槲皮素对高糖诱导肾小球系膜细胞增殖及TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的:研究槲皮素在高糖环境下对大鼠肾小球系膜细胞增殖槲皮素对照组及TGF-β1表达的影响。方法:将体外培养的大鼠系膜细胞分为正常组、高糖组、槲皮素对照组及槲皮素低、中、高剂量组6组,MTT法检测槲皮素对肾小球系膜细胞增殖的影响,Western-blot法检测肾小球系膜细胞TGF-β1、P-Smad2、FN的表达。结果:槲皮素能够显著抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖及TGF-β1、P-Smad2、FN表达。结论:槲皮素可通过降低TGF-β1水平抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖,并通过抑制Smad2磷酸化部分影响TGF-β1/Smads信号通路的激活,降低FN的表达,对肾脏起到保护作用。     

建中理劳汤含药血清对TGF-β1诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖及基质金属蛋白酶表达的影响

目的：通过观察建中理劳汤含药血清对转移生长因子-β1（TGF-β1）诱导的大鼠肾小球系膜细胞（HBZY-1）增殖、基质金属蛋白酶及其抑制酶表达的影响,探讨建中理劳汤治疗慢性肾衰纤维化的机制。方法：体外培养HBZY-1细胞,制备理劳汤含药血清,实验分为空白对照组、TGF-β1诱导组、空白血清组、建中理劳汤低、高剂量组和尿毒清组,通过乳酸脱氢酶（LDH）检测方法观察含药血清对HBZY-1细胞的毒性作用;通过CCK8方法观察各组HBZY-1细胞形态和增殖的情况;通过ELISA方法检测各组HBZY-1细胞中基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9及其抑制酶TIMP-1、TIMP-2表达的情况。结果：建中理劳汤含药血清对HBZY-1细胞无毒性作用（P>0.05）;与模型组相比,建中理劳汤可明显抑制TGF-β1诱导的HBZY-1细胞的增殖（P<0.05）;建中理劳汤可明显增加MMP-2、MMP-9的表达（P<0.05）,同时抑制TIMP-1、TIMP-2的表达（P<0.05）。结论：建中理劳汤含药血清可明显抑制TGF-β1诱导的大鼠肾小球系膜细胞的增殖,并通过影响基质金属蛋白酶及其抑制酶的表达改善慢性肾衰纤维化。     

消渴平含药血清对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖、周期及TGF-β1的影响

目的:观察消渴平(xiaokeping,XKP)含药血清对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖、周期及转化生长因子(TGF-β1)表达的影响,探讨其治疗DKD的作用机理。方法:使用不同浓度的消渴平含药血清及厄贝沙坦含药血清与高糖共同培养大鼠系膜细胞,应用MTT法观察各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期变化,Western-blot及RT-PCR检测TGF-β1蛋白和mRNA表达情况。结果:与空白对照组相比,高糖组系膜细胞增殖明显增加(P 0. 01),消渴平可呈浓度依赖性地抑制系膜细胞增殖。细胞周期检测结果显示,与高糖组相比,消渴平高剂量组可明显降低S期系膜细胞的百分比(P 0. 05),Western-blot及RT-PCR检测显示消渴平可显著减少TGF-β1表达(P 0. 05)。结论:消渴平可明显抑制高糖诱导的大鼠系膜细胞增殖,阻滞细胞周期,降低TGF-β1表达,这可能是其防治DKD的机制之一。     

玉屏风散加味方干预COPD气道重塑相关细胞因子作用研究

目的探讨玉屏风散加味方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道重塑大鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)和转化生长因子β1(TGF-β1)的调节作用。方法将60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、玉屏风散加味方高剂量组、玉屏风散加味方中剂量组、玉屏风散加味方低剂量组、阳性组,每组10只。除正常组外,其余各组大鼠采用被动吸烟加气管内注入LPS的方法复制COPD大鼠模型,玉屏风散加味方各组给予相应剂量玉屏风散加味方灌胃,阳性组给予罗红霉素胶囊溶液灌胃,正常组、模型组给予等量生理盐水灌胃。灌胃30 d后用ELISA方法测定大鼠肺泡灌洗液中MMP-9、TIMP-1、TGF-β1水平,计算MMP-9/TIMP-1比值。结果模型组MMP-9、TIMP-1、TGF-β1表达水平均明显高于正常组(P均0.05),MMP-9/TIMP-1比值明显低于正常组(P0.05);玉屏风散加味方高、中剂量组及阳性组MMP-9、TIMP-1、TGF-β1表达水平均明显低于模型组(P均0.05),玉屏风散加味方高剂量组MMP-9、TIMP-1、TGF-β1表达水平均明显低于玉屏风散加味方低剂量组(P均0.05)。结论玉屏风散加味方可延缓COPD气道重塑病变,其干预COPD气道重塑的作用可能是通过调节气道局部细胞因子MMP-9、TIMP-1和TGF-β1表达实现的,且以高剂量效果最为明显。     

益肾通络方对体外大鼠肾小球系膜细胞增殖的抑制作用

目的:观察益肾通络方对体外大鼠肾小球系膜细胞(MC)增殖的抑制作用.方法:制备益肾通络方大鼠血清,以脂多糖(LPS)为刺激因子,将体外大鼠肾小球系膜细胞分为5组,即空白组、脂多糖组(模型组)、益肾通络方低、中、高剂量组(含药血清各组).以甲基偶氮唑盐法检测系膜细胞增殖情况.结果:24h后,含药血清各组对增殖有明显的抑制作用(P<0.05,P<0.01);48h后含药血清各组对增殖的抑制作用持续;24h和48h均以高剂量含药血清抑制效果最为明显(P<0.01).结论:益肾通络方大鼠血清对LPS诱导的MC增殖有明显的抑制作用,且存在量效关系和时效关系.     

补脏通络方含药血清对高糖环境下人脐静脉内皮细胞NO、eNOS及MMP9/TIMP1表达的影响

目的旨在观察补脏通络方含药血清对高糖环境下人脐静脉内皮细胞(HUVEC)NO、eNOS及MMP9/TIMP1表达的影响,探讨补脏通络方保护糖尿病大血管内皮的可能机制。方法采用血清药理学方法提取补脏通络方含药血清。体外培养HUVEC,细胞分正常组、高糖组、补脏通络方低剂量含药血清干预组(BZTL-L)、补脏通络方中剂量含药血清干预组(BZTL-M),补脏通络方高剂量含药血清干预组(BZTL-H)进行干预实验。硝酸还原酶法检测细胞上清液NO水平,Western Blot分析细胞eNOS、MMP9、TIMP1蛋白含量。结果高糖组较正常组,NO水平和eNOS、TIMP-1表达均降低(P0.01),MMP-9表达和MMP-9/TIMP-1比值均升高(P0.01);各中药干预组较高糖组,NO水平和eNOS、TIMP-1表达均升高(P0.01),MMP-9表达和MMP-9/TIMP-1比值均下降(P0.01),且MMP-9/TIMP-1比值下降呈剂量依赖性。结论改善内皮细胞NO分泌,调节内皮细胞MMP-9/TIMP-1平衡以稳定血管基质的正常代谢,可能是补脏通络方保护糖尿病大血管内皮的具体机制之一。     

保肾通络方对高糖培养下肾小球系膜细胞外基质增生及外泌体miR-192表达的影响

目的观察保肾通络方对高糖培养下肾小球系膜细胞外基质增生及外泌体miR-192表达的影响,探讨其防治糖尿病肾病(DN)的作用机制。方法将20只SD大鼠随机分为正常对照组、保肾通络方低剂量组、保肾通络方中剂量组及保肾通络方高剂量组,每组5只。保肾通络方低、中、高剂量组大鼠分别予浓度为0.5、1.0、2.0 g/mL的保肾通络方颗粒剂药液灌胃,正常对照组大鼠予等容积蒸馏水灌胃。各组大鼠均连续灌胃7 d,通过腹主动脉取血并分离出含药血清。将永生化小鼠肾小球系膜细胞分为正常对照组、高糖对照组、保肾通络方低剂量组、保肾通络方中剂量组及保肾通络方高剂量组。正常对照组肾小球系膜细胞予DMEM低糖培养基+正常对照组大鼠血清培养,高糖对照组肾小球系膜细胞予含30 mmol/L葡萄糖的高糖培养基+正常对照组大鼠血清培养,保肾通络方低、中、高剂量组肾小球系膜细胞分别予高糖培养基+10%的保肾通络方低、中、高剂量含药血清培养。培养24 h后,采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性情况,免疫荧光法检测细胞外基质蛋白胶原蛋白Ⅳ(CollagenⅣ)及纤维连接蛋白(FN)表达情况,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测CollagenⅣ、FN及外泌体miR-192的mRNA表达情况。结果高糖对照组培养后肾小球系膜细胞增殖活性与正常对照组比较明显升高(P 0.05),保肾通络方低、中、高剂量组培养后肾小球系膜细胞增殖活性与高糖对照组比较明显降低(P 0.05),但保肾通络低、中、高剂量组细胞增殖活性组间比较差异均无统计学意义(P0.05)。高糖对照组培养后CollagenⅣ及FN灰度值与正常对照组比较均升高(P 0.05),保肾通络方低、中、高剂量组培养后CollagenⅣ及FN灰度值与高糖对照组比较均降低(P 0.05),但保肾通络方低、中、高剂量组CollagenⅣ及FN灰度值组间比较差异均无统计学意义(P0.05)。高糖对照组培养后CollagenⅣ、FN及外泌体miR-192的mRNA表达与正常对照组相比均明显上调(P 0.05),保肾通络方低、中、高剂量组培养后CollagenⅣ、FN及外泌体miR-192的mRNA表达与高糖对照组比较均明显下调(P 0.05),但保肾通络方各剂量组CollagenⅣ、FN及外泌体miR-192的mRNA表达组间比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论保肾通络方可以降低DN肾小球系膜细胞增殖活性,抑制细胞外基质增生,减少CollagenⅣ及FN蛋白的表达,并能够下调CollagenⅣ、FN及外泌体miR-192的mRNA表达,从多途径对DN进行干预治疗。     

两色金鸡菊提取物对大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维化因子表达的影响

目的:本研究通过高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞建立糖尿病肾病的体外模型,观察两色金鸡菊乙酸乙酯提取物(ethyl acetate extract of Coreopsis tinctoria,AC)对模型中细胞增殖及纤维化因子表达的影响。方法:采用AC对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞进行干预,将细胞分为正常组,模组组,AC不同质量浓度(25,50,100,150 mg·L~(-1))组。采用噻唑蓝(MTT)比色法,细胞增殖与活性检测(CCK8)法检测AC不同质量浓度对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖的抑制作用;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)进一步观察AC不同质量浓度对肾脏纤维化蛋白转化生长因子-β_1(TGF-β_1),胶原蛋白Ⅳ(CollagenⅣ),纤维连接蛋白(FN)表达的影响。结果:AC 50,100,150 mg·L~(-1)组均能抑制高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞的增殖(P0.01);AC 25,100,150 mg·L~(-1)质量浓度组显著降低细胞中TGF-β_1的mRNA与蛋白表达水平(P0.01);AC 100,150 mg·L~(-1)质量浓度组显著抑制细胞中CollagenⅣmRNA与蛋白的表达水平(P0.01);AC 50,100,150 mg·L~(-1)质量浓度组显著抑制细胞中FN mRNA与蛋白的表达水平(P0.01)。结论:两色金鸡菊乙酸乙酯提取物可能通过抑制大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维化因子表达发挥其对糖尿病肾病肾脏保护作用。     

糖肾汤对高糖下肾小球系膜细胞TGF-β1表达影响的实验研究

目的：观察高糖对肾小球系膜细胞TGF-β1蛋白及mRNA表达的影响，以及糖肾汤的干预作用。方法：分别用低糖、高糖以及高糖下糖肾汤不同剂量培养肾小球系膜细胞，采用ELISA法测定TGF-β1蛋白含量，逆转录-多聚合酶链反应(RT-PCR)法测定TGF-β1ImRNA表达，并以开博通作为阳性药对照。结果：高糖可刺激肾小球系膜细胞TGF-β1蛋白及mRNA的表达，糖肾汤具有对抗高糖刺激作用，且呈现一定的量效关系。结论：糖肾汤对高糖对肾小球系膜细胞的影响具有干预作用。     

黄芪、水蛭对脂多糖诱导的大鼠肾系膜细胞MMP-2及TIMP-2表达的影响

目的:研究黄芪、水蛭有效成分及大鼠含药血清对脂多糖(LPS)诱导的系膜细胞增殖中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及基质金属蛋白酶组织抑制因子-2(TIMP-2)因子的调控作用,探讨黄芪、水蛭治疗系膜增生性肾小球肾炎的机制。方法:LPS诱导大鼠系膜细胞增殖,选用MTT法检测后最大无毒浓度的黄芪、水蛭有效成分及含药血清进行干预。实验分为正常组、LPS组、黄芪多糖组、黄芪甲苷组、毛蕊异黄酮组、水蛭素组、黄芪高剂量血清组、水蛭高剂量血清组、黄芪低水蛭高剂量血清组、黄芪高水蛭高剂量血清组,干预24 h后收集细胞,Western Blot法测定MMP-2及TIMP-2表达的变化。结果:模型组经LPS诱导后,MMP-2表达高于正常组(P<0.01),TIMP-2蛋白表达低于正常组(P<0.01),黄芪、水蛭能不同程度地抑制MMP-2蛋白的表达(P<0.05),同时上调TIMP-2蛋白的表达(P<0.01)。结论:说明黄芪、水蛭通过调节MMP-2/TIMP-2动态平衡来减少肾小球细胞外基质的沉积,延缓肾纤维化进程。     

遹肺饮及其拆方对博莱霉素致肺纤维化大鼠MMP-9与TIMP-1的影响

目的观察遹肺饮及其拆方对肺纤维化大鼠MMP-9和TIMP-1的影响,探讨遹肺饮干预肺纤维化病理进程的机制。方法 180只SPF级雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、遹肺饮组及3拆方组(补气通络组、养阴通络组、祛瘀通络组)。气管内滴注博莱霉素复制肺纤维化大鼠模型。术后第2天各用药组大鼠灌服相应中药煎液,假手术组与模型组大鼠灌胃生理盐水。分别于第7、14、28天腹腔麻醉后断头处死大鼠,留取肺组织。HE和Masson染色观察肺组织病理形态,免疫组织化学染色和实时荧光定量PCR检测肺组织TGF-β1、MMP-9及TIMP-1蛋白与基因表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠肺组织TGF-β1、MMP-9与TIMP-1表达水平均显著升高(P0.01),MMP-9/TIMP-1比值在第7天明显上升(P0.01),在第28天明显下降(P0.01);与模型组比较,各用药组大鼠TGF-β1、MMP-9与TIMP-1水平明显下降(P0.05或P0.01),MMP-9/TIMP-1比值在第7天、第14天明显下降(P0.01),在第28天明显升高(P0.01);各用药组对上述指标均有改善,其中以遹肺饮调节作用最优,3拆方组中以补气通络组作用尤为显著。结论遹肺饮通过下调TGF-β1、MMP-9与TIMP-1水平,调节MMP-9/TIMP-1平衡,延缓肺纤维化病理进程。     

补脏通络方对糖尿病合并大血管病变大鼠主动脉内膜MMP-9/TIMP-1的调节

目的观察补脏通络方对糖尿病合并大血管病变大鼠主动脉内膜MMP-9/TIMP-1表达的影响,探讨其逆转糖尿病大血管内膜增厚的可能机制。方法脂肪乳灌胃21d后一次性尾静脉注射STZ 30mg/kg造模。补脏通络方治疗。病理切片光镜观察大鼠胸主动脉内膜形态改变,检测内膜厚度;免疫组化检测主动脉内膜IV型胶原表达;免疫印迹法分析主动脉内膜MMP-9、TIMP-1蛋白表达。结果与正常组相比,病理组主动脉内膜增厚明显(P0.01),IV型胶原表达增加(P0.01),MMP-9、TIMP-1表达增加(P0.01),MMP-9/TIMP-1比值上升(P0.01);经补脏通络方治疗,与病理组相比,各治疗组主动脉内膜厚度和IV型胶原表达降低(P0.01),MMP-9表达降低(P0.01),TIMP-1表达增加(P0.01),MMP-9/TIMP-1比值下降(P0.01);补脏通络方高剂量组降低MMP-9、升高TIMP-1的作用优于低剂量组(P0.05)。结论调节大血管内膜MMP-9/TIMP-1平衡,加速胶原降解,可能是补脏通络方逆转糖尿病大血管内膜增厚的可能机制。     

通络保肾复方对高糖环境下LPS刺激肾小球足细胞增殖及TGF-β_1 mRNA表达的影响

目的:探讨通络保肾复方对肾小球脏层上皮细胞(POD)增殖反应及转分化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA表达的影响。方法:将5%含药血清培养基加入体外培养的足细胞,分别于高糖环境下脂多糖(LPS)刺激足细胞12h、24h、36h、48h后,用MTT方法检测各组的增殖情况,RT-PCR方法检测TGF-β1mRNA的表达。结果:LPS刺激12h后足细胞开始增殖,24h达高峰,48h后开始下降。通络保肾复方能够抑制足细胞增殖,以通络保肾复方大剂量组效果显著,与LPS组比较差异显著(P<0.01)。同时通络保肾复方可以降低足细胞TGF-β1mRNA的表达。本研究结果提示,通络保肾复方可以抑制高糖环境下LPS刺激诱导的足细胞增殖及降低足细胞TGF-β1mRNA的表达,减轻足细胞的损伤,抑制细胞外基质的异常积聚和沉积,从而延缓肾小球硬化的进程。     

芪蓟肾康汤对血管紧张素Ⅱ诱导的人肾小球系膜细胞FN、TGF-β_1影响的研究

目的观察芪蓟肾康汤对AngⅡ诱导人肾小球系膜细胞FN及TGF-β_1表达,探讨不同剂量芪蓟肾康汤改善肾小球硬化作用机制。方法用酶联免疫法吸附试验(ELISA)法检测空白组,模型组,替米沙坦组及低、中、高剂量组芪蓟肾康汤含药血清培养AngⅡ诱导人肾小球系膜细胞株FN、TGF-β_1的表达。结果 24 h和48 h的FN、TGF-β_1含量表达,模型组高于正常组(明显)(P0.01);低、中、高剂量组芪蓟肾康汤较模型组减少,作用时间越长抑制效果越好(P0.01);中、高剂量组芪蓟肾康汤低于西药组,中药组间剂量芪蓟肾康汤越高抑制效果越好(P0.05)。结论芪蓟肾康汤可有效抑制FN、TGF-β_1的表达,从而抑制AngⅡ诱导人肾小球系膜细胞增殖,潜在改善肾小球硬化程度。     

玉屏风散加味方干预慢性阻塞性肺疾病气道重塑的探讨

目的:探究玉屏风散加味方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道重塑病理形态的影响及其对相关细胞因子基质金属蛋白酶-9(MMP-9),金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响。方法:SD大鼠48只,除正常组8只外,其余各组大鼠采用烟熏加脂多糖滴入叠加法复制COPD动物模型,造模成功的大鼠随机分为模型组,玉屏风散加味方高、中、低剂量组(30,10,5 g·kg-1),阳性药物组(罗红霉素胶囊),ig给药30 d后,取大鼠肺组织做病理切片,苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理学变化,并用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠肺泡灌洗液(BALF)中的MMP-9,TIMP-1,TGF-β1的含量。结果:与正常组比较,模型组大鼠肺组织病理形态出现显著改变,支气管壁黏膜充血,水肿以肺泡巨噬细胞(AM),中性粒细胞(NEU),淋巴细胞(LYM),嗜酸性粒细胞(EOS)炎性细胞浸润较为明显,模型组MMP-9,TIMP-1,TGF-β1表达水平明显升高(P0.05);与模型组比较,玉屏风散加味方组大鼠肺组织纤毛倒伏、粘连、缺失;上皮细胞坏死、脱落;支气管壁黏膜充血、水肿以及AM,NEU炎性细胞浸润程度均有所改善,其中高剂量组较为明显(P0.05),玉屏风散加味方高、中剂量组下调细胞因子MMP-9,TIMP-1,TGF-β1表达水平明显(P0.05)。结论:玉屏风散加味方可影响COPD气道重塑的病理形态,下调MMP-9,TIMP-1和TGF-β1的过度表达,可能为该方药干预COPD气道重塑作用机制之一,且以高剂量效果最为明显。     

益气养阴化浊通络方对早期糖尿病肾病患者 TGF-β1,MMP-9,TIMP-1表达的影响

目的:探讨益气养阴化浊通络方对早期糖尿病肾病(DN)患者血清转化生长因子β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)、组织型金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)表达水平的影响.方法:63例早期DN患者随机分组,对照组(31例)采用DN常规治疗,治疗组(32例)在常规治疗基础上加用益气养阴化浊通络方,疗程3个月.采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定两组患者治疗前后血清TGF-β1,MMP-9,TIMP-1水平,同时观察β2-微球蛋白(β2-MG)、尿微量白蛋白排泄率(UAER)的变化.结果:与治疗前比较,两组患者治疗后TGF-β1,TIMP-1水平下降(P＜0.05,P＜0.01),MMP-9水平、MMP/TIMP-1比值升高(P ＜0.05,P＜0.01),β2-MG,UAER指标改善(P ＜0.05,P＜0.01).同时治疗组治疗后TGF-β1,MMP-9,TIMP-1及Ⅳ型胶原水平改善优于对照组(P＜0.05,P＜0.01).结论:益气养阴化浊通络方可能是通过改善血清TGF-β 1,MMP-9,TIMP-1水平而影响细胞外基质(ECM)代谢调控系统,延缓DN的进展.     

补肾活血中药对系膜增生性肾小球肾炎大鼠肾组织基质金属蛋白酶及组织抑制剂表达的影响

目的:研究补肾活血中药对系膜增生性肾小球肾炎大鼠肾组织基质金属蛋白酶及组织抑制剂表达的影响。方法:取雄性SD大鼠54只,实验设正常对照组、模型组、补肾活血法药物干预组,每组分2周、4周、8周时间点,每个时间点6只大鼠。肾组织切片分别行HE和PAS染色,进行常规病理学检查。免疫组化检测肾组织基质金属蛋白酶(MMP-2)、TIMP-2、MT1-MMP、TGF-β1的表达。流式细胞术检测肾皮质MMP-2、TIMP-2、MT1-MMP和TGF-β1蛋白表达。结果:模型组大鼠随病程进展肾小球逐渐增大,系膜基质增多,肾小球基底膜增厚。免疫组化染色显示模型组较对照组MMP-2、MT1-MMP表达减少,而药物干预组较模型组表达减少程度轻;模型组较对照组TIMP-2、TGF-β1表达增多,而药物干预组较模型组表达增多程度轻。流式细胞仪检测显示,4周和8周模型组MMP-2的相对值较对照组降低,在统计学上差异具有显著性(P<0.05或P<0.01),而各期模型组TIMP-2和TGF-β1的相对值较对照组升高,MT1-MMP的相对值较对照组降低,差异具有显著性(P<0.01)。结论:系膜增生性肾小球肾炎肾组织MMP-2表达降低、活性...     

补肺益肾方对脂多糖刺激细胞分泌细胞因子的影响

目的:从补肺益肾方药对脂多糖(LPS)刺激细胞分泌细胞因子变化的影响,揭示补肺益肾方药治疗COPD分子机理。方法:LPS刺激肺泡上皮细胞A549、气道上皮细胞H292、单核巨噬细胞THP-1,每种细胞均分为正常组(20%正常大鼠血清)、LPS组(20%正常大鼠血清和75 pg·mL-1LPS)、用药组(20%补肺益肾方药大鼠血清和75 pg·mL-1LPS),ELISA法检测细胞因子,应用网络工具分析细胞因子的转录因子。结果:与正常组比较,LPS组THP-1细胞分泌MMP-9、TGF-β增多,分泌TNF-α、PPAP2B减少;A549细胞分泌TIMP增多,分泌IL-3、TGF-β减少;H292细胞分泌IL-8增多。与LPS组比较,用药组THP-1细胞分泌TNF-α、TGF-β、TIMP-1、MMP-9(P<0.01)及GM-CSF、SOD、CD36(P<0.05)增加,TGF-β分泌减少(P<0.01);H292细胞分泌IL-8减少(P<0.01),TNF-α、TIMP-1、PPAP2B(P<0.05)和TGF-β(P<0.05)分泌增加;A549细胞分泌TIMP-1、TNF-α(P<0.01)和PPAP2B(P<0.05)减少,MMP-9、IL1B增加(P<0.01)。与LPS组比较,用药组有改变细胞因子的转录因子:THP-1细胞的AP1、NFKB1、STAT3、SMAD3和PPARG,A549细胞的STAT3和PPARG满足激活条件。结论:LPS对单核巨噬细胞THP-1分泌细胞因子影响最大,补肺益肾含药血清对LPS引起的细胞因子分泌变化有一定调节作用。     

痰瘀同治对肾小球硬化大鼠肾组织TGF-β1、MMP-2的影响

目的：探讨痰瘀同治对肾小球硬化大鼠肾组织TGF-B1、MMP．2的影响。方法：将大鼠分为正常组、模型对照组、治疗组，给药12周，采集并固定肾组织。PAS染色，观察肾小球系膜区面积，并用免疫组化及免疫荧光细胞化学技术观察肾脏TGF-β1、MMP-2的表达。结果：模型大鼠肾小球系膜区面积增大，TGF-β1强阳性表达，MMP-2表达微弱，药物治疗大鼠肾小球系膜区面积显著减小，TGF-β1表达减弱，MMP2表达增强，差异显著。结论：痰瘀同治可减少肾小球系膜区面积，显示抗肾小球硬化作用，其作用机制与抑制TGF-βI表达、促进MMP-2表达有关。     

通肾络1号对高糖状态下大鼠肾系膜细胞金属蛋白酶2及其抑制物2mRNA影响的研究

目的:探讨通肾络1号对在高糖刺激下大鼠肾系膜细胞MMP-2、TIMP-2mRNA转录水平及其对细胞培养上清产物FN、ColⅣ的影响。方法:大鼠肾小球系膜细胞在高糖、高糖 ET-1、高糖 ANGⅡ培养下,给予通肾络1号、缬沙坦刺激后,运用荧光定量PCR方法及ELISA方法检测MMP-2、TIMP-2mRNA转录水平及细胞培养上清产物FN、ColⅣ的含量。结果:通肾络1号能提高高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞MMP-2mRNA转录水平(P<0.05),降低TIMP-2mRNA水平(P<0.05),以及提高MMP2/TIMP2(P<0.05)比值,降低细胞上清FN(P<0.05)、ColⅣ含量(P<0.05)。结论:通肾络1号降低细胞上清FN、ColⅣ含量是通过提高高糖刺激下系膜细胞MMP-2mRNA转录水平,降低TIMP-2mRNA水平,达到提高MMP2/TIMP2比值实现的。