桥本甲状腺炎患者外周血CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞及IL-10的检测及临床意义

目的评价检测桥本甲状腺炎(HT)患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Treg)及白细胞介素-10(IL-10)的临床意义。方法选择30例临床确诊初次发病HT患者作为观察组,另选择30例同时期年龄、性别匹配的健康体检者作为对照组,均抽取空腹静脉血,采用流式细胞术测定外周血CD4~+CD25~+Treg占CD4~+T细胞的百分比、CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+T细胞的百分比以及CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+CD25~+Treg的百分比,采用酶联免疫吸附实验检测IL-10水平。结果两组的外周血CD4~+CD25~+Treg占CD4~+T细胞的百分比差异无统计学意义(P0.05);观察组的外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+T细胞的百分比、CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+CD25~+Treg的百分比均明显低于对照组(P0.05);观察组的IL-10水平显著低于对照组(P0.05)。结论桥本甲状腺炎患者的外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞比例、IL-10水平低于健康人群;推测CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg、IL-10可能参与了桥本甲状腺炎的发病。     

脓毒症大鼠调节性T细胞凋亡对辅助性T细胞漂移的影响及血必净注射液的干预作用

目的 探讨脓毒症大鼠CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)凋亡对辅助性T细胞(Th)漂移的影响及血必净注射液的干预作用.方法 将Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、血必净组,每组8只.行盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症大鼠模型.于第3日采用免疫磁珠法分选各组CD4+CD25+Treg并培养12 h,用流式细胞仪检测Treg凋亡率及叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)和T淋巴细胞毒性相关抗原4(CTLA-4)的表达,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素-10(IL-10)的分泌量;再将CD4+CD25+ Treg与CD4+CD25-T细胞1∶1共培养,刀豆素A刺激68 h,ELISA检测Th1、Th2、Th17分泌的γ-干扰素(IFN-γ)、IL-4、IL-17水平.结果 正常组Treg凋亡率[(12.03±0.89)%]与假手术组[(9.48±2.17)%]比较差异无统计学意义;模型组Treg凋亡率[(5.87±0.44)%]明显低于正常组和假手术组;而血必净组的Treg凋亡率[(27.29±2.48)%]显著高于其他各组(P均<0.01).Foxp3、CTLA-4表达和IL-10分泌量随Treg凋亡率增加而减少,相关系数(r)分别为-0.878(P=0.042)、-0.877(P=0.042)、-0.743(P=0.010).与正常组比较,模型组IFN-γ、IL-4水平和IFN-γ/IL-4比值均明显升高[IFN-γ:(254.70±44.88)ng/L比(0.68±0.78)ng/L,IL-4:(8.82±0.61)ng/L比(3.48±0.98)ng/L,IFN-γ/IL-4比值:30.28±4.87比0.23±0.30,P均<0.01];而血必净组IFN-γ[(491.54±84.28)ng/L]和IFN-γ/IL-4比值(45.31±8.01)均显著高于模型组(P<0.01和P<0.05);各组间IL-17水平无明显差异(P均>0.05).结论 脓毒症时Treg凋亡率增加可减轻对效应T细胞的抑制功能,血必净注射液能有效促进脓毒症Treg凋亡,介导Th2向Th1漂移.     

育龄期妇女复发性自然流产外周血调节性T细胞的表达

目的 观察育龄期妇女复发性自然流产外周血调节性T细胞的表达水平.方法 选择2009年1月～12月于我院妇产科就诊的复发性自然流产21例(复发性流产组)及同期正常妊娠20例(正常妊娠组),检测两组血清CD4+T、CD4-CD25+Treg 和CD4+CD25+Foxp3+Treg等调节性T细胞的表达情况.结果 复发性流产组血清CD4+T水平明显高于正常妊娠组,而CD4-4CD25+Treg 和CD4+CD25+Foxp3+Treg水平明显低于正常妊娠组,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).结论 育龄期妇女复发性自然流产存在外周血调节性T细胞异常表达.     

脓毒症小鼠CD4~+ CD25~+ Foxp3~+T细胞变化及其意义

目的观察脓毒症小鼠血中CD4+CD25+Foxp3+T细胞的变化特点,探讨它与脓毒症病程发展间的关系。方法选择清洁级KM雄性小鼠,用盲肠结扎穿孔术(CLP)制作脓毒症小鼠模型(CLP组),分别于2h、6h、12h、24h、48h、72h采血处死12只,并留取远端回肠HE染色光镜检查;流式细胞仪检测血中CD4+CD25+Foxp3+T细胞计数及其占CD4+T细胞的百分比,ELISA法测定细胞因子TNF-α、IL-6、IL-10的表达水平,全自动生化分析仪检测AST、ALT、BUN、Cr等肝肾功能生化指标。以假手术组(Control组)作为对照,标本采集时间点、检测方法同CLP组。结果 CLP组血CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞百分比持续增高,12h后即高于假手术组,随病程进展增高更为显著(P<0.01)。CLP2h后TNF-α水平升高即超过假手术组(P<0.01),12h到达顶峰,随后开始下降,但至CLP后72h仍高于假手术组;IL-6水平于CLP后6h出现快速升高,12h达到峰值,与假手术组相比增幅有统计学差异(P<0.01),随后下降,72h与假手术组比较无统计学差异(P>0.05);CLP2h后IL-10水平即已高于假手术组(P<0.01),12h出现快速上升改变,并持续攀升,至72h未见下降拐点。CLP后ALT、AST升高早于BUN、Cr,前者术后24h明显升高,增幅大于假手术组(P<0.01),而后者术后48h明显升高,增幅大于假手术组(P<0.01),随着时间的延长,ALT、AST、BUN、Cr均进一步升高,假手术组指标则回落到基线水平。结论 CLP小鼠模型CD4+CD25+Foxp3+T细胞比例增加与脓毒症严重程度成正比,这种变化可能是机体逃避过度的炎症反应引发严重的组织器官损伤的自身调节反应,但有一定限度,调控Treg或将为脓毒症免疫调节治疗提供新的思路。     

胸腺基质淋巴细胞生成素诱导重症肌无力患者胸腺CD4~+CD25~-T细胞向CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞分化

目的:探索胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)对重症肌无力(MG)合并胸腺异常患者胸腺CD4+CD25-T细胞诱导生成CD4+CD25+Foxp3+调节性T(Treg)细胞的研究。方法:以磁珠分选的方法得到胸腺CD4+CD25-T细胞及树突状细胞(DC)细胞,通过不同浓度(0.1、1、10、20 ng/m L)的TSLP活化DC后诱导CD4+CD25-T细胞向CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞分化,以流式细胞术检测CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞/CD4+T细胞比率;RT-PCR检测Foxp3 m RNA表达;Western blot法检测上调的CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的Foxp3蛋白表达;ELSIA法检测培养上清IL-10的含量。结果:10 ng/m L TSLP组、20 ng/m L TSLP组经诱导后CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞/CD4+T细胞比例均明显升高,Foxp3的表达水平也相应增加,IL-10水平升高,与PBS对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。结论:TSLP可以诱导MG合并胸腺异常患者胸腺CD4+CD25-T细胞向CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞分化,并促进Foxp3的表达。     

甲状腺乳头状癌患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞及T-钙粘蛋白的检测及临床意义

目的研究CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Treg)与T-钙黏蛋白在甲状腺乳头状癌(PTC)外周血中的水平及临床意义。方法采用回顾性研究方法,选取PTC患者40例(观察组)以及甲状腺腺瘤患者40例(对照组)。对比两组患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞比率及T-钙黏蛋白水平;对比不同病理特征下CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞比率及T-钙黏蛋白水平有无差异。结果 PTC组患者CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞比率及T-钙黏蛋白水平均明显高于对照组(P0.05),TNMⅢ、Ⅳ期与存在颈部淋巴结转移的PTC患者CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞与T-钙黏蛋白水平均明显升高(P0.05)。结论 CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞与T-钙黏蛋白可以作为PTC的标志物,同时与患者临床分期以及淋巴结转移有密切的相关性。     

致敏小鼠CD4~+ CD25~+调节性T细胞磁珠分选及体外扩增

本研究探讨致敏小鼠CD4+ CD25+调节性T细胞的分选及体外扩增。流式细胞术检测致敏小鼠及正常小鼠体内CD4+ CD25+ Treg细胞水平,免疫磁珠分选方法从小鼠脾细胞中分选出CD4+T细胞、CD4+ CD25+ Treg细胞和CD4+ CD25-T细胞,负载抗CD3/CD28单克隆抗体MACSiBead联合IL-2共同刺激CD4+ CD25+ Treg细胞进行体外扩增培养,用0.4%台盼蓝染色并计数检测细胞的活性,流式细胞术检测分选后细胞纯度、主要表面标记及Foxp3基因的表达。结果表明:致敏小鼠体内CD4+ CD25+ Treg水平较正常小鼠升高(P<0.05)。分选出CD4+ CD25+ Treg细胞纯度平均达到87%,细胞活性大于97%,高表达Foxp3基因。体外扩增2周后细胞数扩增倍数能够达到42倍,CD4+ CD25+ Treg细胞所占比例为85.32%,Foxp3表达由(76.92±1.72)%稍下降至(75.33±2.11)%(P>0.05)。结论:免疫磁珠分选法能够分选出高纯度的CD4+ CD25+ Treg细胞,该分选方法不影响分选靶细胞的细胞活力;体外成功扩增了CD4+ CD25+ Treg细胞,扩增后的CD4+ CD25+ Treg细胞表面标记及Foxp3基因表达无明显改变。     

急性白血病患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞检测及其对细胞凋亡的作用

目的研究CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞在急性白血病患者外周血中的检测,并探讨其对细胞凋亡的作用。方法将65例急性白血病患者(包括急性淋巴细胞性白血病33例和急性髓系白血病32例)分为未缓解组(28例)和缓解组(37例),25例健康志愿者作为对照组。根据是否合并感染又分为合并感染组(39例)和未合并感染组(26例)。采用细胞内染色的流式细胞术及荧光定量PCR的方法,分别在蛋白质和mRNA水平检测Foxp3表达,并与正常对照组进行比较。同时,利用荧光定量PCR的方法的检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、P53的表达。结果与正常对照相比,急性白血病患者(未缓解组和缓解组)外周血中CD4~+CD25~+Foxp3~+比例明显提高,且治疗缓解后CD4~+CD25~+Foxp3~+表达下调(P0.05)。凋亡相关基因Bcl-2表达上调,Bax、P53表达下调。结论急性白血病患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞明显升高,并且,影响凋亡相关基因Bcl-2、Bax、P53的表达,提示CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞可能通过细胞凋亡信号通路影响急性白血病的发展。     

三阴性乳腺癌外周血及病灶微环境辅助性和调节性T细胞表达

目的分析三阴性乳腺癌(trip nenegative breast cancer,TNBC)患者外周血及病灶微环境辅助性T细胞和调节性T细胞的表达水平。方法选择2012年1—4月经临床及病理确诊的女性TNBC 34例(TNBC组)、非三阴性乳腺癌(NTNBC)39例(NTNBC组)及同期确诊为乳腺良性疾病女性患者27例(对照组),均检测外周血及病灶微环境辅助性T细胞(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)和调节性T细胞(CD4CD25+Treg和CD4+CD25+Foxp3+Treg),并进行比较。结果 TNBC组外周血及病灶微环境CD3+、CD4+水平、CD4+/CD8+比值均明显低于NTNBC及对照组,而CD8+水平则明显高于其他两组(P0.05);TNBC组外周血及病灶微环境CD4CD25+Treg及CD4+CD25+Foxp3+Treg表达水平均明显高于NTNBC组及对照组(P0.05)。结论 TNBC患者存在明确的外周血及病灶微环境调节性T细胞和辅助性T细胞异常表达,其可作为本病免疫学病因诊断及评估疗效的特征性标识,并为今后寻找TNBC免疫治疗途径提供试验数据。     

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3／9活性改变及其与凋亡的关系

目的 探讨脓毒症时CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3/9(caspase-3/9)活性变化及其与激活诱导细胞凋亡的关系.方法 体外培养免疫磁珠法分选大鼠脾脏CD4+CD25+Treg,随机分为对照组、抗CD3/CD28组、抗CD3/CD28+脂多糖(LPS)组,培养3 d后采用流式细胞术检测Treg凋亡率,荧光比色法检测caspase-3/9活性.同时采用盲肠结穿孔术(CLP)复制大鼠脓毒症模型,将动物随机分为正常对照组、假手术组、CLP组,于第3日分离Treg后检测Treg凋亡率和caspase-3/9活性.结果 体外实验显示,抗CD3/CD28组和抗CD3/CD28+LPS组CD4+CD25+Treg凋亡率均显著高于对照组(P均<0.01),而抗CD3/CD28+LPS组Treg凋亡率明显低于抗CD3/CD28组(P<0.05).抗CD3/CD28组caspase-3/9活性均显著高于对照组(P均<0.01);抗CD3/CD28+LPS组caspase-3/9活性则明显低于抗CD3/CD28组(P均<0.01).体内实验显示,CLP组CD4+CD25+Treg凋亡率和caspase-3活性均显著低于正常对照组和假手术组(P均<0.01),但caspase-9活性改变不明显(P均>0.05).结论 脓毒症病理过程中CD4+CD25+Treg凋亡率明显下降,caspase-3激活是诱发Treg凋亡的重要途径之一.     

CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞增龄性变化及其与老年肺癌的关系

目的探讨CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)的增龄性变化及其与老年肺癌发生、发展的关系。方法肺癌患者70例和体检健康者60例,分别按年龄(青年18~45岁、中年45~60岁、老年60岁)分为青年肺癌组21例、中年肺癌组25例、老年肺癌组24例和青年健康组20例、中年健康组20例、老年健康组20例。采用流式细胞分析法测定各组外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+T细胞的百分率,采用实时荧光定量PCR法测定功能基因Foxp3 mRNA的相对表达量;分析肺癌患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞百分率与临床特征的关系。结果老年肺癌组外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞占CD4~+T细胞百分率[(11.81±2.40)%]及Foxp3 mRNA相对表达量(3.14±1.30)高于中年肺癌组[(11.25±1.84)%、2.53±1.16]和青年肺癌组[(9.05±2.14)%、2.28±1.21],中年肺癌组高于青年肺癌组(P0.05);老年健康组外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞占CD4~+T细胞百分率[(9.82±1.19)%]及Foxp3mRNA相对表达量(2.67±0.99)高于中年健康组[(7.81±1.16)%、1.76±0.80]和青年健康组[(6.23±0.91)%、1.17±0.51],中年健康组高于青年健康组(P0.05);相同年龄段,各肺癌组中CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞占CD4~+T细胞百分率及Foxp3 mRNA相对表达量均明显高于各健康组(P0.05);肺癌患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞占CD4~+T细胞百分率在肺癌分期、有无淋巴结转移上差异有统计学意义(F=28.660,P=0.002;t=21.084,P0.001),在不同性别、病理类型上差异无统计学意义(t=2.330,P=0.120;F=0.020,P=0.980)。结论 CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞的增龄性变化可能是导致老年肺癌发生、发展的原因之一。     

麻风溃疡患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞水平及临床意义

目的探讨CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Treg)在麻风溃疡发病中的作用。方法选取60例麻风溃疡患者作为试验组,同期匹配麻风病未合并溃疡的患者57例作为对照组及体检健康者68例为健康人组,采用流式细胞仪检测在治疗前(或入组时)、治疗后4周(对照组和健康人组为入组后4周)3组研究对象外周血的CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+T细胞的百分比。结果试验组在治疗后4周的CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg比例明显低于治疗前,差异有统计学意义(P0.05),在治疗前和治疗后4周试验组的CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg比例均明显高于同时间点的对照组和健康人组,差异均有统计学意义(P0.05),对照组的CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg比例也明显高于健康人组,差异均有统计学意义(P0.05)。合并复杂性溃疡的麻风患者其外周血的CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg比例在治疗前和治疗后均显著高于合并单纯性溃疡的麻风患者,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg的表达失衡可能参与了麻风溃疡的发生、发展。     

乌司他丁对脓毒症小鼠调节性T细胞凋亡及细胞因子分泌的影响

目的观察乌司他丁对脓毒症小鼠调节性T细胞(Treg)凋亡及细胞因子分泌的影响。方法将60只小鼠分为假手术组、模型组和乌司他丁组,每组20只。采用盲肠结扎穿孔方法制备脓毒症大鼠模型,假手术组除不结扎和穿刺盲肠外,其余手术步骤相同,乌司他丁组小鼠术后30 min尾静脉给药100 000 U/kg。采用流式细胞仪检测各组小鼠CD4+CD25+Treg的凋亡率,采用酶联免疫吸附试验检测各组小鼠白细胞介素2(IL-2)、IL-4、干扰素γ的水平。结果假手术组、模型组和乌司他丁组小鼠CD4+CD25+Treg细胞的凋亡率比较,差异有统计学意义[(20.1±1.0)%、(10.9±0.8)%、(13.7±0.8)%,F=10.236,P=0.030],且乌司他丁组小鼠显著低于假手术组,而高于模型组(P均0.05)。同时,与假手术组比较,模型组与乌司他丁组IL-2[(352±76)、(172±59)、(249±64)ng/L]和干扰素γ[(177±25)、(56±14)、(109±18)ng/L]均显著下降,而IL-4显著升高[(46±15)、(328±81)、(242±62)ng/L],且与模型组比较,乌司他丁组IL-2和干扰素γ均明显升高,而IL-4明显降低(P均0.05)。结论乌司他丁可诱导脓毒症小鼠Treg细胞凋亡,上调IL-2和干扰素γ,降低IL-4水平。     

T淋巴细胞亚群及外周血IL-17、IL-35和IFN-γ在多发性骨髓瘤患者中的水平及其临床意义

河北中医学院目的:探讨外周血T淋巴细胞亚群、调节性T细胞(Treg)、白介素IL-17、IL-35和γ-干扰素(IFN-γ)在多发性骨髓瘤(MM)患者中的水平及其临床意义。方法:选取2014年1月-2017年1月医院收治的8~~+例多发性骨髓瘤患者作为MM组,并选取同时期体检健康者30例为对照组。应用流式细胞术检测外周血CD4~+/CD8~+T细胞比例和CD4~+CD25~(high/+)CD127~(low/-)调节性T水平,ELISA法检测血清IL-17、IL-35和IFN-γ表达水平;比较各组不同指标间的差异。结果:与对照组比较,多发性骨髓瘤患者CD4~+T细胞、CD4~+/CD8~+T细胞比例降低,CD8~+T细胞、Treg细胞比例升高;MMⅢ期患者的T淋巴细胞亚群与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);随着临床分期的提高,Treg细胞呈现增高趋势;MMⅢ期Treg细胞水平明显高于Ⅰ期(P0.05);血清IL-17水平依次为MMⅢ期Ⅱ期Ⅰ期对照组,血清IL-35和IFN-γ水平依次为对照组Ⅰ期Ⅱ期Ⅲ期(P0.05);Treg细胞比例依次为进展期稳定期对照组(P0.05);血清IL-17水平进展期稳定期对照组,血清IL-35和IFN-γ水平则对照组稳定期进展期(P0.05)。结论:T淋巴细胞亚群、调节性T细胞、IL-17、IL-35和IFN-γ水平异常与多发性骨髓瘤患者疾病进展及预后相关。目的:探讨外周血T淋巴细胞亚群、调节性T细胞(Treg)、白介素IL-17、IL-35和γ-干扰素(IFN-γ)在多发性骨髓瘤(MM)患者中的水平及其临床意义。方法:选取2014年1月-2017年1月医院收治的86例多发性骨髓瘤患者作为MM组,并选取同时期体检健康者30例为对照组。应用流式细胞术检测外周血CD4~+/CD8~+T细胞比例和CD4~+CD25high/~+CD127low/-调节性T水平,ELISA法检测血清IL-17、IL-35和IFN-γ表达水平;比较各组不同指标间的差异。结果:与对照组比较,多发性骨髓瘤患者CD4~+T细胞、CD4~+/CD8~+T细胞比例降低,CD8~+T细胞、Treg细胞比例升高;MMⅢ期患者的T淋巴细胞亚群与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);随着临床分期的提高,Treg细胞呈现增高趋势;MMⅢ期Treg细胞水平明显高于Ⅰ期(P0.05);血清IL-17水平依次为MMⅢ期Ⅱ期Ⅰ期对照组,血清IL-35和IFN-γ水平依次为对照组Ⅰ期Ⅱ期Ⅲ期(P0.05);Treg细胞比例依次为进展期稳定期对照组(P0.05);血清IL-17水平进展期稳定期对照组,血清IL-35和IFN-γ水平则对照组稳定期进展期(P0.05)。结论:T淋巴细胞亚群、调节性T细胞、IL-17、IL-35和IFN-γ水平异常与多发性骨髓瘤患者疾病进展及预后相关。     

脓毒症患儿CD4+CD25+调节性T细胞的变化

目的 观察不同免疫状态下脓毒症婴幼儿外周血CD4+CD25+Foxp3high调节性T细胞(Treg细胞)及相关分子的变化,探讨婴幼儿脓毒症免疫功能紊乱的可能机制.方法 分别收集2007年5月至2007年11月深圳市儿童医院重症监护室收治的婴幼儿脓毒症36例血液标本,另选16例健康同龄儿童作为正常对照进行前瞻性研究;排除既往患有自身免疫性疾病、免疫缺陷病、遗传代谢病及肿瘤的患儿,排除近6个月曾使用影响免疫功能的药物.本研究获得深圳市儿童医院伦理委员会的同意.以外周血CD14+单核细胞HLA-DR表达>30%或<30%为阈值,将患儿分为免疫激活组(DR-H组)和免疫抑制组(DR-L组),用流式细胞术检测CD14+单核细胞HLA-DR表达率,CD4+CD25+Foxp3highTreg细胞比例;实时荧光定量PCR(Real time-PCR)检测CD4+T细胞Foxp3、CTLA-4、GITR、IL-10mRNA表达.统计方法采用单因素方差分析,P<0.05为差异具有统计学意义.结果 急性期DR-L组CD4+CD25+Foxp3highTreg细胞比例明显高于对照组及DR-H组(P<0.05).DR-L组Foxp3、CTLA-4、IL-10等相关分子基因表达高于对照组及DR-H组(P<0.05),DR-L组GITR基因表达高于DR-H组.结论 CD4+CD25+Foxp3highTreg细胞数量异常增加可能与婴幼儿脓毒症免疫抑制状态有关.     

不同剂量血必净对内毒素诱导调节性T细胞凋亡的影响

目的 探讨血必净注射液对内毒素诱导CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)凋亡影响的剂量-效应关系.方法 体外培养免疫磁珠法分选大鼠脾脏CD4+CD25+Treg,分为对照组、抗CD3/CD28组、抗CD3/CD28+脂多糖(LPS)组、抗CD3/CD28+血必净组(1、5、25 mg/ml)和抗CD3/CD28+LPS+血必净组(1、5、25 mg/ml).以刺激第3日为观察时间点,采用流式细胞术分析Treg凋亡率、叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)和T淋巴细胞毒性相关抗原4(CTLA-4)表达水平,酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素-10(IL-10)分泌情况.结果 抗CD3/CD28+血必净各组CD4+CD25+Treg凋亡率高于对照组和抗CD3/CD28组,抗CD3/CD28+LPS+血必净各组凋亡率较对照组和抗CD3/CD28+LPS组明显升高(P<0.05或P<0.01);且凋亡率随血必净刺激剂量增加而升高,其中5 mg/ml血必净组凋亡率接近50%.Foxp3和CTLA-4的表达及IL-10分泌随凋亡率增加而逐渐降低,不同剂量血必净组间比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 血必净注射液能显著促进内毒素介导Treg的凋亡,并呈一定程度的剂量-效应关系.     

大鼠肾移植急性排斥反应调节性T细胞及其基因表达的机制研究

目的观察肾移植大鼠外周血中CD4+CD25+调节性T细胞及其表面标志物Foxp3、ABCC4、e IF6基因表达,结合白细胞介素-2(IL-2)和肿瘤坏死因子-γ(INF-γ)水平及肝、肾功能变化进行相关分析,探讨其在移植免疫排斥机制中的作用及意义。方法监测急排组与非急排组大鼠肝、肾功能;ELISA方法检测血浆中IL-2和INF-γ的表达水平;流式细胞仪检测CD4+、CD8+、CD4+CD25+Treg细胞亚群;荧光PCR检测CD4+CD25+Treg细胞Foxp3、ABCC4及e IF6 m RNA表达。结果与术前相比,急排组术后第7天血清肌酐、尿素氮均明显升高(P<0.05);急排组术后第7天IL-2及IFN-γ均升高,差异有统计学意义(P<0.05);急排组术后CD3+、CD4+、CD8+水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与非急排组相比,急排组术后CD4+CD25+Treg细胞表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与非急排组相比,急排组术后Foxp3+基因表达量明显降低,ABCC4、e IF6基因表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CD4+CD25+调节性T细胞在肾移植排斥反应中起到重要作用,CD4+CD25+Treg细胞Foxp3、ABCC4及e IF6 m RNA参与急性排斥反应的发生,检测其变化可辅助诊断急性排斥反应的发生。     

小鼠调节性T细胞的CD4+ CD25+ CD127low/-标记分析

新的特异性细胞表面标记的发现是提高调节性T细胞(Treg)测量和分选技术的重要环节,Foxp3是公认的天然Treg的标记,却不能作为分选细胞的标记,CD127是新发现低表达于Treg细胞表面的标记。本实验测定CD4+CD25+CD127low/-和CD4+CD25+Foxp3+标记的小鼠外周血及脾脏Treg细胞的数量,并测定CD4+CD25+CD127low/-细胞内Foxp3转录因子的表达水平,分析CD4+CD25+CD127low/-标记在小鼠Treg细胞测定及分选的价值。收集BALB/c小鼠外周血及制备脾细胞悬液,分别三重荧光染色CD4、CD25、CD127及CD4、CD25、Foxp3后应用流式细胞仪检测,得出CD4+CD25+CD127low/-、CD4+CD25+Foxp3+这两种标记的小鼠外周血和脾脏Treg细胞的比例;再在CD4、CD25、Foxp3基础上加CD127染色(四重荧光染色),检测CD4+CD25+CD127low/-细胞Foxp3转录因子的表达情况。结果显示:①BALB/c小鼠外周血CD4+T细胞的分布:在总T细胞中CD4+TCD4+CD25+T细胞的中位表达水平分别为39.02%、5.35%;在CD4+T细胞中CD4+CD25+CD127low/-、CD4+CD25+Foxp3+细胞的中位表达水平分别为7.13%、3.97%;②BALB/c小鼠脾脏CD4+T细胞的分布:在总T细胞中CD4+T、CD4+CD25+T细胞的中位表达水平分别为23.49%、3.86%;在CD4+T细胞中CD4+CD25+CD127low/-、CD4+CD25+Foxp3+细胞的中位表达水平分别为12.8%、8.23%;③BALB/c小鼠外周血和脾脏CD4+CD25+CD127low/-细胞比例高于CD4+CD25+Foxp3+细胞,以脾脏更为明显(P<0.01);④小鼠外周血及脾脏CD4+CD25+CD127low/-细胞高表达Foxp3转录因子,CD4+CD25+Foxp3+细胞低表达CD127。结论:BALB/c小鼠外周血和脾脏CD4+CD25+CD127low/-较CD4+CD25+Foxp3+能定量更多的Treg细胞;CD127low/-作为CD4+CD25+Treg细胞表面的特征性标志,在细胞分选时受其他细胞的干扰最小,是定量和纯化小鼠Treg细胞的更好标记选择。     

红细胞输注无效患者外周血T淋巴细胞亚群和调节性T细胞的变化

目的研究红细胞输注无效患者外周血T淋巴细胞亚群、调节性T细胞(Treg细胞)水平变化。方法采用流式细胞仪分别检测30例红细胞输注无效患者和30例红细胞输注有效患者输血前后外周血T淋巴细胞亚群(CD3~+,CD4~+,CD8~+,CD4~+/CD8~+、CD4~+CD25~+Treg)的水平。结果红细胞输注无效组输血后的CD3~+T细胞百分比、CD4~+T细胞百分比以及CD4~+/CD8~+比值较输血前升高(P0.05),而CD8~+T细胞百分比无改变(P0.05),CD4~+CD25~+Treg水平较输血前下降(P0.05);红细胞输注有效组输血前后外周血T淋巴细胞亚群(CD3~+,CD4~+,CD8~+,CD4~+/CD8~+、CD4~+CD25~+Treg)的水平没有变化(P0.05)。结论红细胞输注无效患者存在T淋巴细胞异常活化现象,调节性T细胞CD4~+CD25~+数量的减少可能是其活化的原因,进而导致患者红细胞输注无效。     

原因不明复发性流产病理妊娠患者外周血CD4+CD25+Treg、Foxp3mRNA的表达

目的探讨原因不明复发性流产(URSA)病理妊娠患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)及叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)mRNA的表达。方法采用流式细胞术测外周血CD4+CD25+Treg,半定量、实时荧光定量PCR分析外周血单个核细胞Foxp3转录水平;检测70例原因不明复发性流产史妇女(URSA未孕组)、20例病理妊娠妇女(URSA病理妊娠组)、22例正常妊娠妇女组(正常妊娠组)、20例正常非孕妇女组(对照组)外周血中CD4+CD25+Treg、Foxp3 mRNA的表达情况。采用酶联免疫吸附法检测血清白细胞介素-10(IL-10)水平。结果 URSA未孕组外周血CD4+CD25+Treg、Foxp3 mRNA、IL-10比例明显低于正常非孕妇女组,两组比较,差异均有统计学意义(t分别=3.61、4.18、2.71,P均<0.05);URSA病理妊娠组外周血中CD4+CD25+Treg、Foxp3 mRNA、IL-10低于正常妊娠妇女组,两组比较,差异均有统计学意义(t分别=3.79、12.56、4.42,P均<0.05)。结论外周血CD4+CD25+Treg、Foxp3 mRNA和IL-10表达水平降低可能与URSA病理妊娠患者的发病有关。