异丙酚对脓毒症大鼠外周血CD4~+CD25~+T细胞及IL-6、IL-10的影响

目的观察异丙酚对脓毒症大鼠外周血CD4+CD25+T细胞数量以及炎症因子IL-6与IL-10浓度的影响,探讨异丙酚与脓毒症时调节性T细胞(Treg)及炎症反应的关系。方法 SPF级SD雄性大鼠48只,10～12周龄,体重230～300g,以盲肠结扎穿孔术法(CLP)制作脓毒症模型。采用随机数字表法,将其随机分为三组(n=16):异丙酚干预组(CLP+异丙酚,Pro组,n=16)、赋型剂对照组(CLP+10%脂肪乳剂,FE组,n=16)和脓毒症对照组(CLP+生理盐水,CLP组,n=16)。Pro组和FE组术毕分别经股静脉泵注射异丙酚50μg·kg-1·min-1和与异丙酚等容量的10%脂肪乳注射液,注射时间持续1h,CLP组同法注射等时等容量生理盐水。分别于术后6、12、24h经尾静脉采血,流式细胞仪检测血中CD4+CD25+T细胞计数及其占CD4+T细胞的百分比,ELISA法测定血清IL-6、IL-10的含量;计算各组大鼠24h生存率。结果 Pro组24h生存率绝对值高于CLP组和FE组,但差异无统计学意义(χ2=2.133,P=0.344)。三组大鼠术后外周血CD4+CD25+T细胞计数均随时间延长而上升,组内比较差异均有统计学意义(P<0.05);三组间比较,术后6h组间无统计学差异(P>0.05),12、24hPro组和FE组均明显低于CLP组(P<0.05),同时Pro组又显著低于FE组(P<0.05);三组CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞的百分比随时间变化不一致,Pro组逐渐下降而CLP组和FE组均逐渐升高,组内比较差异均有统计学意义(P<0.05),组间比较与细胞计数组间比较结果类似。三组大鼠术后血清IL-6和IL-10浓度均显著升高,组内比较差异有统计学意义(P<0.05);不同的是CLP组和FE组术后6hIL-6即达到高峰,随后渐降,Pro组则高峰推迟到12h;而术后IL-10均呈持续升高改变;组间比较,Pro组术后6、12、24h血清IL-6和IL-10水平均低于CLP组和FE组(P<0.05);但FE组仅术后6h低于CLP组(P<0.05),12、24h时两组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论异丙酚不能显著降低脓毒症大鼠模型24h病死率,但具有抑制急性脓毒症模型外周血中CD4+CD25+T细胞增加、降低血清炎症因子浓度的效应,从而对机体炎症反应失衡有调节作用。     

中西医结合治疗对免疫低下肺炎小鼠CD4~+CD25~+调节性T细胞的影响

目的建立免疫功能低下小鼠肺炎克雷伯菌肺炎的模型,观察中西医结合治疗对于此种肺炎的CD4+CD25+调节性T细胞表达的影响。方法采用腹腔注射环磷酰胺的方法建立免疫功能低下的小鼠模型,通过鼻腔滴种肺炎克雷伯菌液制作肺炎模型,用流氏细胞学技术检测各组小鼠给药前、给药后12 h,给药后24 h,给药后36 h小鼠外周血CD4+T细胞表面Foxp3阳性表达率和CD4+Foxp3+T细胞CD25表达强度。结果各组各时间点的小鼠外周血CD4+Foxp3+T细胞CD25表达强度较正常小鼠显著升高(P<0.05),CD4+T细胞表面Foxp3阳性表达率较正常小鼠明显降低(P<0.05)。给药后12 h,中西医治疗组小鼠外周血的CD4+Foxp3+T细胞CD25表达强度较模型组显著下降(P<0.05),CD4+T细胞表面Foxp3阳性表达率较对照组、单纯西药组及单纯中药组显著升高(P<0.05)。结论①应用环磷酰胺后,小鼠外周血CD4+Foxp3+T细胞CD25表达强度显著升高,CD4+T细胞表面Foxp3阳性表达率明显降低。②中西医结合治疗在免疫功能抑制小鼠肺炎感染模型中可能具有"双向调节免疫"功能的作用,即一方面维持CD4+T细胞Foxp3阳性表达率,提高机体抗感染能力,同时维持了机体免疫耐受的状态。③中西药结合治疗有改善免疫功能低下感染生存率的趋势。     

调节性T细胞对脓毒症中T淋巴细胞凋亡的影响

目的:探讨CD4~+CD25~+调节性T细胞(CD4~+CD25~+Treg)对脓毒症过程中效应性T细胞(Teff)凋亡的影响。方法:应用SPF级健康雄性BALB/C小鼠制备盲肠结扎穿孔术(CLP)脓毒症模型。小鼠随机分为正常对照组、假伤组、CLP组、CLP+PC61(Treg特异性抑制剂)组、CLP+HRPN(PC61的同型对照蛋白IgG)组。免疫磁珠法分选小鼠脾脏CD4~+CD25~+Treg。采用流式细胞术观察T淋巴细胞毒性相关抗原(CTLA)-4及转录因子叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)表达以及CD25比例的变化,并检测各组小鼠CD4+CD25-T细胞的凋亡率。ELISA法检测外周血中白细胞介素(IL)-10、IL-2、IL-4和干扰素(IFN)-γ的含量变化。结果:CLP+PC61组术后48h小鼠生存率(90%)较CLP组(60%)明显升高;CLP+PC61组CD4~+CD25~+Treg中Foxp3及CTLA-4表达恢复至正常对照组水平,与CLP组差异有统计学意义(P0.05),并且CLP+PC61组CD25表达水平最低。CLP+PC61组IL-2、IFN-γ水平显著升高,与CLP组差异明显(P0.05),但IL-4、IL-10水平较CLP组出现不同程度地下降(P0.05)。此外,CLP+PC61组效应性T细胞凋亡率明显低于CLP组(P0.05)。结论:拮抗小鼠体内调节性T细胞活性可有效地减轻脓毒症状态下效应性T细胞凋亡,提高小鼠生存率。     

脓毒症小鼠不同组织炎症因子及T细胞亚群动态变化

目的 探讨CLP小鼠在脓毒症发病过程中不同脏器炎症浸润程度的变化以及不同免疫器官中T细胞亚群的相互关系。方法 对小鼠进行盲肠结扎穿孔术建立脓毒症模型，在术后0h、6h、12h、24h、48h及72h不同时间点检测小鼠血液、肺组织及回肠组织中IL-6、IL-10、IL-2、IL-4的含量变化，并以流式细胞技术检测小鼠脾脏中Treg及Th17比例变化、回肠黏膜固有层中CD4+T及CD8+T淋巴细胞比例变化。结果 肺组织及回肠组织中IL-6含量于术后6h达到峰值，血浆中IL-6含量于术后12h达到峰值，均显著高于同时间点假手术组（P＜0.01）。回肠组织中IL-10含量于术后6h达到峰值，明显高于假手术组（P＜0.01）。回肠组织中IL-2含量与术后出现持续上升，并在术后24h达到峰值，显著高于假手术组（P＜0.01）。血液、肺组织及回肠组织中IL-6、IL-10、IL-2、IL-4均于24h后大幅下降。CLP术后6h及24h的脾脏淋巴细胞Th17、Treg比例明显高于同时间点假手术组（P＜0.01）。回肠黏膜固有层中CD4+T细胞比例于术后12h达到最高，CD8+T细胞比例于术后24h达到最高，均显著高于假手术组（P＜0.01）。Th17、Treg、CD4+T及CD8+T细胞均于24h后出现下降。结论 脓毒症发病过程中，不同部位的炎症因子浸润程度不同，肠道黏膜中炎症反应出现最早且持续时间更长。脓毒症中后期CD8+T细胞的显著减少及Treg比例的相对性增加可能提示淋巴细胞增殖能力的下降。     

胸腺基质淋巴细胞生成素诱导重症肌无力患者胸腺CD4~+CD25~-T细胞向CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞分化

目的:探索胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)对重症肌无力(MG)合并胸腺异常患者胸腺CD4+CD25-T细胞诱导生成CD4+CD25+Foxp3+调节性T(Treg)细胞的研究。方法:以磁珠分选的方法得到胸腺CD4+CD25-T细胞及树突状细胞(DC)细胞,通过不同浓度(0.1、1、10、20 ng/m L)的TSLP活化DC后诱导CD4+CD25-T细胞向CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞分化,以流式细胞术检测CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞/CD4+T细胞比率;RT-PCR检测Foxp3 m RNA表达;Western blot法检测上调的CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的Foxp3蛋白表达;ELSIA法检测培养上清IL-10的含量。结果:10 ng/m L TSLP组、20 ng/m L TSLP组经诱导后CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞/CD4+T细胞比例均明显升高,Foxp3的表达水平也相应增加,IL-10水平升高,与PBS对照组相比差异有统计学意义(P0.05)。结论:TSLP可以诱导MG合并胸腺异常患者胸腺CD4+CD25-T细胞向CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞分化,并促进Foxp3的表达。     

致敏小鼠CD4~+ CD25~+调节性T细胞磁珠分选及体外扩增

本研究探讨致敏小鼠CD4+ CD25+调节性T细胞的分选及体外扩增。流式细胞术检测致敏小鼠及正常小鼠体内CD4+ CD25+ Treg细胞水平,免疫磁珠分选方法从小鼠脾细胞中分选出CD4+T细胞、CD4+ CD25+ Treg细胞和CD4+ CD25-T细胞,负载抗CD3/CD28单克隆抗体MACSiBead联合IL-2共同刺激CD4+ CD25+ Treg细胞进行体外扩增培养,用0.4%台盼蓝染色并计数检测细胞的活性,流式细胞术检测分选后细胞纯度、主要表面标记及Foxp3基因的表达。结果表明:致敏小鼠体内CD4+ CD25+ Treg水平较正常小鼠升高(P<0.05)。分选出CD4+ CD25+ Treg细胞纯度平均达到87%,细胞活性大于97%,高表达Foxp3基因。体外扩增2周后细胞数扩增倍数能够达到42倍,CD4+ CD25+ Treg细胞所占比例为85.32%,Foxp3表达由(76.92±1.72)%稍下降至(75.33±2.11)%(P>0.05)。结论:免疫磁珠分选法能够分选出高纯度的CD4+ CD25+ Treg细胞,该分选方法不影响分选靶细胞的细胞活力;体外成功扩增了CD4+ CD25+ Treg细胞,扩增后的CD4+ CD25+ Treg细胞表面标记及Foxp3基因表达无明显改变。     

脓毒症患儿CD4+CD25+调节性T细胞的变化

目的 观察不同免疫状态下脓毒症婴幼儿外周血CD4+CD25+Foxp3high调节性T细胞(Treg细胞)及相关分子的变化,探讨婴幼儿脓毒症免疫功能紊乱的可能机制.方法 分别收集2007年5月至2007年11月深圳市儿童医院重症监护室收治的婴幼儿脓毒症36例血液标本,另选16例健康同龄儿童作为正常对照进行前瞻性研究;排除既往患有自身免疫性疾病、免疫缺陷病、遗传代谢病及肿瘤的患儿,排除近6个月曾使用影响免疫功能的药物.本研究获得深圳市儿童医院伦理委员会的同意.以外周血CD14+单核细胞HLA-DR表达>30%或<30%为阈值,将患儿分为免疫激活组(DR-H组)和免疫抑制组(DR-L组),用流式细胞术检测CD14+单核细胞HLA-DR表达率,CD4+CD25+Foxp3highTreg细胞比例;实时荧光定量PCR(Real time-PCR)检测CD4+T细胞Foxp3、CTLA-4、GITR、IL-10mRNA表达.统计方法采用单因素方差分析,P<0.05为差异具有统计学意义.结果 急性期DR-L组CD4+CD25+Foxp3highTreg细胞比例明显高于对照组及DR-H组(P<0.05).DR-L组Foxp3、CTLA-4、IL-10等相关分子基因表达高于对照组及DR-H组(P<0.05),DR-L组GITR基因表达高于DR-H组.结论 CD4+CD25+Foxp3highTreg细胞数量异常增加可能与婴幼儿脓毒症免疫抑制状态有关.     

桥本甲状腺炎患者外周血CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞及IL-10的检测及临床意义

目的评价检测桥本甲状腺炎(HT)患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Treg)及白细胞介素-10(IL-10)的临床意义。方法选择30例临床确诊初次发病HT患者作为观察组,另选择30例同时期年龄、性别匹配的健康体检者作为对照组,均抽取空腹静脉血,采用流式细胞术测定外周血CD4~+CD25~+Treg占CD4~+T细胞的百分比、CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+T细胞的百分比以及CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+CD25~+Treg的百分比,采用酶联免疫吸附实验检测IL-10水平。结果两组的外周血CD4~+CD25~+Treg占CD4~+T细胞的百分比差异无统计学意义(P0.05);观察组的外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+T细胞的百分比、CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+CD25~+Treg的百分比均明显低于对照组(P0.05);观察组的IL-10水平显著低于对照组(P0.05)。结论桥本甲状腺炎患者的外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞比例、IL-10水平低于健康人群;推测CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg、IL-10可能参与了桥本甲状腺炎的发病。     

丹参酮ⅡA对脓毒症急性肺损伤小鼠多糖包被的保护作用

目的探讨丹参酮ⅡA对脓毒症急性肺损伤小鼠多糖包被的作用及机制。方法将8周龄雄性昆明小鼠随机分为3组:假手术组(S组)、脓毒症组(CLP组)及丹参酮ⅡA治疗组(TSN组)。采用盲肠结扎穿孔法建立脓毒症模型;TSN组于术后3h和12h用丹参酮ⅡA(15mg/kg,腹腔内注射)干预,S组和CLP组于同时间点给予等量生理盐水。观察CLP组及TSN组术后7d生存率。于术后24h时收集BALF及肺组织,采用ELISA法测定BALF中炎症因子及多糖包被标志物水平;HE染色观察肺部病理变化;采用比色法检测肺组织MDA含量及SOD活性。结果与S组比较,CLP组BALF中TNF-α及IL-6水平升高(P<0.01),肺损伤评分增加(P<0.01),肺组织MDA含量增加、SOD活性下降(P<0.01),肺组织syndecan-1、heparin sulfate及thrombomodulin水平明显升高(P<0.01);与CLP组比较,TSN组7d生存率升高(P<0.05),BALF中TNF-α和IL-6水平降低(P<0.05),肺损伤评分下降(P<0.05),肺组织MDA含量下降(P<0.01),SOD活性增加(P<0.05),肺组织syndecan-1、heparin sulfate及thrombomodulin水平下降(P<0.01)。结论丹参酮ⅡA可减轻肺脏多糖包被损伤,其机制可能与抑制炎症反应及氧化应激有关。     

CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞与2型糖尿病肾病的相关性研究

目的探讨CD4~+CD25~+Foxp3~+T细胞与2型糖尿病肾病的相关性。方法将120例研究对象分为对照组、糖尿病前期组、糖尿病无肾病组、糖尿病肾病组,每组各30例。采用流式细胞术检测CD4~+CD25~+Foxp3~+T细胞表达率,以高压液相色谱法检测糖化血红蛋白,用全自动生化分析仪检测血糖、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、三酰甘油和总胆固醇。结果与对照组比较,其余3组CD4+CD25+T细胞表达率均下降,差异有统计学意义(P0.05),不同组别之间CD4~+CD25~+Foxp3~+T细胞表达率差异有统计学意义(P0.01),且糖尿病肾病组明显低于其余3组,差异均有统计学意义(P0.05)。4组之间CD4~+CD25~+Foxp3~+T细胞表达呈现随病情加重而下降的趋势。糖化血红蛋白、空腹血糖、三酰甘油、糖尿病病程与CD4~+CD25~+Foxp3~+T细胞表达率之间呈负相关(P0.05)。结论 CD4~+CD25~+Foxp3~+T细胞表达率下降可能与2型糖尿肾病的发病相关。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞在特发性血小板减少性紫癜发病中的作用

目的探讨CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞在特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者中的表达及意义。方法采用流式细胞技术分别检测20例健康人、33例初诊ITP患者,22例治疗后ITP患者CD4+CD25highTreg细胞和CD4+CD25+CD127dimTreg细胞的表达水平。将初诊ITP患者根据病情分为重型组和轻型组,治疗后ITP患者根据治疗疗效分为治疗有效组和无效组。将各组计量资料进行统计学分析。结果初诊ITP患者CD4+CD25highTreg细胞、CD4+CD25+CD127dimTreg细胞比例明显低于正常对照组(P<0.01),且重型ITP组明显低于轻型ITP组(P<0.01,P<0.05),结果具有统计学意义。治疗后患者CD4+CD25highTreg细胞、CD4+CD25+CD127dimTreg细胞比例升高(P<0.01),但仍低于正常对照组(P<0.05);治疗有效组CD4+CD25highTreg细胞和CD4+CD25+CD127dimTreg细胞比例均高于治疗无效患者(P<0.05),结果具有统计学意义。结论 CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞的表达水平在ITP发病、疾病进展中具有重要的临床意义。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对哮喘小鼠呼吸道变应性炎症作用的研究

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对尘螨卵清蛋白(OVA)致敏/激发小鼠呼吸道变应性炎症的作用。方法 C57BL/6小鼠以OVA致敏/激发,在其每日供水时加入EGCG;在最后一次激发24 h后,留取标本,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中的细胞计数和分类,测定BALF、血浆中细胞因子水平以及外周血和BALF中Foxp3+CD4+T细胞的比例。结果哮喘小鼠可见明显炎性细胞浸润,经EGCG治疗后肺部炎性细胞浸润显著减少;BALF中炎性细胞,特别是嗜酸性粒细胞计数较对照组明显升高(P<0.01);白细胞介素(IL)-4、IL-5水平较对照组明显升高(P<0.01),Foxp3+T细胞比例显著下降(P<0.01),Th1细胞因子干扰素-γ(IFNγ-)无显著变化,治疗组与模型组相比细胞计数、IL-4和IL-5水平、Foxp3+T细胞比例显著增加,与对照组相比无显著差异;IL-10水平显著升高。结论 EGCG可有效抑制哮喘模型小鼠呼吸道变应性炎症,其作用途径可能是通过诱导Foxp3+T细胞的产生和IL-10的分泌,进而抑制Th2型免疫反应,这提示EGCG也许可以应用于哮喘的辅助治疗。     

骨髓间充质干细胞上调再生障碍性贫血患者CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞的临床研究

目的:初步探讨再生障碍性贫血(AA)患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)的表达及临床意义;探讨临床使用异体骨髓间充质干细胞(MSC)治疗对CD4+CD25+Foxp3+Treg表达的影响。方法:(1)流式细胞仪检测13例重型再生障碍性贫血(SAA),17例慢性再生障碍性贫血(CAA)及10例健康对照者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达;(2)检测7例AA患者MSC治疗前后外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达。结果:(1)AA患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达明显低于健康对照者(P<0.01);(2)SAA患者CD4+CD25+Foxp3+Treg表达较CAA者低(P<0.05);(3)MSC治疗后AA患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达升高(P<0.05)。结论:(1)AA患者存在外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达减低,其表达异常可能参与AA的发病;(2)CD4+CD25+Foxp3+Treg表达在SAA患者更低,提示其表达水平可能可以作为判断AA病情轻重的指标;(3)MSC治疗可上调AA患者CD4+CD25+Foxp3+Treg表达,为MSC纠正AA患者的免疫异常提供了临床依据。     

小鼠调节性T细胞的CD4+ CD25+ CD127low/-标记分析

新的特异性细胞表面标记的发现是提高调节性T细胞(Treg)测量和分选技术的重要环节,Foxp3是公认的天然Treg的标记,却不能作为分选细胞的标记,CD127是新发现低表达于Treg细胞表面的标记。本实验测定CD4+CD25+CD127low/-和CD4+CD25+Foxp3+标记的小鼠外周血及脾脏Treg细胞的数量,并测定CD4+CD25+CD127low/-细胞内Foxp3转录因子的表达水平,分析CD4+CD25+CD127low/-标记在小鼠Treg细胞测定及分选的价值。收集BALB/c小鼠外周血及制备脾细胞悬液,分别三重荧光染色CD4、CD25、CD127及CD4、CD25、Foxp3后应用流式细胞仪检测,得出CD4+CD25+CD127low/-、CD4+CD25+Foxp3+这两种标记的小鼠外周血和脾脏Treg细胞的比例;再在CD4、CD25、Foxp3基础上加CD127染色(四重荧光染色),检测CD4+CD25+CD127low/-细胞Foxp3转录因子的表达情况。结果显示:①BALB/c小鼠外周血CD4+T细胞的分布:在总T细胞中CD4+TCD4+CD25+T细胞的中位表达水平分别为39.02%、5.35%;在CD4+T细胞中CD4+CD25+CD127low/-、CD4+CD25+Foxp3+细胞的中位表达水平分别为7.13%、3.97%;②BALB/c小鼠脾脏CD4+T细胞的分布:在总T细胞中CD4+T、CD4+CD25+T细胞的中位表达水平分别为23.49%、3.86%;在CD4+T细胞中CD4+CD25+CD127low/-、CD4+CD25+Foxp3+细胞的中位表达水平分别为12.8%、8.23%;③BALB/c小鼠外周血和脾脏CD4+CD25+CD127low/-细胞比例高于CD4+CD25+Foxp3+细胞,以脾脏更为明显(P<0.01);④小鼠外周血及脾脏CD4+CD25+CD127low/-细胞高表达Foxp3转录因子,CD4+CD25+Foxp3+细胞低表达CD127。结论:BALB/c小鼠外周血和脾脏CD4+CD25+CD127low/-较CD4+CD25+Foxp3+能定量更多的Treg细胞;CD127low/-作为CD4+CD25+Treg细胞表面的特征性标志,在细胞分选时受其他细胞的干扰最小,是定量和纯化小鼠Treg细胞的更好标记选择。     

宫颈癌患者外周血CD4~+CD25~+调节性T淋巴细胞与白细胞介素-17水平及其相关性研究

目的探讨外周血CD4~+CD25~+调节性T淋巴细胞(Tr细胞)和白细胞介素-17(IL-17)水平在宫颈癌患者中的变化及其相关性。方法选取2014年1月至2015年3月该院确诊宫颈癌患者60例(宫颈癌组)和查体的健康女性60例(健康对照组),采用流式细胞仪检测外周血Tr细胞数量及占CD4~+细胞百分比,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清IL-17水平。结果宫颈癌组外周血Foxp3~+Tr、Tr、CD4~+T淋巴细胞百分比,Foxp3~+Tr/Tr、Tr/CD4~+T淋巴细胞比值及血清IL-17水平均较健康对照组明显升高,而IL-17/Tr比值明显下降,差异有统计学意义(P0.05)。宫颈癌组患者外周血CD4~+CD25~+Tr细胞水平与血清IL-17水平呈正相关(r=0.768,P0.05)。结论宫颈癌患者存在细胞免疫功能紊乱,IL-17与Tr细胞比值失衡可能在宫颈癌发病机制中起一定的作用。     

痰热清注射液对脓毒症大鼠核因子-κB活性及生存率的影响

目的:探讨痰热清注射液对脓毒症(sepsis)大鼠核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)活性及生存率的影响。方法:采用盲肠结扎穿孔术(cecum ligation perforation,CLP)制备脓毒症模型。112只Wistar大鼠按随机数字表法分为正常对照组、假手术组、模型组和痰热清治疗组,观察模型组及痰热清治疗组大鼠术后7 d的生存率。用ELISA法检测各组NF-κB活性和IL-6的水平。结果:痰热清治疗组7 d生存率明显高于模型组(P<0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠外周血单个核细胞NF-κB活性在CLP后2 h明显升高,6 h达到高峰,各时点与假手术组比较差异有显著性(P<0.01);IL-6水平在CLP后6 h明显升高,12 h达到高峰,除2 h时点外,各时点与假手术组比较差异有显著性(P<0.01);与模型组比较,除2 h时点外,痰热清治疗组NF-κB活性和IL-6水平明显降低(P<0.01)。模型组大鼠外周血单个核细胞NF-κB活性与血浆IL-6水平呈明显正相关(r=0.625,P<0.01)。结论:痰热清注射液可明显抑制脓毒症大鼠NF-κB活性及IL-6水平,提高脓毒症大鼠的生存率。     

哮喘小鼠CD4+CD25+调节性T细胞及Foxp3表达的变化

目的 探讨哮喘小鼠CD4+CD25+调节性T细胞数量的变化及相关转录因子Foxp3表达的变化.方法 24只5周龄C57BL/6小鼠随机分为哮喘模型组和对照组,每组12只,于第0天和第14天,哮喘组以腹腔注射致敏液[0.1%的鸡卵蛋白(OVA)0.1ml与等体积液态铝混合]0.2ml致敏,对照组注射等体积生理盐水,第24、25、26天开始雾化吸入1%的OVA(哮喘组)或生理盐水(对照组)进行激发,连续3 d,于最后1次激发后48 h处死小鼠.取脾脏,制备脾细胞悬液,流式细胞术检测脾脏CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞比例.取脾脏组织以RT-PCR和Western blot分别检测脾脏Foxp3 mRNA和蛋白的表达.数据结果以Levene法行方差齐性检验后,进行独立样本的t检验,以P＜0.05为差异具有统计学意义.结果 脾脏CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞比例哮喘组为(7.03±2.19)%,对照组为(9.70±2.80)%,哮喘组低于对照组,两者相比差异有统计学意义(P=0.016);脾脏Foxp3 mRNA的表达水平哮喘组为(0.37±0.11),对照组为(0.237±0.118),哮喘组高于对照组,两者相比差异有统计学意义(P=0.009);脾脏Foxp3蛋白的表达水平哮喘组(0.692±0.171),对照组(0.515±0.135),哮喘组高于对照组,两者相比差异有统计学意义(P=0.01).结论 哮喘时抗原对CD4+CD25+T细胞的激活不足,可能在哮喘发病机制中起一定作用.     

储存血液中CD4~+ CD25~+调节性T细胞表达水平的研究

目的探讨储存血液中调节性T细胞表达的变化及意义。方法采用流式细胞术检测5名健康献血者新鲜血液及储存3周后血液中CD4+CD25+调节性T细胞及CD4+CD25+Foxp3+的变化。结果新鲜血液与储存3周后血液相比CD4+CD25+调节性T细胞的值与CD4+CD25+Foxp3+的值均降低(P0.01)。新鲜血液与储存3周后血液CD4+CD25+Foxp3+表达成线性相关。结论储存血液调节性T细胞及其基因Foxp3表达的明显降低可能为临床相关疾病输血治疗及疗效的评估提供了新的思路。     

急性白血病患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞检测及其对细胞凋亡的作用

目的研究CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞在急性白血病患者外周血中的检测,并探讨其对细胞凋亡的作用。方法将65例急性白血病患者(包括急性淋巴细胞性白血病33例和急性髓系白血病32例)分为未缓解组(28例)和缓解组(37例),25例健康志愿者作为对照组。根据是否合并感染又分为合并感染组(39例)和未合并感染组(26例)。采用细胞内染色的流式细胞术及荧光定量PCR的方法,分别在蛋白质和mRNA水平检测Foxp3表达,并与正常对照组进行比较。同时,利用荧光定量PCR的方法的检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、P53的表达。结果与正常对照相比,急性白血病患者(未缓解组和缓解组)外周血中CD4~+CD25~+Foxp3~+比例明显提高,且治疗缓解后CD4~+CD25~+Foxp3~+表达下调(P0.05)。凋亡相关基因Bcl-2表达上调,Bax、P53表达下调。结论急性白血病患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞明显升高,并且,影响凋亡相关基因Bcl-2、Bax、P53的表达,提示CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞可能通过细胞凋亡信号通路影响急性白血病的发展。     

紫癜性肾炎患儿外周血CD4+CD25+调节性T细胞的临床意义

目的 研究紫癜性肾炎(HSPN)患儿外周血CD4+CD25+调节性T细胞数量、相关细胞因子的水平及Foxp3的表达,探讨它们在HSPN发病机制中的作用.方法 分别采集40例HSPN患儿及20例健康儿童外周静脉血,通过流式细胞仪分析CD4+CD25+调节性T细胞百分率,ELISA测定血浆IL-10和TGF-β1水平,荧光定量PCR(Real-time PCR)检测T细胞Foxp3mRNA的表达.结果 HSPN患儿外周血CD4+T,CD25+T,CD4+CD25+T/CD4+T均低于对照组(P<0.05);T细胞Foxp3mRNA的表达明显降低,血浆IL-10水平也明显低于对照组(P<0.05),血浆TGF-β1水平较对照组明显升高(P<0.01);CD4+CD25+调节性T细胞百分率随HSPN病理分级加重有降低趋势,二者呈负相关(r＝-0.966,P<0.01).结论 HSPN患儿外周血存在细胞免疫功能失调,CD4+CD25+调节性T细胞数量减少或功能异常,导致免疫抑制效应不足,参与并促进了儿童HSPN的发生发展,其外周血水平与HSPN病理分级有相关性.