多西紫杉醇对人非小细胞肺癌细胞株A549生长的影响及机制的体外研究

目的:探讨多西紫杉醇诱导肺癌细胞株A549细胞的生长抑制作用及其对凋亡相关基因表达的影响.方法:采用MTT法测定细胞增殖抑制率,在显微镜下观察细胞凋亡的形态特点,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)法测定整合素α5β1,bcl-2,bax等凋亡相关基因mRNA的表达.结果:(1)多西紫杉醇在1.33～108μ/ml浓度范围内可抑制A549细胞增殖,且此作用与药物浓度、作用时间呈明显相关关系(r=0.947、0.979,P=0.014、0.004).(2)4～36μg/ml多西紫杉醇作用12～48 h,A549细胞可见典型的凋亡形态学改变,且A549细胞凋亡率随药物浓度增加而升高,呈浓度依赖性(r=0.999,P=0.034).(3)RT-PCR结果显示,多西紫杉醇可明显抑制A549细胞中表达α5,整合素亚基基因,使其bcl2/bax比值明显降低,差异均有统计意义(t=10.147、4.583,P=0.01、0.044).但多西紫杉醇对A549细胞表达VEGF、bFGF、β1整合素亚基基因无明显影响(P＞0.05).结论:多西紫杉醇可抑制A549细胞增殖,诱导A549细胞凋亡,其机制是通过抑制Bcl-2/Bax表达比例诱导其凋亡,并可能抑制整合素α5β1表达而影响A549细胞的增殖、黏附,以及转移能力.     

肺癌细胞凋亡与β1整合素关系的实验研究

目的：研究β1整合素及纤维粘连蛋白与人肺癌细胞凋亡之间的关系。方法：体外无血清培养条件下，以培养在包被纤维粘连蛋白底物上的人肺腺癌SPC-A-1细胞为靶细胞，用不同浓度抗β1整合素单克隆抗体阻断β1整合素与纤维粘连蛋白相互作用，采用噻唑蓝比色法检测细胞存活情况，计算肿瘤细胞存活率；以TUNEL和流式细胞术检测细胞凋亡情况，并计算凋亡指数。结果：抗β1整合素单克隆抗体对SPC-A-1细胞凋亡有明显的促进作用，对细胞存活有抑制作用，在一定范围内，呈时间、剂量依赖性。结论：肺癌细胞凋亡与β1整合素有密切关系，β1整合素与其特异配体纤维粘连蛋白的相互作用能促进细胞生存，当二者作用被阻断导致肺癌细胞凋亡。     

β1整合素及纤维粘连蛋白与肺癌细胞凋亡关系的实验研究

目的 研究β1整台素及纤维粘连蛋白与人肺癌细胞凋亡之间的关系．方法 体外无血清培养条件下，以培养在包被纤维粘连蛋白底物上的人肺腺癌SPC-A-1细胞为靶细胞、用不同浓度抗β1，整台素单克隆抗体阻断β1整合素与纤维粘连蛋白相互作用，采用苏木素-伊红(HF)染色．吖啶橙荧光染色，DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡情况，并计算凋亡指数。结果 抗β1整合素单克隆抗体列SPC-A-1细胞凋亡有明显的促进作用，在一定的范围内，呈时间、剂量依赖性。结论 肺癌细胞凋亡与β1整合素受体有密切关系，且β1整台素受体与其特异配体纤维粘连蛋白的相互作用能促进细胞生存，当二者作用阴断导致肺癌细胞凋亡。     

硬皮病皮损成纤维细胞整合素表达的免疫电镜观察*

目的：研究硬皮病皮损成纤维细胞整合素表达及细胞超微结构特征。方法：将培养的硬皮病皮损成纤维细胞置包被纤维粘连蛋白的培养瓶中作粘附培养,运用间接免疫胶体金技术在电镜下观察成纤维细胞表面整合素α5,β1亚基表达、分布特征及细胞超微结构变化。结果：硬皮病皮损成纤维细胞整合素α5,β1亚基表达均较正常成纤维细胞显著增加（P<0.01）,并呈簇集分布的特征;细胞内骨架成分微丝密集成束。结论：整合素α5,β1介导的纤维粘连蛋白与成纤维细胞相互作用在硬皮病时增强。     

整合素β1、α2亚基在培养大鼠椎间盘纤维环细胞中的表达

目的: 检测培养大鼠椎间盘纤维环细胞整合素β1、α2亚基的表达.方法: 用酶消化法分离、培养大鼠椎间盘纤维环细胞,采用免疫荧光细胞化学染色和流式细胞术检测培养细胞整合素β1、α2亚基的表达,并对其进行定量分析.结果: 培养大鼠椎间盘纤维环细胞表达整合素β1、α2亚基,整合素β1表达量较高,α2亚基表达较低.结论: 培养大鼠椎间盘纤维环细胞表达整合素β1、α2亚基.     

纤维黏连蛋白碎片增加整合素α5 β1在髓核细胞表达的研究

目的 探讨纤维黏连蛋白碎片对整合素α5和β1亚基在兔间盘髓核细胞上表达的影响.方法 体外分离和培养兔间盘髓核细胞,在培养液中加入纤维黏连蛋白碎片,通过免疫印迹技术、免疫荧光技术及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,检测整合素α5和β1亚基的表达情况,同时比较Ⅱ型胶原蛋白、基质金属蛋白酶9和13(MMP9,13)的表达.结果 加入纤维黏连蛋白碎片后,髓核细胞的整合素α5和β1亚基表达明显增加,而Ⅱ型胶原蛋白表达下降,MMP9和MMP13的表达增加.结论 纤维黏连蛋白碎片可以诱导髓核细胞退变,同时可以增加整合素α5和β1亚基的表达.     

α5、β1整合素亚基在肺腺癌细胞凋亡中作用的实验研究

目的探讨α5、β1整合素亚基对体外培养的肺癌细胞凋亡的作用及相关关系.方法实验组以特异的抗α5、β1整合素亚基单克隆抗体(McAb-1956Z、Sc-9970)分别阻断体外培养的人肺腺癌细胞(GLC-82)膜上α5、β1整合素亚基的功能,采用吖啶橙(acridine orange,AO)做荧光染色和TUNEL法检测细胞凋亡的情况,并计算出凋亡指数(apoptosis index,AI).结果人肺癌细胞GLC-82培养24、48h的AI值分别为(1.3±0.67)%和(2.4±0.84)%.用McAb-1956Z阻断α5整合素亚基的实验组(浓度分别为1.0μg/ml、5.0μg/ml和10.0μg/ml)24hAI值分别为(2.0±0.66)%、(2.7±0.67)%和(2.8±0.63)%;48hAI值分别为(3.4±0.96)%、(4.7±1.33)%和(5.1±1.19)%;以Sc-9970阻断β1整合素亚基的实验组(浓度分别为2.0μg/ml、4.0μg/ml和10.0μg/m),24hAI值分别为(2.6±0.69)%、(3.8±1.03)%、和(5.1±0.99)%;48hAI值分别为(4.8±0.91)%、(7.0±0.81)%、和(9.4±1.17)%.与对照组相比差异有显著性意义(P<0.01).结论α5、β1整合素亚基可抑制肺腺癌GLC-82细胞的凋亡,表现为AI值增加及一种量、效的依赖关系.     

67kDa层粘连蛋白受体与肿瘤

1　前　言层粘连蛋白 (laminin,L n)是细胞外基质中的一种重要的糖蛋白 ,它与肿瘤细胞的相互作用是影响肿瘤转移的一个重要因素。细胞可以通过不同的受体与层粘连蛋白结合 ,这些受体按结构可分为整合素家族与非整合素家族两大类 ,其中整合素家族是由 α和 β两个亚基通过非共价键结合起来的异二聚体 ,至今为止已发现至少有八种整合素能与层粘连蛋白结合 ,包括 α1 β1 、α2 β1 、α3β1 、α6 β1 、α7β1 、α6 β4 、α β2 、α β3,而非整合素家族有九种 ,其中发现最早、研究最多是 6 7k Da层粘连蛋白受体。1983年三个实验室分别通…     

PI3K介导消退素D1上调脂多糖刺激的A549细胞钠离子通道

目的 研究促炎症消退介质消退素D1(resolvin D1,RvD1)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激的肺泡上皮A549细胞钠离子通道α亚基(epithelial sodium channel α-subunit,α-ENaC)和γ亚基(epithelial sodium channel-γ-subunit,γ-ENaC)蛋白表达的影响并探讨其机制.方法 不同时间点和不同剂量的LPS刺激A549细胞建立LPS刺激A549细胞模型.将A549细胞分为:空白对照组;LPS(1μg/ml)组;LPS+RvD1(100nmol/L)组;LPS+LY294002(10μmol/L)组.用Western blot检测A549细胞中α-ENaC和γ-ENaC蛋白表达及磷酸化的磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)水平.结果 LPS下调A549细胞α-ENaC和γ-ENaC蛋白表达,消退素D1抑制LPS对ENaC的下调作用,抑制LPS刺激的磷酸化PI3K.结论 消退素D1通过下调磷酸化PI3K,抑制LPS对A549细胞α-ENaC和γ-ENaC蛋白表达的下调作用.     

维甲酸信号通路对脂多糖作用后A549细胞SP-B表达的影响

目的 探讨在感染相关的肺透明膜病发病中是否有维甲酸受体α(retinoic acid receptor-α,RARα)异常的机制参与以及全反式维甲酸(all trans-retinoic acid,ATRA)对脂多糖(1ipopolysaccharide,LPS)引起的A549细胞肺泡活性蛋白-B(surfactant protein B,SP-B)表达下调是否有干预作用.方法 将体外培养的人肺腺癌细胞A549分为①对照组:用无血清DMEM培养液培养;②LPS组:含10μg/ml LPS无血清DMEM培养液培养24 h;③LPS+ATRA治疗组:10μg/ml LPS培养24 h,再加入1 μmol/ml ATRA培养24 h;④ATRA+LPS预防组:1 μmol/ml ATRA培养24 h,再加入10μg/ml LPS培养24 h.应用免疫细胞化学方法(SP法)检测各组A549细胞中SP-B、RARα的表达及分布情况.结果 LPS组A549细胞胞质中SP-B表达较对照组明显减弱(P<0.05);RARα胞核内表达减弱而出现明显胞质内表达(P<0.05).LPS+ATRA治疗组SP-B表达与对照组比较表达强度相近(P>0.05);RARα表达强度及细胞内定位与对照组表达无明显变化(P>0.05).ATRA+LPS预防组A549细胞质中SP-B表达明显减弱;胞核中RARα的表达明显减弱,而胞质内表达增强,与LPS组结果一致(P>0.05).结论 LPS可引起A549细胞SP-B蛋白水平下调.其机制可能与LPS引起RARα表达和细胞内分布异常有关;ATRA可能通过诱导RARα核内表达而干预LPS引起的A549细胞SP-B表达下调;预先给与ATRA不能减轻LPS引起的A549细胞SP-B蛋白水平下调.     

α5整合素亚基在肺癌细胞凋亡中作用的实验研究

目的探讨α5整合素亚基在肺癌细胞凋亡中的作用.方法以特异性单克隆抗体阻断肺癌细胞中α5整合素亚基的功能,TUNEL实验检测肺癌细胞的凋亡情况.结果肺癌GLC-82细胞24h、48h AI值分别为(1.3±0.67)%和(2.4±0.84)%.在1.0μg/ml、5.0μg/ml和10.0μg/ml浓度的抗体作用后24h的AI分别为(2.0±0.66)%、(2.7±0.67)%和(2.8±0.63)%;48h的AI分别为(3.4±0.96)%、(4.7±1.33)%和(5.1±1.19)%.与对照组相比差异有显著性(P＜0.05).结论α5整合素亚基可能抑制体外培养的GLc-82肺癌细胞的凋亡.     

藤梨根含药血清对肺腺癌A549细胞的抑制作用

目的 研究藤梨根含药血清对人肺癌A549细胞株的增殖抑制作用及其机制.方法 将9只无特定病原体(SPF)级SD大鼠随机分为藤梨根含药血清高、低剂量组和对照组,每组3只,含药血清组分别以12.5、6.25 g/(kg·d)的藤梨根灌胃,对照组予生理盐水灌胃,3 d后取腹主动脉血制备含药血清及对照组血清,3 组血清分别干预体外培养的人肺癌A549细胞24 h,应用Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂测定藤梨根含药血清对人肺癌A549细胞的抑制作用,应用DNA断裂的原位末端标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡,应用蛋白免疫印迹法检测藤梨根含药血清对人肺癌A549细胞表皮生长因子受体(EGFR)、B淋巴细胞瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的影响.结果 CCK-8法检测结果示,藤梨根含药血清对人肺癌A549 细胞有增殖抑制作用.与对照组比较,含药血清组增殖抑制率明显增高(P<0.01).藤梨根含药血清对A549细胞有诱导细胞凋亡的作用,与对照组比较,低、高剂量组凋亡率增高(P<0.01).蛋白免疫印迹法检测结果显示,与对照组比较,藤梨根含药血清作用人肺癌A549细胞24 h后,肺癌细胞EGFR和Bcl-2蛋白表达水平下降,而Bax蛋白表达水平增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 藤梨根含药血清可抑制人肺癌A549细胞的增殖,诱导A549细胞凋亡,其机制可能与下调EGFR和Bcl-2蛋白表达、上调Bax蛋白表达相关.     

整合素β-1对实体瘤细胞耐药的影响研究

目的：初步探讨附分子β－1整合素对肿瘤耐药的影响。方法：采用人肺腺癌细胞株A549，分别以不同浓度阿霉素诱导建立耐药细胞株，采用MTT法检测肿瘤细胞结合纤维粘连蛋白（FN）及阻断β－1整合素后对肿瘤细胞耐药的影响。结果：经致死剂量的阿霉素作用，MTT法检测药物敏感的肿瘤细胞抑制率为97．1％，耐药细胞株为45．2％，与纤维粘连蛋白结合后，药物敏感细胞株抑制率为68．5％，耐药细胞株为56．4％，阻断β－1整合素后与纤维粘连蛋白结合，药物敏感细胞株抑制率达到94％，耐药细胞株为49．4％，与纤维粘连蛋白结合后，肿瘤细胞抑制率明显下降（P＜0．05）；阻断β－1整合素功能后，肿瘤细胞抑制率显著上升，结论：肿瘤细胞与细胞外基质作用是造成肿瘤耐药的原因之一，阻断肿瘤细胞与细胞外基质的作用可以逆转肿瘤耐药。     

hTERT启动子特异性调控炭疽毒素致死因子表达以杀伤人肺腺癌A549细胞的研究

目的观察人端粒酶逆转录酶启动子(hTERTp)靶向调控炭疽毒素致死因子(LF)表达对人肺腺癌A549细胞活力及凋亡/坏死的影响。方法构建含hTERTp或CMV启动子(CMVp)且表达LF的真核质粒表达载体(phTERTp-LF或pCMV-LF),分别转染人肺腺癌A549细胞株和正常人胚肺成纤维MRC-5细胞株。针对A549、A549hTERTp-LF、A549CMVp-LF、MRC-5、MRC-5hTERTp-LF、MRC-5CMVp-LF六组细胞,分别采用RT-PCR和Western blot检测LF mRNA和蛋白表达,用MTT分析检测细胞活力,用流式细胞仪检测细胞凋亡/坏死。结果与A549组比较,A549hTERTp-LF组、A549CMVp-LF组均出现明显的LF mRNA和蛋白表达,以及细胞活力降低和凋亡/坏死率上升;与A549hTERTp-LF组相比,A549CMVp-LF组LF mRNA和蛋白表达更高,细胞活力降低和凋亡/坏死率上升更明显。与MRC-5组比较,MRC-5hTERTp-LF组也不能测出LF mRNA和蛋白表达,细胞活力和凋亡/坏死率亦无明显变化,但MRC-5CMVp-LF组的LF mRNA和蛋白表达上升,细胞活力降低和凋亡/坏死率增加。结论 hTERTp能特异性地驱动LF表达并杀伤人肺腺癌A549细胞,但避免了对MRC-5细胞的毒性,可望提供一种针对肺腺癌细胞且不良反应小的靶向治疗策略。     

整合素β1对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡的影响研究

目的 探讨整合素β1介导的细胞与细胞外基质(extraceUular matrix,ECM)的黏附,及其黏附对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡抑制作用即耐药性的影响研究.方法 利用酶联免疫吸附实验(ELISA)及吖啶橙-溴化乙锭(AO-EB)双荧光染色法分析卵巢癌株型SKOV3、3AO、8910细胞由顺铂诱导的细胞凋亡情况,并采用分组对照的方法检测整合素β1及整合素β1与特异性配体的黏附作用在细胞凋亡中的作用.结果 卵巢癌3株细胞均可由顺铂诱导凋亡(P<0.01).经顺铂(10 μg/mL)作用48 h后,生长于整合素β1的配体-纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)上的3株细胞的富集系数(enrichmentfactor,EF)明显低于生长于非整合素配体一多聚赖氨酸上的细胞EF值;吖啶橙-溴化乙锭双荧光染色法结果显示生长于FN上的细胞凋亡率明显低于生长于多聚赖氨酸上的细胞凋亡率,用整合素β1的特异性阻断抗体封闭过的细胞再次生长于FN上,EF又明显提高(P<0.01).结论 整合素β1介导的细胞与FN的黏附对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡有抑制作用,提示细胞黏附可能通过抑制细胞凋亡而促使细胞产生耐药性.     

整合素α5β1和纤维连接蛋白在大肠癌中的表达及其意义

目的　研究纤维连接蛋白、整合素α5β1 在大肠癌及癌旁组织中的表达与肿瘤细胞分化、转移等生物学行为的关系。方法　用免疫组化EV二步法检测 81例大肠癌及相应癌旁组织石蜡标本纤维连接蛋白和整合素α5β1 的表达情况。结果　在 81例大肠癌组织中纤维连接蛋白及整合素α5β1 表达量与相应的癌旁组织相比差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,大肠癌细胞中纤维连接蛋白及整合素α5β1 的表达量明显升高。低分化大肠癌组织中整合素α5β1 的表达量高于高分化大肠癌 ,其差异有显著性 (P <0 0 5 )。整合素α5β1 在大肠癌的表达与淋巴结转移无相关性 (P >0 0 5 )。纤维连接蛋白在大肠癌癌细胞中的表达与大肠癌癌细胞的分化程度及淋巴结转移无相关性 (P >0 0 5 )。结论　整合素α5β1 的表达与大肠癌癌变及癌细胞的分化关系较密切 ,与癌组织发生淋巴结转移的关系不明显。纤维连接蛋白的表达与大肠癌癌变关系较密切 ,而与癌细胞分化及是否发生淋巴结转移的关系不明显。提示纤维连接蛋白与其受体整合素α5β1 在大肠癌癌变中的作用值得进一步的研究。     

αv整合素与卵巢癌细胞增殖及凋亡关系的研究

目的研究αv整合素与人卵巢癌细胞增殖及凋亡之间的关系。方法MTT法测定细胞增殖情况;吖啶橙荧光染色观察细胞凋亡的形态学变化;流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡。结果抗整合素αv亚基抗体对HO-8910细胞有增殖抑制作用,呈时间、剂量依赖性;光镜可观察到细胞凋亡的形态学变化;流式细胞术检测结果分析,实验组G1/G0期上升,S期和G2/M期下降,细胞凋亡率上升。结论αv整合素可抑制卵巢癌HO-8910细胞凋亡,促进细胞生存。     

整合素α9与肿瘤的研究进展

整合素(integrin)是跨膜糖蛋白受体,通过与配体的结合介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质 (extracellular matrix,ECM)之间的相互黏附,并介导细胞与ECM之间的双向信号传导.整合素最初是因此类 黏附分子主要介导细胞与细胞外基质的黏附,使细胞得以附着而形成整体(integration)而得名.整合素分子 都是由α(ITGA)亚基和β(ITGB)亚基通过非共价键连接而形成的异二聚体.到目前为止,有18种ITGA亚基 和8种ITGB亚基组成24种不同的整合素分子[1],它们在不同的生理、病理状态下发挥自身的功能.整合素在 机体内广泛表达,大多数细胞表面均可以表达至少一种整合素.整合素α9(ITGA9)是研究较少的整合素亚基 之一,近年来发现ITGA9与肿瘤之间有一定的关系,可能是新的抗肿瘤、抗血管生成治疗的潜在靶点.     

百里醌类似物ATQTHB对肺癌细胞株A549增殖与凋亡的影响

目的 研究人工合成百里醌类似物ATQTHB对肺癌细胞A549的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法 将细胞分为5组：空白对照组、A549细胞组、A549细胞+ATQTHB干预(400μg/mL)组、人正常肺上皮细胞(BEAS-2B)组、BEAS-2B细胞+ATQTHB干预组。采用CCK-8法分析细胞增殖抑制情况,采用流式细胞术检测细胞凋亡水平,采用Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达水平。结果 与A549细胞组相比,400μg/mL ATQTHB干预对A549细胞增殖具有显著抑制作用(P<0.05);ATQTHB干预后,人正常肺上皮细胞BEAS-2B增殖与未干预细胞间差异无统计学意义(P>0.05);与A549细胞组相比,A549细胞+ATQTHB干预组的细胞凋亡率显著增加(P<0.05),抑制凋亡蛋白Bcl-2表达减少(P<0.05),促凋亡蛋白Bax表达增加(P<0.05);与BEAS-2B细胞组相比,BEAS-2B细胞+ATQTHB干预组的细胞凋亡率无显著改变(P>0.05),Bcl-2和Bax的蛋白表达水平差异无统计学意义(...     

β1-整合素与乳腺癌细胞凋亡关系的实验研究

目的探讨乳腺癌细胞凋亡与β1-整合素作用的关系.方法人乳腺癌细胞SK-BR-3在培养中以不同浓度的抗β1-整合素单克隆抗体的作用下,观察其对TNF-α诱导的凋亡并计算凋亡率.结果加入凋亡诱导剂后,凋亡细胞由正常生长的2.85±0.41增加到25.62±1.41(P＜0.01);而加入抗β1-整合素单克隆抗体的实验组凋亡细胞数明显减少,且随加入抗体浓度的增加而再度减少.结论TNF-α对SK-BR-3人乳腺癌细胞凋亡的诱导作用可能是由β1-整合素参与的介导作用实现的,且存在着一种在一定范围内的量、效依赖关系.