大豆皂甙AI对心肌作用的单钙通道分析及ESR谱研究

利用细胞贴附式膜片钳技术，在Ｗｉｓｔａｒ大鼠单个心室肌细胞上记录了Ｔ、Ｌ、Ｂ型钙通道的单通道活动，大鼠皂甙单体ＡＩ ２０μｍｏｌ／Ｌ显著抑制三型钙通道的活动，使其开放概率减少，开放时间缩短，对通过通道的离子流幅值无明显影响，用电子自旋共振法侧定了培养心肌细胞的自由基含量。     

齐墩果酸型人参皂甙R_0对心肌细胞单钙通道活动与自由基含量的影响

在培养的Ｗｉｓｔａｒ大鼠心室肌细胞上，用膜片钳法证明齐墩果酸型人参皂甙单体Ｒ０２００μｍｏｌ·ｍＬ－１对Ｌ，Ｂ，Ｔ三型钙通道的单通道活动均无影响；用电子自旋共振法证明Ｒ０３０μｍｏｌ·ｍＬ－１不能抑制黄嘌呤０．４２ｍｍｏｌ·Ｌ－１－黄嘌呤氧化酶５．３ｎｍｏｌ·Ｌ－１所致的自由基含量增多。确切证明Ｒ０既无钙通道阻滞作用，也无抗自由基作用。     

齐墩果酸型人参皂甙Ro对心肌细胞单钙通道活动与自由基含…

在培养的Ｗｉｓｔａｒ大鼠心室肌细胞上，用膜片钳法证明齐墩果酸型人参皂甙单体Ｒｏ２００μｍｏｌ．ｍＬ＾－＾１对Ｌ，Ｂ，Ｔ三型钙通道的单通道活动均无影响；用电子自旋共振法证明Ｒｏ３０μｍｏｌ．ｍＬ＾－＾１不能抑制黄嘌０．４２ｍｍｏｌ．Ｌ＾－＾１黄嘌呤氧化酶５．３ｎｍｏｌ．Ｌ＾－＾１所致的自由基含量增多。确切证明Ｒｏ既无钙通道阻滞作用，也无抗自由基作用。     

Rg_2与R_f对钙通道作用的单通道分析

在单个Ｗｉｓｔａｒ大鼠乳鼠心室肌细胞上，用连细胞电压钳法，观察人参三醇组皂甙单体Ｒｇ２、Ｒｆ６０μｍｏｌ·Ｌ－１对钙通道单通道活动的影响，并与钙通道阻滞剂异博定７９μｍｏｌ·Ｌ－１、钙通道激动剂ＢＡＫ８６４４５μｍｏｌ·Ｌ－１对照，证明Ｒｇ２对钙通道有阻滞作用，其机理在于使钙通道的开放时间缩短、开放概率减少、关闭时间延长，而对Ｂａａ＋流幅值无明显影响，Ｒｆ可缩短Ｌ型钙通道的开放时间、延长关闭时间、降低开放概率。     

Rb1对B型钙通道的阻滞作用及其机理的单通道分析

在Wistar大鼠单个心室肌细胞上记录了B型钙通道的单通道活动。人参二醇组皂甙单体Rb1 250μg/ml显著抑制型钼单通道活动。其机制在于使其开放概率减少与开放时间缩短，而对通过此通道的离子流幅度无影响。     

人参二醇组皂甙对正常“缺血”诱导的大鼠大脑皮层神经元L—型…

目的：研究人参二醇组皂甙（ＰＤＳ）对正常“缺血”状态下大鼠大脑皮层神经元Ｌ－型钙通道的影响。方法：急性分离大鼠大脑皮层神经元建立体外“缺血”Ｓ和细胞贴附膜片钳单通道记录方法；结果：在“缺血”过程中，大鼠大脑皮层神经元Ｌ－型钙通道平均开放时间明显增加，并出现长达２０ｍｓ的长时程开放，平均关闭时间缩短，开放概率增加。ＰＤＳ１．５ｍｇ／ｍｌ可显著抑制正常和“缺血”诱导的Ｌ－型钙通道的开放，使其平均开放时     

R_(b1)对B型钙通道的阻滞作用及其机理的单通道分析

在Wistar大鼠单个心室肌细胞上记录了B型钙通道的单通道活动。人参二醇组皂甙单体R_(b1)250μg/ml显著抑制B型钙单通道活动,其机制在于使其开放概率减少与开放时间缩短,而对通过此通道的离子流幅度无影响。     

汉防己碱对大鼠皮层神经元钙通道的阻滞作用

在急性分离的大鼠大脑皮层神经元上,用膜片钳单通道记录技术研究汉防己碱（Ｔｅｔ）对电压依赖性钙通道的影响。结果表明,Ｔｅｔ７．５μｍｏｌ／Ｌ、１５μｍｏｌ／Ｌ和３０μｍｏｌ／Ｌ可浓度依赖性抑制大鼠皮层神经元膜Ｌ－和Ｎ－型电压依赖性钙通道,使其开放时间缩短,关闭时间延长,开放概率降低,从而降低钙内流,其对Ｌ－型钙通道的作用与钙通道阻滞剂Ｖｅｒａｐａｍｉｌ相似但较弱。Ｔｅｔ的多种药理作用可能与其阻滞通道     

黄芪皂甙对培养心肌细胞损伤的影响

从蒙古黄芪的根中提取黄芪皂甙（ＡＳ），研究ＡＳ对培养的新生大鼠心肌细胞损伤的影响。在培养基中加入黄嘌呤－黄嘌呤氧化酶（Ｘ－ＸＯＤ）和丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ），损伤心肌细胞以及用缺氧－复氧的方法造成心肌细胞损伤。实验组加入不同剂量的ＡＳ（１～５０μｇ／ｍｌ），对照组用培养基代替ＡＳ两组加入ＸＯＤ和ＭＭＣ以及缺氧３ｈ复氧３０ｍｉｎ后，对照组心肌细胞内ＬＤＨ的漏出明显增加，而线粒体活性值明显受抑。ＡＳ（１～２５μｇ／ｍｌ）可以保护心肌细胞，减轻Ｘ－ＸＯＤ，ＭＭＣ及缺氧－复氧所致的损伤，使ＬＤＨ的释放量显著低于对照组，而线粒活性值有较大的恢复（Ｐ＜０．０５）。在１～２５μｇ／ｍｌ剂量范围内ＡＳ的抗损伤作用呈剂量相关性增加。但使用５０μｇ／ｍｌ的ＡＳ没有能观察到这种抗损伤作用。结论：ＡＳ（１～２５μｇ／ｍｌ）对培养的新生大鼠心肌细胞具有抗自由基损伤及ＭＭＣ损伤的作用。     

肾上腺素对大鼠心室肌细胞钙通道促进作用的单通道分析

目的：观察肾上腺素对大鼠心肌细胞钙通道作用机理。方法：使用斑片钳技术，在培养的Ｗｉｓｔａｒ大鼠心肌细胞上记录Ｔ、Ｌ、Ｂ三型钙通道的单通道电活动。结果：肾上腺素对心肌细胞钙通道Ｌ、Ｂ单通道开放时间延长，开放概率增加，平均关闭时间缩短（Ｐ值均小于０．０１），对流过钙通道的Ｃａ２＋流幅值无影响。肾上腺素对Ｔ型钙通道活动有促进作用趋势，但无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。结论：肾上腺素对大鼠心肌细胞的作用和已知钙通道激动剂ＢＡＹ·Ｋ８６４４作用相似，和钙通道阻滞剂异搏定作用相反     

巴曲酶对原代培养的大鼠皮层神经元钙激活钾通道的作用研究

目的观察巴曲酶对原代培养新生SD大鼠皮层神经元上钙激活钾通道(Kca)作用。方法采用细胞贴附和内面向外两种膜片钳单通道记录技术检测巴曲酶对Kca作用。结果在钙浴液内,细胞贴附式膜片上,钳制膜电位+30mV,加入不同浓度巴曲酶0.15mmol/L、0.25mmol/L、0.50mmol/L、0.75mmol/L、1.0mmol/L,通道开放概率由0.005分别增加为0.013±0.002、0.082±0.011、0.131±0.012、0.211±0.010、0.062±0.009(P<0.01),在0.75mmol/L以内表现出浓度依赖性。在无钙浴液内,细胞贴附式膜片上,钳制膜电位+50mV,随巴曲酶浓度增加为0.15mmol/L、0.40mmol/L、0.60mmol/L、1.0mmol/L时,通道开放概率由0.005分别增加为0.013±0.001、0.112±0.007、0.193±0.010、0.301±0.009(P<0.05)。6例内面向外式膜片上,钳制膜电位+40mV,分别加入巴曲酶0mmol/L、0.25mmol/L、0.50mmol/L3min后,通道开放概率分别为0.012±0.007、0.011±0.009、0.013±0.008(P>0.05),巴曲酶在胞内Kca开放概率,平均开放/关闭时间,电流幅值均无明显变化。结论巴曲酶通过影响胞内游离钙水平间接调节Kca,可能对神经元有直接保护作用。     

钙激活钾通道在钙离子致神经细胞损伤中的作用

采用膜片钳单通道记录方法,观察原代培养新生ＳＤ大鼠皮层神经元的钙激活钾通道比（Ｋｃａ）特征及胞内不同游离钙水平对通道开放动力学的调节,结果显示：培养ＳＤ大鼠皮层神经元的Ｋｃａ以大电导活动占优势,胞内游离钙为１０＾－８ｍｏｌ／Ｌ时,通道几乎不开放,在１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ时达最大激活。由此表明神经元上Ｋｃａ通道开放概率明显依赖于胞浆中钙离子和膜电位,Ｋｃａ对胞内钙离子浓度变化极为敏感,钾通道的开放剂可     

钙池操纵的Ca~(2+)通道在IL-13促气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的:探讨钙池操纵的Ca2+(SOC)通道在Th2型细胞因子IL-13促进气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖中的作用。方法:体外分离培养大鼠ASMCs,IL-13孵育36 h后,以Fluo 3-AM为钙荧光示踪剂,采用激光共聚焦显微镜,测定大鼠ASMCs基础Ca2+水平以及肌浆网钙泵抑制剂Thapsigargin(TPG)诱发的内钙释放和经SOC通道的外钙内流;采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法),检测SOC通道阻断剂SKF-96365对IL-13促增殖作用的影响。结果:①IL-13作用36 h后,ASMCs的内钙释放及经SOC通道的钙内流反应明显高于对照组(P<0.05),并且这种钙内流反应能部分被SOC通道阻断剂SKF-96365抑制(P<0.01)。②IL-13能促进气道平滑肌细胞增殖,该作用可被SKF-96365抑制(P<0.01)。结论:IL-13对气道平滑肌细胞的促增殖作用可能部分是通过促进SOC通道钙离子内流反应来实现的。     

SKF96365和氯化镍对环匹阿尼酸诱导的大鼠PASMC［Ca2＋］i升高的影响

目的：研究SKF96365和氯化镍（NiCl2）对环匹阿尼酸（CPA）诱导的大鼠远端肺动脉平滑肌细胞（PASMC）内游离钙离子浓度（[Ca2＋]i）变化的影响。方法培养大鼠PASMC,运用荧光显微镜和InCyte细胞内钙浓度检测系统观测CPA、SKF96365和NiCl2对PASMC[Ca2＋]i的影响。结果含5μmol／L硝苯地平的无钙Krebs溶液孵育PASMC,10μmol／LCPA使PASMC[Ca2＋]i短暂小幅升高,恢复细胞外Ca2＋至2．5mmol／L后,10μmol／LCPA使PASMC[Ca2＋]i迅速显著升高;50μmol／LSKF96365和500μmol／LNiCl2均能明显抑制10μmol／LCPA引起的PASMC[Ca2＋]i升高,但对高钾（60mmol／LKCl）溶液引起的PASMC[Ca2＋]i升高无影响。结论CPA可致大鼠PASMC[Ca2＋]i升高,且能被SKF96365和NiCl2阻断,提示CPA可能诱发细胞外Ca2＋经钙池操纵性钙通道（SOCC）内流,SKF96365和NiCl2能选择性抑制SOCC活性使经SOCC的Ca2＋内流减少。     

钙库操纵的钙内流在转化生长因子-β1促进气道平滑肌细胞增殖中的作用

目的:探讨钙库操纵的钙内流(SOCE)在转化生长因子-β1(TGF-β1)促进气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖中的作用.方法:体外培养大鼠ASMCs,以Fluo-3/AM为细胞内钙离子浓度示踪剂,观察ASMCs在TGF-β1作用后,细胞内基础钙离子浓度、钙释放和SOCE的变化;四甲基偶氮唑蓝(MTT)微量比色法测定TG...     

辛伐他汀对多柔比星损伤心肌细胞钙稳态作用的研究

目的:探讨辛伐他汀(simvastatin,SIM)对多柔比星(doxorubicin,DOX)损伤心肌细胞的保护作用。方法:将培养72 h的新生SD大鼠心肌细胞随机分为对照组、DOX损伤组、1μmol/L SIM干预组、10μmol/L SIM干预组、20μmol/L SIM干预组,继续培养24 h后,四甲基偶氮唑盐(MTT)检测心肌细胞存活率;荧光染料Fluo-3/AM检测心肌细胞内钙离子荧光强度;蛋白质印迹法检测肌浆网Ca2+-ATP酶(SERCA2a)的表达。结果:与对照组相比,DOX损伤组心肌细胞存活率明显下降(P<0.01);钙离子荧光强度明显增强(P<0.01);SERCA2a蛋白表达显著下降(P<0.01)。给予SIM处理后,心肌细胞存活率显著上升(P<0.01),钙离子荧光强度显著下降(P<0.01),SERCA2a表达明显改善(P<0.01)。结论:辛伐他汀对多柔比星损伤的心肌细胞的保护作用可能与部分改善SERCA2a的表达、抑制钙超载有关。     

人参皂苷Rg1对H2O2诱导的HT22细胞凋亡及胞内Ca2+变化的影响

目的 研究人参皂苷Rg1对H2O2诱导的HT22细胞凋亡及胞内Ca2+浓度变化的影响.方法 以0、6.25、12.5、25、50、100μg/L人参皂苷Rg1预处理细胞24 h,采用Ca2+荧光染料探针Fluo-3/AM负载细胞1 h后,50 mmol/L H2O2刺激细胞,多功能酶标仪测定荧光强度,激光共聚焦显微镜实时监测[Ca2+]i变化,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡.结果 H2O2可诱导细胞内Ca2+浓度增加(P<0.01),并增加细胞凋亡率(P<0.01).不同浓度人参皂苷Rg1可呈剂量依赖性的抑制H2O2诱导的HT22[Ca2+]i增加(P<0.01),抑制细胞凋亡(P<0.01),以50μg/L的作用为最强(P<0.01).结论 人参皂苷Rg1可通过降低H2O2诱导的HT22细胞内Ca2+水平的升高,抑制氧化应激引起的细胞凋亡.     

丙泊酚对人子宫平滑肌细胞Ca2+跨膜内流和肌浆网钙释放功能的影响

目的观察丙泊酚对足月产妇子宫平滑肌细胞Ca2+跨膜内流和肌浆网Ca2+释放功能的影响,探讨其抑制子宫平滑肌收缩功能的可能机制。方法取正常孕足月待产的子宫平滑肌组织,胶原酶消化法培养子宫平滑肌细胞。①40个孔板中活性良好的子宫平滑肌细胞随机等分为4组(n=10):对照组(C组)、低浓度丙泊酚组(P1组)、中浓度丙泊酚组(P2组)、高浓度丙泊酚组(P3组),用Fluo-3AM钙荧光指示剂染色后,分别给予Hank液、10μmol/L丙泊酚(终浓度)、50μmol/L丙泊酚、250μmol/L丙泊酚处理20 min,然后加入40 mmol/L氯化钾,每个孔板在激光共聚焦显微镜下随机选定10个子宫平滑肌细胞,利用图形分析软件分析细胞内钙荧光强度,取钙荧光强度峰值的平均值反映子宫平滑肌细胞游离Ca2+浓度([Ca2+]i)。②再以20 mmol/L咖啡因代替氯化钾,其余处理及分组同前。结果①与基础值比较,各组加入丙泊酚后子宫平滑肌细胞[Ca2+]i差异无统计学意义(P>0.05),加入氯化钾后[Ca2+]i均升高(P<0.01);与C组相比,加入氯化钾后P1组子宫平滑肌细胞[Ca2+]i差异无统计学意义(P>0.05),P2组和P3组加入氯化钾后[Ca2+]i明显低于C组(均P<0.01),且P3组[Ca2+]i低于P2组(P<0.05)。②与基础值比较,各组加入丙泊酚后子宫平滑肌细胞[Ca2+]i差异无统计学意义(均P>0.05),加入咖啡因后[Ca2+]i升高(P<0.01);加入咖啡因后各组子宫平滑肌细胞[Ca2+]i差异无统计学意义(P>0.05)。结论丙泊酚可浓度依赖性地抑制足月产妇子宫平滑肌细胞电压依赖型钙通道开放而减少Ca2+跨膜内流,而对肌浆网Ryanodine型Ca2+释放功能无明显影响。