通络保肾复方对肾小球系膜细胞表达FN和LN的影响

目的:探讨通络保肾复方对肾小球系膜细胞分泌纤维粘连蛋白(FN)和层粘连蛋白(LN)含量的影响。方法:用细胞酶联免疫吸附(ELISA)方法,以缬沙坦为实验对照组,观察通络保肾复方对肾小球系膜细胞分泌FN和LN含量的影响。结果:通络保肾复方可以显著抑制肾小球系膜细胞分泌FN和LN,并呈剂量依赖关系;通络保肾复方作用明显优于缬沙坦。结论:通络保肾复方延缓肾小球硬化的作用机制可能是通过抑制肾小球系膜细胞分泌FN和LN实现的。     

商陆皂甙甲对阿霉素致肾小球硬化大鼠TGF-β_1表达的影响

目的观察商陆皂甙甲对阿霉素致肾小球硬化大鼠TGF-β1表达的影响及其可能机制。方法采用单侧肾切除并阿霉素尾静脉注射的方法建立大鼠肾小球硬化模型。将48只SD大鼠随机分为假手术组(N组)、模型组(M组)、商陆皂甙甲组(S组)、依那普利组(Y组),分别给予生理盐水、商陆皂甙甲、依那普利治疗,共100 d。观察商陆皂甙甲对肾小球硬化大鼠肾小球病理改变及24 h尿蛋白、肾功能的影响。用免疫组化方法测定肾小球TGF-β1的表达。结果术后第7,13周S组大鼠24 h尿蛋白排泄量、处死前血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)水平、肾小球硬化指数显著低于M组(P均<0.01),肾小球病理损害轻于M组,血清白蛋白较M组显著增高(P<0.01)。结论商陆皂甙甲可下调肾小球硬化大鼠肾小球TGF-β1的表达,减少细胞外基质的沉积,进而保护肾功能,延缓肾小球硬化的发生、发展。     

糖肾汤对高糖下肾小球系膜细胞TGF-β1表达影响的实验研究

目的：观察高糖对肾小球系膜细胞TGF-β1蛋白及mRNA表达的影响，以及糖肾汤的干预作用。方法：分别用低糖、高糖以及高糖下糖肾汤不同剂量培养肾小球系膜细胞，采用ELISA法测定TGF-β1蛋白含量，逆转录-多聚合酶链反应(RT-PCR)法测定TGF-β1ImRNA表达，并以开博通作为阳性药对照。结果：高糖可刺激肾小球系膜细胞TGF-β1蛋白及mRNA的表达，糖肾汤具有对抗高糖刺激作用，且呈现一定的量效关系。结论：糖肾汤对高糖对肾小球系膜细胞的影响具有干预作用。     

保肾通络方含药血清对高糖培养下足细胞p38通路及凋亡的作用研究

目的探讨保肾通络方含药血清对于高糖培养下足细胞p38通路及凋亡的作用。方法足细胞分为正常对照组、高糖组、保肾通络方含药血清低、中、高剂量组。CCK-8法检测各组足细胞活力,WB检测足细胞P-p38及p38蛋白表达,免疫荧光、RT-PCR检测足细胞凋亡相关蛋白caspase-3蛋白及mRNA表达,Hochest33258染色检测足细胞凋亡情况。结果与正常对照组相比,高糖组足细胞活力明显降低(P <0.05),与高糖组相比,保肾通络方含药血清组细胞活力明显升高(P <0.05)。与正常对照组相比,高糖组足细胞P-p38蛋白表达明显上调(P <0.05),与高糖组相比,保肾通络方含药血清组P-p38蛋白表达明显下调(P <0.05)。与正常对照组相比,高糖组足细胞caspase-3蛋白及mRNA表达明显上调(P <0.05),与高糖组相比,保肾通络方含药血清组足细胞caspase-3蛋白及mRNA表达明显下调(P <0.05)。与正常对照组比较,高糖组足细胞凋亡数目明显升高(P <0.05),与高糖组比较,保肾通络方含药血清组足细胞凋亡数目明显降低(...     

益气解毒活络中药有效成分对高糖高脂刺激人肾小球系膜细胞增殖分化及FN、TGF-β mRNA和蛋白表达影响

目的:观察高糖高脂刺激下人肾小球系膜细胞增殖分化及FN、TGF-β mRNA和蛋白活性表达变化,探究益气解毒活络中药有效成分防治糖尿病肾病的分子机制,讨论正交配伍中最优药物组合。方法:体外培养人肾小球系膜细胞株,传代3~5代后接种于96孔培养板,采用4因素3水平正交设计方案分为正常对照组,高糖高脂模型组、中药1、2、3、4、5、6、7、8、9组,以相应药物对HMCs干预24、48、72h。MTT法检测24、48、72 h各时间点HMCs增殖分化情况;以qRT-PCR法检测48 h FN、TGF-βmRNA表达;以ELISA法检测48 h FN、TGF-β蛋白活性表达。结果与结论:(1)高糖高脂环境刺激作用下HMCs及胞外基质均能够显著增殖,且在48h达到顶峰;(2)益气解毒活络中药有效成分防治DN作用机制与通过下调高糖高脂作用下HMCs TGF-β、FN mRNA及蛋白活性表达,进而抑制高糖高脂刺激HMCs增殖相关;(3)益气解毒活络中药有效成分最佳配伍为黄芪甲苷中剂量、盐酸小檗碱低剂量、水蛭素低剂量、木犀草苷低剂量。     

虫草肾荼胶囊对人肾小球系膜细胞TGF-β1mRNA及PAI-1mRNA表达的影响

目的:研究虫草肾茶胶囊对培养在高糖条件下人肾小球系膜细胞(HMC)转化生长因子-β1mRNA(TGF-β1mRNA)和纤维蛋白溶解酶原激活物抑制剂-1mRNA(PAI-1mRNA)表达的影响,探讨其在糖尿痛肾病(DN)防治中的意义.方法:制备虫草肾茶胶囊及福辛普利药物血清,用实时定量PCR方法测定各组HMCTGF-β1以及PAI-1mRNA表达,并以福辛普利为对照.结果:虫草肾茶胶囊高、中剂量组及福辛普利组TGF-β1mRNA和PAI-1mRNA表达均低于高糖组,且以虫草肾茶胶囊高剂量组表达最低(P<0.05).结论:高糖可促进HMCTGF-β1mRNA和PAI-1mRNA表达,虫草肾茶胶囊可下调高糖刺激下HMCTGF-β1mRNA及PAI-1mRNA的表达,从而预防肾小球硬化的发生、发展,进而延缓DN的进展.     

虫草肾茶胶囊对人肾小球系膜细胞TGF-β1 mRNA及PAI-1mRNA表达的影响

目的：研究虫草肾茶胶囊对培养在高糖条件下人肾小球系膜细胞（HMC）转化生长因子-β1mRNA（TGF-β1mRNA）和纤维蛋白溶解酶原激活物抑制剂-1mRNA（PAI-1mRNA）表达的影响,探讨其在糖尿病肾病（DN）防治中的意义。方法：制备虫草肾茶胶囊及福辛普利药物血清,用实时定量PCR方法测定各组HMCTGF-β1以及PAI-1mRNA表达,并以福辛普利为对照。结果：虫草肾茶胶囊高、中剂量组及福辛普利组TGF-β1mRNA和PAI-1mRNA表达均低于高糖组,且以虫草肾茶胶囊高剂量组表达最低（P〈0.05）。结论：高糖可促进HMCTGF-β1mRNA和PAI-1mRNA表达,虫草肾茶胶囊可下调高糖刺激下HMCTGF-β1mRNA及PAI-1mRNA的表达,从而预防肾小球硬化的发生、发展,进而延缓DN的进展。     

二黄糖肾康对糖尿病肾病大鼠细胞因子TGF-β_1和PDGF-B表达的影响

我们在临床应用二黄糖肾康治疗糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)取得了较好的疗效,为探讨二黄糖肾康防治糖尿病肾病的作用机制,开展了此项研究并报告如下。1材料与方法1·1实验动物与分组选清洁级健康雄性SD大鼠60只,体重160g~210g(河北医科大学实验动物中心提供)。按Ander     

清肺化痰通络方对大鼠肺纤维化的干预作用及对TGF-β_1表达的影响

目的：观察清肺化痰通络方对肺间质纤维化大鼠肺内胶原纤维沉积和转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的影响。方法：Wistar雌性大鼠72只,随机分为对照组、模型组、中药组。模型组和中药组大鼠气管内一次性滴注博莱霉素A5（BLMA5）,对照组大鼠气管内一次性滴注等体积的生理盐水。造模后2h开始给药,模型组和对照组灌服生理盐水,中药组灌服清肺化痰通络方药物,每天一次。各组动物分别于第3、7、14、28天各处死6只,取肺组织进行HE和Masson染色,观察肺内胶原的沉积部位和数量;同时进行免疫组化染色,结合图像分析来检测各组肺组织中TGF-β1的表达水平。结果：对照组肺内结构正常,胶原沉积不明显;模型组可见支气管黏膜下、血管壁及其周围、肺间质、肺泡壁有大量胶原沉积;中药组胶原沉积明显轻于模型组。第14天模型组、中药组TGF-β1在肺内的表达呈强阳性,高于对照组,差异有显著性意义（P〈0.01）。中药组TGF-β1表达数量少于同一时段模型组,差异有显著性意义（P〈0.05）。结论：清肺化痰通络方可以抑制肺间质纤维化大鼠肺组织内胶原的沉积,可以减缓肺纤维化的形成,其作用机制可能是通过抑制TGF-β1的表达来实现。     

肾糖颗粒对糖尿病肾病大鼠TGF-β1表达的实验研究

[目的]研究肾糖颗粒对糖尿病肾病大鼠TGF-β1表达的影响,从而探讨肾糖颗粒对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用机制。[方法]采用高脂饲料喂养+STZ腹腔注射制作糖尿病肾病大鼠模型。分为正常对照组、模型对照组、中药治疗组(肾糖颗粒)、西药治疗组(洛汀新)、中西药治疗组(肾糖颗粒+洛汀新),观察各组大鼠治疗后血糖变化。实验结束前进行留尿,测24h尿蛋白定量,尿微量白蛋白、尿α1-微球蛋白。免疫组化方法测定大鼠TGF-β1的表达。[结果]经肾糖颗粒治疗8周后,大鼠一般状况较模型对照组改善较好,体重增加。空腹血糖、24h尿蛋白定量、尿微量白蛋白、尿α1-微球蛋白均明显低于模型对照组。模型组的TGF-β1的表达显著高于各治疗组。[结论]肾糖颗粒对糖尿病肾病大鼠的肾保护作用与其抑制TGF-β1表达有关。     

保肾通络方治疗2型糖尿病肾脏病气阴两虚兼血瘀证临床观察和足细胞保护机制研究

目的:观察保肾通络方治疗糖尿病肾脏病(Diabetic Kidney Disease,DKD)气阴两虚兼血瘀证患者的临床疗效和足细胞保护机制。方法:采用随机、安慰剂对照的试验设计方法,选取2017年1月～2019年12月首都医科大学附属北京中医医院肾内科门诊及住院收治的80例DKD气阴两虚兼血瘀证患者。按随机数字表法分为治疗组和对照组,治疗组予基础治疗+保肾通络方颗粒,对照组予基础治疗+安慰剂颗粒。观察两组患者治疗前后尿白蛋白/肌酐(Urinary Albumin/Creatinine Ratio,UACR)、血肌酐(Scr)、白蛋白(ALB)、尿Nephrin和血清转化生长因子-β1(Transforming Growth Factor-β1,TGF-β1)、骨形态发生蛋白(Bone Morphogenetic Protein-7,BMP-7)和酸性鞘磷脂酶样磷酸二酯酶3b(Acid Sphingomyelinase-like Phosphodiesterase 3b,SMPDL3b)的水平,并采用SPSS20.0进行统计学分析。结果:与本组疗前比较,治疗组疗后UACR明显下降,差异有统计学意义(P0.05);对照组疗后UACR下降,但差异无统计学意义(P0.05);两组疗后比较,治疗组UACR低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。两组治疗前后Scr和ALB差异无统计学意义(P0.05)。与本组疗前比较,治疗组疗后尿液中Nephrin、血清TGF-β1和SMPDL3b水平下降,血清BMP-7水平升高,差异均有统计学意义(P0.05);对照组治疗前后对比差异均无统计学意义(P0.05);两组疗后比较,治疗组尿液中Nephrin、血清TGF-β1和SMPDL3b水平低于对照组,血清BMP-7水平高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。治疗组中医证候有效率高于对照组,两组差异有统计学意义(P0.05)。结论:保肾通络方对DKD患者具有较好的改善中医证候、减少蛋白尿的临床效果,其机制可能与下调TGF-β1和SMPDL3b、上调BMP-7水平,减少尿Nephrin排泄,从而发挥对足细胞的多靶点保护作用有关。     

糖肾平胶囊对糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用及其对肾组织TGF-茁1蛋白及mRNA表达的影响

目的：探讨糖肾平胶囊对糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用及其对肾组织TGF-茁1 蛋白及mRNA 表达的影响。方法：雄性SD 大鼠,50 只,按体重随机分为正常组10 只,模型组40 只。模型组大鼠按55mg·kg-1,腹腔一次性注射链脲佐菌素,72h 后血糖逸16.7mmol·L-1,尿糖逸4垣者为造模成功。将造模成功的大鼠按血糖高低随机分为模型组、厄贝沙坦组、糖肾平胶囊组。每周称体重,第4、8、12 周分笼收集24h 尿液检测24h 尿蛋白定量。用药12 周,处死大鼠行血液生化指标BUN、Scr、TG 检测及肾组织Mallory 染色,观察生化指标和肾组织病理形态学改变,采用免疫组织化、原位杂交方法观察分析肾组织TGF-茁1 蛋白及mRNA 的表达情况。结果：模型组大鼠摄食减少、精神不振、活动迟缓、尿量减少、体重减轻、24h 尿蛋白定量增高、肾脏病理改变等,而糖肾平胶囊组对以上指标均有不同程度改善,并优于厄贝沙坦组;正常组及用药组肾小管上皮细胞、肾间质细胞胞浆有轻度TGF-茁1 蛋白及mRNA 表达,模型组则呈强阳性表达。糖肾平胶囊组与模型组比,TGF-茁1 蛋白及mRNA 表达明显减少（P<0.05）。结论：糖肾平胶囊可通过对肾组织TGF-茁1 蛋白及mRNA 表达下调而发挥治疗和预防糖尿病肾病的作用。     

糖肾1号方含药血清对高糖环境下培养的HK-2细胞中TGF-β1、α-SMA、FNmRNA和蛋白水平的影响

[目的]观察糖肾1号方含药血清干预高糖环境下培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)中转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)mRNA和蛋白水平,初步探索糖肾1号方治疗糖尿病肾病可能的作用机制。[方法]选用HK-2细胞,分为空白组、高糖组、空白血清组、糖肾1号方含药血清低剂量组、糖肾1号方含药血清高剂量组。高糖环境下培养24 h后,进行血清干预24 h,培养48 h后收集细胞,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测HK-2细胞中TGF-β1、α-SMA、FN mRNA和蛋白表达水平。[结果]1)与空白组相比,高糖组的TGF-β1、α-SMA、FN mRNA和蛋白表达水平明显增多,差异具有统计学意义(P0.05)。2)与高糖组相比,糖肾1号方低剂量组、糖肾1号方高剂量组TGF-β1、α-SMA、FN mRNA表达水平减少,差异具有统计学意义(P0.05)。3)与高糖组相比,糖肾1号方低剂量组FN蛋白表达水平减少,差异具有统计学意义(P0.05),糖肾1号方高剂量组α-SMA、FN蛋白表达水平减少,差异具有统计学意义(P0.05)。4)与糖肾1号方低剂量组相比,糖肾1号方高剂量组TGF-β1、FN mRNA降低,差异具有统计学意义(P0.05)。[结论]糖肾1号方含药血清可抑制TGF-β1、α-SMA、FN mRNA和α-SMA、FN蛋白表达水平,糖肾1号方高剂量组效果优于糖肾1号方低剂量组。     

糖肾康饮对糖尿病肾病大鼠肾组织AGES和TGF-β1表达的影响

目的:通过观察糖肾康饮对实验性糖尿病肾病大鼠肾组织糖基化终产物(AGES)、转移生长因子"1(TGF-"1)的表达沉积,肾功能及肾脏结构的影响,进一步明确糖肾康饮治疗糖尿病肾病的作用机制。方法:切除大鼠左侧肾脏联合腹腔注射链脲佐菌素(50mg/kg)建立糖尿病肾病(DN)模型,90只雄性Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、西药马来酸依那普利组、中药糖肾康饮高,中,低剂量组,给药12周后测血尿指标,取右侧肾脏,采用免疫组化法检测肾组织AGES和TGF-"1的表达。结果:模型组大鼠肾组织AGES和TGF-"1大量表达,镜下特征表现为肾小球细胞外基质(ECM)积聚所致肾小球基底膜、系膜增生,经12周的糖肾康饮治疗后肾组织中AGES和TGF-"1明显少于模型组,以糖肾康饮高剂量组效果最好,但与中剂量组相比无显著差异。结论:糖肾康饮能够减少ECM积聚,降低DN大鼠肾组织AGES和TGF-"1的表达,可能是通过降低AGES和TGF-"1的表达,减少肾小球细胞外基质(ECM)积聚而改善DN肾脏病理结构。     

通络保肾复方对5/6肾切除大鼠肾功能及肾组织FN表达的影响

选取雄性Wistar大鼠40只，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，周龄6～8周，体重180g～220g，随机分为正常组、模型组、代文组、保肾康组、中药组（通络保肾复方组）5组，每组8只。除正常组外，其余各组按照文献介绍的方法做5／6肾切除模型。正常组、模型组给予生理盐水按5ml／kg灌胃，保肾康组、     

糖肾康中药复方含药血清对高糖环境下RMCs的增殖及TGF-β1/Smad2/3 信号通路的影响

目的研究糖肾康中药复方含药血清对高糖环境下大鼠肾系膜细胞(RMCs)增殖及TGF-β1/Smad2/3信号通路的影响。方法 12只SD大鼠采用随机数字法分为小剂量中药组、中剂量中药组、大剂量中药组,空白组,每组3只,灌胃7天后门静脉取血。分别用含中药血清和普通大鼠血清培养RMCs。采用4-甲偶氮唑蓝(MTT)法测定系膜细胞的增殖率,以确定最佳中药血清浓度;实时定量、PCR及酶联免疫吸附剂(ELISA)法测定TGF-β1mRNA及蛋白的表达,蛋白免疫印迹(Western blot)及免疫荧光方法测定Smad2/3蛋白表达及磷酸化水平。结果不同剂量的糖肾康中药含药血清均能抑制大鼠肾小球系膜细胞的增殖;中药血清可显著抑制高糖诱导的TGF-β1表达及Smad2/3磷酸化。结论糖肾康中药含药血清能抑制高糖刺激下的RMCs增殖,其作用机制可能与抑制TGF-β1/Smad2/3通路有关。     

活血化瘀、益气补肾中药复方对高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维连接蛋白表达的影响

目的 研究活血化瘀、益气补肾中药复方对高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞（RMCs）增殖及纤维连接蛋白（FN）表达的影响。方法 以大鼠RMCs为研究对象,用高糖和不同浓度的中药处理RMCs,分别作用24、48 h后,用噻唑蓝（MTT）法检测RMCs的增殖情况,实时定量PCR法检测FN mRNA表达,ELISA法检测FN蛋白表达。结果 处理24 h和48 h,与对照组比较,单纯高糖组细胞增殖明显升高（P<0.01, P<0.01）;FN mRNA表达及蛋白表达也明显升高（P<0.01）;与高糖组比较, 24 h时各浓度中药组RMCs增殖及FN蛋白及mRNA表达差异无统计学意义（P>0.05）;48 h时各浓度中药组RMCs增殖及FN蛋白及mRNA表达较高糖组明显下降（P<0.01, P<0.01）。结论 高糖能够刺激RMCs增殖及FN蛋白及mRNA表达,中药处理24 h对高糖刺激的RMCs增殖及FN蛋白及mRNA表达的作用不明显,中药处理48 h能够逆转高糖刺激下RMCs的增殖及降低FN 蛋白及mRNA 的表达。     

通络益肾方对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞MMP-9/TIMP-1和TGF-β1表达的影响

目的观察通络益肾方对高糖培养下大鼠肾小球系膜细胞增殖、细胞外基质调控系统MMP-9/TIMP-1、TGF-β1表达的影响,探讨其防治糖尿病肾病的可能机制。方法以体外培养的大鼠肾小球系膜细胞为研究对象,将培养的肾小球系膜细胞分为空白对照组、高糖培养组(高糖组)、通络益肾方高、中、低剂量组及西药对照组,用大鼠含药血清给药,分别给予相应处理48 h后,采用四甲偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖,ELISA法检测细胞培养上清液TGF-β1、MMP-9和TIMP-1的水平。结果与空白对照组比较,高糖组肾小球系膜细胞增殖明显(P<0.01),上清液中TGF-β1和TIMP-1水平显著增加,MMP-9水平减少(均P<0.01);通络益肾方高、中、低剂量均能明显抑制肾小球系膜细胞增殖(P<0.01或P<0.05),下调TGF-β1和TIMP-1表达,上调MMP-9表达(P<0.05或P<0.01),尤以高剂量组效果最佳,呈剂量依赖性;西药对照组上述指标表达水平和中药中剂量组相当(P>0.05)。结论通络益肾方可能通过抑制肾小球系膜细胞增殖和下调TGF-β1、促进细胞外基质的降解而拮抗糖尿病肾病肾小球硬化,发挥其肾保护作用。     

中药对肾小球硬化大鼠MMP-9、TIMP-1及TGF-β1mRNA表达的影响

目的 探讨肾络癥积中药复方对肾小球硬化大鼠细胞外基质降解调控系统MMP-9、TIMP-1及TGF-β1mRNA的影响.方法 采用切除单侧肾脏同时尾静脉注射阿霉素的方法,建立肾小球硬化大鼠模型,检测各组大鼠24小时尿蛋白定量,ELISA法检测基质金属蛋白酶(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制物(TIMP-1)的表达,计算M...     

骨碎补对骨折愈合中TGF-β_1表达的影响

目的 :骨碎补是骨伤科常用的一味中药 ,为了进一步探讨其促进骨折愈合的机理 ,设计了该实验以期为临床运用骨碎补提供理论依据。方法 :将 3 6只 SD大鼠随机分成三组 :生理盐水组 (A)、骨碎补组 (B)、伤科接骨片组 (C)。按标准骨折模型方法造模 ,不作任何外固定 ,分笼饲养。从手术后第二天开始灌胃给药 ,骨碎补组每天以骨碎补水煎液分早晚 2次灌胃 ,伤科接骨片组每天给药 2次 ,对照组同时给予等量生理盐水。于术后第 7天、1 4天、2 1天每组分别处死动物 4只 ,取出骨标本。骨标本制成切片测量骨痂厚度及 TGF-β1 免疫组化染色。结果 :骨碎补组骨痂组织形成丰富 ,厚度明显优于对照组 (P<0 .0 1 ) ;骨碎补组骨痂组织中 TGF-β1表达量及阳性定位与伤科接骨片组相同 ,均明显强于对照组。结论 :实验结果表明骨碎补能增加骨痂厚度 ,提高骨折愈合质量。增加 TGF-β1 在骨痂组织中的表达 ,可能是骨碎补促进骨折愈合的机制之一。