN)的关系.方法 链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病大鼠模型,分为对照组(n=10)和实验组(n=14).造模6周后,透射电镜下观察肾脏超微结构变化.采用免疫组化法检测肾脏上皮细胞整合素αvβ3的表达.结果 与对...