草酸钙晶体对大鼠肾小管上皮细胞骨桥蛋白表达的影响

目的探讨一水草酸钙(calcium oxalate monohydrate,COM)晶体对大鼠肾小管上皮细胞中骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达的影响。方法选用SD大鼠的肾皮质原代培养出肾小管上皮细胞并制成爬片,将爬片的肾小管上皮细胞随机分为A、B、C、D、E5组。A组不加COM(11例);B组1 mmol/L浓度COM(17例);C组3 mmol/L浓度COM(18例);D组5 mmol/L浓度COM(18例);E组10 mmol/L浓度COM(17例)。采用免疫组织化学法(SABC)检测各组肾小管上皮细胞中OPN的表达,并进行阳性细胞计数和各组间比较。结果 OPN的表达主要定位于细胞质,呈棕褐色。各组OPN阳性表达率:A组54.5%;B组64.7%;C组77.8%;D组88.9%;E组76.5%。随着COM浓度增加,OPN表达逐渐增强,到5 mmol/L浓度COM时OPN表达最强(P0.01),而10 mmol/L浓度COM时OPN表达反而下降,接近3 mmol/L浓度COM水平(P0.05)。结论大鼠肾小管上皮细胞受COM刺激后OPN表达增强,但高浓度COM使OPN表达减弱,提示高浓度COM通过损伤肾小管上皮细胞使OPN表达下降,进而形成结石。     

低分子肝素对胃癌原代细胞增殖及SDF-1表达的影响

[目的]探讨低分子肝素对胃癌原代培养细胞增殖及基质细胞衍生因子1 (stromal cell derived factor-1,SDF-1)表达的影响.[方法]将胃低分化腺癌组织和正常胃黏膜组织制成原代细胞后分为:①胃癌细胞组(A组),②胃癌细胞+低分子肝素(LMWH)组(B组),③胃黏膜细胞组(C组),④胃黏膜细胞+LMWH组(D组).MTT法检测各组细胞增殖,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞周期分布和凋亡状况,RT-PCR检测各组细胞SDF-1 mRNA的表达量并比较.[结果]B组细胞增殖显著低于A组,同时细胞凋亡率增加,G0和G1期细胞比例显著增高,而S期比例则显著减低,G2和M期无显著差异;D组细胞数量和细胞凋亡率、G0和G1期、S和G2和M期的比例与C组比较差异无统计学意义.B组与A组相比,SDF-1mRNA表达水平下降,而D组SDF-1mRNA表达水平与C组无明显差异.[结论]LMWH可显著抑制胃癌原代细胞的增殖和增加细胞的凋亡率,影响细胞周期,同时可降低细胞SDF-1表达.     

葡萄糖诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞凋亡信号传导途径的研究

目的:探讨葡萄糖诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2)凋亡的信号传导途径。方法:利用葡萄糖诱导细胞凋亡:将不同浓度葡萄糖作用于HK-2细胞不同时间,并经透射电镜观察、流式细胞仪(FCM)检测凋亡细胞。采用抑制剂拮抗葡萄糖诱导凋亡:分别将不同浓度的蛋白激酶C抑制剂(hypericin)、半胱氨酸蛋白酶(caspase-3)抑制剂(apopain)、蛋白酪氨酸激酶抑制剂(genistein)、一氧化氮合酶抑制剂(NAME)作用于HK-2细胞30min,再加50mmol/L葡萄糖作用48h,后行FCM检测HK-2细胞凋亡情况。结果:50mmol/L葡萄糖作用48h可诱导HK-2细胞发生凋亡,并可通过透射电镜观察到凋亡小体,而FCM检测发现10-4mmol/Lhypericin、10-4mmol/L和10-6mmol/Lapopain、10-7mmol/Lgenistein、10-2mmol/LNAME可明显抑制葡萄糖诱导的HK-2细胞凋亡。结论:蛋白激酶C、caspase-3、蛋白酪氨酸激酶、一氧化氮(NO)都参与了葡萄糖诱导HK-2细胞凋亡的信号传导过程。     

输尿管镜下钬激光碎石术对肾脏微损伤的影响

[目的]探讨输尿管镜下钬激光碎石术(URSL)对肾小球肾小管的微损伤的影响及损伤恢复情况.[方法]对215例输尿管结石患者行URSL手术,根据结石不同位置、手术时间的长短将患者分为输尿管上段(A组)、中下段结石(B组)组及手术时间<30 min(C组)和≥30 min(D组)组.测定患者术前、术后24 h、1周、1个月、2个月的尿微量白蛋白(mALB),葡萄糖苷酶N-乙酰-β-氨基(NAG),视黄醇结合蛋白(RBP)指标来评价URSL手术对患者肾小球肾小管的损伤及与结石位置、手术时间长短之间的关系以及损伤的恢复情况.[结果]患者术后mALB、NAG、RBP均较术前有明显上升(P<0.01),随后逐渐下降,在术后1~2个月左右时间基本降至术前水平;结石位置越高,手术时间越长的患者术后NAG升高更显著(P<0.05).[结论]URSL对患者肾小球肾小管均造成一定损伤,结石位置越高,手术时间越长对于肾小管的损伤越大,这些损伤会在术后1~2个月左右逐渐自行恢复.     

黄芪甲苷孵育脂肪源性干细胞对顺铂诱导肾小管上皮细胞凋亡的影响

背景：干细胞移植用于治疗急性肾损伤的有效性已经被多个研究证实,但其对肾小管上皮细胞损伤的修复机制尚不明确。目的：观察黄芪甲苷孵育后的脂肪源性干细胞对顺铂诱导的肾小管上皮细胞凋亡的保护作用及机制。方法：实验分为4组。2.5μmol/L顺铂诱导肾小管上皮细胞24 h,建立肾小管细胞损伤模型（顺铂损伤组）;将脂肪源性干细胞与损伤肾小管上皮细胞共培养（脂肪源性干细胞＋损伤肾小管上皮细胞组）;利用 Transwel小室将20 mg/L黄芪甲苷孵育脂肪源性干细胞48 h后与损伤肾小管上皮细胞共培养（黄芪甲苷孵育脂肪源性干细胞＋损伤肾小管上皮细胞组）;以正常肾小管上皮细胞做对照（正常对照组）。结果与结论：与肾小管上皮细胞损伤组相比,AV/PI和TUNEL结果均显示脂肪源性干细胞＋肾小管上皮细胞组和20 mg/L 黄芪甲苷脂肪源性干细胞＋肾小管上皮细胞组肾小管上皮细胞发生凋亡的比例和数量明显减少;ELISA结果表明20 mg/L黄芪甲苷脂肪源性干细胞＋肾小管上皮细胞组胰岛素样生长因子1分泌显著提高（P＆lt;0.05）;Western blot进一步显示20 mg/L 黄芪甲苷脂肪源性干细胞＋肾小管上皮细胞组caspase-3蛋白水平明显下降,而Bcl-2的表达量明显增加（P＆lt;0.05）。表明黄芪甲苷孵育的人脂肪源性干细胞对顺铂诱导的肾小管上皮细胞凋亡具有抑制作用,从而有利于肾小管损伤的早期恢复,其保护机制可能与增加胰岛素样生长因子1分泌,抑制caspase-3表达、上调Bcl-2水平有关。     

氧化应激对大鼠肾小管上皮细胞生物学行为的影响及L-EGCG的保护作用

[目的]探讨氧化应激对大鼠肾小管上皮细胞（NRK）生物学行为的影响及L -表没食子儿茶素没食子酸酯（L -EGCG）对NRK细胞氧化性损伤的保护作用.[方法]利用H2O2刺激离体培养的NRK细胞建立氧化损伤的模型,筛选H2O2对NRK细胞损伤研究的最适剂量与最佳时点.然后将培养细胞分EGCG正常对照组、H2O2组、不同浓度儿茶素组.MTT法检测细胞活力,流式细胞仪测定细胞凋亡,荧光探针JC-1测定线粒体膜电位.利用生物化学法检测各组NRK细胞培养上清中丙二醛（MDA）含量及乳酸脱氢酶（LDH）漏出量.[结果]①250 μmol/L H2O2作用6 h剂量组即可引起NRK细胞损伤;②L-EGCG能明显改善H2O2导致的细胞损伤,可使细胞存活率升高,LDH释放量降低,MDA生成减少,稳定了线粒体膜电位,减轻了细胞凋亡.[结论]氧化应激能导致大鼠肾小管上皮细胞活力下降,凋亡增加,L-EGCG可能是通过提高NRK细胞的抗氧化能力而提高其对H2O2损伤的保护及损伤修复能力.     

血浆同型半胱氨酸水平对结直肠癌和肝细胞癌细胞增殖的影响

目的：探讨同型半胱氨酸（Hcy）对结直肠癌和肝癌增殖的影响。方法：收集结直肠癌、肝癌和健康人血浆204份测定Hcy。再检测Hcy对HepG2和HT29增殖的影响。结果：癌症组Hcy水平与健康组比较有统计学差异（P〈0.05）。HepG2在4和2 mmol/L Hcy处理组与未处理组比较OD值增高（P〈0.05）;0.5和0.25 mmol/L处理组与未处理组比较OD值减低（P〈0.05）。HT29在4 mmol/L Hcy处理组与未处理组比较OD值增高（P〈0.05）。HepG2经0.5和0.25 mmol/L Hcy处理,DNA凝胶电泳均未形成梯状图形。HepG2和HT29经4和1 mmol/L Hcy处理,S期细胞构成比与未处理组比较均无统计学差异（P〉0.05）。HepG2经0.25 mmol/L Hcy处理未检出亚二倍体峰。结论：Hcy达一定浓度时有促进肿瘤细胞增殖的潜能。     

基于TGF-β1/AKT信号通路的西格列汀对人肾小管上皮细胞转化的干预及机制

目的:观察西格列汀(sitagliptin,SIT)对高糖诱导的肾小管上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的干预效应及对AKT信号通路的影响,探讨西格列汀防治早期糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的作用机制。方法:将体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)分为正常组(NG,5.56 mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG,60 mmol/L葡萄糖)、西格列汀组(SIT组,60 mmol/L葡萄糖+1,5,10μmol/L西格列汀)、TGF-β1抑制剂组(60 mmol/L葡萄糖+5μmol/L SB-431542)。MTT法检测细胞活力;ELISA法检测细胞中TGF-β1蛋白分泌;蛋白质印迹法检测细胞中Akt蛋白磷酸化水平及EMT指标蛋白质变化。结果:高糖提高了肾小管上皮细胞的活力,促进TGF-β1蛋白分泌,激活AKT蛋白磷酸化,降低细胞中上皮表型蛋白质E-cadherin的表达,并增加间质表型蛋白质α-SMA的表达。西格列汀显著降低HK-2细胞的活力,降低高糖环境下TGF-β1蛋白分泌,降低AKT蛋白磷酸化水平,改善E-cadherin表达的减少及α-SMA表达的增加。结论:西格列汀可以改善高糖诱导的HK-2细胞上皮-间充质转分化,此效应可能与抑制TGF-β1/AKT信号通路有关。     

冬凌草甲素对人膀胱癌T24和5637细胞杀伤作用的研究

[目的]探讨冬凌草甲素对不同恶性程度人膀胱癌细胞的抑制作用.[方法]以丝裂霉素为对照,用不同浓度的冬凌草甲素处理人膀胱癌细胞株T24(浸润性,G3)和5637(非浸润性,G2)后,通过MTT法检测细胞增殖抑制率并计算IC50值,应用倒置显微镜观察细胞形态及其抑制情况,采用荧光染色法观察细胞核及细胞凋亡情况.[结果]冬凌草甲素和丝裂霉素对T24和5637细胞均有抑制增殖和杀伤作用,并呈现时间-效应和浓度-效应关系.分别作用T24、5637细胞株12 h和24 h 后,64 μmol/L冬凌草甲素的抑制增殖和杀伤效果均要显著优于150 μmol/L丝裂霉素的效果.低恶性细胞5637较高恶性T24对冬凌草甲素和丝裂霉素处理更敏感.[结论]冬凌草甲素能通过诱导T24和5637细胞凋亡,起到杀伤和抑制增殖的效果,且较丝裂霉素起效快,有进一步研究的价值.     

罗格列酮对高糖作用下人肾小管上皮细胞增殖的影响

[目的]研究高糖作用下人近端肾小管上皮细胞(HK-2)增殖情况及罗格列酮(RGZ)干预对其的影响.[方法]分别检测高糖作用下和RGZ 干预后24 h、48 h、72 h HK-2细胞增殖情况.[结果]①24 h时间点,高糖组(HG,25 mmol/L D-葡萄糖)与低糖组(NG,5.5 mmol/L D-葡萄糖)比较细胞增殖减少,但无显著性差异.48 h和72 h时间点,HG组较NG组细胞增殖显著增加(P＜0.01);②24 h时间点,HG R10组(HG 10 μmol/L RGZ)和HG R5组与NG组比较,细胞增殖受抑,差异均有显著性(P＜0.01);与HG组比较差异无显著性.48 h和72 h时间点,HG R10组和HG R5组与NG组比较,细胞增殖均显著增加(P＜0.01),且细胞增殖程度与RGZ剂量相关;HG R10组和HG R5组与HG组比较,细胞增殖加快,其中72 h时间点,差异有显著性(P＜0.01).[结论]①高糖对HK-2细胞产生双重效应,可能是先促使细胞凋亡,然后又诱导细胞增殖;②在观察时间范围内,RGZ对于高糖刺激下的HK-2细胞以促进增殖为主.     

葡萄糖诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞内钙离子浓度动态变化及其信号传导途径的研究

目的：探讨葡萄糖诱导人肾皮质近曲小管上皮细胞（HK-2）内钙离子（Ca^2＋）浓度的动态变化及其信号转导途径。方法：在葡萄糖诱导的HK-2细胞中加入不同浓度的蛋白激酶C抑制剂（Hypericin）、半胱氨酸蛋白酶抑制剂（Apopain）、蛋白酪氨酸激酶抑制剂（Genistein）、一氧化氮合酶抑制剂（NAME）,利用激光共聚焦显微镜（LSCM）观察HK-2细胞内[Ca^2＋]动态变化。结果：LSCM下观察发现,150mmol/L葡萄糖可引起HK-2细胞内[Ca^2＋]增高。150mmol/L葡萄糖诱导的HK-2细胞中加入10^-4mmol/LHypericin、10^-6mmol/LApopain、10^-7mmol/LGenistein、10^-2mmol/LNAME可抑制葡葡萄糖诱导的HK-2细胞内[Ca^2＋]增高。结论：葡萄糖作用于HK-2细胞,可引起细胞内[Ca^2＋]增高;蛋白激酶C、caspase-3、蛋白酪氨酸激酶、一氧化氮（NO）均参与了葡葡萄糖诱导的HK-2细胞内[Ca^2＋]增高的信号传导过程。     

恩格列净改善高糖诱导HK-2细胞凋亡的机制探讨

目的 探讨恩格列净改善人肾皮质近曲小管上皮细胞（HK-2细胞）凋亡的机制。方法 将HK-2细胞置于正常葡萄糖、高葡萄糖、高葡萄糖+不同浓度的恩格列净共干预环境下培养48 h。采用蛋白免疫印迹法检测肾脏沉默信息调节因子2相关酶1（SIRT1）、硫氧还蛋白互作蛋白（TXNIP）以及裂解的半胱天冬酶-3（cleaved Caspase-3）的表达水平。采用TUNEL染色评估HK-2细胞凋亡情况。结果 蛋白免疫印迹结果显示,高葡萄糖培养48 h后HK-2细胞的TXNIP和cleaved Caspase-3表达水平均高于正常葡萄糖组,而SIRT1表达水平低于正常葡萄糖组（P均< 0.05）。1000 nmol/L恩格列净和30 mmol/L葡萄糖共干预48 h后,HK-2细胞的TXNIP和cleaved Caspase-3的蛋白表达水平降低,SIRT1表达水平升高（P均< 0.001）。TUNEL染色结果显示恩格列净和30 mmol/L葡萄糖共干预组较30 mmol/L葡萄糖组TUNEL阳性细胞数少,且1000 nmol/L恩格列净和30 mmol/L葡萄糖共干预组凋亡改善更明显。结论 恩格列净可能通过上调SIRT1的表达、抑制TXNIP表达,改善高糖诱导HK-2细胞凋亡。     

去甲斑蝥素对白蛋白刺激肾小管上皮细胞增殖及上调纤维连接蛋白表达的影响

目的观察去甲斑蝥素（NCTD）对白蛋白刺激人近端肾小管上皮细胞株（HK-2）增殖及上调FN表达的影响,初步探讨NCTD延缓肾间质纤维化的体外作用机制。方法通过细胞毒性实验筛选出对HK-2细胞无明显损伤的NCTD适合浓度。将HK-2细胞随机分为5组：对照组（1640培基组）,白蛋白组（1640＋白蛋白5g/L）,各浓度NCTD组（1640＋白蛋白5g/L＋NCTD 0.5,1,2.5mg/L）。在各组HK-2细胞中加入相应干预液孵育24h后,采用细胞增殖法（MTT法）检测NCTD对白蛋白刺激HK-2细胞增殖的影响;酶联免疫吸附试验（ELISA）测定各组细胞上清中FN的蛋白含量;RT-PCR法半定量分析HK-2细胞中FN mRNA的表达。结果①比较对照组及NCTD（0.5,1.0,2.5 mg/L）各组的乳酸脱氢酶（LDH）浓度,各组间的差异无统计学意义（P〉0.05）;②白蛋白组MTT值（0.438±0.073）明显高于对照组（0.330±0.060）（P〈0.05）,而NCTD（2.5 mg/L）组MTT值（0.327±0.080）较白蛋白组降低（P〈0.05）;③与白蛋白组比较,NCTD（2.5mg/L）组HK-2细胞上清中FN蛋白含量降低,差异有统计学意义（P〈0.01）;NCTD（1mg/L和2.5mg/L）组细胞上清中FN mRNA的表达较白蛋白组明显下调,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论白蛋白（5g/L）诱导HK-2细胞增殖及FN过表达,一定浓度去甲斑蝥素可抑制白蛋白对HK-2细胞的活化作用。     

初始联合治疗策略对高血压患者的疗效及肾功能的影响

【目的】探讨初始小剂量氨氯地平分别与复方阿米洛利和替米沙坦联合治疗高血压痛的效果及对肾功能的影响。【方法】302例50～79岁伴心血管病危险因素的原发性高血压患者随机分为A、B两组,起始治疗A组给予小剂量氨氯地平（2．5mg／d）＋复方阿米洛利（半片／d）,含阿米洛利1．25mg,氢氯嘧嗪12．5mg;B组给予氨氯地平＋替米沙坦（40mg／d）。二周后根据血压调整剂量,随访治疗一年,观察两种联合治疗方案对高血压患者的降压幅度、血压控制率、不良反应以及对血肌酐和内生肌酐清除率的影响。【结果】治疗前后A组与B组血压均显著降低,分别从（157．1±12．0）／（91．1±9．4）mmHg降至（128．1±10．3）／（76．6±8．0）mmHg和（156．4±13．6）／（91．2±9．5）mmHg降至（131．5±12．3）／（77．3±9．2）mmHg,P〈0．05;血压控制率分别为87．1％和76．5％（P=0．024）;B组血肌酐较治疗前降低[（85．15±21．25）μmmol／Lvs．（82．70±20．21）μmmol／L,P=0．001]。【结论】两种联合治疗方案均可以显著降低血压,初始联合治疗可以显著提高血压控制率;联合方案中配伍替米沙坦可能提供降压外的肾脏保护作用。     

Omi/HtrA2在窒息后血清诱导人近曲肾小管皮细胞凋亡中的作用

目的 研究Omi/HtrA2在新生儿窒息后血清诱导人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡时的作用机制.方法 以HK-2细胞为研究对象,实验分为空白对照组、窒息组、Ucf-101(Omi/HtrA2的特异性阻断剂)干预组.以体积分数为20%的窒息后24 h血清作为攻击血清,以终浓度为10/μmol/L的Ucf-101对窒息组进行干预.用激光共聚焦显微镜观测Omi/HtrA2在胞内的转位状况,采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率.结果 窒息血清攻击后,Omi/HtrA2由线粒体转位到胞质中,阳性转位细胞率较空白对照组明显增加[(28.1±3.6)%比(9.4±2.1)%,P<0.013].与空白对照组比较,窒息组细胞凋亡率明显增加[(36.3±4.4)%比(12.45±2.9)%,P<0.013].与窒息组比较,干预组细胞凋亡率明显减少((27.0±3.9)%比(36.3±4.4)%,P<0.01].结论 窒息后新生儿血清诱导HK-2细胞凋亡,Omi/HtrA2由线粒体转位到线粒体外,在其胞内凋亡信号转导过程中占有重要作用.     

硫化氢对抗七叶皂苷对于HK-2细胞的毒性作用

目的 研究硫化氢（H2S）对七叶皂苷钠（SA）细胞毒性的保护作用.方法 培养HK-2细胞分别建立H2S处理[培养基中添加H2S的供体硫氢化钠（NaHS）]和H2S关键合成酶胱硫醚β合成酶（CBS）、胱硫醚γ裂解酶（CSE）的抑制剂炔丙基甘氨酸（PPG）处理的实验模型.CCK-8实验检测细胞存活率;流式细胞凋亡实验检测细胞凋亡率.结果 SA处理HK-2细胞24h后,细胞存活率为（48.21±3.57）％,细胞凋亡率为（40.8±1.41）％.同时给予SA和NaHS处理,HK-2细胞存活率[（74.35±3.62）％]升高,凋亡率[（17.7±0.55）％]降低（P＜0.01）;相反,同时给予SA和PPG处理,对HK-2细胞的毒性作用增强,细胞存活率[（19.67±2.31）％]降低,细胞凋亡率[（76.91±2.36）％]升高（P＜0.01）.结论 H2S能对抗SA对HK-2细胞的毒性作用,抑制细胞凋亡.     

肾小管上皮细胞转分化时MicroRNA表达变化和丹酚酸B干预效应

目的观察转化生长因子（TGF）．B1诱导肾小管上皮细胞一问充质细胞转分化（epithefiN—mesenchymal transNOn，EMT）时microRNA（miRNA）表达谱的变化及丹酚酸B的干预效应。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞系细胞（}玎艮2），分为3组：（1）对照组：细胞培养基中未加入丹酚酸B或者TGF-β1；（2）TGF-β1组：细胞培养基中加入TGF-β1；（3）丹酚酸B干预组：细胞培养基中分别加入丹酚酸B（50μmol／L）和TGF-β1（浓度为5nNml）。采用基因芯片和RT-PCR检测各组细胞miRNA的表达变化。结果（1）与正常HK-2细胞比较，TGF-β1组有118种miRNA的表达出现显著改变，其中28种表达下调2倍以上，90种表达上调2倍以上。（2）与TGF．Bl组比较，丹酚酸B干预组有256种miRNA的表达出现显著改变，其中172种表达下调2倍以上，84种表达上调2倍以上。（3）有19种miRNA表达在两组同时出现显著改变，其中8种在TGF-β1组明显下调，而在丹酚酸B干预后明显上调，11种在TGF-β1组明显上调，而在丹酚酸B干预后则明显下调。结论肾小管EMT时伴有miRNAs表达谱的明显变化，部分miRNA的表达变化与丹酚酸B的干预密切相关，可能成为治疗肾间质纤维化新的靶点。     

血压和血糖控制程度与代谢综合征并发症脑梗死的关系

【目的】比较代谢综合征患者在不同程度的血压和血糖控制下脑梗死的发生情况。【方法】将105例代谢综合征患者随机分成强化治疗组（A组,55例）和一般治疗组（B组,50例）。A组强化血压和血糖控制：控制目标：血压（BP）135／80mmHg,空腹血糖（FBG）〈6．0mmol／L,餐后血糖（PBG）〈7．8mmol／L;B组控制目标：BP150／90mmHg,FBG％8．0mmol／L,PBG％10mmol／L;一个月随访一次。比较两组脑梗死的发生情况。【结果】B组脑梗死发生6例,发生率为10．9l％,A组尚无脑梗死发生,两组相比较差异有显著性（P〈0．05）。【结论】强化血压和血糖控制能降低代谢综合征患者脑梗死的发生。