苯妥英钠对大鼠牙周膜干细胞粘附于牙根面的影响

目的探索不同浓度苯妥英钠(PHT)对大鼠牙周膜干细胞(rat periodontal ligament stem cells,rPDLSCs)粘附于牙根面的影响,为PHT应用于牙周重建提供一定的实验依据,为牙周炎的治疗提供了新思路。方法提取大鼠rPDLSCs,培养并纯化。通过多项诱导分化、表面标记物鉴定后,使细胞在不同浓度PHT刺激条件下,与牙骨质片共同培养,检测粘附于牙骨质片上的细胞量并作比较。结果 20~80 mg/L浓度范围内的PHT能够促进rPDLSCs的粘附数量,40 mg/L PHT组促进粘附的效果最强。实验组与对照组有显著统计学差异。结论适合浓度的PHT可以促进rPDLSCs粘附于牙骨质表面,40 mg/L PHT组促进粘附的效果最强。     

整合素β1、α2亚基在培养大鼠椎间盘纤维环细胞中的表达

目的: 检测培养大鼠椎间盘纤维环细胞整合素β1、α2亚基的表达.方法: 用酶消化法分离、培养大鼠椎间盘纤维环细胞,采用免疫荧光细胞化学染色和流式细胞术检测培养细胞整合素β1、α2亚基的表达,并对其进行定量分析.结果: 培养大鼠椎间盘纤维环细胞表达整合素β1、α2亚基,整合素β1表达量较高,α2亚基表达较低.结论: 培养大鼠椎间盘纤维环细胞表达整合素β1、α2亚基.     

姜黄素促进炎症微环境下大鼠骨髓间充质干细胞骨向分化

目的 研究姜黄素对炎症微环境下大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响。方法 分离、培养大鼠BMSCs,以10 ng/mL的肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱发细胞炎症反应,用不同浓度姜黄素处理细胞,CCK-8检测细胞增殖以便筛选出实验所需姜黄素适宜浓度;实验分组为正常组、炎症组和炎症+姜黄素组;碱性磷酸酶(ALP)和茜素红染色检测成骨分化,实时荧光定量PCR检测骨涎蛋白(BSP)、Runt相关转录因子2(Runx2)的表达。结果 成功分离培养BMSCs;低浓度的姜黄素无细胞毒性,1μmol/L为适宜浓度;炎症降低大鼠BMSCs成骨相关基因BSP、Runx2表达,且ALP染色变浅、矿化结节减少;而姜黄素则可以逆转这种趋势,促进炎症状态下成骨相关基因 BSP、Runx2的表达(P＜0.05),较炎症组ALP染色加深,矿化结节增多。结论 姜黄素可以促进炎症微环境下BMSCs成骨分化。     

巨噬细胞对血管内皮细胞增殖、Hoxb2、血管内皮生长因子受体和整合素ανβ3表达的影响

目的 建立人巨噬细胞系U937与人脐静脉血管内皮细胞系ECV-304体外共培养模型,以刀豆蛋白A(ConA)作为U937激活剂,研究巨噬细胞调节血管生成的机制。方法 实验分4组:ECV-304、ConA+ECV-304、U937+ECV-304和ConA+U937+ECV-304。将ECV-304细胞接种,待60%融合时按照不同的分组进行共培养48h后,流式细胞仪检测细胞周期的变化;采用3H-TdR掺入试验检测内皮细胞DNA合成变化;RT-PCR技术检测内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)受体KDR和同源盒(homebox)Hoxb2基因mRNA表达水平的变化;免疫荧光在流式细胞仪上检测整合素受体ανβ3表达的变化。结果 ConA激活的U937细胞可使内皮细胞S期、DNA合成明显增加(P<0.01);ConA刺激的U937细胞使内皮细胞VEGF受体KDR(0.879±0.003)、Hoxb2基因mRNA的表达水平(0.947±0.003)和整合素受体ανβ3的表达水平(10.26±1.73)明显上调(P<0.01)。结论 ConA活化的巨噬细胞可通过影响内皮细胞的细胞周期、DNA合成、VEGF受体KDR、Hoxb2及整合素受体ανβ3的表达来促进内皮细胞的增殖、迁移及与基质的黏附,从而调节血管的生成。     

L161982对大鼠实验性自身免疫性神经炎中巨噬细胞亚型变化的影响

目的 探讨前列腺素E₂-EP4受体拮抗剂L161982对大鼠实验性自身免疫性神经炎(EAN)中巨噬细胞亚型的影响。方法 EAN模型建立后将21只EAN大鼠随机分为A、B、C 3组。A组每日腹腔注射L161982溶媒,B组自免疫前1天至免疫第8天(免疫阶段)、C组自免疫第5~16天(发病期)均每日腹腔注射L161982(5 mg/kg)。免疫第16天处死大鼠收集腹腔灌洗细胞,用CD68与CD86或CD163不同荧光抗体组合标记M1、M2亚型巨噬细胞,流式细胞术检测各组巨噬细胞亚群比例;ELISA法检测各组大鼠脾单核细胞培养上清中IL-12、IL-10含量。结果 B、C组与A组相比,L161982降低CD86+细胞占总细胞的比例(P<0.05)及CD86+细胞占CD68+细胞比例(P<0.05),升高CD163+细胞占CD68+细胞比例(P<0.05);降低IL-12含量(P<0.05),升高IL-10含量(P<0.05)。B组高峰期临床评分较A、C组降低(P<0.05)。结论 L161982通过降低EAN中M1型巨噬细胞比例,升高M2型巨噬细胞比例减轻EAN病情,免疫阶段作用更明显。     

侧脑室注射链脲霉素引起大鼠脑Aβ1-40、Aβ1-42和tau202、tau396、tau404表达增加

目的 探讨用链脲霉素(Streptozotocin,STZ)阻断脑内胰岛素信号传导,引起脑能量代谢障碍与Aβ表达及tau蛋白过度磷酸化的关系。方法 24只SD大鼠随机分为实验组和生理盐水组,实验组双侧侧脑室注入STZ3mg/kg,第3天重复此剂量;生理盐水组手术操作相同,但注入等量的生理盐水代替STZ。21d后,采用免疫组化方法观测各组大鼠大脑皮层和海马区的Aβ_1-40、Aβ_1-42、tau³⁹⁶、tau⁴⁰⁴阳性细胞表达。结果 与生理盐水组相比,实验组皮层和海马Aβ_1-40、Aβ_1-42、tau²⁰²、tau³⁹⁶、tau⁴⁰⁴阳性细胞明显增多。结论 侧脑室注射STZ可以引起脑内Aβ表达增多和tau蛋白过度磷酸化。     

多巴胺受体在胰岛β细胞系和原位组织中的差异性表达

目的 通过研究大鼠胰腺组织和胰岛β细胞系INS-1（大鼠源）和HIT-T15（仓鼠源）细胞中多巴胺（dopamine,DA） 受体的分布以及INS-1细胞系的内分泌功能,为DA调节胰岛β细胞功能研究结果不一致的可能原因提供一定的实验依据。方法 应用双标记免疫荧光染色方法观察在大鼠胰腺组织和胰岛β细胞系中DA受体分布的异同,以及胰岛素和胰高血糖素免疫荧光双标记结果的差异。应用放射免疫法检测INS-1细胞孵育液中胰岛素及胰高血糖素的浓度,观察细胞系的内分泌功能的改变。结果 在大鼠胰腺组织中,DA受体D1、D2和D5分别表达在β细胞、δ细胞、α细胞和PP细胞上,β细胞只表达D1受体。然而在两种胰岛β细胞系INS-1和HIT-T15细胞上不仅有D1受体,还有D2和D5受体的分布。两种胰岛β细胞系均同时表现胰岛素和胰高血糖素免疫阳性,而在原位胰岛中分布于不同的细胞,进一步检测显示INS-1细胞系的孵育液中不仅含有胰岛素,也含有胰高血糖素。结论 胰岛β细胞系DA受体分布及内分泌功能不同于原位β细胞。     

甘草酸二铵脂质配体对大鼠急性肺损伤的改善作用*

目的: 研究甘草酸二铵脂质配体(DGLL)对大鼠急性肺损伤(ALI)及肺水肿的影响。方法: 雄性SD大鼠123只,体重170～200 g,(6±1)周龄,灌胃DGLL(30、60、120 mg/kg),1 h后通过腹腔内注射脂多糖(LPS)10 mg/kg建立大鼠ALI模型。6 h后,使用HE染色技术评估肺损伤。使用肺湿干重比、支气管肺泡灌洗液(BALF)中的蛋白质含量和肺组织中的Evans蓝(EB)来评估肺水肿。用ELISA法测定肺组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素(IL-1β)的表达水平。通过免疫组织化学染色法检测髓过氧化物酶(MPO)的表达水平。Western blotting法测定细胞间黏附分子(ICAM-1)、血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)、黏附蛋白(ZO-1)、连接黏附分子(JAM-1)等与肺部炎症和微血管通透性有关的蛋白表达水平。结果: MPO免疫反应性降低,大鼠肺组织中TNF-α、IL-1β和ICAM-1的表达水平下降,证明DGLL缓解了LPS诱导的ALI。此外,DGLL可以抑制LPS诱导的肺水肿,降低BALF的蛋白浓度及EB外渗。DGLL也降低了VE-cadherin的表达水平以及抑制LPS引起的肺组织中的连接蛋白,包括ZO-1、JAM-1的表达。结论: DGLL对LPS诱导的大鼠ALI表现出保护作用,同时也抑制了炎症细胞的浸润和微血管屏障的破坏。     

延龄草皂苷通过抑制TGF-β/Smad3与Wnt/β-catenin信号通路改善大鼠肺纤维化

目的 探讨延龄草皂苷对肺间质纤维化大鼠的治疗作用及其可能机制。 方法 雄性SD大鼠50只,随机分为对照组,模型组,延龄草皂苷低、中、高剂量组［25 mg/(kg·d)、50 mg/(kg·d)和100 mg/(kg·d)］,每组10只。除对照组外,其余各组采用气管插管注入伯莱霉素法(5 mg/kg)建立大鼠肺纤维化模型;次日开始连续给药28 d。处死大鼠后,取肺组织称重并计算肺系数;进行HE和Masson染色观察小鼠肺组织形态病理学变化;ELISA法检测大鼠白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)的表达以及超氧化物歧化酶(SOD)的活性;Western blotting法检测大鼠肺组织中纤连蛋白(fibronectin)、胶原蛋白Ⅰ型(Collagen Ⅰ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β(TGF-β)、SMAD同源物3(Smad3)、Wnt3a、β-连环蛋白(β-catenin)和糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)的蛋白表达水平。 结果 与模型组比较,延龄草皂苷低、中、高剂量组的肺系数降低;大鼠肺组织炎性细胞浸润、胶原沉积和纤维化程度改善;大鼠IL-1β、TNF-α、IL-6、MDA和ROS的表达水平降低, SOD的活性升高,发挥抗炎、抗氧化作用;肺纤维化标志蛋白fibronectin,Collagen Ⅰ和α-SMA表达被抑制;大鼠肺组织TGF-β1、Smad3、Wnt3a、β-catenin和GSK-3β蛋白的表达水平降低,且治疗效果呈现剂量依赖性。 结论 延龄草皂苷可通过抗炎、抗氧化,抑制TGF-β/Smad3与Wnt/β-catenin信号通路激活,从而对肺纤维化产生保护作用。     

5-甲基四氢叶酸对大鼠动脉粥样硬化的潜在干预作用

目的 探讨5-甲基四氢叶酸(5-MTHF)对大鼠动脉粥样硬化的潜在干预特性和可能机制。 方法 高脂饮食联合维生素D2建立大鼠动脉粥样硬化模型,将48只雄性Wister大鼠随机分为对照组、模型组、5-MTHF低剂量组(0.5 mg/kg)和5-MTHF高剂量组(2 mg/kg),每组12只。6周后处死大鼠,检测各组大鼠血清活性叶酸、同型半胱氨酸、血脂、氧化应激、炎症因子和内皮因子含量,采用苏木精-伊红染色法观察大鼠主动脉病理变化,采用qRT-PCR法检测大鼠主动脉中核因子-κB p65(NF-κB p65)和凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)mRNA表达。 结果 与对照组比较,模型组大鼠体质量下降(P<0.05),血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDC-C)含量增加(P<0.001),高密度脂蛋白(HDL-C)含量降低(P<0.001),主动脉中有平滑肌细胞增生和脂质斑块弥漫,提示大鼠动脉粥样硬化造模成功。模型组血清活性叶酸含量较对照组差异无统计学意义(P>0.05),同型半胱氨酸浓度增加77.47%(P<0.001)。与模型组相比,5-MTHF低剂量组、5-MTHF高剂量组血清活性叶酸水平升高(P=0.042,P<0.001),同型半胱氨酸浓度降低(P=0.046,P<0.001);5-MTHF低剂量组大鼠的血脂异常、一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)活力、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、炎症肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、内皮素1(ET-1)、可溶性细胞间黏附分子1(sICAM-1)、NF-κB p65和LOX-1 mRNA表达水平均无明显改善(P>0.05);5-MTHF高剂量组大鼠血清TC和LDC-C含量降低(P=0.023,P=0.036),HDL-C含量升高(P=0.035);NO浓度、NOS和SOD活力增加(P=0.035,P=0.022,P=0.04);MDA、TNF-α、IL-6、ET-1含量降低(P=0.022,P=0.045,P=0.024,P=0.045),GSH-Px活力明显增强(P=0.007);LOX-1 mRNA表达下调(P=0.038),NF-κB p65 mRNA表达下调差异无统计学意义(P>0.05)。5-MTHF对动脉粥样硬化大鼠斑块无消退作用,但高剂量5-MTHF可减少平滑肌细胞增生和斑块中泡沫细胞聚集。 结论 5-MTHF可以改善动脉粥样硬化大鼠的血脂异常、氧化应激和炎症反应,减少泡沫细胞聚集和平滑肌细胞增生,但未减轻动脉粥样硬化斑块,其作用机制可能是降低同型半胱氨酸水平,抑制氧化应激和下调LOX-1 mRNA表达。     

银杏叶提取物对帕金森病模型大鼠脑内神经炎性反应的影响

目的 观察银杏叶提取物对帕金森病（Parkinson's disease,PD）模型大鼠中脑和纹状体神经炎性反应因子及其调控因子核因子-κB （nuclear factor-kappa B,NF-κB）的影响。方法 将32只3月龄雄性SD大鼠采用数字表法随机分为对照组、模型组、低剂量组和高剂量组,每组8只。背部皮下注射鱼藤酮制备PD大鼠模型,低剂量组和高剂量组同时给予银杏叶提取物灌胃共30 d。酶联免疫法检测大鼠脑内纹状体中神经炎性反应因子-肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）及白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）含量变化,同时Western blotting检测大鼠脑内星形胶质细胞、小胶质细胞和NF-κB的表达改变。结果 与对照组相比,模型组大鼠纹状体中TNF-α和IL-1β均明显增加（P<0.01）,大鼠脑内GFAP、Iba1和NF-κB表达明显增加（P<0.05）。银杏叶提取物治疗后明显逆转了上述神经炎性反应,与模型组相比,治疗组GFAP、Iba1和NF-κB蛋白表达明显降低（P<0.05）,大鼠纹状体中TNF-α和IL-1β明显减少（P<0.05）。同时上述改变有明显剂量依赖性。结论 银杏叶提取物能改善PD大鼠脑内的慢性神经炎性反应,保护脑内黑质多巴胺能神经元,为PD的临床治疗提供新的靶点。     

整合素avβ3单克隆抗体对小鼠子宫内膜异位病灶的抑制作用

目的 研究整合素avβ3单克隆抗体对SCID小鼠子宫内膜异位病灶生长和微血管形成的影响。方法 建立人子宫内膜异位症小鼠皮下移植病灶模型。治疗组尾静脉注射整合素avβ3单克隆抗体Lm609(250μg/只),对照组给予相应体积的PBS,1周2次。4周后处死动物,测量病灶,采用免疫组化法检测病灶微血管密度(MVD)及整合素avβ3的表达。结果 治疗组与对照组皮下移植病灶质量分别为(0.82±0.09)g和(0.51±0.93)g(P<0.05),病灶组织中MVD则分别为31.2±4.4和14.4±1.8(P<0.05),治疗组病灶受到显著抑制。结论 整合素avβ3单克隆抗体通过抑制微血管形成而抑制子宫内膜异位病灶的生长。     

人Aβ42重组抗原的融合表达及Aβ抗体的检测

目的 原核表达β-淀粉样蛋白(Aβ₄₂)抗原,建立检测Aβ抗体的间接ELISA技术。方法 化学合成Aβ₄₂基因两个互补片段,通过PCR构建人Aβ₄₂基因,克隆至pGEX-2T表达载体中,原核表达并亲和纯化GST-Aβ₄₂融合蛋白。Westernblotting检测其抗原特异性。以GST-Aβ₄₂和Aβ₄₂肽分别为包被抗原,间接ELISA法检测Aβ₄₂免疫的大鼠血清中Aβ抗体。结果 原核表达的可溶性GST-Aβ₄₂融合蛋白相对分子质量为31000,经亲和纯化后,融合蛋白产量为800mg/L菌液,纯度大于95%;Westernblotting证实纯化的融合抗原与Aβ单抗特异反应;以GST-Aβ₄₂为包被抗原,间接ELISA法检测Aβ抗体灵敏度为2ng/ml;以GST-Aβ₄₂和化学合成的Aβ₄₂分别为包被抗原,间接ELISA法检测Aβ₄₂肽免疫大鼠血清中Aβ抗体滴度,两者比较差异无显著性(P>0.05)。结论 原核表达的GST-Aβ₄₂融合蛋白可替代昂贵的化学合成的Aβ₄₂肽抗原,用于检测Aβ抗体。     

腹腔内注射脂多糖对大鼠黑质多巴胺能神经元和小胶质细胞形态学影响及炎性因子变化

目的 观察腹腔注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)后,大鼠黑质多巴胺能神经元和小胶质细胞形态学变化及炎性因子的变化。方法 健康2月龄、12月龄斯普雷格-道利(Sprague-Dawley,SD)大鼠经腹腔注射LPS(1 mg/kg)后,分别于6 h,12 h,24 h,48 h,1 周处死,用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(streptavidin-peroxidase,SP)法进行抗酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)和抗钙离子结合蛋白1(ionized calcium binding adapter molecule 1,Iba-1)免疫组织化学染色,观察不同时间点脑黑质多巴胺能神经元阳性存活率及黑质小胶质细胞的激活情况。酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法分别检测相应时间点血及脑脊液中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)、白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)及白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)的变化。结果 腹腔注射LPS(1 mg/kg)后,老龄组大鼠小胶质细胞呈明显激活改变,且早于青年组小胶质细胞的高峰;各组小胶质细胞的激活早于多巴胺能神经元的损毁;老年组脑脊液中各种炎性因子水平高于青年组。结论 老化因素与外周炎性介质诱发的中枢神经系统(central nervous system,CNS)炎性反应有关。     

TLR-4、TNF-α和IL-1在急性肺损伤中的表达及意义

目的 研究急性肺损伤大鼠Toll样受体4(TLR-4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-1(IL-1)表达变化的临床意义。方法 40只Wistar大鼠随机分为假手术组与模型组, 假手术组采用仅无菌开腹与盲肠翻动, 模型组采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制作急性肺损伤模型,分别于假手术及CLP术后6、12 h处死大鼠,ELISA检测血清中TNF-α和IL-1的水平,免疫组织化学法检测TLR-4和TNF-α在大鼠肺组织中的表达分布。结果 模型组在两个时间点中血清TNF-α和IL-1水平均高于假手术组,差异有统计学意义(P＜0.01);且CLP 12 h组在血清中TNF-α和IL-1水平显著高于CLP 6 h组,差异有统计学意义(P＜0.01);TLR-4和TNF-α在模型组两个时间点中肺组织中表达均增强,TLR-4 在肺巨噬细胞及血管内皮细胞表达,TNF-α主要分布在气道上皮细胞和巨噬样细胞表达。结论 TLR-4、TNF-α和IL-1水平可作为早期诊断急性肺损伤的指标。     

过表达miR-27a对急性脑梗死大鼠海马神经元损伤的影响及其机制

目的 探究过表达miR-27a对急性脑梗死大鼠海马神经元损伤的影响及可能机制。 方法 将60只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、Agomir阴性对照组(Agomir-NC组)和miR-27a agomir组(Agomir组),每组15只。采用改良Longa线栓法构建急性脑梗死大鼠模型,于造模前1天和造模成功时,分别经侧脑室注射15 mg/kg的agomir-NC或miR-27a agomir。术后72 h,采用Zea-Longa评分法对大鼠神经功能缺损进行评分;采用氯化三苯基四氮唑染色法(TTC)测量大鼠脑梗死面积;原位缺口末端标记法(TUNEL)检测大鼠海马组织细胞凋亡水平;qRT-PCR法检测各组大鼠海马组织miR-27a的表达水平;流式细胞术(FCM)检测各组大鼠海马组织中Iba-1⁺/CD68⁺小胶质细胞所占百分比;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组大鼠海马组织IL-1β、IL-6、TNF-α及iNOS的表达水平;Western blotting 检测大鼠海马组织中TLR4信号通路相关蛋白TLR4、MyD88、p-NF-κB p65及NF-κB p65表达情况。 结果 与Sham组相比,Model组大鼠海马组织细胞凋亡水平及Iba-1⁺/CD68⁺小胶质细胞水平均显著增加(均P<0.001),海马组织中IL-1β、IL-6、TNF-α水平和iNOS活性及TLR4、MyD88、p-NF-κB p65蛋白表达水平均显著升高(P<0.05),海马组织中miR-27a表达水平显著降低(P<0.001)。与Model组比,Agomir组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死面积、海马组织细胞凋亡水平及Iba-1⁺/CD68⁺小胶质细胞水平均显著降低(均P<0.001),海马组织中IL-1β、IL-6、TNF-α水平和iNOS活性及TLR4、MyD88、p-NF-κB p65蛋白表达水平均显著下降(P<0.05),海马组织miR-27a表达水平显著上升(P<0.001)。 结论 过表达miR-27a通过抑制小胶质细胞M1型极化减轻急性脑梗死大鼠海马神经元损伤,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路活化有关。     

伯氏疏螺旋体诱导大鼠类风湿关节炎模型的建立

目的 应用伯氏疏螺旋体全菌蛋白首次皮内注射,再次腹腔注射加强免疫诱导Lewis大鼠类风湿关节炎(RA)模型并通过检测血清细胞因子探讨该模型发病机制。 方法 将雄性Lewis大鼠54只随机分为螺旋体低剂量组、螺旋体中剂量组、螺旋体高剂量组、完全弗氏佐剂组、不完全弗氏佐剂组及PBS组,每组9只。采用关节炎指数和组织病理学方法观察大鼠的发病程度和病理特点。采用双抗体夹心ELISA法检测血清RF、TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-17含量。 结果 螺旋体高剂量组大鼠关节炎发病率为66.7%。病变关节病理显示关节滑膜组织增生,炎性细胞浸润,软骨及骨质侵蚀,呈典型的关节炎改变。螺旋体高剂量组与完全弗氏佐剂组相比关节炎指数、组织病理学评分及血清RF、TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-17水平的差异无统计学意义(P>0.05)。螺旋体高剂量组与PBS组相比关节炎指数、组织病理学评分及血清RF、TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-17水平明显升高(P<0.05)。结论 伯氏疏螺旋体全菌蛋白成功诱导大鼠关节炎,与人类RA的发病及病理特点极为相似,是研究RA较理想的模型之一。     

粒细胞集落刺激因子治疗大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤

目的 探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的治疗作用.方法 线栓法构建SD大鼠脑缺血再灌注损伤模型,线栓时间2 h.手术48 h后,对模型鼠神经功能缺失评分,将12分以下的20只大鼠随机平均分为两组:干预性治疗组:予G-CSF 20μg/(kg·d)皮下注射,共19 d;对照组皮下注射等量生理盐水,置同样环境饲养.两组同时腹膜腔注射脱氧溴化尿嘧啶(Brdu)10mg/kg共19 d.两组均于手术后每周进行神经系统功能缺失评测.术后3周,将实验鼠麻醉后处死取脑,脑沿冠状面将鼠脑切成等分,取第3块脑切块,做冰冻切片,行神经干细胞及神经胶质细胞特异性抗体与Brdu抗体免疫组化双染,观察梗死区新生神经细胞.结果 手术后3周,与对照组比较,G-CSF治疗组神经功能恢复好于对照组(P<0.0);治疗组脑组织梗塞灶周围新生神经干细胞和神经胶质细胞增生明显多于对照组.结论 G-CSF能促进脑梗死后神经功能恢复和神经细胞再生,是一有效的脑缺血干预性治疗用药.     

成年大鼠纹状体神经干细胞的体外培养及分化

目的 探讨成年大鼠纹状体神经干细胞多向分化的可能性。方法 分离成年大鼠纹状体神经干细胞,单克隆连续传代培养并诱导分化,将分化产物进行免疫细胞化学染色及RT-PCR检测分析。结果 无血清单克隆培养时期可见大量的细胞团出现,以血清诱导分化后出现多种细胞类型,免疫细胞染色发现分化细胞中有Nestin阳性、NSE阳性、GFAP阳性细胞,RT-PCR法分析mRNA水平有脑因子-1、γ-氨基丁酸α-受体γ-亚单位、酪氨酸羟化酶及色氨酸羟化酶等基因的表达。结论 成年大鼠纹状体内分离出的干细胞样细胞具有自我增殖和多向分化潜能。     

小鼠内淋巴囊原代上皮细胞L型钙离子通道定位表达

目的 探讨C57BL/6小鼠内淋巴囊原代上皮细胞中电压门控钙离子通道定位表达。 方法 选取2日龄C57BL/6(P2B6)小鼠60只,P2B6小鼠8只麻醉处死取得颞骨标本,体视显微镜下定位内淋巴囊位置,提取内淋巴囊原代细胞并在低血清状态下培养。P2B6小鼠52只处理同上,颞骨标本用4%甲醛固定后脱钙包埋,采用免疫组织荧光技术和免疫细胞荧光技术定性原代内淋巴囊上皮细胞并确定L型钙离子通道表达。 结果 内淋巴囊上皮细胞在P2B6小鼠内淋巴囊中排列紧密,可见细胞聚集呈嵴状突起,胞体较小,细胞呈椭圆状,以扁平上皮为主,细胞培养光镜观察为不规则铺路石样,细胞形态大小不一,胞浆丰富,核椭圆形且大。免疫荧光检测显示L型Ca²⁺通道在内淋巴囊上皮细胞膜上均呈均匀表达,细胞核上高表达。 结论 小鼠原代内淋巴囊上皮细胞中L-型电压依赖钙离子通道α1C亚基(CACNA1C)、L-型电压依赖钙离子通道α1S亚基(CACNA1S)、L-型电压依赖钙离子通道α1D亚基(Cav1.3/ CACNA1D)表达为阳性,为细胞功能学实验提供依据,有利于进一步研究内淋巴囊维持稳态的机制。